硫酸銅、敵百蟲、聚維酮碘對吉富羅非魚的急性毒性及組織病理學(xué)研究

戴瑜來，王宇希，許寶青，戴楊鑫，林啟存，蔡麗娟

杭州市農(nóng)業(yè)科學(xué)研究院，浙江 杭州 310024

羅非魚隸屬于鱸形目、麗魚科、羅非魚屬，是聯(lián)合國糧農(nóng)組織 (Food and Agriculture Organization of the United Nations,FAO) 向全世界推廣養(yǎng)殖的優(yōu)質(zhì)魚類之一。其中，吉富羅非魚 (GIFT tilapia,Oreochromisniloticus) 因生長速度快、抗逆性強(qiáng)、出肉率高，深受水產(chǎn)從業(yè)者喜愛，是目前我國主要的羅非魚養(yǎng)殖品種之一[1-3]。

隨著羅非魚養(yǎng)殖產(chǎn)業(yè)的不斷發(fā)展，高密度、集約化養(yǎng)殖增加了羅非魚疾病的發(fā)生率。湖病毒病[4]、鏈球菌病[5]、氣單胞菌病[6]、柱狀黃桿菌病[7]、黏孢子蟲病[8]、上皮囊腫病[9]、黑斑病[10]、車輪蟲病[11]等的不斷發(fā)生，嚴(yán)重威脅著養(yǎng)殖羅非魚的健康。然而，國內(nèi)外針對羅非魚 (尤其是苗種)藥物敏感性的研究卻鮮有報道，若按照藥物的常用濃度給藥存在較大風(fēng)險。以不合理的濃度連續(xù)用藥會引發(fā)新的問題，導(dǎo)致藥物殘留、病原菌耐藥性增強(qiáng)并影響水產(chǎn)品安全性，甚至威脅到環(huán)境安全和人類健康[12]。

敵百蟲、硫酸銅、聚維酮碘是目前水產(chǎn)養(yǎng)殖領(lǐng)域廣泛使用的寄生蟲藥或水體殺菌消毒劑，其過量使用可導(dǎo)致水產(chǎn)動物組織發(fā)生不利改變[13-15]。目前有關(guān)敵百蟲、硫酸銅、聚維酮碘對羅非魚組織病理學(xué)的毒害作用報道較少。組織病理學(xué)研究可直觀發(fā)現(xiàn)急性藥物中毒過程中魚體的組織形態(tài)學(xué)變化，了解藥物對魚體的主要損傷部位，有助于分析藥物的毒害作用[16]。羅非魚組織病理學(xué)的進(jìn)一步改變會導(dǎo)致魚體行為異常，出現(xiàn)臨床癥狀。為了解水產(chǎn)上常用藥物敵百蟲、硫酸銅、聚維酮碘的合理給藥劑量及安全性，評估其對吉富羅非魚的毒害作用，本研究以吉富羅非魚為試驗對象，從組織-細(xì)胞水平分析藥物對試驗魚的急性毒性、藥物暴露下魚的行為變化和組織病理學(xué)，探究科學(xué)的給藥劑量，旨在提高藥物療效，減少藥物浪費(fèi)和環(huán)境污染。

1 材料與方法

1.1 實驗動物

本試驗所用吉富羅非魚采自杭州市農(nóng)業(yè)科學(xué)研究院水產(chǎn)研究所，全長 (4.00±0.31) cm、體長(3.10±0.37) cm、體質(zhì)量 (0.89±0.22) g。隨機(jī)挑選體格健康、大小均勻、體表無損的吉富羅非魚作為試驗對象。試驗前，將幼魚暫養(yǎng)于實驗室的玻璃缸中，暫養(yǎng)時間為2 周，正常投飼，待其適應(yīng)實驗室環(huán)境后開始試驗。

1.2 實驗藥品

硫酸銅 (CuSO4·5H2O，純度99.0%，國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司)；敵百蟲 (w≥90%，南通江山農(nóng)業(yè)化工股份有限公司)；聚維酮碘 (w≥99%，國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司)。

1.3 急性毒性試驗條件

試驗在規(guī)格為長96.5 cm×寬47.5 cm×高49.0 cm 的玻璃缸中進(jìn)行，每缸水體150 L，試驗用水為經(jīng)存放并曝氣處理24 h 的自來水，每缸投放實驗魚30 尾，各備有一個充氣頭，試驗時pH 為7.58～7.83、溶解氧為7.35～8.16 mg?L-1、水溫為22.5～24.5 ℃，光照采用自然光。

1.4 急性毒性試驗方法

本研究采用靜態(tài)急性毒性試驗法[17]。試驗前通過預(yù)試驗確定試驗濃度范圍，試驗設(shè)置5 個濃度梯度 (I—V，表1)，濃度梯度按照等對數(shù)間距設(shè)置，同時設(shè)2 個平行組及1 個對照組 (對照組為不含藥物的曝氣自來水)。試驗藥物需先配成高濃度的母液，再按要求潑灑添加，藥液均為現(xiàn)配現(xiàn)用。用藥后前8 h 內(nèi)連續(xù)觀察魚的中毒癥狀和死亡情況，8 h 后按用藥開始的第24、第48 和第96 小時記錄魚的死亡數(shù)目，期間及時撈除死亡個體 (以喪失游泳能力，觸碰無反應(yīng)為準(zhǔn))。試驗前24 h 作停飼處理，且以對照組死魚不超過5%為本試驗進(jìn)行的必要條件。

表1 用藥濃度Table 1 Concentrations of test drugs

1.5 組織病理學(xué)觀察

進(jìn)行急性毒性試驗48 h 后，分別從每種藥物的試驗組 (含2 個平行組，選取活力差或瀕臨死亡的試驗魚) 和對照組各取3 尾魚樣用于組織病理學(xué)分析。

光鏡觀察：用MS-222 麻醉后，進(jìn)行活體解剖，分別取對照組和試驗組 (暴露于表1 藥物濃度IV) 的鰓、肝臟、腎臟、腦組織，經(jīng)1×PBS 漂洗后，Bouin 氏液固定，常規(guī)脫水，石蠟包埋切片，HE 染色，在OLYMPUS 顯微鏡下觀察并拍照保存。

透射電鏡觀察：按照常規(guī)方法進(jìn)行制作，將對照組和試驗組 (暴露于表1 的藥物濃度IV) 的鰓、肝、腎、腦組織于活體狀態(tài)迅速取下，1×PBS 漂洗后分割成小于1 mm3的小塊，經(jīng)戊二醛-鋨酸雙固定，4 ℃冰箱保存，乙醇脫水，環(huán)氧樹脂Epon812 包埋，RMC-XL 超薄機(jī)超薄切片，醋酸雙氧鈾-檸檬酸鉛雙染法染色，用日立7650 型透射電鏡觀察并拍照保存。

1.6 半致死濃度和安全濃度的計算

根據(jù)第24、第48 和第96 小時不同藥物、濃度條件下受試魚的死亡率，采用改進(jìn)寇氏法[18]，計算上述時間的半致死濃度 (LC50)和安全濃度 (SC)：

式中：CLC50為半致死濃度，CLC50的95%置信區(qū)間= lg-1(lgCLC50±1.96SE·lgCLC50)；Xmax為試驗組最大劑量的對數(shù)；a為相鄰組濃度對數(shù)之差；SE為標(biāo)準(zhǔn)誤差；pi為各組的死亡率；∑pi為各組死亡率的總和；n為每組動物數(shù)；CS為安全濃度，根據(jù)24和48 h 的LC50求得。

1.7 數(shù)據(jù)處理

記錄每組試驗魚的死亡數(shù)量，取平均值后換算成死亡率，用Microsoft Excel 2010 軟件進(jìn)行處理，計算出24、48、96 h 的半致死濃度及安全濃度。

2 結(jié)果

2.1 硫酸銅對吉富羅非魚生態(tài)行為的影響

將硫酸銅母液按濃度要求稀釋后潑灑進(jìn)入裝有吉富羅非魚魚苗的玻璃缸中，各缸中的魚起初未見明顯反應(yīng)，高濃度組 (8.435 和15 mg?L-1) 有6.67%的魚出現(xiàn)體表黏液增多現(xiàn)象；試驗進(jìn)行6 h后，最高濃度組 (15 mg?L-1) 有魚出現(xiàn)中毒癥狀，魚體側(cè)翻游動，時而亂竄、時而沉底，對外部刺激不敏感；12 h 后最高濃度組開始出現(xiàn)死亡，死魚體表和魚鰓發(fā)白且有黏液附著，其余無殊。硫酸銅對吉富羅非魚的24、48 和96 h 的LC50分別為13.715、10.351 和5.896 mg?L-1，SC 為1.769 mg?L-1(表2)。

表2 硫酸銅對吉富羅非魚的毒性試驗結(jié)果Table 2 Toxicity test results of copper sulfate on GIFT tilapia

2.2 敵百蟲對吉富羅非魚生態(tài)行為的影響

敵百蟲母液按濃度要求稀釋后潑灑進(jìn)入裝有吉富羅非魚魚苗的玻璃缸后，其初始情況與硫酸銅組差異不大，在實驗進(jìn)行8 h 后才出現(xiàn)中毒癥狀，魚中毒后浮于水面竄游，側(cè)翻游動，平衡能力減弱，有2.22%的魚出現(xiàn)抽搐現(xiàn)象；10 h 后，最高濃度組 (40 mg?L-1) 開始出現(xiàn)死魚，身體僵直，體色變黑，鰓蓋和口部張開；72 h 后，可見高濃度組(28.284 和40 mg?L-1) 有將近10%的魚出現(xiàn)畸形游動現(xiàn)象，表現(xiàn)為脊椎彎曲。敵百蟲對吉富羅非魚的24、48 和96 h 的LC50分別為43.036、25.887和16.689 mg?L-1，SC 為2.810 mg?L-1(表3)。

表3 敵百蟲對吉富羅非魚的毒性試驗結(jié)果Table 3 Toxicity test results of trichlorfon on GIFT tilapia

2.3 聚維酮碘對吉富羅非魚生態(tài)行為的影響

將聚維酮碘母液按濃度要求潑灑進(jìn)入玻璃缸中，其初始情況較敵百蟲、硫酸銅組差異較大，在實驗進(jìn)行45 min 后，最高濃度組 (30 mg?L-1) 開始出現(xiàn)中毒癥狀，表現(xiàn)出群體浮頭現(xiàn)象，有將近30%的魚沉底或旋轉(zhuǎn)亂竄；1 h 后，最高濃度組開始出現(xiàn)死魚，魚鰓發(fā)紫，體表無明顯癥狀。聚維酮碘對吉富羅非魚的24、48 和96 h 的LC50分別為10.509、9.301 和8.674 mg?L-1，SC 為2.190 mg?L-1(表4)。

表4 聚維酮碘對吉富羅非魚的毒性試驗結(jié)果Table 4 Toxicity test results of povidone-iodine on GIFT tilapia

2.4 組織病理學(xué)結(jié)果

藥物影響下吉富羅非魚鰓組織的變化見圖1，與對照組 (圖1-a) 相比，8.435 mg?L-1硫酸銅處理組鰓組織損害明顯，鰓絲輪廓模糊不清，上皮細(xì)胞腫脹 (圖1-b)；28.284 mg?L-1敵百蟲處理組鰓組織間隙變大，鰓絲及組織破壞嚴(yán)重 (圖1-c)；16.870 mg?L-1聚維酮碘處理組鰓絲萎縮，上皮組織增生(圖1-d)。

圖1 不同藥物作用下鰓組織的變化注：a.對照組；b.8.435 mg?L-1 硫酸銅處理組；c.28.284 mg?L-1 敵百蟲處理組；d.16.870 mg?L-1 聚維酮碘處理組。Fig.1 Changes of gill by different drugsNote: a.Control group; b.8.435 mg?L-1 copper sulfate treatment; c.28.284 mg?L-1 trichlorfon treatment; d.16.870 mg?L-1 povidone-iodine treatment.

藥物影響下吉富羅非魚肝組織的變化見圖2，與對照組 (圖2-a) 相比，8.435 mg?L-1硫酸銅處理組肝組織間空隙變大，細(xì)胞核萎縮 (圖2-b)；28.284 mg?L-1敵百蟲處理組出現(xiàn)大量無核肝細(xì)胞，且組織間結(jié)構(gòu)呈不規(guī)則形態(tài) (圖2-c)；16.870 mg?L-1聚維酮碘處理組肝組織空泡化且存在充血現(xiàn)象 (圖2-d)。

圖2 不同藥物作用下肝組織的變化注：a.對照組；b.8.435 mg?L-1 硫酸銅處理組；c.28.284 mg?L-1 敵百蟲處理組；d.16.870 mg?L-1 聚維酮碘處理組。Fig.2 Changes of liver by different drugsNote: a.Control group; b.8.435 mg?L-1 copper sulfate treatment; c.28.284 mg?L-1 trichlorfon treatment; d.16.870 mg?L-1 povidone-iodine treatment.

藥物對吉富羅非魚腦組織的影響見圖3，與對照組 (圖3-a) 相比，8.435 mg?L-1硫酸銅處理組中可見腦組織神經(jīng)纖維出現(xiàn)輕微破損，細(xì)胞出現(xiàn)破裂現(xiàn)象 (圖3-b)；28.284 mg?L-1敵百蟲處理組腦組織神經(jīng)纖維破損及細(xì)胞破裂明顯 (圖3-c)；16.870 mg?L-1聚維酮碘處理組除神經(jīng)纖維有輕微破損外，未見其他明顯變化 (圖3-d)。

圖3 不同藥物作用下腦組織的變化注：a.對照組；b.8.435 mg?L-1 硫酸銅處理組；c.28.284 mg?L-1 敵百蟲處理組；d.16.870 mg?L-1 聚維酮碘處理組。Fig.3 Changes of brain by different drugsNote: a.Control group; b.8.435 mg?L-1 copper sulfate treatment; c.28.284 mg?L-1 trichlorfon treatment; d.16.870 mg?L-1 povidone-iodine treatment.

藥物對吉富羅非魚腎組織影響見圖4，與對照組(圖4-a) 相比，8.435 mg?L-1硫酸銅處理組中組織間隙變大，腎小管壞死 (圖4-b)；28.284 mg?L-1敵百蟲處理組中可見結(jié)構(gòu)排列松散，腎間質(zhì)出血現(xiàn)象(圖4-c)；16.870 mg?L-1聚維酮碘處理組中除結(jié)構(gòu)排列松散外，未見其他明顯差異 (圖4-d)。

圖4 不同藥物作用下腎組織的變化注：a.對照組；b.8.435 mg?L-1 硫酸銅處理組；c.28.284 mg?L-1 敵百蟲處理組；d.16.870 mg?L-1 聚維酮碘處理組。Fig.4 Changes of kidney by different drugsNote: a.Control group; b.8.435 mg?L-1 copper sulfate treatment; c.28.284 mg?L-1 trichlorfon treatment; d.16.870 mg?L-1 povidone-iodine treatment.

透射電鏡下，藥物對吉富羅非魚鰓組織影響見圖5，與對照組 (圖5-a) 相比，8.435 mg?L-1硫酸銅處理組鰓組織出現(xiàn)空泡化，組織間間隙變大 (圖5-b)；28.284 mg?L-1敵百蟲處理組中細(xì)胞邊界不清，細(xì)胞發(fā)生凋亡 (圖5-c)；16.870 mg?L-1聚維酮碘處理組中線粒體數(shù)增多，線粒體雙層膜結(jié)構(gòu)不完整(圖5-d)。

圖5 不同藥物作用下鰓組織的變化 (透射電鏡)注：a.對照組 (15 000×)；b.8.435 mg?L-1 硫酸銅處理組 (8 000×)；c.28.284 mg?L-1 敵百蟲處理組 (8 000×)；d.16.870 mg?L-1聚維酮碘處理組 (15 000×)。Fig.5 Changes of gill by different drugs (TEM)Note: a.Control group (15 000×); b.8.435 mg?L-1 copper sulfate treatment (8 000×); c.28.284 mg?L-1 trichlorfon treatment (8 000×);d.16.870 mg?L-1 povidone-iodine treatment (15 000×).

透射電鏡下，藥物對吉富羅非魚肝組織的影響見圖6，與對照組 (圖6-a) 相比，8.435 mg?L-1硫酸銅處理組肝組織空泡化，細(xì)胞核固縮 (圖6-b)；28.284 mg?L-1敵百蟲處理組線粒體腫脹，嵴斷裂，并呈空泡化 (圖6-c)；16.870 mg?L-1聚維酮碘處理組中細(xì)胞出現(xiàn)凋亡現(xiàn)象，有髓樣小體出現(xiàn) (圖6-d)。

圖6 不同藥物作用下肝組織的變化 (透射電鏡)注：a.對照組 (8 000×)；b.8.435 mg?L-1 硫酸銅處理組 (7 000×)；c.28.284 mg?L-1 敵百蟲處理組 (25 000×)；d.16.870 mg?L-1聚維酮碘處理組 (10 000×)。Fig.6 Changes of liver by different drugs (TEM)Note:a.Control group (8 000×); b.8.435 mg?L-1 copper sulfate treatment (7 000×); c.28.284 mg?L-1 trichlorfon treatment (25 000×); d.16.870 mg?L-1 povidone-iodine treatment (10 000×).

透射電鏡下，藥物對吉富羅非魚腦組織的影響見圖7，與對照組 (圖7-a) 相比，8.435 mg?L-1硫酸銅處理組可見細(xì)胞邊界不清，細(xì)胞發(fā)生凋亡 (圖7-b)；28.284 mg?L-1敵百蟲處理組細(xì)胞核固縮 (圖7-c)；16.870 mg?L-1聚維酮碘處理組有明顯變化 (圖7-d)。

圖7 不同藥物作用下腦組織的變化 (透射電鏡)注：a.對照組 (10 000×)；b.8.435 mg?L-1 硫酸銅處理組 (8 000×)；c.28.284 mg?L-1 敵百蟲處理組 (8 000×)；d.16.870 mg?L-1聚維酮碘處理組 (8 000×)。Fig.7 Changes of brain by different drugs (TEM)Note: a.Control group (10 000×); b.8.435 mg?L-1 copper sulfate treatment (8 000×); c.28.284 mg?L-1 trichlorfon treatment (8 000×);d.16.870 mg?L-1 povidone-iodine treatment (8 000×).

透射電鏡下，藥物對吉富羅非魚腎組織的影響見圖8，與對照組 (圖8-a)相比，8.435 mg?L-1硫酸銅處理組中組織間間隙變大，核膜破損 (圖8-b)；28.284 mg?L-1敵百蟲處理組中除線粒體形態(tài)變化外，未見其他明顯差異 (圖8-c)；16.870 mg?L-1聚維酮碘處理組中除線粒體腫脹、形態(tài)變化外，未見其他明顯差異 (圖8-d)。

圖8 不同藥物作用下腎組織的變化 (投射電鏡)注：a.對照組 (8 000×)；b.8.435 mg?L-1 硫酸銅處理組 (8 000×)；c.28.284 mg?L-1 敵百蟲處理組 (10 000×)；d.16.870 mg?L-1 聚維酮碘處理組 (10 000×)。Fig.8 Changes of kidney by different drugs (TEM)Note: a.Control group (8 000×); b.8.435 mg?L-1 copper sulfate treatment (8 000×); c.28.284 mg?L-1 trichlorfon treatment (10 000×);d.16.870 mg?L-1 povidone-iodine treatment (10 000×).

3 討論

3.1 3 種漁藥引起的組織病理學(xué)變化

硫酸銅作為水產(chǎn)養(yǎng)殖水體中銅離子 (Cu2+) 的來源之一，通過在生物體內(nèi)蓄積，當(dāng)其含量達(dá)到一定濃度時，會引起一系列中毒反應(yīng)，如行為異常、組織病變或可能造成死亡[19-20]。本研究中，高濃度硫酸銅會引起吉富羅非魚魚苗側(cè)翻、亂竄、沉底等急性中毒現(xiàn)象，且造成一系列的組織病理變化，最終導(dǎo)致死亡。有研究表明魚鰓是吸收Cu2+的主要部位，Cu2+進(jìn)入魚體后通過生化反應(yīng)和血液運(yùn)輸至機(jī)體其他部位，造成各組織損傷[21]。Jooyandeh 等[22]發(fā)現(xiàn)，15 mg?L-1硫酸銅能引起草魚 (Ctenopharyn-godonidella) 鰓組織發(fā)生包括板層壞死、增生、板層粘連、出血、鰓板棒狀等組織病理學(xué)變化；胡亞東[23]將暗紋東方鲀 (Takifuguobscurus) 暴露于含100 μg?L-1Cu2+的環(huán)境中，造成其鰓絲畸形，出現(xiàn)動脈瘤和壞死，肝臟細(xì)胞核固縮和炎性損傷、壞死；馬莉芳[24]研究水體Cu2+對黃河鯉 (Cyprinus carpio) 的毒性時發(fā)現(xiàn)，2.51 mg?L-1的Cu2+會導(dǎo)致黃河鯉鰓絲腫脹、肝細(xì)胞壞死、腎小管上皮細(xì)胞變形崩解。

敵百蟲是乙酰膽堿酯酶的有效抑制劑，已發(fā)現(xiàn)對眾多水生生物有毒害作用[25]。有研究表明，魚類可經(jīng)食道、呼吸系統(tǒng)及皮膚接觸吸收過量的敵百蟲而導(dǎo)致中毒[26]；長期接觸低濃度的敵百蟲也會抑制魚體內(nèi)膽堿脂酶的活性，導(dǎo)致其行為、代謝和激素變化，損害肝、腎及體內(nèi)細(xì)胞的遺傳物質(zhì)[27-28]。本研究中的吉富羅非魚魚苗暴露在敵百蟲環(huán)境下，出現(xiàn)多種異常行為，組織結(jié)構(gòu)也發(fā)生諸多不利變化。已有研究發(fā)現(xiàn)，尼羅羅非魚 (O.niloticus) 暴露于0.5 mg?L-1敵百蟲環(huán)境下會造成異常游泳行為和不良生理反應(yīng)[28]；敵百蟲暴露會造成鯉神經(jīng)毒性、肝臟脂質(zhì)過氧化并改變頭部腎臟和脾臟結(jié)構(gòu)[29]；敵百蟲可誘導(dǎo)異育銀鯽 (Carassiusauratusgibelio) 肝細(xì)胞凋亡，導(dǎo)致線粒體空泡化、細(xì)胞質(zhì)丟失和核固縮[13,30]；均與本研究結(jié)果基本一致。此外，長期接觸敵百蟲可破壞鯉腸道免疫功能，引起腸道炎癥，造成腸道損傷[31]。

目前，國內(nèi)外關(guān)于聚維酮碘對魚類組織病理學(xué)的研究相對較少。Hedayati 等[15]研究發(fā)現(xiàn)，聚維酮碘高于5 mg?L-1時可造成鯉的鰓絲彎曲、繼發(fā)性黏連、出血，肝細(xì)胞破壞、凋亡，聚維酮碘對鰓的損傷程度要大于肝臟，與本研究結(jié)果相似。

3.2 3 種漁藥的用藥注意事項

硫酸銅在生產(chǎn)上主要用于殺滅中華鳋 (Sinergasilus)、車輪蟲 (Trichodina)、斜管蟲 (Chilodonella)、舌杯蟲 (Apiosomaspp.)、水網(wǎng)藻 (Hydrodictyaceae)、青苔 (Chlorella) 等。本研究中硫酸銅用藥的結(jié)果明顯高于尼羅羅非魚[規(guī)格 (3.3±0.3) cm、(1.5±0.2) g，96 h 的LC50為1.093 mg?L-1][32]，但遠(yuǎn)低于同為鱸形目的攀鱸 [Anabastestudineus，規(guī)格(7.9±0.4) cm、(7.8±1.6) g，SC 為7.010 mg?L-1][33]。然而，較硫酸銅的常用濃度 (表5)，其對本研究規(guī)格的吉富羅非魚而言是一種較為安全的藥物。

表5 3 種藥物常用質(zhì)量濃度與安全濃度對比Table 5 Comparison of common mass concentration and safe concentrations of three drugs

敵百蟲是一種廣譜性有機(jī)磷類殺蟲劑，主要用于殺滅體表的中華鳋、魚鲺(Argulussp.)、錨頭鳋(Lernaea)、指環(huán)蟲 (Dactylogyridae)、三代蟲 (Gyrodactylus) 等。本實驗敵百蟲用藥的結(jié)果遠(yuǎn)大于奧尼羅非魚 (O.niloticus♀×O.aureus♂，規(guī)格2.8～3.0 cm、0.48～0.50 g，96 h 的LC50為1.57 mg?L-1，SC 為0.157 mg?L-1)[26]和同目的黑鯛 [Sparusmacrocephlus，規(guī)格(13.0±0.4) g，96 h LC50為0.54 mg?L-1，SC 為0.14 mg?L-1][34]、梭鱸 (Luciopercaluciopeica，規(guī)格2.9～3.4 cm、0.25 g，96 h LC50為2.13 mg?L-1，SC為0.213 mg?L-1)[35]。較表5 的常用濃度，敵百蟲對于本研究規(guī)格的吉富羅非魚也較安全。

聚維酮碘是聚乙烯吡咯烷酮與碘的絡(luò)合物，對大部分細(xì)菌、真菌、霉菌孢子及部分病毒均有一定的殺滅作用。試驗中聚維酮碘用藥的結(jié)果極接近于不同規(guī)格的吉富羅非魚[規(guī)格(10.12±0.83) cm、(17.14±1.77) g，96 h 的LC50為7.95 mg?L-1][36]，低于同為鱸形目的藍(lán)點笛鯛 [Lutjanusrivulatus，規(guī)格(2.45±0.10) cm、(0.425±0.010) g，SC 為2.842 9 mg?L-1][37]和梭魚 [Planilizahaematocheila，規(guī)格(4.22±0.87) cm、(1.23±0.28) g，SC 為4.7 mg?L-1][38]，其安全濃度高于常用濃度 (表5)，因此，聚維酮碘對于本研究規(guī)格吉富羅非魚可按常用劑量安全使用。

本研究表明，硫酸銅、敵百蟲、聚維酮碘對于本實驗規(guī)格的吉富羅非魚均為較為安全的藥物。然而，從組織病理學(xué)研究發(fā)現(xiàn)，在高濃度藥物暴露下，魚的組織 (細(xì)胞器) 均有不同程度的損害，且可能造成不可逆后果，從而影響魚的生長、發(fā)育，或直接導(dǎo)致死亡。此外，藥物的使用還需結(jié)合養(yǎng)殖動物所處的養(yǎng)殖周期及環(huán)境，不同養(yǎng)殖周期的水產(chǎn)動物對藥物的敏感度有較大差別，尤其在特殊時期(如苗種期、脫殼期等) 使用藥物更需謹(jǐn)慎。實際生產(chǎn)中，所用藥物會受到溫度、pH、光照、溶解氧、有機(jī)物、各種水生生物等諸多因素的影響[20,42]，如敵百蟲在堿性環(huán)境下會轉(zhuǎn)化為敵敵畏，毒性大大增強(qiáng)。因此，在藥物使用過程中應(yīng)充分了解其理化特性和使用方法，避免過量或過久的持續(xù)使用，進(jìn)而造成不可逆的組織損傷。