野生香菇母種純化與保藏培養(yǎng)基篩選

摘要：【目的】篩選野生香菇的母種純化與保藏培養(yǎng)基，為培養(yǎng)和保藏野生香菇菌株種質(zhì)資源提供適宜條件?！痉椒ā繉募质“矆D縣采集到的野生香菇菌株培養(yǎng)成母種，再分別設(shè)置4種純化與保藏培養(yǎng)基配方，比較培養(yǎng)后菌絲的生長情況與菌落的顏色差異，篩選適宜的培養(yǎng)基配方?！窘Y(jié)果】母種純化培養(yǎng)基中以配方四（馬鈴薯200 g、木屑10 g、黃豆粉10 g、葡萄糖20 g、瓊脂20 g、水1 L）表現(xiàn)最優(yōu)，其菌絲在第3 d開始萌發(fā)，菌絲生長速度最快，達(dá)0.51 cm/d，長勢旺盛、白色，菌落無色素。母種保藏培養(yǎng)基中以配方A（細(xì)木屑78%、麥麩20%、石灰1%、石膏1%）的表現(xiàn)好，其菌絲萌發(fā)率高，長勢旺盛且整齊，菌落無色素，能保藏15個月?！窘Y(jié)論】通過研究篩選出野生香菇適宜的母種純化與保藏培養(yǎng)基，為香菇野生資源的收集純化與長期保藏奠定了基礎(chǔ)。

關(guān)鍵詞：香菇；母種；培養(yǎng)基；純化；保藏

中圖分類號：S646.12" " " " " " " " " " " "文獻(xiàn)標(biāo)識碼：A" " " " " " " " " " "文章編號：2095-5774（2024）04-0308-06

Culture Selection of Purification and Preservation of Mother Spawn

From Wild Lentinula edodes

Wang Xu，Wang Xin，Hu Zhiqiang*，Du Zhongwei，Li Jian，Piao Jiyan，Sun Xiuxia，Wu Wenlin

（Yanbian Academy of Agricultural Sciences，Yanji，Jilin 133000，China）

Abstract：【Objective】In order to select the culture to purificate and preservate of wild Lentinula edodes，to provide suitable conditions for cultivating and preserving germplasm resources of wild Shiitake strains.【Method】Cultured from strain comes to spawn of Shiitake which collected from Antu County，Jilin Province，set up four kinds of purification and preservation medium，compared the difference of growth of mycelium and the colorof the colonies.【Result】Both hyphal may germinate in different purificated and preserve cultures of the spawn of L. edodes，but has big differences.The results showed that the hyphal of L. edodes could grow in all 4 culture，and formula 4（patato 200 g，sawdust 10 g，soybean powder 10 g，glucose 20 g，agar 20 g，water 1 L）was much more suitable for the growth of this strain，which was better than other culture conditions. And the growth rate of mycelium was the highest，reaching 0.51 cm/d，vigorous，white，and the colonies without pigment. Formula A（wood chips 78%，wheat bran 20%，lime 1%，gypsum 1%）was more suitable for long-term culture and preservation of mother spawn，and the germination rate of mycelium is higher，and its growth is vigorous and neat，and the colonies without pigment，may preserve 15 months. 【Conclusion】Studies on selecting the cultures for purification and preservation of wild L. edodes，which laid a foundation for the collection，purification and long-term preservation of wild resources of L. edodes.

Key words：Lentinula edodes；Mother spawn；Culture；Purification；Preservation

香菇（Lentinula edodes）隸屬于擔(dān)子菌門（Basidiomycota ）、傘菌綱（Agaricomycetes）、傘菌目（Agaricales）、光茸菌科（Omphalotaceae）、香菇屬（Lentinula），是我國主要的栽培食用菌種類之一，已有悠久的栽培歷史［1］。其富含較高的蛋白質(zhì)、維生素以及多種礦質(zhì)元素，有著山珍、菇中之王等美稱，香菇具有延緩衰老、降血壓血脂及膽固醇、提高機(jī)體免疫功能等作用［2］。伴隨“一帶一路”“精準(zhǔn)扶貧”和“鄉(xiāng)村振興”等重大發(fā)展機(jī)遇，香菇、黑木耳等食用菌產(chǎn)業(yè)成為許多地區(qū)農(nóng)業(yè)經(jīng)濟(jì)的支柱產(chǎn)業(yè)［3-4］。

優(yōu)良菌種是食用菌生產(chǎn)最重要的基礎(chǔ)性生產(chǎn)資料和關(guān)鍵環(huán)節(jié)，對食用菌發(fā)展起著至關(guān)重要的作用，加上科學(xué)合理的栽培管理措施，才能獲得高產(chǎn)穩(wěn)產(chǎn)的子實體［5-6］。目前香菇母種一般采用PDA斜面保藏法，該方法簡單易行，并能夠?qū)崟r觀察保藏菌種的菌絲生長情況，但PDA培養(yǎng)基不含有木質(zhì)、纖維素等有機(jī)物［7-9］。長期保藏需進(jìn)行不斷繼代培養(yǎng)、復(fù)壯、馴化，并通過利用木屑、礦物油、液氮、甘油、冷凍干燥等方法或技術(shù)來實現(xiàn)［10-11］。

本研究對長白山區(qū)野生香菇資源進(jìn)行收集與利用，充分了解長白山區(qū)香菇的分布和類型，通過對分離的香菇菌株進(jìn)行篩選，能夠摸索野生香菇菌絲的生長特性。通過利用不同培養(yǎng)基質(zhì)對野生香菇母種培養(yǎng)條件進(jìn)行篩選，并基于木屑等原材料對菌種保藏條件進(jìn)行摸索。初步探討香菇母種培養(yǎng)基的適宜配方和保藏條件，從而有效提高香菇菌種質(zhì)量，以期篩選出適合規(guī)?；a(chǎn)、應(yīng)用的培養(yǎng)條件及配方，為香菇產(chǎn)業(yè)發(fā)展提供更好的理論依據(jù)。

1材料與方法

1.1 供試材料

供試菌株分離于采自吉林省安圖縣福星林場的香菇子實體樣本，野外生長情況見圖1。標(biāo)本保藏于延邊朝鮮族自治州農(nóng)業(yè)科學(xué)院標(biāo)本室，菌株保藏于食用菌所菌種保藏室。利用徠卡 DM2000顯微鏡觀察孢子、鎖狀聯(lián)合等形態(tài)學(xué)形態(tài)特征，結(jié)果為孢子印白色，孢子光滑、無色、橢圓形至卵圓形、大小為（5～7）×（3～4）μm，雙核菌絲有鎖狀聯(lián)合，經(jīng)檢索相關(guān)資料鑒定為香菇（Lentinula edodes）。

1.2 試驗方法

1.2.1母種培養(yǎng)

利用PDA斜面培養(yǎng)基進(jìn)行野生香菇菌株的分離與培養(yǎng)，培養(yǎng)溫度為25 ℃。PDA培養(yǎng)基配方：馬鈴薯（去皮）200 g，葡萄糖20 g，瓊脂20 g，水1Ｌ，pH自然。

1.2.2母種純化培養(yǎng)基篩選

母種純化、篩選培養(yǎng)基制作時，設(shè)置4種配方。配方一：加富PDA培養(yǎng)基，馬鈴薯（去皮）200 g、MgSO4 2 g、KH2PO4 2 g、葡萄糖20 g、瓊脂20 g、水1 L，pH自然；配方二：馬鈴薯（去皮）200 g、玉米粉10 g、麥麩10 g、葡萄糖20 g、瓊脂20 g、水1 L，pH自然；配方三：馬鈴薯（去皮）200 g、玉米粉10 g、黃豆粉10 g、葡萄糖20 g、瓊脂20 g、水1 L，pH自然；配方四：馬鈴薯（去皮）200 g、木屑10 g、黃豆粉10 g、葡萄糖20 g、瓊脂20 g、水1 L，pH自然。

1.2.3 母種保藏培養(yǎng)基

母種保藏培養(yǎng)基制作時，設(shè)置4種配方。配方A：細(xì)木屑78%、麥麩20%、石灰1%、石膏1%；配方B：細(xì)木屑78%、精糠20%、石灰1%、石膏1%；配方C：細(xì)木屑60%、精糠20%、黃豆粉10%、玉米面8%、石灰1%、石膏1%；配方D：PDA斜面培養(yǎng)基。

1.2.4培養(yǎng)基制作

按照試驗配方稱取相應(yīng)的材料，置于１L水中煮制，保持沸騰狀態(tài)30 min后過濾，將過濾好的溶液倒入鍋中繼續(xù)煮沸，依次加入瓊脂和葡萄糖等，混合加熱后分裝三角瓶中。

1.2.5 滅菌及倒平板

將配置好的母種純化、保藏培養(yǎng)基置于滅菌鍋中，高溫高壓（121 ℃）滅菌30 min。降溫后在紫外滅菌30 min的超凈工作臺中，將不同試驗培養(yǎng)基分別倒入無菌的培養(yǎng)皿（Φ - 9 cm）中，每個培養(yǎng)皿裝液量約18 mL，靜置、冷卻。

1.2.6 接種及培養(yǎng)

將制作好的純化培養(yǎng)基靜置24 h無冷凝水后接種，將接種（接種塊大小Φ - 0.5 cm）后的母種標(biāo)記好，每組4個重復(fù)，放入25℃的恒溫培養(yǎng)箱中暗光培養(yǎng)10 d。將接種后的保藏菌種置于25℃的恒溫培養(yǎng)箱中暗光培養(yǎng)，每組30個重復(fù)，菌絲長滿后置于4～6℃冰箱中保存。

1.2.7 測量與分析

母種純化培養(yǎng)基篩選試驗自接種24 h后，間隔24 h觀察和記錄菌絲萌發(fā)時間、菌落色素；菌絲萌發(fā)后利用十字交叉法及畫線法記錄長勢，并測量菌落的生長直徑，測定香菇菌株平均生長速度。母種保藏培養(yǎng)基試驗記錄萌發(fā)率，觀察菌絲整齊度、菌落色素有無等，查看保藏期間菌絲長勢并記錄菌株保藏時間。相關(guān)數(shù)據(jù)采用Excel 2007、SPSS等軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)處理和統(tǒng)計分析。

2結(jié)果與分析

2.1 不同母種純化培養(yǎng)基對野生香菇菌絲生長的影響

野生香菇菌絲在不同配方母種純化培養(yǎng)基里的生長情況如表1、圖2所示，分離的野生香菇菌株在不同的培養(yǎng)基中均能生長，但生長情況存在較大的差異。配方二和配方四中菌絲均在第3 d開始萌發(fā)，配方一和配方三均為第4 d；菌絲長勢以配方四的最優(yōu)，為旺盛，配方三其次，配方一、二則為一般；菌絲生長速度也以配方四的最快，達(dá)0.51 cm/d，但與配方二、三之間無顯著差異，僅顯著快于配方一。配方一、四的菌落無色素，而配方二、三的菌落有色素。4種母種純化培養(yǎng)基中配方中菌絲在第3 d開始萌發(fā)，菌絲生長較快、長勢旺盛、白色，菌落無色素；配方三次之，長勢均優(yōu)于其他對照。結(jié)合菌絲萌發(fā)時間、生長速度、長勢等生長情況及菌落色素有無情況，結(jié)果表明配方四為香菇母種純化最佳配方。

2.2 不同母種保藏培養(yǎng)基對野生香菇菌絲生長的影響

利用4種培養(yǎng)基進(jìn)行香菇母種保藏對比試驗，觀測不同培養(yǎng)基內(nèi)菌絲長勢、整齊度、萌發(fā)率及菌落色素等情況，從表2及圖3可以看出不同條件下香菇母種均能萌發(fā)，但也存在差異。4種配方培養(yǎng)基的菌絲萌發(fā)率為94.9%～97.8%，其中配方A萌發(fā)率最高，配方C次之，二者差異不顯著，但都顯著高于配方D。萌發(fā)后配方A的菌絲長勢旺盛，配方C、D次之，配方B較一般；配方A的菌絲整齊度整齊，優(yōu)于其他處理，配方B的菌絲比較雜亂；配方B的菌落有產(chǎn)生少量色素，其他配方無色素。綜合保藏時間、萌發(fā)率、菌絲長勢及整齊度、菌落色素有無等生長情況，結(jié)果表明配方A萌發(fā)率高，菌絲生長情況好且保藏時間能達(dá)到15個月，保藏時間明顯長于其他處理，更適于香菇菌株的長期保存。

3 結(jié)論與討論

優(yōu)良菌種的生長須有其適宜的生長環(huán)境，在適宜的培養(yǎng)條件下，其生理代謝才能正常進(jìn)行，表現(xiàn)出優(yōu)良的性狀，而最根本條件為適宜的培養(yǎng)基，以保證優(yōu)良菌種為前提進(jìn)行母種培養(yǎng)基的篩選及優(yōu)化和保藏，能夠保證母種的質(zhì)量與活力。史紅鴿等添加木屑后優(yōu)化香菇母種培養(yǎng)基［9］，但本純化試驗培養(yǎng)基在PDA培養(yǎng)基的基礎(chǔ)上加入細(xì)木屑、麥麩、黃豆粉等濾汁，為其生長提供更加豐富的營養(yǎng)，并對篩選菌種退化原因及復(fù)壯有一定的促進(jìn)作用［12］，在配方四（馬鈴薯200 g、木屑10 g、黃豆粉10 g、葡萄糖20 g、瓊脂20 g、水1 L）培養(yǎng)條件下利于保持菌種的特性。

姜寧等以小米粒為培養(yǎng)基質(zhì)，探索香菇菌種保藏方法［13］。而本保藏培養(yǎng)基篩選利用木屑、精糠、玉米面等替代料作為試驗材料，能夠提高分解纖維素的能力和抗病能力，與PDA斜面保藏相比菌絲生長速度更快，菌絲潔白粗壯，有效保持菌絲活力及分解纖維素能力。配方A（細(xì)木屑78%、麥麩20%、石灰1%、石膏1%）培養(yǎng)條件下菌絲生長旺盛、濃密，保存時間長、萌發(fā)率高，有效延長菌種保藏時間4～6個月，能夠長期保持菌種優(yōu)良特性，防止菌種退化。

野生香菇母種培養(yǎng)中，伴隨菌絲在不同培養(yǎng)條件下生長，生物量的增加，菌絲鎖狀聯(lián)合數(shù)量、菌絲形態(tài)等都會發(fā)生相應(yīng)的變化［14］，菌絲不同培養(yǎng)基中出現(xiàn)較明顯的區(qū)別。綜合不同培養(yǎng)基中菌絲的萌發(fā)時間、長勢、色素有無等因素，結(jié)果表明配方四（馬鈴薯200 g、木屑10 g、黃豆粉10 g、葡萄糖20 g、瓊脂20 g、水1 L）更適合該菌株母種培養(yǎng)，配方A（細(xì)木屑78%、麥麩20%、石灰1%、石膏1%）適合母種保藏，但關(guān)于菌絲出現(xiàn)退化、老化的特征有待進(jìn)一步研究。

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（責(zé)任編輯：許" " 玲）