大球蓋菇顆粒原種培養(yǎng)基篩選及其應用

摘要：【目的】為篩選適宜的大球蓋菇原種培養(yǎng)基，研發(fā)菌絲活力強、萌發(fā)點多、松散均一的顆粒原種，并確立合適的擴繁透氣袋栽培接種量。【方法】以‘大球蓋菇8號’為試驗菌株，采用菌絲生長速度為評價指標，通過單因素試驗，比較由小米、細木屑、玉米芯、菜籽粕等主要組分的不同培養(yǎng)基的顆粒原種擴繁栽培種效果，對比不同接種量對透氣袋栽培種滿袋時間的影響?！窘Y(jié)果】確定最佳大球蓋菇顆粒原種培養(yǎng)基配方為XGM（小米50%、蔗糖2%、細木屑20%、硅藻巖26%、輕質(zhì)碳酸鈣2%），培養(yǎng)基的碳氮比是32.5，培養(yǎng)的大球蓋菇顆粒原種菌絲生長速度為2.99 mm/d。顆粒原種XGM擴繁透氣袋栽培種最佳接種量為1.25%，透氣袋栽培種平均滿袋時間為13.4 d?！窘Y(jié)論】通過研究優(yōu)化了顆粒原種培養(yǎng)基，初步建立透氣袋栽培種生產(chǎn)工藝，為工廠化生產(chǎn)大球蓋菇透氣袋栽培種奠定基礎。

關鍵詞：大球蓋菇；顆粒原種培養(yǎng)基；透氣袋栽培種；優(yōu)化

中圖分類號：S646" " " " " " " " " " " " 文獻標識碼：A" " " " " " " " " " " " "文章編號：2095-5774（2024）04-0271-07

Study on Selection and Application of Culture Medium of Particle Pre-culture Spawn of Stropharia rugosoannulata

Zeng Zhiheng，Chen Wenzhi，Dai Jianqing，Zeng Hui，Guo Zhongjie，Cai Zhixin*

（Institute of Edible Fungi，F(xiàn)ujian Academy of Agricultural Sciences / National and Local Joint Engineering Research Center

for Breeding amp; Cultivation of Featured Edible Fungi，F(xiàn)uzhou，F(xiàn)ujian 350013，China）

Abstract：【Objective】 The aim is to screen suitable spawn culture media for Stropharia rugosoannulata and develop particle pre-culture spawn with strong mycelial vitality，numerous germination points，and loose uniformity. The appropriate inoculation amount of spawn using vent plastic bag was established. 【Method】 Using‘S. rugosoannulata No. 8’as the experimental strain and the mycelial growth rate as the evaluation index，a single factor experiment was conducted to compare the effects of particle spawn propagation and cultivation on different media containing main components such as millet，fine sawdust，corn cob，and rapeseed meal，and compare the effects of different inoculation amount on the bag-filled time of spawn using vent plastic bag. 【Result】 The optimal formula for the particle pre-culture spawn medium of S. rugosoannulata was determined to be XGM，with 50% millet，2% sucrose，20% fine sawdust，26% diatomaceous earth ，and 2% light calcium carbonate. The carbon-to-nitrogen ratio in the medium was 32.5，and the growth rate of the mycelia of the particle pre-culture spawn was 2.99 mm/d. The optimal inoculation amount was 1.25% and the average bag-filled time was 13.4 days using particle pre-culture spawn XGM to expand spawn in vent plastic bag. 【Conclusion】 The culture medium of particle pre-culture spawn was optimized and the production process of S. rugosoannulatain using vent plastic bag was preliminarily established，which laid a foundation for industrial production of S. rugosoannulata spawn.

Key words：Strophariarugosoannulata；Particle pre-culture spawn；Spawn using vent plastic bag；Application

大球蓋菇（Stropharia rugosoannulata），商品名為赤松茸，隸屬擔子菌門、擔子菌綱、傘菌目、球蓋菇屬［1］。大球蓋菇營養(yǎng)價值高，經(jīng)測定干品含粗蛋白30%，粗多糖48%，粗纖維10%，灰分4.3%；并含有17 種氨基酸，包括全部8種必需氨基酸，占氨基酸總量的39.11%，與非必需氨基酸比值為0.64，達到聯(lián)合國糧農(nóng)組織FAO和世界衛(wèi)生組織提出的理想蛋白質(zhì)要求［2］。大球蓋菇因其色澤艷麗、味道鮮美、滑嫩爽口，受到廣大消費者的喜愛，市場需求量越來越大。為滿足市場需求，提高栽培效益，許多企業(yè)和科研院所探索大球蓋菇設施大棚栽培模式，這對大球蓋菇菌種質(zhì)量和栽培工藝提出了更高的要求。目前，大球蓋菇菌種主要是以家庭小作坊式生產(chǎn)為主，因制種工藝不規(guī)范，常常造成菌種質(zhì)量參差不齊。再者，傳統(tǒng)的大球蓋菇栽培種制種周期長，原種擴繁栽培種一般需要2～3個月甚至更長時間才能完成菌包滿袋，往往造成較高的污染率，從而影響推廣［3］。顆粒原種因其具有菌絲量大、活力旺盛、萌發(fā)點多、松散均一等優(yōu)點，被廣泛用于透氣袋栽培種生產(chǎn)［4］。目前，有關顆粒菌種只見在雙孢蘑菇、灰樹花、平菇、香菇、羊肚菌等食用菌品種上有報道［4-8］，未見大球蓋菇顆粒菌種及作為原種擴繁透氣袋栽培種的相關研究報道。本研究以大球蓋菇菌絲生長速度為評價指標，采用單因素法篩選大球蓋菇顆粒原種培養(yǎng)基，并比較不同配方的顆粒原種擴繁透氣袋菌絲滿袋時間，確立最佳顆粒原種配方和接種量，初步建立透氣袋栽培種生產(chǎn)工藝，為工廠化生產(chǎn)大球蓋菇透氣袋栽培種提供參考。

1 材料與方法

1.1 試驗材料

1.1.1供試菌株

‘大球蓋菇8號’，由福建省農(nóng)業(yè)科學院食用菌研究所遺傳育種研究室提供。

1.1.2培養(yǎng)基材料

小米（C含量29.35%，N含量1.52%）、蔗糖（C含量42.10%）、玉米芯（C含量42.30%，N含量0.48%），細木屑（規(guī)格：長2～5 mm，寬1～2 mm，厚0.5～1 mm；C含量49.18%，N含量0.10%），麩皮（C含量42.48%，N含量2.71%），菜籽粕（C含量37.66%，N含量5.87%）購自福州市場，硅藻巖（100目）購于黑龍江沃坤農(nóng)業(yè)科技有限公司，輕質(zhì)碳酸鈣，粗木屑（規(guī)格：長5～10 mm，寬2～3 mm，

厚1～2 mm，C含量49.18%，N含量0.10%），分析純由天津市科密歐化學試劑有限公司生產(chǎn)。

1.1.3 顆粒原種培養(yǎng)基配方

試驗設置6個大球蓋菇顆粒原種培養(yǎng)基配方，各配方培養(yǎng)基組分比例按質(zhì)量比配制，如表1所示。

1.1.4透氣袋栽培種培養(yǎng)基配方

按質(zhì)量比，配方組分為粗木屑80%，麩皮19%，

輕質(zhì)碳酸鈣1%，加水使培養(yǎng)基含水量達65%。

1.2 試驗方法

1.2.1菌種活化

在潔凈工作臺中，從保藏的斜面大球蓋菇8號，切出0.5 cm×0.5 cm大小的菌塊接入滅菌的PDA平皿中，在生化培養(yǎng)箱中24℃黑暗培養(yǎng)20 d。

1.2.2顆粒原種培養(yǎng)基碳氮含量測定

參考曾輝等［9］方法進行，測定各配方培養(yǎng)基各組分碳氮含量，計算得出每個配方的碳氮比。

1.2.3菌絲生長速度測量

按照1.1.3列舉的配方材料，配制6個顆粒原種培養(yǎng)基處理，分別置于試管（規(guī)格：20 mm×

200 mm），裝量料為試管2/3長度，硅膠塞封口，126℃高溫滅菌2.5 h，冷卻后無菌操作接入1塊直徑為1.0 cm大球蓋菇PDA菌塊，后置于培養(yǎng)室24℃培養(yǎng)，培養(yǎng)7 d后劃線記為起始點，之后每間隔10 d劃線，測量菌絲在試管走菌長度，每個配方處理設置3個重復，計算菌絲平均生長速度。

1.2.4 原種制備

按照1.1.3中顆粒原種配方，配制不同配方培養(yǎng)基，置于250 mL三角瓶內(nèi)，每瓶裝100 mL，126℃高溫滅菌2.5 h，冷卻后無菌操作接入1塊直徑為1.0 cm大球蓋菇PDA菌塊于三角瓶顆?；|(zhì)內(nèi)，后置于培養(yǎng)室24℃培養(yǎng)10 d，均質(zhì)后再培養(yǎng)10 d，待菌絲長滿透氣袋后獲得大球蓋菇顆粒原種。

1.2.5透氣袋栽培種擴繁

依據(jù)1.1.4列舉的配方材料配制大球蓋菇栽培種培養(yǎng)基，置于透氣袋（規(guī)格：20 cm×35 cm×

0.05 cm），裝量料為500 g，封口機熱塑封口，126℃高溫滅菌2.5 h，冷卻后無菌操作條件下開口透氣袋，按照接種量1%要求接入顆粒原種，然后再封口機熱塑封口，翻動透氣袋，使顆粒原種均勻分布在培養(yǎng)基中，后置于培養(yǎng)室24℃培養(yǎng)，每個處理設置10袋，記錄菌絲滿袋時間，計算平均菌絲滿袋時間，篩選出最優(yōu)顆粒原種配方。利用篩選得到的配方顆粒原種培養(yǎng)基，按照接種量0.50%、0.75%、1.00%、1.25%、1.50%、1.75%，擴繁透氣袋栽培種，比較滿袋時間。

1.2.6 數(shù)據(jù)分析

試驗數(shù)據(jù)采用Excel進行整理、標準差分析和作圖。

2結(jié)果與分析

2.1不同配方顆粒原種培養(yǎng)基的碳氮比比較

按照顆?；|(zhì)碳氮含量測定方法，分別測定培養(yǎng)基配方所需各組分碳氮含量，根據(jù)配方計算每個培養(yǎng)基配方的碳氮含量，得出每個配方的碳氮比，結(jié)果如表2 所示，配方Y(jié)FM碳含量最高，碳氮比也最大，分別為42.17%和54.06；配方XGC碳含量最小，碳氮比也最小，分別為23.05%和11.92；其余配方碳氮比介于兩者之間。配方XGM、XGC的碳源以小米為主，YFM、YGM、YFC、YGC的碳源以玉米芯為主；配方XGC的氮源以菜籽粕為主，XGM的氮源主要來自小米，YFM、YGM的氮源以麩皮為主，YFC、YGC的氮源來自菜籽粕和麩皮。

2.2不同配方顆粒原種培養(yǎng)基的菌絲生長速度比較

配制的6個不同配方的顆粒原種培養(yǎng)基，接種大球蓋菇8號試管母種后菌絲生長速度結(jié)果如圖1、圖2所示，大球蓋菇在配方XGM中菌絲平均生長速度最快，達2.99 mm/d，且菌絲濃白，與其他配方的菌絲生長速度差異顯著（P＜0.05）；配方Y(jié)FM中的菌絲平均生長速度次之，為2.59 mm/d；配方Y(jié)GM、YFC、XGC的菌絲生長速度分別為2.43、2.24和2.13 mm/d，其中配方Y(jié)GM與配方Y(jié)FC中的菌絲生長速度差異不顯著（P＞0.05），配方Y(jié)FC與配方XGC中的菌絲生長速度差異也差異不顯著（P＞0.05），但XGC配方的菌絲最為濃白；YGC配方的菌絲生長速度最慢，為1.97 mm/d。

圖1" " 不同配方顆粒原種培養(yǎng)基的菌絲生長速度

Figure 1" The mycelial growth rate of the particle pre-culture spawn in the different medium formulas

不同小寫字母表示差異顯著（P＜0.05），下同

The different lowercase letters indicate the significant difference at P＜0.05. The same as below

圖2" " 菌絲在不同配方顆粒原種培養(yǎng)基

試管中的生長情況

Figure 2" The growth of hyphae in test tubes of the particle pre-culture spawn in the different medium formulas

2.3不同顆粒原種擴繁透氣袋栽培種的滿袋時間比較

根據(jù)配方配制大球蓋菇栽培種培養(yǎng)基，接入不同顆粒原種，比較擴繁透氣袋栽培種滿袋時間，結(jié)果如圖3、圖4所示，配方XGM顆粒原種擴繁透氣袋栽種平均滿袋時間最短，為15.5 d，其次為配方XGC，平均滿袋時間為15.7 d，兩者的差異不顯著（P＞0.05），但均顯著快于其他4個配方處理。配方Y(jié)GC的滿袋時間為19 d，配方Y(jié)FC的滿袋時間為21.4d，配方Y(jié)FM的平均滿袋時間為25.7 d，配方Y(jié)GM的平均滿袋時間最長，為27.8 d，且與其他配方的平均滿袋時間差異顯著（P＜0.05）。因此，結(jié)合大球蓋菇菌絲的生長速度，確立配方XGM為顆粒原種擴繁透氣袋栽培種的最優(yōu)配方：小米50%，蔗糖 2%，細木屑20%，硅藻巖26%，輕質(zhì)碳酸鈣2%。

2.4擴繁透氣袋栽培種接種量的確立

利用篩選得到的配方XGM顆粒原種培養(yǎng)基，按照不同接種量擴繁大球蓋菇透氣袋栽培種，比較滿袋時間，結(jié)果如圖5、圖6所示，大球蓋菇菌絲滿袋時間隨著顆粒原種接種量的增加而縮短，其中接種量為0.50%的平均滿袋時間最長，為22.6 d；接種量為0.75%、1.00%、1.25%、1.50%的平均滿袋時間依次為19.8 d、15.5 d、13.4 d、12.8 d；接種量為1.75%的平均滿袋時間最短，為12.5 d，但與1.50%接種量平均滿袋時間差異不顯著（P＞0.05），1.50%接種量與1.25%接種量平均滿袋時間差異也不顯著（P＞0.05），考慮到以較小的接種量達到較高的制種效率，因此，確立顆粒原種擴繁透氣袋最佳接種量為1.25%。

3討論

大球蓋菇顆粒原種培養(yǎng)基采用的碳源為小米、細木屑和玉米芯，氮源為麩皮和菜籽粕，礦物質(zhì)顆粒為硅藻巖，這些原料來源廣泛，廉價易得，為顆粒原種穩(wěn)定生產(chǎn)提供保證。食用菌菌種配方優(yōu)化涉及多種因素，無論哪一種食用菌培養(yǎng)基配方的核心均為碳氮比［10］。王麗等人研究了蜜環(huán)菌人工菌棒基質(zhì)碳氮比對烏天麻產(chǎn)量及營養(yǎng)品質(zhì)的影響［11］，結(jié)果表明蜜環(huán)菌人工菌棒基質(zhì)碳氮比對烏天麻的產(chǎn)量、基本營養(yǎng)成分含量及氨基酸的營養(yǎng)品質(zhì)均有顯著影響；麥艷珍等人研究了不同碳氮比栽培料對血芝菌絲及子實體生長的影響［12］，當碳氮比在54.0～61.9時，菌絲生長快，平均滿袋時間為37.3～37.6 d；當碳氮比在50.7～78.6時，子實體長速適中；當碳氮比在50.7～57.7時，子實體農(nóng)藝性狀良好且產(chǎn)量較高；胡延如等人研究了培養(yǎng)料不同碳氮比對糙皮側(cè)耳生長和營養(yǎng)成分含量的影響［13］，發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)料含氮量呈上升趨勢，碳氮比呈下降趨勢；菌絲生長速度呈下降趨勢；生物學效率呈先升高后降低趨勢；子實體粗蛋白含量呈上升趨勢，而子實體總糖、粗脂肪和粗纖維含量呈下降趨勢。本研究在配方篩選試驗中，大球蓋菇均能在所有配方的顆粒培養(yǎng)基中生長，但菌絲生長速度有所不同，其中配方XGM與配方XGC相比，由于它們的細木屑和菜籽粕含量不同，造成二者間的碳氮比不同，其中配方XGM的碳氮比為32.50；配方XGC的碳氮比為11.92 。配方XGM的碳氮比大于配方XGC，配方XGM的菌絲生長速度顯著大于配方XGC，但配方XGC的菌絲比配方XGM的濃密，這表明顆粒原種基質(zhì)配方碳氮比越小，菌絲平均生長速度越慢，菌絲在培養(yǎng)基內(nèi)生長越濃密，試驗結(jié)果與曾志恒等［4］對雙孢蘑菇顆粒研究結(jié)果類似。

配方Y(jié)GM與配方Y(jié)FM之間的區(qū)別在于玉米芯、細木屑和硅藻巖的添加比例不同，配方Y(jié)GM的碳氮比為52.52，配方Y(jié)FM的碳氮比為54.06，兩者的碳氮比相近，雖然表現(xiàn)出配方Y(jié)FM的菌絲生長速度快于配方Y(jié)GM，但兩者的差異不顯著（P＞0.05）。配方Y(jié)GM和配方Y(jié)FM在所有配方中的碳氮比較大，表現(xiàn)出菌絲生長稀疏，作為顆粒原種擴繁透氣袋栽培種滿袋時間最長，表明菌種活力不強，說明配方碳源以玉米芯為主，且碳氮比大的配方不適合作為大球蓋菇顆粒菌種配方，這與陶月等［5］研究結(jié)果玉米芯作為灰樹花顆粒菌種最優(yōu)碳源組分不同，這可能是由于食用菌不同品種對不同碳源偏好不同所導致的。

配方Y(jié)FC與配方Y(jié)GC之間的區(qū)別在于玉米芯、菜籽粕和硅藻巖的添加比例不同，配方Y(jié)FC的碳氮比為30.23，配方Y(jié)GC的碳氮比為22.16，碳氮比較配方Y(jié)GM和配方Y(jié)FM有所降低，即配方Y(jié)FC與配方Y(jié)GC的氮含量有所提高，表現(xiàn)出配方Y(jié)FC與配方Y(jié)GC菌絲生長速度慢于配方Y(jié)GM和配方Y(jié)FM，但擴繁透氣袋栽培種滿袋時間短于配方Y(jié)GM和配方Y(jié)FM，表明顆粒原種配方Y(jié)FC和配方Y(jié)GC菌絲活力優(yōu)于配方Y(jié)GM和配方Y(jié)FM。優(yōu)化配方XGM顆粒原種在菌絲生長速度和擴繁透氣袋栽培種滿袋時間方面都顯著優(yōu)于配方Y(jié)FC、YGC、YGM和YFM，說明顆粒原種既要滿足自身菌絲生長速度快，又要擴繁透氣袋栽培種滿袋時間短條件，因此顆粒原種配方碳氮比應在20：1～30：1范圍內(nèi)較為合適。

眾所周知，雙孢蘑菇是工廠化栽培程度最高的食用菌品種之一，其周年工廠化栽培使用透氣袋栽培種［14］采用混播接種方式能提高機械化程度、縮短菌絲培養(yǎng)時間，這對大球蓋菇工廠化栽培提供很好地借鑒作用。本研究篩選確定最佳顆粒原種配方XGC為小米50%，蔗糖 2%，細木屑20%，硅藻巖26%，輕質(zhì)碳酸鈣2%。顆粒原種擴繁透氣袋栽培種最佳接種量為1.25%，平均滿袋時間為13.4 d。通過優(yōu)化大球蓋菇顆粒原種培養(yǎng)基，初步建立透氣袋栽培種生產(chǎn)工藝，為工廠化生產(chǎn)大球蓋菇透氣袋栽培種奠定基礎；優(yōu)良的透氣袋栽培種也為大球蓋菇大棚設施栽培提供保障。

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（責任編輯：許" " "玲）