血清SF、IGF-1、UBE2C 在乳腺疾病良惡性診斷中意義及與臨床病理參數(shù)關(guān)聯(lián)性

張?jiān)品?，崔亞飛

（1.鄭州人民醫(yī)院檢驗(yàn)科，河南 鄭州 450000；2.鄭州兒童醫(yī)院檢驗(yàn)科，河南 鄭州 450000）

近年來，乳腺癌發(fā)病率呈明顯增長、年輕化趨勢[1]，流行病學(xué)調(diào)查顯示，到2021 年，乳腺癌發(fā)病率預(yù)計(jì)將增加到每10 萬名女性中85 人[2]，已成為嚴(yán)重危害女性健康的主要疾病之一。 乳腺癌早期無典型性臨床癥狀，僅利用影像學(xué)檢查，難以獲得較高檢出率。 隨生物學(xué)方向?qū)θ橄侔┻z傳及表觀遺傳的深入研究， 生物標(biāo)志物在乳腺疾病早期診斷中的價(jià)值逐漸受到臨床關(guān)注。 鐵蛋白（SF）可參與多種組織細(xì)胞代謝，參與惡性腫瘤發(fā)生、進(jìn)展過程[3]。 胰島素樣生長因子-1（IGF-1）能刺激腫瘤細(xì)胞分裂，增加其惡性程度，提高其轉(zhuǎn)移潛力[4]。 泛素偶聯(lián)酶E2C（UBE2C）可調(diào)控細(xì)胞有絲分裂，調(diào)節(jié)細(xì)胞周期進(jìn)展，其水平高表達(dá)參與惡性腫瘤增殖、侵襲、轉(zhuǎn)移[5]。本研究探討了血清SF、IGF-1、UBE2C在乳腺疾病良惡性診斷中意義及與臨床病理參數(shù)關(guān)聯(lián)性。

1 資料與方法

1.1 一般資料 前瞻性選取2013 年8 月至2016年12 月我院乳腺癌患者96 例為惡性組， 其中臨床分期Ⅰ～Ⅱ期56 例， Ⅲ期40 例；68 例乳腺良性疾病患者為良性組，其中乳腺炎14 例，乳腺增生23 例，乳腺纖維瘤19 例，乳腺囊腫12 例，另選取同期健康體檢者68 例為健康組。3 組年齡、絕經(jīng)狀態(tài)、體質(zhì)量指數(shù)比較無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＞0.05），惡性組血清腫瘤標(biāo)志物［糖類抗原153（CA153）、糖類抗原125（CA125）、癌胚抗原（CAE）］水平高于良性組（P＜0.05）。見表1。本研究經(jīng)醫(yī)院倫理委員會批準(zhǔn)。

表1 3 組一般資料比較（±s）［n(%)］

注：“-”表示無需進(jìn)行該指標(biāo)對比。

一般資料 惡性組（n=96） 良性組（n=68） 健康組（n=68） F/χ2 P年齡（歲）體質(zhì)量指數(shù)（kg/m2）絕經(jīng)49.18±5.33 22.19±1.50 48.79±5.01 21.98±1.42 47.33±8.24 21.65±2.09 1.835 2.073 0.162 0.128是否血清腫瘤標(biāo)志物CA125（U/ml）CAE（μg/L）CA153（U/ml）31（32.29）65（67.71）155.98±32.49 12.08±4.01 17.50±3.64 21（30.88）47（69.12）47.18±10.09 9.70±2.26 8.87±1.49 19（27.94）49（72.06）26.31±5.69 3.09±1.33 2.67±0.92 0.358 853.866 190.282 707.732 0.836＜0.001＜0.001＜0.001

1.2 納入排除標(biāo)準(zhǔn)

1.2.1 納入標(biāo)準(zhǔn) （1）惡性組均經(jīng)手術(shù)病理學(xué)檢查證實(shí)為乳腺癌， 良性組均經(jīng)B 超等影像學(xué)檢查確診為乳腺良性疾??；（2） 患者及家屬均簽署知情同意書。

1.2.2 排除標(biāo)準(zhǔn) （1）肝腎等重要臟器器質(zhì)性病變者；（2）Ⅳ期乳腺癌等不符合手術(shù)指征者；（3）凝血機(jī)制紊亂或活動性內(nèi)出血者；（4）嚴(yán)重心腦血管疾病者；（5）其他部位惡性腫瘤者；（6）精神行為異常者。

1.3 檢測方法 空腹取3 mL 靜脈血，離心12 min，3 000 r/min，分離取血清。（1）采用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)檢測血清IGF-1、UBE2C 水平，試劑盒購自深圳市科潤達(dá)生物工程有限公司， 操作步驟： 設(shè)空白孔、標(biāo)準(zhǔn)孔、待測樣品孔。 酶標(biāo)包被板上標(biāo)準(zhǔn)孔加入50 μL 樣品， 待測樣品孔分別加入40 μL 樣品稀釋液、10 μL 待測樣品，輕輕搖勻，封板，置于37 ℃溫水中，促使抗體與抗原充分反應(yīng)。溫育30 min 后每孔均加入洗滌液， 重復(fù)洗滌5 次， 拍干后加50 μL 酶標(biāo)試劑，并置于37 ℃溫水溫育30 min。 重復(fù)洗滌5 次，拍干，加顯色劑。37 ℃避光顯色10 min，于每孔加50 μL 終止液，終止反應(yīng)。15 min 內(nèi)450 nm 波長依序測量各孔吸光度。 （2）采用E-170 電化學(xué)發(fā)光分析儀及配套試劑盒檢測血清SF 水平，嚴(yán)格按照德國羅氏診斷有限公司提供的儀器及配套試劑盒說明書操作。

1.4 治療方法 惡性組均實(shí)施改良乳腺癌根治術(shù)，良性組則予以弧形切口切除手術(shù)。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS 22.0 軟件分析處理數(shù)據(jù)，符合正態(tài)分布的計(jì)量資料采用（±s）表示，組間比較采用獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)，組內(nèi)比較采用配對t檢驗(yàn)，不符合正態(tài)分布的計(jì)量資料采用中位數(shù)表示，非參數(shù)秩和檢驗(yàn)，計(jì)數(shù)資料用n（%）表示，組間比較采用χ2檢驗(yàn)， 采用Spearman進(jìn)行相關(guān)性分析，采用受試者工作特征曲線 （Receiver operating characteristic，ROC） 分析診斷價(jià)值，P＜0.05 為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 3 組血清SF、IGF-1、UBE2C 水平比較 惡性組血清SF、IGF-1、UBE2C 水平高于良性組、 健康組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。 見表2。

表2 3 組血清SF、IGF-1、UBE2C 水平比較(±s)

表2 3 組血清SF、IGF-1、UBE2C 水平比較(±s)

組別 n惡性組良性組健康組96 68 68 FP SF（ng/mL） IGF-1（ng/mL）128.37±36.92 70.02±24.15 51.97±20.64 154.827＜0.001 204.29±41.30 116.94±29.42 79.28±24.65 299.789＜0.001 UBE2C（pg/mL）837.32±164.19 304.08±69.05 267.91±54.02 638.386＜0.001

2.2 血清各指標(biāo)水平與乳腺癌患者血清腫瘤標(biāo)志物關(guān)聯(lián)性Spearman相關(guān)性分析顯示， 血清SF、IGF-1、UBE2C 水平與乳腺癌患者血清CA153、CA125、CAE 水平呈顯著正相關(guān)（P＜0.05）。 見表3。

表3 血清各指標(biāo)與乳腺癌患者血清腫瘤標(biāo)志物關(guān)聯(lián)性

2.3 血清指標(biāo)單一診斷乳腺疾病良惡性ROC曲線通過繪制ROC曲線可知，血清UBE2C 診斷乳腺疾病良惡性曲線下面積（AUC）為0.813，明顯大于SF（0.804）、IGF-1（0.733）。 見表4、圖1。

圖1 血清指標(biāo)單一診斷乳腺疾病良惡性ROC 曲線

表4 血清指標(biāo)單一診斷乳腺疾病良惡性ROC 曲線分析

2.4 血清指標(biāo)聯(lián)合診斷乳腺腫瘤良惡性的ROC曲線 血清SF、IGF-1、UBE2C 聯(lián)合診斷時(shí)采取Logistic二元回歸擬合，返回預(yù)測概率logit(p)，將其作為獨(dú)立檢驗(yàn)變量繪制ROC曲線， 得出各指標(biāo)聯(lián)合診斷乳腺腫瘤良惡性的AUC為0.875，95%CI為0.814～0.921，敏感度為72.92%，特異度為86.76%。見圖2。

圖2 血清指標(biāo)聯(lián)合診斷乳腺腫瘤良惡性的ROC 曲線

2.5 惡性組不同臨床病理參數(shù)患者血清SF、IGF-1、UBE2C 水平比較 不同腫瘤大小患者血清SF、IGF-1、UBE2C 水平相比， 差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）； Ⅲ期、 中低分化、 有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者血清SF、IGF-1、UBE2C 水平高于Ⅰ～Ⅱ期、高分化、無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者（P＜0.05）。 見表5。

表5 惡性組不同臨床病理參數(shù)患者血清SF、IGF-1、UBE2C 水平比較(±s)

表5 惡性組不同臨床病理參數(shù)患者血清SF、IGF-1、UBE2C 水平比較(±s)

項(xiàng)目 n SF（ng/mL） t P腫瘤大小t P IGF-1（ng/mL） t P UBE2C（pg/mL）0.464 0.644 0.741 0.461 0.425 0.672臨床分期9.292＜0.001 9.393＜0.001 3.881＜0.001組織分化程度＞2 cm≤2 cmⅢ期Ⅰ～Ⅱ期中低分化高分化6.467＜0.001 7.140＜0.001 3.039 0.003淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有無44 52 40 56 34 62 46 50 130.25±39.18 126.78±34.07 169.54±43.85 98.96±30.62 160.28±41.02 110.87±32.63 149.72±40.76 108.73±34.35 5.342＜0.001 207.68±42.92 201.42±39.78 252.84±53.97 169.61±32.65 244.75±50.90 182.10±34.69 229.81±45.86 180.81±37.72 5.736＜0.001 845.04±170.21 830.79±158.16 916.41±194.23 780.83±148.07 906.38±186.20 799.45±152.11 876.42±179.23 801.35±154.09 2.206 0.030

2.6 血清各指標(biāo)與乳腺癌患者臨床病理參數(shù)關(guān)聯(lián)性 以乳腺癌患者臨床病理參數(shù)為因變量， 血清SF、IGF-1、UBE2C 表達(dá)為自變量進(jìn)行的Spearman相關(guān)性分析顯示， 上述血清指標(biāo)與患者腫瘤大小無明顯相關(guān)性（P＞0.05）；上述血清指標(biāo)與患者臨床分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移呈顯著正相關(guān)，與組織分化程度呈顯著負(fù)相關(guān)（P＜0.05）。 見表6。

表6 血清SF、IGF-1、UBE2C 與乳腺癌患者臨床病理參數(shù)關(guān)聯(lián)性

3 討論

數(shù)據(jù)顯示，30.0%左右乳腺癌患者確診時(shí)已處于中晚期，喪失最佳手術(shù)時(shí)機(jī)[6]。 同時(shí)乳腺癌病程較長， 術(shù)后5 年生存率＜30.0%[7]。 CA153、CA125、CAE 為臨床常用診斷乳腺癌的血清腫瘤標(biāo)志物[8]，但其特異性較差。 因此研究新的高特異性血清腫瘤標(biāo)志物，探索乳腺癌發(fā)生、發(fā)展機(jī)制是目前臨床亟待解決問題之一。

SF 主要生物學(xué)功能為貯存鐵和調(diào)節(jié)腸黏膜對鐵的吸收，可有效反映機(jī)體鐵儲備含量，促進(jìn)腫瘤細(xì)胞增殖[9]。通過研究96 例乳腺癌患者、68 例乳腺良性疾病患者可知，血清SF 水平與乳腺癌患者血清CA153、CA125、CAE 水平存在明顯正相關(guān)關(guān)系，與王軍梅等[10]研究相似。 SF 水平升高會導(dǎo)致含鐵黃素在組織中大量沉積，引發(fā)氧化損傷，乳腺癌細(xì)胞異常增殖[11]。

UBE2C 是泛素結(jié)合酶家族的重要成員， 在泛素蛋白酶途徑（UPS）中具有重要作用[12]。 UPS 通路失調(diào)會異常降解一些癌基因及腫瘤抑制基因編碼蛋白，造成體內(nèi)蛋白蓄積，參與癌癥病程進(jìn)展[13]。本研究結(jié)果顯示，血清UBE2C 水平在乳腺癌患者中呈高表達(dá)，與魏震[14]觀點(diǎn)一致，并與乳腺癌患者臨床分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移存在正相關(guān)性，與組織分化程度存在負(fù)相關(guān)性。ROC曲線顯示，UBE2C 診斷乳腺疾病良惡性AUC最大， 為0.813， 且特異度高達(dá)85.29%，提示UBE2C 有望成為鑒別乳腺疾病良惡性的特異性血清標(biāo)志物。

研究結(jié)果顯示，IGF-1 可作用于乳腺細(xì)胞基質(zhì)，刺激乳腺癌患者雌激素活性，提高機(jī)體雌激素水平，異常增生乳腺導(dǎo)管上皮細(xì)胞，促進(jìn)乳腺癌發(fā)生、發(fā)展[15]。Spearman相關(guān)性分析顯示，血清IGF-1與乳腺癌患者臨床分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、組織分化程度存在一定相關(guān)性。

本研究采用聯(lián)合應(yīng)用模式， 結(jié)果顯示， 血清SF、IGF-1、UBE2C 聯(lián)合診斷乳腺腫瘤良惡性的AUC為0.875，特異度可達(dá)86.76%，可見血清SF、IGF-1、UBE2C 聯(lián)合診斷具有成為乳腺良惡性疾病診斷指標(biāo)的潛力。