HLA-B27、ANA 和ANCA 檢測對類風濕性關(guān)節(jié)炎的診斷價值

曹娜娜，王娜，劉玉珂

（河南省洛陽正骨醫(yī)院，河南 洛陽 471000）

類風濕性關(guān)節(jié)炎(Rheumatoid arthritis, RA)是臨床常見的慢性免疫性疾病， 多發(fā)于40~60 歲中老年女性患者[1-3]。 臨床常表現(xiàn)為對稱性、進行性和侵蝕性關(guān)節(jié)炎， 嚴重者可造成關(guān)節(jié)畸形和功能喪失[4-6]。 近些年，隨著人們飲食結(jié)構(gòu)和生活方式的變化，RA 的發(fā)病率逐年遞增，2020 年我國RA 的發(fā)病率在慢性病中占0.28%~0.36%[7-9]。早期RA 缺乏特異性的臨床表現(xiàn)， 常被誤診為系統(tǒng)性紅斑狼瘡（Systemic lupus erythematosus，SLE） 和 骨 關(guān) 節(jié) 炎（Osteoarthritis，OA），往往延誤最佳的治療時機，且老年患者多伴基礎(chǔ)疾病，若未及時有效治療RA 會使膝關(guān)節(jié)造成不可逆性損傷， 嚴重影響患者的日常活動和生活質(zhì)量。 因此，早期診斷對RA 患者的預(yù)后有積極的意義。 目前臨床常用X 線、MRI 影像學(xué)檢查進行診斷， 但是頻繁使用影像學(xué)射線對患者造成極大的傷害[10]。 研究發(fā)現(xiàn)，動態(tài)監(jiān)測血清免疫指標對RA 患者的治療和預(yù)后有積極的指導(dǎo)意義[11]。 人類白細胞B27 抗原（Human leukocyte B27 antigen,HLA-B27）與關(guān)節(jié)性疾病有一定的相關(guān)性，抗核抗體（Anti-nuclear antibody ,ANA）是臨床篩查自身免疫性疾病的重要指標[12-13]。 抗中性粒細胞胞質(zhì)抗體(Antineutrophil cytoplasmic antibody,ANCA)以中性粒細胞和單核細胞為靶抗原的抗體，在原發(fā)性小血管炎中有較高的表達[14]。本研究旨在探討HLA-B27、ANA 和ANCA 在診斷RA 的臨床價值，現(xiàn)報告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2018 年9 月至2020 年9 月在我院住院的患者，其中RA 組132 例，并隨機選取同期治療的非RA 組患者132 例。 納入標準：滿足RA 的診斷依據(jù)[15]；RA 診斷標準：晨僵≥6 周；累及部位3 個及以上；手關(guān)節(jié)炎；對稱性關(guān)節(jié)炎；類風濕結(jié)節(jié)； 血清類風濕因子陽性；X 片提示骨侵蝕或關(guān)節(jié)局限性脫鈣或明顯脫鈣； 滿足以上≥4 條。排除標準：患惡性腫瘤；肝腎功能不全；臨床資料不全。

1.2 方法

1.2.1 標本采集 采集患者空腹靜脈血5 mL，靜置30 min 后離心并分離血清（2 000 r,10 min），取上層清液置于-80 ℃冰箱保存，從采集到檢驗≤2 h。

1.2.2 檢測方法 采用酶聯(lián)吸附試驗法 （ELISE 檢測）白細胞介素33（Interleukin-33，IL-33）、白細胞介素35（Interleukin-35，IL-35）水平，試劑和試劑盒均采用杭州聯(lián)科生物技術(shù)股份有限公司。 檢測前質(zhì)控并矯正儀器，在試驗中設(shè)置空白、陽性、陰性和質(zhì)控孔，選擇自動酶標儀比色分析，在450 nm波長處測定吸光度值（OD 值）并計算樣本含量。 采用化學(xué)發(fā)光分析儀分析25-（OH）VitD3 水平， 試劑和試劑盒均采用上海鈺博生物科技有限公司。

使用流式細胞術(shù)檢測HLA-B27 陽性率，儀器： 美國貝克曼庫爾特公司FC500 流式細胞儀和原裝試劑。記錄淋巴細胞中HLA-B27+/B7-細胞的平均熒光強度和細胞表達率。 判定標準：HLAB27+/B7-占總淋巴細胞比例大于60%且平均熒光強度大于5。

采用間接免疫熒光法檢測ANA 陽性率，儀器選用德國歐蒙公司生產(chǎn)放射免疫計數(shù)儀， 試劑選用上海科新生物公司生產(chǎn)試劑。 判定標準：熒光顯示鏡下特異性熒光為陽性。

采用間接免疫熒光法檢測ANCA 陽性率，儀器選用德國歐蒙公司生產(chǎn)放射免疫計數(shù)儀， 試劑選用上海江萊生物科技有限公司生產(chǎn)試劑。 判定標準：熒光顯示鏡下特異性熒光為陽性。

1.3 觀察指標

比較兩組一般資料和VitD、IL-33 和IL-35水平。

比較兩組HLA-B27、ANA 和ANCA 陽性率。

相 關(guān) 性 分 析IL-33、IL-35 和VitD 水 平 與HLA-B27、ANA 和ANCA 陽 性 率 的 關(guān) 系， 判 斷HLA-B27、ANA 和ANCA 診斷RA 的準確性。

1.4 統(tǒng)計學(xué)處理 采用SPSS 21.0 統(tǒng)計學(xué)軟件對本研究中類風濕性關(guān)節(jié)炎患者臨床數(shù)據(jù)進行整理和分析，滿足正態(tài)分布且方差齊的計量資料采用（±s）表示，采用兩樣本獨立t檢驗比較組間差異，計數(shù)資料用率表示， 采用χ2檢驗，Pearson相關(guān)性分析RA 患者IL-33、IL-35 和VitD 水平與HLA-B27、ANA 和ANCA 陽性率，kappa一致性分析HLAB27、ANA、ANCA 與聯(lián)合檢測的診斷價值，P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 比較兩組一般資料 比較兩組一般資料無顯著差異（P>0.05），見表1。

表1 比例兩組一般資料（±s）［n(%)］

表1 比例兩組一般資料（±s）［n(%)］

類別 RA 組（n=132） 非RA 組（n=132） t/χ2 P性別1.132 0.287年齡（歲）吸煙史飲酒史家族史男女 有無 有無 有無37（28.03）95（71.97）52.36±5.21 49（37.12）83（62.88）43（32.58）89（67.42）73（55.30）59（44.70）45（34.09）87（65.91）52.64±5.34 50（37.88）82（62.12）47（35.61）85（64.39）68（51.52）64（48.48）0.431 0.016 0.271 0.381 0.667 0.899 0.604 0.537文化程度0.138 0.710高中及高中以下高中以上75（56.82）57（43.18）72（54.55）60（45.45）居住環(huán)境潮濕0.693 0.405關(guān)節(jié)活動度（°）是否84（63.64）48（36.36）76.36±5.36 81（61.36）51（38.64）76.69±5.48 0.495 0.621

2.2 比較兩組血清學(xué)水平 RA 組患者IL-33 水平高于非RA 組患者（P<0.05），IL-35 和VitD 水平顯著低于非RA 組患者（P<0.05），見表2。

表2 比較兩組患者IL-33、IL-35 和VitD 水平（±s）

表2 比較兩組患者IL-33、IL-35 和VitD 水平（±s）

組別 IL-33（pg/mL）RA 組（n=132）非RA 組（n=132）t P 28.45±2.14 11.36±2.08 65.794<0.001 IL-35（pg/mL）25.37±3.47 54.18±5.63 50.050<0.001 VitD（nmmol/L）32.88±3.51 50.25±5.46 30.746<0.001

2.3 比較RA 組患者HLA-B27、ANA 和ANCA 陽性率 RA 組患者HLA-B27、ANA 和ANCA 陽性率均高于非RA（P<0.05），見表3。

表3 比較RA 患者HLA-B27、ANA 和ANCA 陽性率［n（%）］

2.4 RA 組患者IL-33、IL-35 和VitD 水平與HLAB27、ANA 和ANCA 陽性率的相關(guān)性分析 RA 組患者IL-33 水平與HLA-B27（+）、ANA（+）和ANCA（+）呈正相關(guān)，IL-35 水平與HLA-B27（+）、ANA（+）和ANCA（+）呈負相關(guān)，VitD 水平與HLA-B27（+）、ANA（+）和ANCA（+）呈負相關(guān)，見表4。

表4 RA 患者IL-33、IL-35 和VitD 水平與HLA-B27、ANA 和ANCA 陽性率的相關(guān)性分析

2.5 比較RA 組患者指標特異性和敏感度 見表5。

表5 比較指標特異性和敏感度

3 討論

RA 是慢性全身炎癥性疾病，目前對發(fā)病機制尚無定論，以侵蝕性關(guān)節(jié)炎為主要特征，常表現(xiàn)為關(guān)節(jié)滑膜炎癥、 關(guān)節(jié)軟骨和軟組織受損， 常見于腕、手、足、膝的病變，多以手掌指關(guān)節(jié)和近節(jié)指關(guān)節(jié)受累[16-17]。 具有極高的致殘率，可發(fā)生于任何年齡，女性高于男性。 目前RA 的治療原則是延緩疾病進展、降低風濕活動性，達到控制關(guān)節(jié)破壞和預(yù)防關(guān)節(jié)功能喪失的目的。 早期發(fā)現(xiàn)和早期治療是RA 患者良好預(yù)后的關(guān)鍵， 由于RA 早期缺乏特異性臨床特征，因此增加了臨床醫(yī)師的診斷難度，但是風濕性疾病患者常出現(xiàn)特異性自身抗體可以為臨床醫(yī)師提供借鑒和判斷。

本研究發(fā)現(xiàn)，RA 組患者IL-33 水平高于非RA 組患者，IL-35 和VitD 水平低于非RA 組患者。IL-33 是當機體受到外在刺激時產(chǎn)生的前炎性因子， 與其受體結(jié)合影響細胞因子的分泌， 使Th1/Th2 免疫應(yīng)答失衡，參與炎癥、免疫學(xué)疾病和心血管疾病的反應(yīng)，在RA 類疾病中有較高的表達。IL-35 是一種抑炎癥因子，通過誘導(dǎo)Tregs和調(diào)節(jié)性B細胞使T 細胞發(fā)生最大抑制效應(yīng)參與免疫應(yīng)答，因此在RA 中相對較低。 VitD 不僅可以維持人體鈣環(huán)境穩(wěn)定， 對免疫調(diào)節(jié)也起重要作用，RA 患者多伴不同程度的骨質(zhì)疏松，RA 患者體內(nèi)鈣流失水平高于非RA 患者， 因此VitD 含量相對較少。 因此， 臨床醫(yī)師在風濕性疾病的診斷治療中可關(guān)注IL-33、IL-35 和VitD 水平輔助判斷RA。

本研究中RA 組患者HLA-B27、ANA 和ANCA 陽性率均明顯高于非RA 組。HLA-B27 是一種顯性遺傳標志抗原，可以調(diào)節(jié)免疫應(yīng)答，通過結(jié)合自身肽段使T 細胞殺傷靶細胞，損傷組織和器官，在全身性炎癥反應(yīng)中有特異性的表現(xiàn)。 既往研究發(fā)現(xiàn)，HLA-B27 在強直性脊柱炎中有較高的表達[18]，因此HLA-B27 在RA 中特異度高， 但靈敏度相對較低。 ANA 靶抗原是核酸、組蛋白、非組蛋白和各種蛋白酶， 除細胞核外在細胞質(zhì)和細胞器中也大量存在，是非特異性的自身抗體，在心血管疾病和血栓疾病中均可出現(xiàn)較高的陽性率， 既往研究發(fā)現(xiàn)，ANA 在系統(tǒng)性紅斑狼瘡中有較高的表達[19]。 因此ANA 在RA 中特異度高，但靈敏度相對較低，在臨床診斷中應(yīng)聯(lián)合其他指標共同鑒別。ANCA 是第一個被證實參與血管炎發(fā)病的相關(guān)抗體， 以靶抗原為中性粒細胞胞漿的多種成分， 如絲氨酸蛋白酶3（PR3）、髓過氧化物酶（MPO）、彈性蛋白酶和乳鐵蛋白，當人體受到外在刺激時，中性粒細胞被募集參與抗擊外來感染源同時發(fā)生凋亡。且RA 患者IL-33 水平與HLA-B27（+）、ANA（+）和ANCA（+）呈正相關(guān)，IL-35 和VitD 水平與HLA-B27 （+）、ANA（+）和ANCA（+）呈負相關(guān)。臨床醫(yī)師可通過檢測IL-33、IL-35 和VitD 水平輔助判斷RA 患者疾病的嚴重程度，以期指導(dǎo)臨床。

因此，臨床難以依據(jù)單一指標診斷RA，應(yīng)結(jié)合HLA-B27、ANA 和ANCA 聯(lián)合評估和判斷，避免誤診和漏診，HLA-B27、ANA 和ANCA 聯(lián)合檢測可以提高RA 診斷的準確度。