MicRNA-126 與肝癌細(xì)胞增殖、凋亡的關(guān)系研究

李寧，崔中鋒，李琤

（河南省傳染病醫(yī)院，河南 鄭州 450000）

肝癌是世界上第五大最常見的癌癥， 也是全球第三大與癌癥相關(guān)的死亡原因[1]。 盡管近年來在肝癌診斷和治療方面取得了不錯的進(jìn)展， 但肝癌患者長期預(yù)后仍然很差， 晚期肝癌患者5 年生存率低于5%[2]。 證據(jù)表明，肝內(nèi)復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移是影響肝癌患者預(yù)后不良的危險因素[3]。 但肝癌復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移的分子機制尚未完全闡明。 肝癌發(fā)生和發(fā)展與包括microRNAs 在內(nèi)的多種基因有關(guān)。 microRNA 是一類長度為21～25 個核苷酸的內(nèi)源性小RNA，可在轉(zhuǎn)錄后水平或翻譯水平上負(fù)調(diào)控基因表達(dá)，從而參與調(diào)控細(xì)胞增殖、凋亡、遷移和侵襲等多種細(xì)胞生物學(xué)過程[4]。研究顯示，micRNA-126 在胃癌[5]、肺癌[6]、前列腺癌[7]等多種腫瘤中下調(diào)表達(dá)，可能發(fā)揮抑制腫瘤發(fā)生和發(fā)展的作用。 亦有文獻(xiàn)報道，micRNA-126 在肝癌組織中的表達(dá)顯著低于癌旁組織和正常組織， 且micRNA-126 低表達(dá)是影響肝癌患者預(yù)后不良的獨立因素[8]。但有關(guān)micRNA-126 影響肝癌細(xì)胞生物學(xué)功能作用的報道較少。本研究旨在分析探討micRNA-126 對肝癌細(xì)胞增殖、凋亡的影響及其相關(guān)機制，現(xiàn)詳細(xì)報告如下。

1 材料與方法

1.1 動物和細(xì)胞株 16 只BALB/c 裸鼠（4～5 周齡）購買自上海斯萊克實驗動物有限公司，體質(zhì)量16～22 g，實驗動物合格證號：SYXK（滬）2019-0008，人肝 癌 細(xì) 胞 株HepG2、MHCC97-L、PLC、Huh7 以 及人肝細(xì)胞株L02 購買自中國科學(xué)院上海細(xì)胞庫，micRNA-126 mimics 和micRNA-126 NC 均購買自上海吉瑪制藥技術(shù)有限公司。

1.2 試劑和儀器 胎牛血清、 胰蛋白酶消化液、DMEM 培養(yǎng)基、青霉素-鏈霉素溶液（批號或貨號分別為：SV30184.02、J160030、AB216496、SV30010。美國Hyclone 公司）；MTT、二甲基亞砜（批號或貨號分別為：303H0523、D8371。北京索萊寶科技有限公司）；轉(zhuǎn)染試劑Lipofectamine 3000（批號或貨號：L3000-015。 美國Invitrogen 公司）；蛋白酶抑制劑（批號或貨號：P7626。 美國Sigma 公司）；膜聯(lián)蛋白V-異硫氰酸熒光素 （Annexin V-FITC）/碘化丙啶（PI）細(xì)胞凋亡檢測試劑盒（批號或貨號：A211-01。南京諾唯贊生物科技有限公司）；PrimeScriptTM RT reagent 試劑盒 （批號或貨號：RR037A。 日本Takara 公司）；LightCycler 480 SYBR Green I Master 試劑盒 （批號或貨號：4887352001。 Roche 公司）；RIPA 裂解液、BCA 蛋白定量試劑盒 （批號或貨號分別：R0010、PC0020。北京索萊寶科技有限公司）；ECL 化學(xué)發(fā)光試劑盒（批號或貨號：P0018M。杭州碧云天生物技術(shù)研究所）； 羊抗PIK3R2、PI3K、PDK1、AKT、p-PI3K、p-PDK1、p-AKT、GAPDH抗體 （批號或貨號分別為：PA5-101022、MA1-74183、MA5 -15797、MA5 -14916、PA5 -104853、PA5-104700、44-621G、MA5-15738-D680，Thermo Fisher 公司）； 辣根過氧化酶標(biāo)記二抗 （批號或貨號：bs-40296G。 北京博奧森生物技術(shù)有限公司）；CO2 細(xì)胞培養(yǎng)箱（型號：HF151UV。 上海力新儀器有限公司）；紫外分光光度計（型號：Q5000。 美國Quawell 公司）；流式細(xì)胞儀（型號：FACScanto II。美國BectonDickinson 公司）； 實時熒光定量PCR儀 （型號：FTC-3000。 上海楓嶺生物技術(shù)有限公司）；蛋白印跡電泳儀（型號：Power PacTM HC。 美國Bio-Rad 公司）。

1.3 方法

1.3.1 細(xì)胞培養(yǎng) 將人肝癌細(xì)胞株HepG2、MHCC97-L、PLC、Huh7 和人肝細(xì)胞株L02 置于含有10%胎牛血清的DMEM 培養(yǎng)基中于37 ℃、5%的CO2 細(xì)胞培養(yǎng)箱中進(jìn)行培養(yǎng)，每1～2 d 傳代一次。

1.3.2 總RNA 提取、逆轉(zhuǎn)錄以及RT-PCR 檢測 收集對數(shù)生長期的人肝癌細(xì)胞株HepG2、MHCC97-L、PLC、Huh7 和人肝細(xì)胞株L02，加入1 mL Trizol 溶液，上下顛倒混勻，并以1∶1 比例加入氯仿，再加入500 μL 提前預(yù)冷異丙醇，提取總RNA。 于260 nm和280 nm 處測定吸光度， 并使用PrimeScriptTM RT reagent 試劑盒將RNA 逆轉(zhuǎn)錄成cDNA。 將所得cDNA 稀釋5～50 倍進(jìn)行RT-PCR 反應(yīng)（反應(yīng)體系：上游、下游引物0.5 μL，SYBR GREEN 0.3 μL，2×Taq Master Mix 10.0 μL，cDNA 1.0 μL， 加 無RNase 水至20.0 μL。 反應(yīng)程序：95 ℃、5 min，預(yù)變性；95 ℃、10 s，變性，60 ℃、20 s，復(fù)性，72 ℃、15 s，延伸，40 個循壞；72 ℃、5 min 延伸， 以U6 為內(nèi)參基因，引物序列：F：5‘- CTTAGTTGCGTTACACCCTT TCTTG-3’，R：5‘-CTGTCACCTTCACCGTTCCAGT TT-3’， 引物由上海吉瑪制藥技術(shù)有限公司合成，實驗重復(fù)三次， 目的基因micRNA-126 mRNA 相對表達(dá)水平采用2-△△Ct法進(jìn)行計算。

1.3.3 細(xì)胞轉(zhuǎn)染 當(dāng)HepG2、MHCC97-L 細(xì)胞密度長至80%～90%時，棄液，并使用PBS 磷酸緩沖液沖洗；加入0.25%胰蛋白酶消化液進(jìn)行消化，收集細(xì)胞混合液，1 000 rpm 離心5 min；棄液，加入新鮮完全培養(yǎng)基重懸細(xì)胞，以每孔1×105個細(xì)胞接種至6 孔細(xì)胞板中， 置于37 ℃、5%的CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱中進(jìn)行培養(yǎng)。 第二天，觀察細(xì)胞生長狀態(tài)良好，用移液槍輕輕吸走培養(yǎng)液， 加入不含胎牛血清的DMEM 培養(yǎng)基，分別轉(zhuǎn)染micRNA-126 mimics（micRNA-126 mimics 組）和micRNA-126 NC（micRNA-126 NC 組），control 組不轉(zhuǎn)染任何序列， 置于37 ℃、5%的CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)4 h；用移液槍輕輕吸走培養(yǎng)液， 并加入含有10%胎牛血清的DMEM 培養(yǎng)基，放回CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)。

1.3.4 MTT 檢測肝癌細(xì)胞增殖能力 分別取5×103個HepG2、MHCC97-L 細(xì)胞接種至96 孔細(xì)胞板中，設(shè)置6 個復(fù)孔，培養(yǎng)至細(xì)胞貼壁開始轉(zhuǎn)染micRNA-126 mimics 和micRNA-126 NC。 同時設(shè)置空白對照組， 置于37 ℃、5%的CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，于24 h、48 h、72 h 以及96 h 時進(jìn)行MTT 檢測，具體操作為：分別于24 h、48 h、72 h 以及96 h時用移液槍輕輕吸走培養(yǎng)液， 加入100 μl 新鮮DMEM 培養(yǎng)基+10 μL MTT 混合液 （濃度為5 mg/mL），置于37 ℃、5%的CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)4 h；用移液槍輕輕吸走培養(yǎng)液，并加入150 μL 二甲基亞砜，避光靜置10 min，于450 nm 處測定吸光度。

1.3.5 流式細(xì)胞儀檢測肝癌細(xì)胞凋亡能力 分別取生長至80%～90%的HepG2、MHCC97-L 細(xì)胞接種至6 孔細(xì)胞板中，設(shè)置6 個復(fù)孔，當(dāng)細(xì)胞生長至密度為80%～90%時進(jìn)行轉(zhuǎn)染，操作同1.3.3；轉(zhuǎn)染48 h，棄液，PBS 沖洗， 加入0.25%胰蛋白酶消化液消化細(xì)胞，收集細(xì)胞混合液并離心，調(diào)整細(xì)胞密度為1×105個細(xì)胞，PBS 沖洗兩次；各組細(xì)胞分別加入500 μL Binding Buffer， 吹打混勻； 再分別加入5 μL Annexin V-FITC、5 μL PI，避光孵育15 min；取1×106個細(xì)胞，采用流式細(xì)胞儀檢測細(xì)胞凋亡率。

1.3.6 RT-PCR 檢測轉(zhuǎn)染前后micRNA-126 表達(dá)水平轉(zhuǎn)染48 h，取對數(shù)生長期細(xì)胞提取總RNA，檢測各組micRNA-126 表達(dá)水平，具體操作同1.3.2。

1.3.7Western blot檢測凋亡相關(guān)蛋白表達(dá) 轉(zhuǎn)染48 h，取各組對數(shù)生長期細(xì)胞，加入1 mL 蛋白裂解液（蛋白酶抑制劑：RIPA 裂解液=1∶1），置于冰上裂解30 min，12 000 rpm 離心5 min， 取上清轉(zhuǎn)移至新的離心管中，測定蛋白濃度。 配制分離膠和濃縮膠，取40 μg 蛋白樣品進(jìn)行SDS-PAGE 電泳，設(shè)置初始電壓為80 V，大約電泳30 min，見待溴酚藍(lán)指示帶到達(dá)分離膠時，調(diào)整電壓為120 V，繼續(xù)電泳2 h，直至溴酚藍(lán)指示帶電泳至分離膠底部。根據(jù)目的分子條帶切取凝膠， 并準(zhǔn)備相應(yīng)大小的硝酸纖維素膜，使用“三明治”夾轉(zhuǎn)膜，設(shè)置恒定電流200 mA，時間為1.5 h。 使用TBST 配制的5%脫脂奶粉溶液室溫封閉2 h，再分別加入一抗（PIK3R2、PI3K、PDK1、AKT、p -PI3K、p -PDK1、p -AKT、GAPDH）4℃孵育過夜，然后加入二抗孵育2 h；在避光條件下混勻ECL 化學(xué)發(fā)光液A 液和B 液，使用移液槍均勻地滴加至硝酸纖維素膜上，靜置5 min，曝光顯影，并置于顯影儀中拍照，采用凝膠圖象處理系統(tǒng)（Gel-Pro-Analyzer）軟件測定各蛋白灰度值，目的蛋白相對表達(dá)水平=目的蛋白灰度值/內(nèi)參蛋白灰度值。

1.3.8 裸鼠成瘤實驗 16 只BALB/c 裸鼠隨機分為過表達(dá)組和陰性對照組，轉(zhuǎn)染micRNA-126 mimics和micRNA-126 NC 的HepG2 細(xì)胞培養(yǎng)48 h，經(jīng)0.25%胰蛋白酶消化液消化， 制成細(xì)胞密度為1×1013個/L 的細(xì)胞懸液， 取100 μL 分別從兩組裸鼠腋下注射，每組各8 只，每周測量裸鼠皮下腫瘤體積，計算公式為體積=[（腫瘤最長徑×腫瘤最短徑）]2×0.5，觀察6 周后處死小鼠，稱重。

1.3.9 生物信息學(xué)預(yù)測 采用miRwalk2.0（http://zmf.umm.uni-heidelberg.de/apps/zmf/mirwalk2/）網(wǎng)站預(yù)測micRNA-126 可能的作用靶點。

1.3.10 micRNA-126 與PIK3R2 的靶向關(guān)系驗證采用熒光素酶實驗進(jìn)一步驗證micRNA-126 與PIK3R2 的靶向關(guān)系， 體外合成含micRNA-126 與PIK3R2 3’ UTR 堿基互補區(qū)域的DNA 片段（WT）及含該位點突變體的DNA 片段（MUT），并克隆至雙熒光素酶啟動子載體， 將質(zhì)粒轉(zhuǎn)染到micRNA-126 細(xì)胞和mimics 細(xì)胞，培養(yǎng)48 h，采用熒光素酶檢測試劑盒檢測熒光素酶活性。

1.4 統(tǒng)計學(xué)方法 數(shù)據(jù)分析處理應(yīng)用SPSS 20.0 統(tǒng)計學(xué)軟件進(jìn)行，計量資料實驗結(jié)果采用（±s）表示，多組組間數(shù)據(jù)對比首先進(jìn)行正態(tài)性檢驗和方差齊性檢驗， 方差齊性采用單因素方差分析（one-way ANOVA），多組兩兩對比采用LSD 法，P<0.05，為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 RT-PCR 檢測micRNA-126 在肝癌細(xì)胞中的表達(dá) 通過檢測micRNA-126 在人肝癌細(xì)胞株HepG2、MHCC97-L、PLC、Huh7 以 及 人 肝 細(xì) 胞 株L02 中的表達(dá)，micRNA-126 在人肝癌細(xì)胞株HepG2、MHCC97-L、PLC、Huh7 中的表達(dá)水平顯著低于人肝細(xì)胞株L02 中的表達(dá)水平， 差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。 見圖1。

圖1 micRNA-126 在人肝癌細(xì)胞和人肝細(xì)胞中的表達(dá)水平

2.2 RT-PCR 檢測轉(zhuǎn)染前后micRNA-126 表達(dá)水平的變化 RT-PCR 檢測結(jié)果顯示，micRNA-126 mimics 組HepG2、MHCC97-L 細(xì)胞中micRNA-126表達(dá)水平顯著高于control 組和micRNA-126 NC組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。 見圖2。

圖2 轉(zhuǎn)染mimics 后HepG2、MHCC97-L細(xì)胞中micRNA-126 表達(dá)水平

2.3 MTT 法檢測過表達(dá)micRNA-126 對肝癌細(xì)胞增殖的影響 MTT 法檢測結(jié)果顯示，在24 h、48 h、72 h 以及96 h 時，micRNA-126 mimics 組HepG2、MHCC97-L 細(xì)胞增殖率均顯著高低于control 組和micRNA-126 NC 組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（F=12.167，F(xiàn)=6.771，F(xiàn)=17.073，F(xiàn)=38.671；F=17.182，F(xiàn)=18.590，F(xiàn)=12.604，F(xiàn)=32.876，P<0.05）。 見圖3。

圖3 MTT 法檢測過表達(dá)micRNA-126對肝癌細(xì)胞增殖能力的影響

2.4 流式細(xì)胞術(shù)檢測過表達(dá)micRNA-126 對肝癌細(xì)胞凋亡的影響 流式細(xì)胞術(shù)檢測結(jié)果顯示，micRNA-126 mimics 組HepG2、MHCC97-L 細(xì) 胞 凋亡率均顯著高于control 組和micRNA-126 NC 組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。 見圖4。

圖4 過表達(dá)micRNA-126 對肝癌細(xì)胞凋亡的影響

2.5 過表達(dá)micRNA-126 對裸鼠移植瘤生長的影響 過表達(dá)組裸鼠腫瘤體積顯著小于陰性對照組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。 見圖5。

圖5 裸鼠皮下成瘤模型腫瘤體積變化

2.6 micRNA-126 靶向抑制PIK3R2 蛋白表達(dá)并調(diào)控PI3K/PDK1/AKT 信號通路 micRNA-126 mimics 組PIK3R2、p-PI3K/PI3K、p-PDK1/PDK1、p-AKT/AKT 蛋白表達(dá)水平顯著低于control 組和micRNA-126 NC 組（P<0.05）。 見圖6。

圖6 Western blot 檢測PIK3R2、PI3K、PDK1、AKT、p-PI3K、p-PDK1、p-AKT 蛋白表達(dá)

2.7 肝癌細(xì)胞中PIK3R2 是micRNA-126 的靶基因 通過生物信息學(xué)預(yù)測工具 （miRwalk2.0 網(wǎng)站）發(fā)現(xiàn)，PIK3R2 是micRNA-126 的潛在靶點，micRNA-126 與PIK3R2 3’ UTR 區(qū)域堿基互補，PIK3R2為肝癌細(xì)胞中micRNA-126 的靶基因。 見圖7。

圖7 生物信息學(xué)預(yù)測PIK3R2 為micRNA-126 的靶基因

2.8 micRNA-126 與PIK3R2 的靶向關(guān)系 與轉(zhuǎn)染W(wǎng)T 熒光素酶質(zhì)粒mimic NC 組相比， 共轉(zhuǎn)染W(wǎng)T熒光素酶質(zhì)粒micRNA-126 mimic 組熒光素酶活性顯著降低（P<0.05），而轉(zhuǎn)染MUT 熒光素酶質(zhì)粒mimic NC 組和共轉(zhuǎn)染MUT 熒光素酶質(zhì)粒micRNA-126 mimic 組熒光素酶活性比較， 差異無統(tǒng)計學(xué) 意 義 （P>0.05），micRNA-126 可 靶 向 負(fù) 調(diào) 控PIK3R2。 見圖8。

圖8 熒光素酶實驗驗證micRNA-126 與PIK3R2 的靶向關(guān)系

3 討論

各種microRNAs 在肝癌中的發(fā)病機制中發(fā)揮著重要的作用，microRNAs 可通過調(diào)控其靶基因參與肝癌發(fā)生和發(fā)展。 MicroRNA-23a 可抑制肝癌細(xì)胞MHCC97H 細(xì)胞生長和增殖， 并通過下調(diào)KIAP誘導(dǎo)MHCC97H 細(xì)胞凋亡[9]。 Liu 等[10]證明microRNA-222 抑制劑靶向BBC3 抑制肝癌細(xì)胞增殖、遷移和侵襲， 并抑制肝癌細(xì)胞凋亡。 Yu 等[11]發(fā)現(xiàn)miR-195 通過靶向YAP 來抑制肝癌細(xì)胞轉(zhuǎn)移和上皮間充質(zhì)轉(zhuǎn)換。故microRNA 可能作為預(yù)測肝癌進(jìn)展的新型生物標(biāo)志物。

大量研究表明，micRNA-126 可能是多種腫瘤患者的調(diào)節(jié)因子和預(yù)后生物標(biāo)志物[12-15]。 Nie 等[16]文獻(xiàn)報道指出， 與癌旁正常組織相比，micRNA-126 在食管鱗狀細(xì)胞癌組織中表達(dá)顯著降低，EC109 細(xì)胞中micRNA-126 過表達(dá)可抑制細(xì)胞增殖和遷移。 過表達(dá)micRNA-126 可抑制宮頸癌細(xì)胞遷移和侵襲， 并可能通過調(diào)節(jié)PI3K/PDK1/AKT途徑誘導(dǎo)HeLa 細(xì)胞凋亡[17]。 Zhang 等[18]研究也表明，micRNA-126 在卵巢癌中顯著下調(diào)，micRNA-126 下調(diào)表達(dá)提示患者預(yù)后不良，其表達(dá)恢復(fù)則可明顯抑制卵巢癌細(xì)胞增殖、侵襲和遷移，其可能與調(diào)節(jié)表皮生長因子樣結(jié)構(gòu)域7 以及ERK/MAPK 信號通路和上皮間充質(zhì)轉(zhuǎn)換有關(guān)。 本研究結(jié)果顯示，肝癌細(xì)胞中micRNA-126 表達(dá)水平顯著下調(diào)，與既往報道結(jié)果一致[19]。本研究中體外實驗結(jié)果發(fā)現(xiàn)，micRNA-126 過表達(dá)可顯著抑制肝癌細(xì)胞HepG2、MHCC97-L 細(xì)胞增殖，促進(jìn)細(xì)胞凋亡，提示micRNA-126 可能是通過抑制肝癌細(xì)胞增殖和促進(jìn)肝癌細(xì)胞凋亡影響肝癌發(fā)生和發(fā)展， 從而在肝癌細(xì)胞中發(fā)揮抑癌功能。 同時，裸鼠皮下成瘤模型實驗結(jié)果顯示，micRNA-126 過表達(dá)可明顯抑制裸鼠皮下腫瘤生長， 進(jìn)一步證明micRNA-126 在肝癌中起著抑癌作用。 彭吉祥等[20]也認(rèn)為，micRNA-126過表達(dá)可抑制肝癌細(xì)胞HepG2 細(xì)胞增殖、 遷移和侵襲能力，促進(jìn)細(xì)胞凋亡，并抑制裸鼠皮下成瘤模型腫瘤生長。 故micRNA-126 可能是調(diào)控肝癌發(fā)生和發(fā)展的重要影響因素。

PIK3R2 編 碼PI3K 蛋 白，PI3K/Akt 信 號 通 路是與細(xì)胞生長密切相關(guān)的通路之一[21]。 PI3K 是由調(diào)控亞基（P85α、P85β、P85γ）和催化亞基（P110）組成的復(fù)合物，其產(chǎn)物PIP2 和PIP3 均是細(xì)胞內(nèi)重要的第二信使，并在細(xì)胞增殖、凋亡以及代謝過程中發(fā)揮著重要作用[22]。 PI3K 被激活后，可使得細(xì)胞膜上的肌醇磷酸化，進(jìn)而產(chǎn)生PIP3，PIP3 則與Akt 結(jié)合并使其活化， 活化的Akt 可調(diào)控細(xì)胞色素C 以及凋亡因子的釋放，最終抑制細(xì)胞凋亡[23]。 本研究通過生物信息學(xué)預(yù)測分析micRNA-126 可能的靶基因， 結(jié)果顯示，micRNA-126 與PIK3R2 3’ UTR區(qū)域堿基互補，PIK3R2 為肝癌細(xì)胞中micRNA-126 的靶基因。 進(jìn)一步熒光素酶實驗驗證發(fā)現(xiàn)，micRNA-126 能夠抑制野生型PIK3R2 細(xì)胞活性，且并不抑制突變型PIK3R2 細(xì)胞活性，提示micRNA-126 可靶向負(fù)調(diào)控PIK3R2 表達(dá)。Western blot檢測結(jié)果顯示，micRNA-126 mimics 組PIK3R2、p-PI3K/PI3K、p-PDK1/PDK1、p-AKT/AKT 蛋白表達(dá)水平顯著低于control 組和micRNA-126 NC 組。提示micRNA-126 可能是通過與PIK3R2 mRNA 3’UTR 區(qū)域結(jié)合， 誘導(dǎo)PIK3R2 基因mRNA 序列降解， 從而抑制PIK3R2 蛋白合成， 從而抑制PI3K/PDK1/AKT 信號通路，最終促進(jìn)肝癌細(xì)胞凋亡。 具體而言，一方面micRNA-126 通過作用于PI3K 抑制PDK1，使得AKT 磷酸化，進(jìn)一步激活下游信號通路中GSK 3β、cyclinD 1、p70S6K 和S6， 最終調(diào)控細(xì)胞增殖； 另一方面micRNA-126 通過作用于PI3K 抑制PDK1， 使得AKT 磷酸化， 從而抑制Bad、Bcl-xL、Bax 以及激活Caspase-3/7， 最終促進(jìn)細(xì)胞凋亡[24]。 Wu 等[25]研究也發(fā)現(xiàn)，micRNA-126 通過靶向PIK3R2 抑制骨肉瘤細(xì)胞增殖。 除此之外，有報道[26]指出，PLK-4 也可能是micRNA-126 的靶基因，miRNA-126/PLK-4 軸以及ATR/CHEK 1 通路的激活是肝癌發(fā)生和發(fā)展的關(guān)鍵，PLK-4/ATR/CHEK 1 通路可能是肝癌治療的潛在靶點。 總而言之， 這些研究為進(jìn)一步理解肝癌發(fā)生和發(fā)展的機制提供了依據(jù)， 但micRNA-126 影響肝癌細(xì)胞生物學(xué)功能作用有待繼續(xù)深入研究。

綜上所述， 肝癌細(xì)胞中micRNA-126 下調(diào)表達(dá)，過表達(dá)micRNA-126 可抑制肝癌細(xì)胞增殖，促進(jìn)肝癌凋亡，抑制裸鼠皮下成瘤模型腫瘤生長，肝癌細(xì)胞中PIK3R2 是micRNA-126 的潛在靶基因，micRNA-126 可能靶向負(fù)調(diào)控PIK3R2 表達(dá)， 抑制肝癌細(xì)胞增殖及促進(jìn)其凋亡， 可為進(jìn)一步研究PIK3R2 在肝癌中的作用奠定理論基礎(chǔ)，對開發(fā)肝癌治療新藥具有一定指導(dǎo)意義。