化學(xué)發(fā)光免疫分析法檢測梅毒抗體在臨床篩查試驗中的應(yīng)用價值分析

于海波

梅毒螺旋體(treponema pallidum, TP)是梅毒的致病物質(zhì), 當(dāng)TP 進(jìn)入到人體后, 可能引發(fā)慢性系統(tǒng)性疾病。性傳播是梅毒的重要傳播路徑, 還有其他傳播途徑如血液傳播、母嬰傳播。梅毒疾病的出現(xiàn)可能引發(fā)機(jī)體臟器、組織受損, 引發(fā)組織破壞、功能失衡［1,2］。如果感染梅毒的女性懷孕, 梅毒會經(jīng)胎盤傳染給胎兒, 最終引發(fā)流產(chǎn)、先天性梅毒等不良結(jié)局。依照世界衛(wèi)生組織最新統(tǒng)計結(jié)果顯示：現(xiàn)階段全球范圍內(nèi)梅毒新發(fā)感染者達(dá)到1200 萬例。近幾年來, 中國梅毒疾病發(fā)生率呈逐年上升的勢態(tài)。需要對梅毒實施有效的防治及監(jiān)控, 這一點已經(jīng)成為中國公共衛(wèi)生領(lǐng)域關(guān)注的重要問題［3,4］。值得注意的是, 在梅毒疾病感染早期, 臨床診斷并不容易。當(dāng)渡過窗口期后, 人體免疫系統(tǒng)則會生成抗-TP, 其為梅毒感染的高特異性指標(biāo)。現(xiàn)階段, 臨床一般應(yīng)用酶聯(lián)接免疫吸附劑測定法(ELISA)測定血液樣本內(nèi)的抗-TP 含量, 用以判定血液樣本內(nèi)是否存在TP。但使用ELISA 篩查抗-TP 特異性并不高, 假陽性案例多［5］。為尋求找一類精準(zhǔn)性更高的測抗-TP 方式, 早在2017 年年末, 衛(wèi)健委臨檢中心就組織了國內(nèi)諸多血液中心對化學(xué)發(fā)光系統(tǒng)應(yīng)用在血液篩查梅毒的可行性加以評價?；瘜W(xué)發(fā)光免疫分析(chemiluminescence immune assay, CLIA)原理為雙抗原夾心法測定抗體水平。這一方式被用作定性測定人體血漿或血清內(nèi)的TP, 最終形成抗原-抗體-抗原-酶復(fù)合物催化發(fā)出底物, 最終發(fā)出光子, 其所發(fā)出的強度水平和TP 水平呈正相關(guān)［6］?；诖? 本文深入探究化學(xué)發(fā)光免疫分析法檢測梅毒抗體在臨床篩查試驗中的應(yīng)用價值, 現(xiàn)報告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 采集2020 年1 月～2021 年12 月在本院門診或體檢的8500 例血清樣本進(jìn)行研究, 受試者自愿參加實驗調(diào)查, 并簽署有關(guān)文件。其中女4105 例, 男4395 例；年齡21.14～92.36 歲, 平均年齡(59.36±12.74)歲。

1.2 方法 抽取受試者空腹靜脈血液3 ml, 將血液樣本放入到離心機(jī)內(nèi), 以3000 r/min 的速度離心處理10 min, 分離血清及血漿后準(zhǔn)備檢測。本實驗應(yīng)用安圖A2000plus 型化學(xué)發(fā)光儀及配套梅毒螺旋體抗體試劑盒對血清中的梅毒抗體進(jìn)行化學(xué)發(fā)光免疫分析法(TP-CLIA)測定。本實驗使用的TPPA 由日本國富士株式會社提供。TRUST 試劑盒由中國上海榮盛公司生產(chǎn)。全部樣本利用TRUST 和CL-1200i 型發(fā)光儀一并完成檢測, 相關(guān)操作結(jié)合儀器及試劑的相關(guān)說明書進(jìn)行。邁瑞公司說明書內(nèi)標(biāo)注：S/CO 達(dá)到1 以上視為陽性結(jié)果, S/CO 結(jié)果為1～10 需要利用TPPA 復(fù)檢。

1.3 觀察指標(biāo) 分析TP-CLIA 及TRUST 的梅毒檢出情況；對比不同年齡段(≤40 歲、41～64 歲、≥65 歲)TP-CLIA 假陽性率, 不同TP-CLIA 檢測血清梅毒抗體S/CO 值患者的TPPA 復(fù)檢率。

1.4 統(tǒng)計學(xué)方法 采用SPSS19.0 統(tǒng)計學(xué)軟件對研究數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計分析。計數(shù)資料以率(%)表示, 采用χ2檢驗。P＜0.05 為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 TP-CLIA及TRUST的梅毒檢出情況分析 8500例受試者中確診梅毒100 例, 梅毒檢出率為1.18%。其中TRUST 陽性結(jié)果共計110 例(1.29%)；TP-CLIA 陽性結(jié)果共計262 例(3.08%)；TRUST 單陽性共計10 例(0.12%)；TP-CLIA 單陽性共計162 例(1.91%)。見表1。

表1 TP-CLIA 及TRUST 的梅毒檢出情況分析［n(%), n=8500］

2.2 不同年齡段TP-CLIA 假陽性率對比 8500 例受試者排除現(xiàn)癥及既往梅毒感染共135 例(1.59%)TP-CLIA 假陽性患者, 其中, ≤40 歲13 例(0.76%),41～64 歲46 例(1.18%), ≥65 歲76 例(2.62%)?；颊叩腡P-CLIA 假陽性率隨著年齡增長呈現(xiàn)上升趨勢,≥65 歲患者的TP-CLIA 假陽性率最高, 不同年齡段TP-CLIA 假陽性率對比差異有統(tǒng)計學(xué)意義(χ2=31.289,P=0.000＜0.05)。見表2。

表2 不同年齡段TP-CLIA 假陽性率對比(n, %)

2.3 不同TP-CLIA 檢測血清梅毒抗體S/CO 值患者的TPPA 復(fù)檢率對比 TP-CLIA 檢測血清梅毒抗體S/CO 值1～10 的122 例患者進(jìn)行TPPA 復(fù)檢, 復(fù)檢率為1.44%(122/8500)。S/CO 值1～5 患者的TPPA 復(fù)檢陽性符合率為43.21%(35/81), S/CO 值5～10 患者的TPPA 復(fù)檢陽性符合率為100.00%(41/41)；S/CO 值1～5 患者的TPPA 復(fù)檢陽性符合率高于S/CO 值5～10 患者, 差異有統(tǒng)計學(xué)意義(χ2=36.740, P=0.000＜0.05)。見表3。

表3 不同TP-CLIA 檢測血清梅毒抗體S/CO 值患者的TPPA復(fù)檢率對比(n, %)

3 討論

梅毒疾病在臨床比較常見。最新流行病學(xué)研究證實, 全球范圍內(nèi)每年新增梅毒疾病感染者例數(shù)為1200 萬［7-9］。梅毒患者主要集中在次撒哈拉非洲、東南亞及南亞地區(qū)。近幾年, 中國梅毒疾病例數(shù)暴漲, 現(xiàn)成為我國報告例數(shù)排第一位的性傳播疾?。?0］。在所有上報的梅毒案例中, 絕大部分為潛伏梅毒, 一期梅毒及二期梅毒也比較常見。且最近幾年先天性梅毒報告例數(shù)明顯增加。

梅毒患者的皮膚黏膜中包含TP, 未患病者如果和梅毒患者發(fā)生性行為, 黏膜皮膚如果存在細(xì)小破損, 可發(fā)生疾病；少數(shù)患者以母嬰傳播及輸血途徑實現(xiàn)傳染。獲得性梅毒早期梅毒患者為重要傳染源, 約有95%以上患者經(jīng)無保護(hù)或危險性行為受到傳染；少數(shù)患者經(jīng)過穿著污染衣物、輸血等受到傳染；身患梅毒的孕婦為胎傳梅毒的重要傳染因素［11］。

梅毒疾病的臨床危害性相當(dāng)高。這種疾病特征比較復(fù)雜, 屬于一類慢性傳染病。倘若患者沒有在第一時間接受行之有效的診斷及治療, 極有可導(dǎo)致患者身心健康受到影響, 降低患者生活質(zhì)量。當(dāng)TP 進(jìn)入到人體后, 會在短時間內(nèi)誘導(dǎo)生成梅毒非特異性抗體及特異性抗體。特異性抗體包含免疫球蛋白(Ig)G 及IgM,其分別于感染梅毒后的4 周與2 周增長；初期梅毒經(jīng)治療后3～9 個月時, IgM 便可消失；終末期梅毒通過2 年左右治療后, IgM 消失, 但I(xiàn)gG 系終身存在。文獻(xiàn)研究表明［12］, 人體在感染梅毒后5～7 周會生成非特異性梅毒毒旋體抗體。這種抗體比特異性抗體出現(xiàn)時間晚, 隨著患者疾病治愈逐漸轉(zhuǎn)陰。值得說明的是, 關(guān)于梅毒的血清學(xué)診斷也分為非特異性及特異性TP 抗體檢測兩大類別。上述檢測對臨床診斷疾病有非常重要的現(xiàn)實意義。現(xiàn)階段臨床中測定非特異性TP 抗體一般利用TURST。這種檢查方法為非特異性檢測, 容易出現(xiàn)假陰性或假陽性結(jié)果。一般臨床將其視為梅毒疾病療效觀察或隨訪是否復(fù)發(fā)或在感染及梅毒初篩的指標(biāo)［13］。特異性TP 抗體檢測方法包含ELISA、CLIA 及TPPA。其中TPPA 為最常被用作梅毒確認(rèn)檢查項目,這種檢查方法靈敏度高、特異性強, 但因檢測過程中需要對樣本加以稀釋, 耗費時間長, 操作復(fù)雜, 不適合進(jìn)行大批量檢測。CLIA 有著自動化快速、靈敏度高等優(yōu)勢, 適合于實施大批量樣本篩查?，F(xiàn)如今, 這種手段被臨床視為梅毒確認(rèn)試驗的常規(guī)方式, 針對初診患者同時測定梅毒非特異性抗體和特異性抗體, 梅毒雙陽患者發(fā)現(xiàn)同時測定。針對梅毒早期診斷與預(yù)后均有一定現(xiàn)實意義［14,15］。

本實驗研究結(jié)果表明, 8500 例受試者中確診梅毒100 例, 梅毒檢出率為1.18%。其中TRUST 陽性結(jié)果共計110 例(1.29%)；TP-CLIA 陽性結(jié)果共計262例(3.08%)；TRUST 單陽性共計10 例(0.12%)；TPCLIA 單陽性共計162 例(1.91%)。表明梅毒感染者在普通群體中占據(jù)一定比例。本組實驗研究結(jié)果和國內(nèi)文獻(xiàn)所報道的結(jié)論相似［16,17］。8500 例受試者排除現(xiàn)癥及既往梅毒感染共135 例(1.59%)TP-CLIA 假陽性患者, 患者的TP-CLIA 假陽性率隨著年齡增長呈現(xiàn)上升趨勢, ≥65 歲患者的TP-CLIA 假陽性率最高, 不同年齡段TP-CLIA 假陽性率對比差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)。之所以出現(xiàn)這種情況, 主要原因在于：高齡患者為發(fā)生惡性腫瘤、自身免疫性疾病、各類老年病及需要透析的重要群體, 這些患者機(jī)體中存在此類抗體或TP 交叉抗原, 老年受試者免疫功能較低容易發(fā)生異種蛋白干擾［18］。TP-CLIA 檢測血清梅毒抗體S/CO 值1～10 的122 例患者進(jìn)行TPPA 復(fù)檢, 復(fù)檢率為1.44%(122/8500)；S/CO 值1～5 患者的TPPA 復(fù)檢陽性符合率100.00%(41/41)高于S/CO 值5～10 患者的43.21%(35/81), 差異有統(tǒng)計學(xué)意義(χ2=36.740, P=0.000＜0.05)。出現(xiàn)這種情況的原因, 很可能和下述內(nèi)容有關(guān)：CLIA 法測定梅毒抗體敏感性高, 當(dāng)發(fā)生弱陽反應(yīng)時容易出現(xiàn)假陽性。當(dāng)S/CO 值在1～5 時, 需要開展TURST和TPPA 復(fù)檢, 用以排除假陽性樣本。與此同時, 工作人員需結(jié)合臨床進(jìn)一步明確患者診斷結(jié)果。

綜上所述, 應(yīng)用CLIA 法開展TP 篩查可靠性強, 針對梅毒抗體S/CO 值比較低的樣本, 特別是S/CO 值1～5的樣本需要復(fù)檢處理。目的在于排除假陽性結(jié)果, 在根本上提升檢測結(jié)果的精準(zhǔn)度, 以免出現(xiàn)非必要糾紛。