?？谔阋咴\斷方法和預(yù)防措施

摘 要：牛口蹄疫屬于一類動物傳染病，牛只患病后生長發(fā)育速度減緩，給養(yǎng)殖場帶來嚴(yán)重的經(jīng)濟(jì)損失。基于此，從病原學(xué)診斷、血清學(xué)診斷、抗體檢測及PCR技術(shù)檢測等方面概述?？谔阋咴\斷方法，提出做好日常消毒、嚴(yán)格飼料供給、定期免疫接種、規(guī)范引種流程等牛口蹄疫防治措施。

關(guān)鍵詞：牛；口蹄疫；疾病診斷；預(yù)防措施

中圖分類號：S858.23 文獻(xiàn)標(biāo)志碼：B 文章編號：1674-7909（2023）02-98-3

0 引言

牛只感染口蹄疫病毒后會出現(xiàn)體溫升高、口腔發(fā)熱、口腔黏膜潮紅，蹄部、舌頭上和唇部會出現(xiàn)大量水皰等癥狀。病牛的病情因年齡不同而存在一定差異，年齡越小，病情越重、病死率越高。因此，養(yǎng)殖戶應(yīng)加強(qiáng)對?？谔阋叩念A(yù)防、診斷和治療。

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1.1 病原

口蹄疫病毒屬于RNA朊病毒，具有急性、熱性、接觸性等特點，且其變異程度較高。牛口蹄疫在全球范圍內(nèi)均屬于重大傳染性疫病，目前已經(jīng)發(fā)現(xiàn)7個血清型和60多個亞型，血清型為O型的口蹄疫病毒的感染范圍最廣。該病毒對環(huán)境的耐受力較強(qiáng)，尤其是耐寒性較強(qiáng)，在低溫的血液、糞便中存活時間可超過4個月，但是在陽光照射下1 h就會失活。使用氫氧化鈉、碳酸氫鈉、甲醛、過氧乙酸等消毒劑可以滅活此病毒［1］。

1.2 傳播途徑

此病的傳染源是患病牛及攜帶病毒的牛只。健康牛只與含有病原微生物的唾液、乳汁、糞便等接觸之后被感染，或者與患病牛污染的飼草料、用具、飲水等接觸后也會被感染。各年齡階段的牛只均可被該病感染，但是犢牛感染此病毒后的發(fā)病率及病死率顯著高于其他年齡段的牛只［2］。

1.3 臨床表現(xiàn)

此病在牛羊等草食動物中的傳播速度很快，但是由于其具有一定的潛伏期（2～5 d），因此其臨床表現(xiàn)是逐步加重的?；疾∨霈F(xiàn)食欲不振甚至廢退但飲水增加，精神低沉萎靡，體溫逐漸升高到41 °C等癥狀。?；疾『笸Ｖ狗雌c，面部、舌根、牙齦、乳頭、趾間等多個部位出現(xiàn)形狀不規(guī)則、大小不一的水皰，水皰破裂后會有黏液流出。同時，患病牛會出現(xiàn)一系列的并發(fā)癥，如局部組織出現(xiàn)壞死現(xiàn)象，妊娠母牛出現(xiàn)早產(chǎn)、流產(chǎn)等情況，進(jìn)而誘發(fā)心肌炎、胃潰瘍、腸炎等［3］。

2 ?？谔阋咴\斷方法

口蹄疫對牛只的危害較大，因此，及時準(zhǔn)確地對該病做出診斷，把握最佳治療時機(jī)尤為重要。獸醫(yī)根據(jù)臨床表現(xiàn)只能做初步判斷，還需要根據(jù)專業(yè)的實驗室檢測進(jìn)行確診。常見的?？谔阋咴\斷方法有病原學(xué)診斷、血清學(xué)診斷、抗體檢測、PCR技術(shù)檢測4種。

2.1 病原學(xué)診斷

此診斷方法主要是運(yùn)用病毒分離技術(shù)對?？谔阋卟《具M(jìn)行確定，一般包括動物接種和細(xì)胞培養(yǎng)2種。動物接種就是將從患病牛身上采集的原始病料對乳鼠、豚鼠、牛等動物進(jìn)行腹腔接種。若在接種病料后的幾天內(nèi)，乳鼠、豚鼠、牛等動物死亡，則說明存在?？谔阋卟《?。需要注意的是，由于乳鼠、豚鼠等實驗動物較小、投資較少等，檢測人員一般會選擇將其作為病料接種動物。但若發(fā)現(xiàn)致病毒株比較重要，則可以選擇牛等本體動物進(jìn)行接種。目前，常用BHK-21和IB-RS-2傳代細(xì)胞檢測口蹄疫病毒。

2.2 血清學(xué)診斷

常用的血清學(xué)診斷方法包括補(bǔ)體結(jié)合試驗和反向間接血凝集試驗，其中補(bǔ)體結(jié)合試驗是國際通用的、經(jīng)典的口蹄疫病毒檢測和定型方法。補(bǔ)體結(jié)合試驗（CFT）的測定原理：補(bǔ)體均參與抗原-抗體、溶血系統(tǒng)（其作為指示劑）的反應(yīng)，若待檢測的病料中含有病毒的抗原，則抗原與血清中的抗體會發(fā)生特異性反應(yīng)形成復(fù)合物，這就會導(dǎo)致補(bǔ)體與抗原-抗體形成的復(fù)合物進(jìn)行完全結(jié)合，導(dǎo)致溶血系統(tǒng)再無游離的補(bǔ)體可以結(jié)合，不會出現(xiàn)溶血現(xiàn)象，此時說明待測的病料中含有口蹄疫病毒，即檢測結(jié)果為陽性。反向間接血凝集試驗作為檢測行業(yè)認(rèn)可的、重要的檢測口蹄疫病毒的方法之一，具有操作簡單、方便等優(yōu)勢，臨床應(yīng)用較普遍。其測定原理是在進(jìn)行了醛化脫敏處理的綿羊紅細(xì)胞上偶聯(lián)口蹄疫病毒的抗體，紅細(xì)胞的表面被抗體吸附，再和游離的抗原進(jìn)行特異性結(jié)合，進(jìn)而形成抗原-抗體凝集網(wǎng)，此時肉眼就可以觀察到紅細(xì)胞發(fā)生了凝集現(xiàn)象，此現(xiàn)象表明檢測結(jié)果為陽性。

2.3 抗體檢測

病毒中和試驗和酶聯(lián)免疫吸附試驗是常用的檢測?？谔阋卟《镜目贵w檢測方法。病毒中和試驗（VNT）可以對口蹄疫病毒的血清型、病毒中和指數(shù)進(jìn)行鑒定。其檢測原理是病毒可刺激機(jī)體產(chǎn)生中和抗體，中和抗體與病毒結(jié)合后使病毒失去吸附細(xì)胞的能力，從而喪失感染力。但此方法的使用要求較高，需要2～3 d的時間進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng)，并且此方法中使用的活病毒存在一定的安全問題，故需要在安全系數(shù)較高、專業(yè)條件優(yōu)良的P3實驗室中進(jìn)行操作，因此在養(yǎng)殖實踐中有一定的應(yīng)用局限性。酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）的檢測原理是將含有抗原或者抗體的患病牛的血清吸附在固相載體上，然后在載體上進(jìn)行免疫酶的相關(guān)反應(yīng)，最終可以用肉眼或者分光光度計觀察底物顯色結(jié)果而進(jìn)行判定。由于此方法具有操作簡單、迅速、敏感性較強(qiáng)、檢測結(jié)果準(zhǔn)確等優(yōu)點，且在一般的實驗室即可進(jìn)行操作，故被廣泛應(yīng)用于?？谔阋叩臋z測［4］。

2.4 PCR技術(shù)檢測

此技術(shù)具有靈敏度較高、特異性較強(qiáng)、檢測速度較快、檢測結(jié)果較為準(zhǔn)確等優(yōu)勢，可以應(yīng)用于各種動物采集的各種病料的檢測，且此技術(shù)不存在生物安全問題，常見的有RT-PCR技術(shù)、熒光定量PCR（qPCR）技術(shù)等。RT-PCR技術(shù)的應(yīng)用原理為將病原為RNA朊病毒的口蹄疫病毒進(jìn)行反轉(zhuǎn)錄合成cDNA，再以cDNA為模板擴(kuò)增合成目的片段。采用此技術(shù)不僅可以進(jìn)行定性檢測，還可以進(jìn)行定量檢測。首先采集患病牛的病料（如牛奶、鼻黏液、唾液等）并放入滅菌鍋中進(jìn)行處理，再用PBS緩沖液進(jìn)行沖洗并制成待檢測的懸濁液；設(shè)計并合成關(guān)于口蹄疫病毒的引物，再使用自配試劑或者購買的專用試劑盒對樣品中含有的總RNA進(jìn)行提取，提取之后為了檢測RNA的完整性需要在含有甲醛的凝膠上進(jìn)行電泳；然后在確定RT-PCR所需要的最優(yōu)的反應(yīng)條件及試劑的最佳濃度后進(jìn)行RT-PCR反應(yīng)程序；最后對所得到的PCR產(chǎn)物進(jìn)行瓊脂糖凝膠電泳檢測，以100 bp DNA Ladder為參照物，在紫外線燈下觀察PCR產(chǎn)物在凝膠中的位置。通用引物可擴(kuò)增到457 bp大小的目的片段，即可判定為感染了口蹄疫［5］。熒光定量PCR（qPCR）技術(shù)是根據(jù)標(biāo)記基因的熒光共振能量轉(zhuǎn)移原理而實現(xiàn)的。根據(jù)試驗方法的不同，qPCR技術(shù)可以分為染料法（以SYBR Green法為代表）和探針法（以Taqman法為代表）。在檢測?？谔阋卟《緯r，檢測人員可應(yīng)用Taqman qPCR 技術(shù)設(shè)計特異性引物和Taqman探針，并建立標(biāo)準(zhǔn)曲線，然后通過Ct值判斷檢測結(jié)果，Ct值小于35說明為陽性。這一檢測方法比傳統(tǒng)熒光定量PCR檢測技術(shù)靈敏10倍以上，能夠更加快速、準(zhǔn)確地檢測出O型口蹄疫病毒［6］。

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3.1 牛口蹄疫治療方案

雖然?？谔愕陌l(fā)病率較高、傳染性較強(qiáng)，但是其致死率不高，抵抗力和免疫力較強(qiáng)的牛只經(jīng)過一段時間后可以自愈。但牛只患病后會出現(xiàn)食欲不振、生產(chǎn)性能下降等情況，因此，養(yǎng)殖戶應(yīng)根據(jù)患病牛的臨床表現(xiàn)、患病部位等采取針對性治療措施。

針對口腔部位感染的病牛，養(yǎng)殖人員可用高錳酸鉀溶液、食醋等徹底清洗患病部位，陰干之后將冰硼散涂抹在口腔中潰爛、有水皰的部位。

針對蹄部患病的牛只，養(yǎng)殖人員可用超氧水將患病牛只的蹄部仔細(xì)清洗干凈，自然陰干后再將適量的魚石脂軟膏涂抹在蹄部；對于病情較為嚴(yán)重的牛只，可以用繃帶纏繞病牛蹄部。

針對乳房部位患病的牛只，養(yǎng)殖人員可用肥皂水徹底清洗病部并用酒精消毒，風(fēng)干之后在乳房上涂抹青霉素軟膏。為防止出現(xiàn)乳腺炎，養(yǎng)殖戶可以及時將病牛乳房內(nèi)積蓄的乳汁擠出。

3.2 牛口蹄疫預(yù)防策略

養(yǎng)殖戶在畜禽養(yǎng)殖過程中，一定要遵循“預(yù)防為主、治療為輔”的原則，認(rèn)識到預(yù)防的重要性要遠(yuǎn)遠(yuǎn)大于治療。

3.2.1 做好日常消毒。做好日常消毒工作、提供干凈衛(wèi)生的牛舍是保證牛只健康、有效預(yù)防疫病發(fā)生的第一道防線。因此，養(yǎng)殖戶一定要提高重視程度，具體可采取如下措施。首先，要認(rèn)識到圈舍環(huán)境對牛只健康的重要性，制訂符合實際情況的消毒制度，定期對圈舍內(nèi)的墻面、地面、用具等進(jìn)行全面徹底的消毒，及時清掃牛只排泄的糞便、尿液等污物。其次，在疫病高發(fā)季節(jié)要增加消毒頻次，并交替使用不同的消毒劑，避免病原微生物產(chǎn)生耐藥性，降低消毒效果。最后，由于口蹄疫病毒對高溫不耐受，但是一般的消毒液又對其起不到很好的作用，因此，為了破壞病原體結(jié)構(gòu)，養(yǎng)殖戶可以適當(dāng)使用一些強(qiáng)酸、強(qiáng)堿溶液進(jìn)行消毒。此外，即使是未發(fā)生疫病的時期，養(yǎng)殖戶也要嚴(yán)格執(zhí)行消毒制度，可以適當(dāng)調(diào)整消毒的時間、頻次、消毒劑使用量等。

3.2.2 嚴(yán)格飼料供給。科學(xué)飼養(yǎng)是有效提高牛只抵抗力和免疫力的有效舉措之一。養(yǎng)殖戶在日常飼養(yǎng)過程中可以適當(dāng)投喂一些藥物，如益生菌、枯草芽孢桿菌、乳酸菌、酵母菌等，以提高牛只的免疫力和抵抗力，從而降低口蹄疫的發(fā)生率。這些藥物通過改善牛只胃腸道對飼草料的消化吸收能力，提高牛只對疫病的抵抗能力。此外，養(yǎng)殖戶還可以在飼料或者飲水中添加具有清熱解毒、驅(qū)除風(fēng)邪等功效的黃芪多糖、蒲公英、板藍(lán)根等中草藥制劑。養(yǎng)豬戶要嚴(yán)格把控所提供飼草料的質(zhì)量，避免飼喂發(fā)霉變質(zhì)、冷凍的劣質(zhì)飼料。同時，飼草料種類要豐富多樣，既要有青貯、干草類粗飼料，又要有豆粕、玉米等精飼料。養(yǎng)殖戶對每次購入的飼草料原料都要進(jìn)行常規(guī)營養(yǎng)成分檢測，根據(jù)檢測結(jié)果及時調(diào)整飼料配方及飼喂量。

3.2.3 定期免疫接種。養(yǎng)殖戶要嚴(yán)格按照免疫接種流程對適齡的全部牛只接種口蹄疫疫苗?？谔阋呷醪《疽呙?、口蹄疫亞單位苗是目前常用的疫苗種類，接種后15 d內(nèi)即可產(chǎn)生相關(guān)抗體，而注射后的有效免疫時間為4個月左右。養(yǎng)殖戶需要定期進(jìn)行抗體水平監(jiān)測工作，若發(fā)現(xiàn)牛只抗體水平下降，可以補(bǔ)充接種，以保證?？贵w水平處于較高水平，從而實現(xiàn)對口蹄疫的長效防控。

3.2.4 規(guī)范引種流程。為避免外來病原微生物進(jìn)入養(yǎng)殖場區(qū)，養(yǎng)殖戶最好堅持自繁自養(yǎng)，確需引種時一定要嚴(yán)格遵循引種流程。首先，嚴(yán)禁從有口蹄疫病原的地區(qū)引種。其次，養(yǎng)殖戶要查閱所引入牛只的疫苗接種情況、疫病治療情況等基本信息，確保牛引種之前已經(jīng)接種了口蹄疫疫苗。最后，對于新引入的牛只，一定要在專門的隔離區(qū)域內(nèi)隔離飼養(yǎng)15 d，并進(jìn)行常見疫病的檢測工作，確保其未攜帶任何病原之后再混群進(jìn)行正常飼養(yǎng)。另外，養(yǎng)殖戶在引種過程中，一定要對運(yùn)輸車輛、人員等進(jìn)行全面徹底的消毒，避免引入病毒。為了避免運(yùn)輸途中牛產(chǎn)生應(yīng)激，養(yǎng)殖戶也可提前注射或者在飲水中添加一些抗應(yīng)激的藥物。

4 結(jié)語

?？谔阋邥φ麄€養(yǎng)牛產(chǎn)業(yè)及人類健康造成嚴(yán)重威脅。因此，養(yǎng)殖戶必須認(rèn)識到該疫病的危害和防控工作的重要性，及時采取切實可行的綜合防控策略，從而有效降低?？谔阋叩陌l(fā)生率，保證牛只健康，促進(jìn)養(yǎng)牛業(yè)蓬勃發(fā)展。

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