不同綿羊品種的產(chǎn)羔數(shù)候選基因遺傳效應(yīng)分析

摘 要：【目的】研究不同綿羊品種產(chǎn)羔數(shù)候選基因的遺傳效應(yīng)。

【方法】以4個(gè)綿羊品種（多浪羊468只、德國(guó)美利奴羊152只、薩?？搜?57只、湖羊600只）為樣本，利用擴(kuò)增受阻突變體系PCR技術(shù)（ARMS-PCR）、限制性內(nèi)切酶片段長(zhǎng)度多態(tài)性技術(shù)（RFLP）等方法，檢測(cè)4個(gè)繁殖力候選基因COIL、FSHR、GUCY1A1、BMPRIB遺傳多態(tài)性，并分析其多態(tài)性與產(chǎn)羔數(shù)相關(guān)性。

【結(jié)果】COIL基因g.7 321 466Ggt;C位點(diǎn)在多浪、德國(guó)美利奴、薩?？?、湖羊上突變純合GG基因型頻率在0.3左右，在多浪羊中CC基因型極顯著高于CG、GG，CG基因型極顯著高于GG；德國(guó)美利奴羊中GG基因型顯著高于CG、CC，CG基因型顯著高于GG；在薩?？恕⒑蛑蠫G、CG基因型極顯著高于CC。BMPRIB基因在湖羊中BB、B+基因型產(chǎn)羔數(shù)極顯著高于++，但其他品種效果不理想。FSHR基因g.75 320 741Cgt;T位點(diǎn)、CUCY基因g.43266624Ggt;A位點(diǎn)對(duì)綿羊產(chǎn)羔數(shù)影響較低。

【結(jié)論】COIL基因g.7321466Ggt;C位點(diǎn)有望替代BMPRIB基因成為新的產(chǎn)羔數(shù)性狀選育的分子標(biāo)記。

關(guān)鍵詞：綿羊；COIL；FSHR；GUCY1A1；BMPRIB；產(chǎn)羔數(shù)

中圖分類號(hào)："" 文獻(xiàn)標(biāo)志碼：A"" 文章編號(hào)：1001-4330（2024）06-1544-09

0 引 言

【研究意義】產(chǎn)羔數(shù)性狀的遺傳力低，基因型選擇較傳統(tǒng)方法會(huì)獲得較大的遺傳進(jìn)展，因此，產(chǎn)羔數(shù)功能基因和分子標(biāo)記的研究成為熱點(diǎn)。繁殖力性狀如排卵率和產(chǎn)羔數(shù)可以由許多影響較小的基因進(jìn)行遺傳調(diào)節(jié)，有時(shí)也可以由單個(gè)影響較大的基因進(jìn)行遺傳調(diào)節(jié)［1］。【前人研究進(jìn)展】BMPRIB基因（FecB）是影響B(tài)ooroola羊的繁殖力基因［2］，近年來(lái)，在中國(guó)的湖羊［3］、小尾寒羊［4］中發(fā)現(xiàn)了FecB基因?qū)Ξa(chǎn)羔數(shù)的影響，但對(duì)其他綿羊品種產(chǎn)羔數(shù)影響不大。例如，在一些綿羊品種如灘羊、杜泊、薩福克和美利奴中，BMPRIB基因多態(tài)性與產(chǎn)仔數(shù)無(wú)顯著關(guān)聯(lián)［5］?！颈狙芯壳腥朦c(diǎn)】COIL影響卵母細(xì)胞的受精數(shù)量從而影響小鼠的繁殖力，敲除COIL導(dǎo)致每胎產(chǎn)仔數(shù)降低，影響小鼠整體生存力和繁殖力［6］?？扇苄曾B(niǎo)苷酸環(huán)化酶會(huì)影響卵母細(xì)胞的減數(shù)分裂從而影響動(dòng)物排卵［7］。促卵泡激素（FSH）由腦垂體前葉分泌，將影響卵泡的發(fā)育中卵母細(xì)胞的減數(shù)分裂。在缺乏足夠FSH的情況下，卵泡不能在早期竇期之后生長(zhǎng)和成熟，會(huì)導(dǎo)致排卵不發(fā)生［8］。COIL、GUCY1A1、FSHR對(duì)綿羊產(chǎn)羔數(shù)有影響，但未進(jìn)行不同品種的大群檢驗(yàn)。急需尋找一個(gè)更有效的候選基因或分子標(biāo)記位點(diǎn)?！緮M解決的關(guān)鍵問(wèn)題】以4種綿羊品種（多浪羊468只、德國(guó)美利奴羊152只、薩?？搜?57只、湖羊600只）為樣本，利用擴(kuò)增受阻突變體系PCR技術(shù)（ARMS-PCR）、限制性內(nèi)切酶片段長(zhǎng)度多態(tài)性技術(shù)（RFLP）等方法，檢測(cè)4個(gè)繁殖力候選基因COIL、FSHR、GUCY1A1、BMPRIB遺傳多態(tài)性，并分析其多態(tài)性與產(chǎn)羔數(shù)相關(guān)性。

1 材料與方法

1.1 材 料

采集麥蓋提刀郎陽(yáng)光農(nóng)牧科技有限公司羊場(chǎng)468只多浪羊、庫(kù)爾勒羊場(chǎng)152只德國(guó)美利奴羊、哈密健坤牧業(yè)羊場(chǎng)600只湖羊、瑪納斯日發(fā)西域羊場(chǎng)157只薩福克健康經(jīng)產(chǎn)母羊（2～3胎次）血樣（均為雙羔的母羊），同時(shí)選取少量單羔的作為對(duì)照。

1.2 方 法

1.2.1 基因組DNA提取

采用酚-氯仿抽提法，提取基因組DNA，并用1%瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)提取DNA的完整度與質(zhì)量。

1.2.2 聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)-限制性片段長(zhǎng)度多態(tài)性（PCR-RFLP）技術(shù)

參照第三版《分子克隆試驗(yàn)指南》方法。

1.2.3 擴(kuò)增受阻突變體系PCR技術(shù)（ARMS-PCR）

根據(jù)篩選到的FSHR基因g.75320741Cgt;T，序列號(hào)NC_019460.2；GUCY1A1基因g.43266624Ggt;A，序列號(hào)NC_019474.2；COIL基因g.7321466Ggt;C，序列號(hào)NC_019468.2在線NCBI網(wǎng)絡(luò)平臺(tái)設(shè)計(jì)引物，由上海生物工程技術(shù)有限責(zé)任公司合成。表1

ARMS-PCR反應(yīng)體系為PCR Mix：COIL、GUCY1A1、FSHR分別為10、10、10 μL；ddH2O：COIL、GUCY1A1、FSHR分別為6.6、7、6 μL；內(nèi)引物上游F1：COIL、GUCY1A1、FSHR分別為0.9、0.8、1.2 μL；內(nèi)引物下游R1：COIL、GUCY1A1、FSHR分別為0.9、0.8、1.2 μL；外引物上游F2：COIL、GUCY1A1、FSHR分別為0.3、0.2、0.3 μL；外引物下游R2：COIL、GUCY1A1、FSHR分別為0.3、0.2、0.3 μL；DNA：COIL、GUCY1A1、FSHR分別為1、1、1 μL。

ARMS-PCR反應(yīng)程序：

94℃預(yù)變性5 min，94℃變性30 s，35個(gè)循環(huán)，（COIL、FSHR）62℃退火30 s/GUCY1A1 61℃退火30 s，35個(gè)循環(huán)，72℃延伸1 min，35個(gè)循環(huán)，72℃延伸5 min，4℃保存。PCR擴(kuò)增產(chǎn)物用2%瓊脂糖凝膠進(jìn)行電泳檢測(cè)。

1.3 數(shù)據(jù)處理

數(shù)據(jù)用Excel整理統(tǒng)計(jì)；群體遺傳規(guī)律的計(jì)算可使用POPGENE32、PIC-CALC能幫助快速計(jì)算基因型頻率、基因純合度（Ho）、基因頻率、基因雜合度（He）、有效等位基因數(shù)（Ne）及多態(tài)信息含量（PIC）。利用SPSS 23.0中單因素方差分析對(duì)平均產(chǎn)羔數(shù)和突變位點(diǎn)基因型進(jìn)行關(guān)聯(lián)分析，產(chǎn)羔數(shù)以“平均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差”表示。

2 結(jié)果與分析

2.1 綿羊基因組DNA檢測(cè)

研究表明，片段清晰，沒(méi)有拖尾，1、2號(hào)泳道是多浪羊基因組；3、4號(hào)泳道是德國(guó)美利奴羊基因組；5、6號(hào)泳道是薩?？搜蚧蚪M；7～9號(hào)泳道是湖羊基因組DNA。圖1

2.2 BMPRIB基因的PCR擴(kuò)增產(chǎn)物檢測(cè)

研究表明，目標(biāo)片段擴(kuò)增特異性良好，得到140 bp大小目標(biāo)片段，無(wú)其他雜帶，可用作后續(xù)試驗(yàn)。1、2號(hào)泳道為多浪羊PCR擴(kuò)增產(chǎn)物；3、4號(hào)泳道為德國(guó)美利奴羊PCR擴(kuò)增產(chǎn)物；5、6號(hào)泳道為薩?？搜騊CR擴(kuò)增產(chǎn)物；7～9號(hào)泳道為湖羊PCR擴(kuò)增產(chǎn)物。圖2

2.3 BMPRIB基因的PCR-RFLP檢測(cè)

研究表明，1、3、4、6號(hào)泳道為野生型++基因型，2、5號(hào)泳道為B+基因型；德國(guó)美利奴羊PCR-RFLP檢測(cè)結(jié)果，1、2號(hào)泳道為B+基因型，3、4、5號(hào)泳道野生型++基因型；湖羊PCR-RFLP檢測(cè)結(jié)果，1、3、4、5、7號(hào)泳道為突變純合BB基因型，2號(hào)泳道野生型++基因型，6號(hào)泳道為B+基因型；薩福克羊PCR-RFLP檢測(cè)結(jié)果，1～5號(hào)泳道為野生型++基因型，未檢出突變。圖3

2.4 COIL、FSHR、GUCY1A1基因的ARMS-PCR擴(kuò)增產(chǎn)物檢測(cè)

2.4.1 COIL基因的ARMS-PCR擴(kuò)增產(chǎn)物檢測(cè)

研究表明，多浪羊1號(hào)泳道為突變純合GG基因型，2、3、4號(hào)泳道為CG基因型；5號(hào)泳道為野生型CC基因型；德國(guó)美利奴羊6號(hào)泳道為突變純合GG基因型，2、3、5號(hào)泳道為CG基因型；1、4號(hào)泳道為野生型CC基因型；湖羊2號(hào)泳道為突變純合GG基因型，3號(hào)泳道為CG基因型；1、4～7號(hào)泳道為野生型CC基因型；薩?？搜?號(hào)泳道為突變純合GG基因型，1、3、4號(hào)泳道為CG基因型；2號(hào)泳道為野生型CC基因型；條帶清晰、且片段大小正確、分型成功。圖4

2.4.2 FSHR基因的ARMS-PCR擴(kuò)增產(chǎn)物檢測(cè)

研究表明，多浪羊1、7號(hào)泳道為野生型CC基因型，2～6號(hào)泳道為CT基因型；德國(guó)美利奴羊1～3、5號(hào)泳道為野生型CC基因型，4號(hào)泳道為CT基因型；湖羊2、4號(hào)泳道為野生型CC基因型，1、3、5號(hào)泳道為CT基因型；薩?？搜?、2、5號(hào)泳道為野生型CC基因型，3、4號(hào)泳道為CT基因型；條帶清晰，且片段大小正確、分型成功。圖5

研究表明，多浪羊1、3～6、8號(hào)泳道為野生型CC基因型，2、7號(hào)泳道為CT基因型；德國(guó)美利奴羊1、2號(hào)泳道為野生型CC基因型，3～5號(hào)泳道為CT基因型；湖羊3號(hào)泳道為野生型CC基因型，1、2、4號(hào)泳道為CT基因型；薩?？搜?號(hào)泳道為野生型CC基因型，1、2、4號(hào)泳道為CT基因型；條帶清晰，且片段大小正確、分型成功。圖6

2.5 COIL、FSHR、GUCY1A1、BMPRIB基因的遺傳多樣性

2.5.1 COIL、FSHR、GUCY1A1、BMPRIB基因在4個(gè)綿羊品種中的基因型頻率、等位基因頻率

研究表明，在多浪羊、德國(guó)美利奴羊、湖羊3個(gè)品種中G等位基因是優(yōu)勢(shì)等位基因；在薩?？搜蛑蠧等位基因是優(yōu)勢(shì)等位基因。在4個(gè)綿羊群體中C等位基因?yàn)閮?yōu)勢(shì)等位基因。在4個(gè)綿羊品種中G等位基因?yàn)閮?yōu)勢(shì)等位基因。在湖羊中B等位基因是優(yōu)勢(shì)等位基因；在多浪、德國(guó)美利奴羊中+等位基因?yàn)閮?yōu)勢(shì)等位基因。表2

2.5.2 COIL、FSHR、GUCY1A1、BMPRIB基因在4個(gè)綿羊品種中的Ho、He、Ne和PIC

研究表明，COIL基因在湖羊群體中處于Hardy-Weinberg平衡狀態(tài)，在4個(gè)綿羊品種中均為中度多態(tài)位點(diǎn)。FSHR基因在薩福克羊群體中處于Hardy-Weinberg平衡狀態(tài)，在多浪羊、德國(guó)美利奴羊中為中度多態(tài)位點(diǎn)，在薩?？搜?、湖羊上為低度多態(tài)位點(diǎn)。GUCY1A1在德國(guó)美利奴、薩?？恕⒑蛉后w中處于Hardy-Weinberg平衡狀態(tài)。4個(gè)品種均為低度多態(tài)位點(diǎn)。BMPRIB基因在多浪羊、德國(guó)美利奴羊群體中處于Hardy-Weinberg平衡狀態(tài)，在湖羊中為中度多態(tài)位點(diǎn)，多浪羊、德國(guó)美利奴羊中為低度多態(tài)位點(diǎn)。表3

2.6 COIL、FSHR、GUCY1A1、BMPRIB基因在4個(gè)綿羊品種中的基因型與產(chǎn)羔數(shù)的關(guān)聯(lián)性

研究表明，COIL基因在多浪羊中，CC基因型產(chǎn)羔數(shù)極顯著高于（Plt;0.01）CG、GG基因型，CG基因型產(chǎn)羔數(shù)極顯著高于（Plt;0.01）GG基因型；德國(guó)美利奴羊GG基因型產(chǎn)羔數(shù)顯著高于（Plt;0.05）CG、CC基因型，CG基因型產(chǎn)羔數(shù)顯著高于（Plt;0.05）CC基因型；薩?？搜?、湖羊GG、CG基因型產(chǎn)羔數(shù)極顯著高于（Plt;0.01）CC基因型。FSHR基因在多浪羊、德國(guó)美利奴羊中，CT基因型產(chǎn)羔數(shù)顯著高于（Plt;0.05）CC基因型，在薩福克羊、湖羊中，CT基因型產(chǎn)羔數(shù)及顯著高于（Plt;0.01）CC基因型。GUCY1A1基因在多浪羊群體中，GA基因型產(chǎn)羔數(shù)顯著高于（Plt;0.05）GG基因型；在德國(guó)美利奴羊群體中，GG基因型產(chǎn)羔數(shù)極顯著高于（Plt;0.01）GA基因型。BMPRIB基因在多浪羊群體中，B+型產(chǎn)羔數(shù)顯著高于（Plt;0.05）++型；德國(guó)美利奴羊中B+、++ 2種基因型對(duì)應(yīng)產(chǎn)羔數(shù)之間不顯著（Pgt;0.05）；湖羊群體中，BB、B+ 2種基因型產(chǎn)羔數(shù)都極顯著高于（Plt;0.01）++型。表4

3 討 論

3.1 COIL基因?qū)Σ煌d羊品種產(chǎn)羔數(shù)的影響

敲除COIL對(duì)小鼠整體生存力和繁殖力有影響，缺少coil基因的小鼠出現(xiàn)明顯的生育力和繁殖力缺陷［6］。試驗(yàn)通過(guò)篩選也發(fā)現(xiàn)COIL基因與產(chǎn)羔數(shù)密切相關(guān)。馬海玉［9］發(fā)現(xiàn)COIL基因通過(guò)影響蛋白翻譯過(guò)程的運(yùn)輸和定位來(lái)調(diào)節(jié)繁殖機(jī)制，COIL基因可以顯著的提高綿羊纖維細(xì)胞的增殖和活性。在不同綿羊品種中均分型得到3種基因型；在與產(chǎn)羔數(shù)關(guān)聯(lián)分析發(fā)現(xiàn)對(duì)產(chǎn)羔數(shù)有顯著影響。

3.2 FSHR、GUCY1A1基因?qū)Σ煌d羊品種產(chǎn)羔數(shù)的影響

促卵泡激素受體（FSHR）在動(dòng)物卵泡發(fā)育中起重要作用，F(xiàn)SHR在超排羔羊和正常羔羊卵巢主要表達(dá)于卵泡顆粒細(xì)胞［10］。馬海玉［9］發(fā)現(xiàn)FSHR與卵泡發(fā)育進(jìn)程有關(guān)。對(duì)于調(diào)節(jié)減數(shù)分裂恢復(fù)和卵母細(xì)胞成熟的完成也有作用，而且FSHR的純合突變是有害的，通過(guò)這些影響排卵導(dǎo)致其對(duì)繁殖性能的影響。小尾寒羊和湖羊具有與產(chǎn)羔數(shù)相關(guān)的FSHR基因g.47Cgt;T多態(tài)性位點(diǎn)［11］。Pan等［12］將FSHR基因型與產(chǎn)羔數(shù)關(guān)聯(lián)分析表明，F(xiàn)SHR基因的同義突變g.-47Cgt;T與產(chǎn)仔數(shù)有明顯的相關(guān)；研究發(fā)現(xiàn)FSHR基因已經(jīng)與卵巢衰竭有關(guān)，純合子可能是一個(gè)有害的變異體的個(gè)體［13］。未在4個(gè)不同綿羊品種中發(fā)現(xiàn)突變純合，也可能是純合突變TT型有害致死，但還有待進(jìn)一步研究。

NO在排卵過(guò)程中的調(diào)節(jié)作用，GUCY1A1基因的突變會(huì)破壞一氧化氮的組成結(jié)構(gòu)，使卵母細(xì)胞停止減數(shù)分裂對(duì)排卵產(chǎn)生影響從而導(dǎo)致綿羊?qū)Ψ敝沉档停?4］。有研究表明NO對(duì)于卵泡發(fā)育是必需的，eNOS在選擇排卵的優(yōu)勢(shì)卵泡中的作用［15］。Guo等［16］發(fā)現(xiàn)補(bǔ)充精氨酸可能會(huì)調(diào)節(jié)卵巢中關(guān)鍵的NO/PGC-1α信號(hào)通路基因的表達(dá)，從而加速排卵過(guò)程。馬海玉［9］在GUCY1A1基因g.43266624位點(diǎn)成功在和田羊和阿勒泰羊中分型，并且發(fā)現(xiàn)此位點(diǎn)的突變?cè)谝欢ǔ潭壬蠒?huì)降低和田羊和阿勒泰羊的產(chǎn)羔能力。在4種綿羊中發(fā)現(xiàn)2種基因型，無(wú)純合突變，GUCY1A1在4種綿羊群體中均屬于低度多態(tài)，這個(gè)位點(diǎn)的突變幾率小，選擇潛力較小。

3.3 BMPRIB基因?qū)Σ煌d羊品種產(chǎn)羔數(shù)的影響

FecB是首個(gè)在綿羊中鑒定出的具有高繁殖性能的關(guān)鍵基因，與提高綿羊的排卵量和產(chǎn)羔量密切相關(guān)。研究發(fā)現(xiàn)，在湖羊中BB、B+2種基因型產(chǎn)羔數(shù)都極顯著高于++型，BB型與B+型對(duì)應(yīng)產(chǎn)羔數(shù)之間不顯著結(jié)果和前人結(jié)果一致［17、18］。在多浪羊中發(fā)現(xiàn)2種基因型（B+、++），B+型產(chǎn)羔數(shù)顯著高于++型與柏雪梅等［19］研究結(jié)果一致。在德國(guó)美利奴羊中發(fā)現(xiàn)2種基因型（B+、++），B+、++2種基因型對(duì)應(yīng)產(chǎn)羔數(shù)之間不顯著，與王鈞［18］未在德國(guó)美利奴羊中發(fā)現(xiàn)BMPRIB基因的B等位基因突變個(gè)體相比，試驗(yàn)研究的樣本量較大，發(fā)現(xiàn)了少量的B等位基因突變個(gè)體；與劉學(xué)峰等［20］在純種德國(guó)肉用美利奴羊（德肉美）和東北細(xì)毛羊僅含有稀少的B+基因型個(gè)體結(jié)果一致。楊永林等［21］利用FecB基因標(biāo)記輔助選擇技術(shù)，選育擴(kuò)繁多胎薩?？诵缕废?。在薩?？搜蛑兄挥?+基因型，BMPRIB基因不是影響薩福克羊多羔性狀的基因，需要進(jìn)一步發(fā)掘其他基因。

4 結(jié) 論

COIL基因?qū)?個(gè)綿羊產(chǎn)羔數(shù)影響顯著，可以作為篩選多浪羊、德國(guó)美利奴羊、薩福克羊、湖羊高繁殖率的新候選基因。

參考文獻(xiàn)（References）

［1］"Davis G H. Major genes affecting ovulation rate in sheep［J］. Genetics Selection Evolution， 2005， 37（Suppl. 1）： S11-S23.

［2］ Gootwine E， Rozov A， Bor A， et al. Carrying the FecB （Booroola） mutation is associated with lower birth weight and slower post-weaning growth rate for lambs， as well as a lighter mature bodyweight for ewes［J］. Reproduction， Fertility and Development， 2006， 18（4）： 433.

［3］ 祝振碩. 湖羊多胎性狀候選基因BMPR-IB多態(tài)性研究及檢測(cè)技術(shù)優(yōu)化［D］. 楊凌： 西北農(nóng)林科技大學(xué)， 2016.

ZHU Zhenshuo. Study of BMPR-IB Gene as Candidate Gene for Prolificacy in Hu Sheep And Optimization of Molecular Detection Methods for It［D］. Yangling： Northwest A amp; F University， 2016.

［4］ 樊慶燦， 葉祿林， 柳楠， 等. 小尾寒羊FecB基因型與產(chǎn)羔數(shù)相關(guān)的研究［J］. 安徽農(nóng)業(yè)科學(xué)， 2011， 39（20）： 12216-12218.

FAN Qingcan， YE Lulin， LIU Nan， et al. Relevance between BMPR-IB genotypes and litter size in small tailed Han sheep［J］. Journal of Anhui Agricultural Sciences， 2011， 39（20）： 12216-12218.

［5］ Chong Y Q， Liu G Q， Jiang X P. Effect of BMPRIB gene on litter size of sheep in China： a meta-analysis［J］. Animal Reproduction Science，" 2019， 210： 106175.

［6］ Walker M P， Tian L P， Matera A G. Reduced viability， fertility and fecundity in mice lacking the Cajal body marker protein， coilin［J］. PLoS One， 2009， 4（7）： e6171.

［7］ Lancellotti Schwarz K R， Lisboa Pires P R， Mesquita L G， et al. Effect of nitric oxide on the cyclic guanosine monophosphate （cGMP） pathway during meiosis resumption in bovine oocytes［J］. Theriogenology， 2014， 81（4）： 556-564.

［8］ Howles C M. Role of LH and FSH in ovarian function［J］. Molecular and Cellular Endocrinology， 2000， 161（1/2）： 25-30.

［9］ 馬海玉. 新疆地方綿羊產(chǎn)羔數(shù)性狀特異基因的鑒定及功能分析［D］. 烏魯木齊： 新疆農(nóng)業(yè)大學(xué)， 2020.

MA Haiyu. Identification and Functional Analysis of Specific Genes for Litter Size Traits in Xinjiang Local Sheep［D］. Urumqi： Xinjiang Agricultural University， 2020.

［10］ Chu M X， Guo X H， Feng C J， et al. Polymorphism of 5' regulatory region of ovine FSHR gene and its association with litter size in Small Tail Han sheep［J］. Molecular Biology Reports，" 2012， 39（4）： 3721-3725.

［11］ Wang W M， Liu S J， Li F D， et al. Polymorphisms of the ovine BMPR-IB， BMP-15 and FSHR and their associations with litter size in two Chinese indigenous sheep breeds［J］. International Journal of Molecular Sciences， 2015， 16（5）： 11385-11397.

［12］ Pan X Y， Liu S J， Li F D， et al. Molecular characterization， expression profiles of the ovine FSHR gene and its association with litter size［J］. Molecular Biology Reports， 2014， 41（12）： 7749-7754.

［13］ Maddirevula S， Awartani K， Coskun S， et al. A genomics approach to females with infertility and recurrent pregnancy loss［J］. Human Genetics， 2020， 139（5）： 605-613.

［14］ Valerio A， Nisoli E. Nitric oxide， interorganelle communication， and energy flow： a novel route to slow aging［J］. Frontiers in Cell and Developmental Biology， 2015， 3： 6.

［15］ Nakamura Y， Yamagata Y， Sugino N， et al. Nitric oxide inhibits oocyte meiotic maturation［J］. Biology of Reproduction， 2002， 67（5）： 1588-1592.

［16］ Guo Y X， Nie H T， Sun L W， et al. Effects of diet and arginine treatment during the luteal phase on ovarian NO/PGC-1α signaling in ewes［J］. Theriogenology， 2017， 96： 76-84.

［17］ 喇永富， 李發(fā)弟， 楊勤， 等. FecB基因在5個(gè)中國(guó)地方綿羊品種中的多態(tài)性及其與產(chǎn)羔數(shù)的關(guān)聯(lián)分析［J］. 中國(guó)草食動(dòng)物科學(xué)， 2020， 40（2）： 12-17.

LA Yongfu， LI Fadi， YANG Qin， et al. Genetic polymorphism of FecB gene and effect in five Chinese local sheep breeds［J］. China Herbivore Science， 2020， 40（2）： 12-17.

［18］ 王鈞. 5個(gè)綿羊品種BMPR-IB基因多態(tài)性的研究［D］. 蘭州： 甘肅農(nóng)業(yè)大學(xué)， 2013.

WANG Jun. Polymorphism of BMPR-IB Gene in Five Sheep Breeds［D］. Lanzhou： Gansu Agricultural University， 2013.

［19］ 柏雪梅， 薛亞欣， 邢鳳， 等. 策勒黑羊和多浪羊FecB基因多態(tài)性及其與產(chǎn)羔數(shù)的相關(guān)性研究［J］. 黑龍江畜牧獸醫(yī)， 2020，（1）： 7-10.

BAI Xuemei， XUE Yaxin， XING Feng， et al. Association of FecB gene polymorphism with litter size in Cele Black sheep and Duolang sheep［J］. Heilongjiang Animal Science and Veterinary Medicine， 2020，（1）： 7-10.

［20］ 劉學(xué)峰， 張立春， 朱貴， 等. 綿羊FecB基因KASP檢測(cè)方法的建立及其在肉羊育種中的應(yīng)用［J］. 黑龍江畜牧獸醫(yī)， 2020，（7）： 58-61， 66， 159.

LIU Xuefeng， ZHANG Lichun， ZHU Gui， et al. Establishment of KASP detection method for fecB gene in sheep and its application in mutton breeding［J］. Heilongjiang Animal Science and Veterinary Medicine，" 2020，（7）： 58-61， 66， 159.

［21］ 楊永林， 楊華， 張?jiān)粕?等. 多胎薩?？搜蛐缕废档倪x育［J］. 中國(guó)草食動(dòng)物科學(xué)， 2014， 34（S1）： 162-166.

YANG Yonglin， YANG Hua， ZHANG Yunsheng， et al. Breeding of a new line of multiparous Suffolk sheep［J］. China Herbivore Science， 2014， 34（S1）： 162-166.

Analysis of genetic effects of candidate genes for lambing numbers in different sheep breeds

Abstract：【Objective】 To explore candidate genes affecting lambing number in different sheep breeds.

【Methods】" Four sheep breeds （468 multi-wave sheep， 152 German merino sheep， 157 Suffolk sheep and 600 lake sheep） were used as samples， and the genetic polymorphisms of four fecundity candidate genes COIL， FSHR， GUCY1A1 and BMPRIB were detected by amplification hindered mutation system PCR technology （ARMS-PCR） and restriction enzyme fragment length polymorphism （RFLP）， and the correlation between polymorphisms and lambing number was analyzed.

【Results】"" The frequency of homozygous GG genotype in C-site of coil gene g.7321466Ggt;C was about 0.3 in Duolang， German Merino， Suffolk and Hu sheep， CC genotype was significantly higher than that of CG and GG， and CG genotype was significantly higher than that of GG.The GG genotype in German merino sheep was significantly higher than that of CG and CC， and the CG genotype was significantly higher than that of GG.In Suffolk and Hu sheep， the GG and CG genotypes were significantly higher than those of CC.The association between BMPRIB gene genotype and lambing number in Hu sheep showed that the number of lambing of BB and B+ genotypes was significantly higher than that of ++， but the effect of other breeds was not satisfactory.The T locus of FSHR gene g.75320741Cgt; and the g.43266624Ggt;A locus of CUCY1A1 gene had low effects on lambing in sheep.

【Conclusion】" The g.7321466Ggt;C locus of COIL gene is expected to replace BMPRIB gene as a molecular marker for the breeding of lamb number traits.

Key words：sheep; COIL; FSHR; GUCY1A1; BMPRIB; number of lambs