多普勒超聲聯(lián)合血清HIF-1α、VEGF 水平診斷宮頸癌的臨床應(yīng)用價(jià)值

尚曉敏

（南陽(yáng)市中心醫(yī)院，河南 南陽(yáng) 473000）

宮頸癌是由錯(cuò)綜復(fù)雜的因素引起的女性惡性腫瘤。 由于該病的早期癥狀不易察覺(jué)，且該病容易誤診為慢性宮頸炎，導(dǎo)致治療效果不佳，嚴(yán)重影響預(yù)后[1]。因此，宮頸癌的早期診斷至關(guān)重要。經(jīng)陰道彩色多普勒超聲（Transvaginal color Doppler sonography，TVCDS）可以清晰顯示腫瘤血流分布，是一種無(wú)創(chuàng)檢查，操作方便[2]。 缺氧誘導(dǎo)因子1α（Hypoxia inducible factor-1α，HIF-1α）在缺氧環(huán)境下會(huì)異常表達(dá)， 促進(jìn)腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)[3]。 血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子（Vascular endothelial growth factor，VEGF） 可以通過(guò)影響內(nèi)皮細(xì)胞的表達(dá)促進(jìn)血管生長(zhǎng)， 從而促進(jìn)腫瘤細(xì)胞增殖[4]。 有部分學(xué)者研究發(fā)現(xiàn)HIF-1α、VEGF 在子宮內(nèi)膜癌中高表達(dá)， 可以影響腫瘤血管生成[5]，但在宮頸癌中的探究不足。 為了提高宮頸癌的診斷價(jià)值， 進(jìn)而為宮頸癌的臨床治療和預(yù)后提供更多思路， 本研究以114 例宮頸癌組織標(biāo)本為例， 探討TVCDS、HIF-1α、VEGF 在宮頸癌早期診斷的應(yīng)用價(jià)值。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2017 年1 月至2019 年12 月本院收治的114 例宮頸癌患者為宮頸癌組。 納入標(biāo)準(zhǔn)：（1）經(jīng)病理學(xué)檢查確診為宮頸癌；（2）年齡大于18 周歲。 排除標(biāo)準(zhǔn)：（1）合并其他生殖系統(tǒng)疾病患者；（2）合并心肝腎肺功能障礙、代謝性疾病以及其他惡性腫瘤患者；（3）合并妊娠患者；（4）精神類疾病患者；（5）化療和放療病史患者；（6）近3 個(gè)月使用過(guò)激素藥物和免疫抑制劑患者。 其中，年齡34~69 歲，平均（53.32±6.27）歲；臨床分期Ⅰ期24例， Ⅱ期52 例， Ⅲ期38 例； 有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者46例，無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者68 例。 另取同期114 例宮頸良性病變患者為宮頸良性病變組，其中年齡35~69歲，平均（54.48±6.13）歲。 兩組受試者的基礎(chǔ)資料差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。 本研究符合《世界醫(yī)學(xué)協(xié)會(huì)赫爾辛基宣言》要求。

1.2 方法 （1） 采集入院后兩組受試者的組織標(biāo)本，經(jīng)石蠟包埋后切片，厚度約為4 μm，采用免疫組化染色 （試劑盒均購(gòu)自北京中杉金橋生物科技有限公司）， 所有步驟按照試劑盒說(shuō)明書(shū)操作，以陽(yáng)性切片和PBS 代替一抗作陰性對(duì)照。 （2）采用半定量積分法判定HIF-1α 和VEGF 結(jié)果， 在光鏡下，HIF-1α 陽(yáng)性為胞質(zhì)或細(xì)胞核中觀察到棕黃色染色，VEGF 陽(yáng)性為胞質(zhì)或細(xì)胞核中觀察到棕黃色染色。 以染色強(qiáng)度計(jì)分：棕黃色3 分，黃色2 分，淡黃色1 分，無(wú)色0 分。 在高倍鏡下，隨機(jī)選取5 個(gè)視野，陽(yáng)性細(xì)胞百分比大于75%為3 分，31%~75%為2 分，11%~30%為1 分，小于11%為0 分。 兩項(xiàng)的乘積得分≥1 分為陽(yáng)性，0 分為陰性[6]。 （3）使用多普勒超聲診斷儀（飛利浦公司）對(duì)入院后的兩組受試者進(jìn)行檢查，設(shè)置頻率5~9 MHz，取截石位，探頭置入陰道穹窿部，進(jìn)行多角度全方位檢查，結(jié)果由兩名經(jīng)驗(yàn)豐富的醫(yī)師分析。

1.3 評(píng)價(jià)指標(biāo) （1） 比較兩組受試者HIF-1α 和VEGF 陽(yáng)性率。 （2）比較TVCDS、HIF-1α 和VEGF單獨(dú)與聯(lián)合診斷應(yīng)用于宮頸癌的診斷效果。 （3）比較HIF-1α 和VEGF 表達(dá)水平與臨床病理特征。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 使用SPSS 20.0 統(tǒng)計(jì)軟件， 計(jì)量資料以±s表示，進(jìn)行t檢驗(yàn)；計(jì)數(shù)資料以率（%）表示并以χ2進(jìn)行檢驗(yàn)；等級(jí)資料采用Mann-Whitney U檢驗(yàn)；繪制TVCDS、HIF-1α 和VEGF 及三者聯(lián)合診斷的ROC曲線， 比較曲線下面積，P＜0.05，為數(shù)據(jù)差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兩組受試者HIF-1α 和VEGF 陽(yáng)性率比較 宮頸癌組HIF-1α 和VEGF 陽(yáng)性率高于宮頸良性病變組（P<0.05）。 見(jiàn)表1。

表1 兩組受試者HIF-1α 和VEGF 陽(yáng)性率比較[n（%）]

2.2 TVCDS、HIF-1α 和VEGF 單獨(dú)與聯(lián)合診斷應(yīng)用于宮頸癌的診斷效果ROC曲線顯示，TVCDS診斷宮頸癌的曲線下面積 （Area Under Curve，AUC） 為0.855，HIF-1α 診 斷 宮 頸 癌 的AUC為0.881，VEGF 診斷宮頸癌的AUC為0.841， 三者聯(lián)合診斷宮頸癌的AUC為0.901， 高于單獨(dú)診斷（P<0.05）。 見(jiàn)圖1，表2。

圖1 TVCDS、HIF-1α 和VEGF 單獨(dú)與聯(lián)合診斷在宮頸癌中的ROC 曲線

表2 TVCDS、HIF-1α 和VEGF 單獨(dú)與聯(lián)合診斷在宮頸癌中的診斷價(jià)值

2.3 宮頸組織中HIF-1α 和VEGF 表達(dá)陽(yáng)性率與臨床病理特征關(guān)系 HIF-1α 和VEGF 在分化程度為中、低分化，有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移，臨床分期為Ⅲ期的宮頸癌組織中， 陽(yáng)性表達(dá)率高于分化程度為高分化、無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、臨床分期為Ⅰ+Ⅱ期的宮頸癌組織（P<0.05），而在不同年齡、腫瘤直徑的宮頸癌組織中無(wú)明顯差異（P>0.05）。 見(jiàn)表3。

表3 宮頸組織中HIF-1α 和VEGF 表達(dá)水平與臨床病理特征關(guān)系（n，%）［n(%)］

3 討論

宮頸癌的發(fā)病機(jī)制尚未有定論， 有研究學(xué)者認(rèn)為，宮頸癌的發(fā)生可能與女性性生活紊亂、口服避孕藥、吸煙、乳頭瘤病毒感染等因素有關(guān)[7-8]。 宮頸癌在女性惡性腫瘤中病死率極高， 僅低于乳腺癌，由于該病早期無(wú)顯著癥狀，很容易發(fā)展為中晚期，而這一時(shí)期治愈率較低[9]。 因此，宮頸癌的早期治療極為重要。 而且早期治療的治愈率可達(dá)90%以上[10]。目前，宮頸癌的診斷方法較多，但是診斷率普遍較低， 因此需要尋找合適的指標(biāo)來(lái)提高宮頸癌的早期診斷率。

由于代謝旺盛， 惡性腫瘤細(xì)胞需要更豐富的血液供應(yīng)來(lái)滿足增殖的需求， 致使血流異常[11]。TVCDS 可以清晰顯示女性陰道的解剖結(jié)構(gòu)， 獲得宮頸和管腔的血流分布情況， 從而可以用來(lái)判斷腫瘤的生長(zhǎng)狀況，是臨床常用的診斷方式[12]。 本研究結(jié)果顯示，TVCDS 在宮頸癌中的ROC曲線下AUC為0.855， 提示TVCDS 用于宮頸癌具有診斷價(jià)值。 但是該診斷方式依賴醫(yī)師的主觀判斷，特異度不高，會(huì)影響診斷效果。

HIF-1α 在缺氧的環(huán)境中會(huì)大量轉(zhuǎn)錄，是重要的蛋白因子，可以影響蛋白的合成，從而促進(jìn)腫瘤細(xì)胞增殖，已有研究報(bào)道，HIF-1α 在乳腺瘤、子宮內(nèi)膜癌、卵巢癌中存在異常表達(dá)[13]。 本研究結(jié)果顯示， 宮頸癌組HIF-1α 陽(yáng)性率高于宮頸良性病變組，且HIF-1α 在宮頸癌中的ROC曲線下AUC為0.881，提示HIF-1α 參與了宮頸癌的發(fā)生，具有一定的診斷價(jià)值。 在正常的機(jī)體中， 氧環(huán)境正常，HIF-1α 的合成量基本等于講解量，兩者處于動(dòng)態(tài)平衡中，因此很難檢測(cè)到HIF-1α 的表達(dá)[14]。 在宮頸癌中， 癌細(xì)胞處于缺氧環(huán)境， 在這種情況下，HIF-1α 的合成呈幾何數(shù)快速上升，而降解受到抑制， 合成后的HIF-1α 與缺氧應(yīng)答靶基因結(jié)合，為腫瘤細(xì)胞的增殖提供能量。 萬(wàn)愛(ài)紅等[15]研究發(fā)現(xiàn)，在分化程度為中、低分化，有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移，臨床分期為Ⅲ期的宮頸癌組織中，HIF-1α 陽(yáng)性表達(dá)率更高。 本研究表明，HIF-1α 在分化程度為中、 低分化，有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移，臨床分期為Ⅲ期的宮頸癌組織中，陽(yáng)性表達(dá)率高于分化程度為高分化、無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、 臨床分期為Ⅰ+Ⅱ期的宮頸癌組織， 提示HIF-1α 與宮頸癌的分化程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和臨床分期有關(guān)。 在宮頸癌腫瘤的發(fā)展過(guò)程中，腫瘤細(xì)胞始終處于缺氧環(huán)境， 為了存活并適應(yīng)缺氧環(huán)境，HIF-1α 會(huì)不斷合成。 一方面，HIF-1α 可以促進(jìn)VEGF 表達(dá)，加速血管生成，便于腫瘤細(xì)胞增殖；另一方面，HIF-1α 能提高具有攜氧能力的紅細(xì)胞生成， 來(lái)使腫瘤細(xì)胞周圍的區(qū)域保持穩(wěn)定的氧平衡狀態(tài)。

VEGF 在促進(jìn)血管生成方面，是目前發(fā)現(xiàn)的能力最強(qiáng)的細(xì)胞因子， 而血管的生成與宮頸癌的發(fā)生和發(fā)展密切相關(guān)[16]。 本研究中，宮頸癌組VEGF陽(yáng)性率高于宮頸良性病變組， 且VEGF 在宮頸癌中的ROC曲線下AUC為0.841， 提示VEGF 與宮頸癌的發(fā)生有關(guān)，具有診斷價(jià)值。 VEGF 通過(guò)影響血管的生成和通透性， 來(lái)促進(jìn)腫瘤細(xì)胞增殖和轉(zhuǎn)移。 本研究表明，VEGF 在分化程度為中、低分化，有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移，臨床分期為Ⅲ期的宮頸癌組織中，陽(yáng)性表達(dá)率高于分化程度為高分化、 無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、臨床分期為Ⅰ+Ⅱ期的宮頸癌組織，提示VEGF與宮頸癌的分化程度、 淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和臨床分期密切相關(guān)。

為了進(jìn)一步分析TVCDS、HIF-1α 和VEGF 的診斷價(jià)值， 繪制各指標(biāo)單獨(dú)與聯(lián)合診斷的ROC曲線。 結(jié)果顯示， 三者聯(lián)合診斷的AUC高于單獨(dú)診斷， 提示TVCDS、HIF-1α 和VEGF 三者聯(lián)合診斷價(jià)值更高。 絕大多數(shù)宮頸癌腫塊邊界不清晰，生長(zhǎng)形態(tài)不規(guī)則， 但也有部分惡性腫瘤早期時(shí)形態(tài)規(guī)則，因此難以和良性腫瘤區(qū)分。 另外，由于代謝旺盛， 惡性腫瘤細(xì)胞需要更豐富的血液供應(yīng)來(lái)滿足增殖的需求，從而使血流異常，而良性腫瘤中乳頭狀瘤同樣會(huì)出現(xiàn)血流異常的現(xiàn)象，TVCDS 容易出現(xiàn)誤診。 HIF-1α 和VEGF 具有協(xié)同作用，HIF-1α可以刺激VEGF 表達(dá)， 而VEGF 可以促進(jìn)血管生成來(lái)為腫瘤細(xì)胞的增殖提供環(huán)境， 腫瘤細(xì)胞的大量增殖會(huì)促進(jìn)HIF-1α 的合成。因此，TVCDS、HIF-1α 和VEGF 三者聯(lián)合診斷比單一指標(biāo)更具有診斷價(jià)值。

綜上所述，HIF-1α 和VEGF 表達(dá)水平在宮頸癌組織中更高，TVCDS、HIF-1α 和VEGF 三者聯(lián)合診斷有助于宮頸癌的早期診斷，HIF-1α 和VEG的表達(dá)水平與分化程度、 臨床分期和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)，可以用于宮頸癌的病情評(píng)估。