胃腺癌和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移癌中Claudin18.2表達(dá)研究

袁雪芹,張靜婷,2,李 霞,2

(1.濟(jì)寧醫(yī)學(xué)院附屬金鄉(xiāng)醫(yī)院病理科,山東 濟(jì)寧 272299;2.深圳市龍崗區(qū)第三人民醫(yī)院病理科,廣東 深圳 518115)

胃癌是全球最常見(jiàn)的惡性腫瘤之一,2020年全球發(fā)病率排名第五,死亡率排名第四[1],也是我國(guó)最常見(jiàn)的消化道惡性腫瘤[2],大多數(shù)患者確診時(shí)已是晚期。目前治療仍然是以化療為主,靶向藥物較少,晚期胃癌患者的治療效果差,5年生存率僅 為30%左右[3],急需開(kāi)發(fā)一些新的靶向治療藥物[4]。Claudin18.2(CLDN18.2)是在上皮緊密連接處表達(dá)的四肽蛋白Claudin家族的成員,正常情況下 Claudin18.2蛋白主要表達(dá)在胃黏膜上皮細(xì)胞,其在胃癌、胰腺癌、食管癌等癌變組織中表達(dá)明顯上調(diào),并參 與腫瘤細(xì)胞的增殖、分化及轉(zhuǎn)移[5]。在一項(xiàng)隨機(jī)2期研究(FAST)中,對(duì)經(jīng)組織學(xué)證實(shí)的中到強(qiáng)Claudin18.2表達(dá)的進(jìn)展期胃癌和胃食管連接部癌患者,zolbetuximab (IMAB362)聯(lián)合化療比單純化療延長(zhǎng)了總生存期和無(wú)進(jìn)展生存期,安全性和耐受性可接受[6]。目前多項(xiàng)研究在進(jìn)行,對(duì)于Claudin18.2在胃癌中的分布及表達(dá)僅在國(guó)外有一些研究[7-8],目前在中國(guó)胃癌患者中僅查及少量研究[9-10],對(duì)于Claudin18.2 在胃癌中表達(dá)及臨床病理學(xué)特征之間的關(guān)系尚不清楚。因而,本研究進(jìn)一步探討患者胃原發(fā)性腺癌及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移癌中Claudin18.2的表達(dá)情況,為靶向選擇、治療積累一些理論依據(jù)。

1 資料與方法

1.1一般資料:收集深圳市龍崗區(qū)第三人民醫(yī)院病理科和濟(jì)寧醫(yī)學(xué)院附屬金鄉(xiāng)醫(yī)院病理科2010～2022年間胃腺癌組織和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移癌樣本共計(jì)110組,病理學(xué)分級(jí)采用WHO 分類(lèi)標(biāo)準(zhǔn)(2019),本研究的組織學(xué)樣本均經(jīng)兩位病理學(xué)家復(fù)診。組織標(biāo)本經(jīng) 4%中性甲醛固定,石蠟包埋,常規(guī)5 μm切片。本研究經(jīng)過(guò)本院醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)審批同意執(zhí)行。

1.2方 法:應(yīng)用免疫組織化學(xué) EnVision法檢測(cè) Claudin18.2(上海杰浩)的表達(dá)水平,操作按試劑盒說(shuō)明書(shū)進(jìn)行,正常胃黏膜作為陽(yáng)性對(duì)照。

1.3免疫組織化學(xué)結(jié)果判定:免疫組織化學(xué)結(jié)果由兩位病理醫(yī)師進(jìn)行交叉雙盲判定。Claudin18.2的免疫組織化學(xué)結(jié)果判讀參照 Sahin等[6,11]報(bào)道的方法,該方法參考腫瘤細(xì)胞膜的染色強(qiáng)度和腫瘤細(xì)胞的百分比綜合評(píng)價(jià),對(duì)完全、基底及側(cè)膜或側(cè)膜染色的癌細(xì)胞百分比進(jìn)行評(píng)估。染色強(qiáng)度分為0(無(wú)細(xì)胞膜反應(yīng))、1+(弱細(xì)胞膜反應(yīng))、2+(中等細(xì)胞膜反應(yīng))和3+(強(qiáng)細(xì)胞膜反應(yīng)),只有陽(yáng)性對(duì)照(健康胃組織)顯示預(yù)期的染色模式,腫瘤標(biāo)本的染色才被認(rèn)為是有效的。Claudin18.2陽(yáng)性定義為至少40%的腫瘤細(xì)胞中中度(2+)或強(qiáng)Claudin18.2染色(3+)。

1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)方法:應(yīng)用 Office 2010軟件的Excel程序進(jìn)行χ2檢驗(yàn),以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1患者和腫瘤特征:患者年齡35～75歲(中位年齡65歲),男和女患者分別為65例和45例。原發(fā)腫瘤位于胃小彎及胃竇部71例(64.5%),胃體部22例(20%),胃食管交界處17例(15.5%)。按腫瘤分期,Ⅲ期80例(72.7%),Ⅱ期30例(27.3%);按Lauren表型,腸型58例(52.7%),彌漫型43例(39.1%),混合型10(8.2%)。見(jiàn)表1。

表1 胃癌患者Claudin18.2的表達(dá)和臨床病理特征之間的關(guān)系

2.2免疫組化結(jié)果

2.2.1胃癌原發(fā)部位及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移部位Claudin18.2的表達(dá):在正常胃黏膜上皮可見(jiàn)中度的Claudin18.2表達(dá),其作為本次研究的內(nèi)對(duì)照(圖1A)。在胃癌中,Claudin18.2主要表達(dá)于細(xì)胞膜,部分腫瘤細(xì)胞可見(jiàn)細(xì)胞質(zhì)表達(dá)。細(xì)胞膜可見(jiàn)完整的、基底側(cè)膜或者側(cè)膜表達(dá)陽(yáng)性。按照FAST研究的標(biāo)準(zhǔn)(≥40%的腫瘤細(xì)胞中≥2+膜染色強(qiáng)度),本研究胃癌Claudin18.2的陽(yáng)性率為50%(55/110)圖1B-1D分別顯示胃腺癌組Claudin18.2 強(qiáng)度1+～3+。淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移癌中觀察到中到強(qiáng)Claudin18.2表達(dá)陽(yáng)性率為44.5%(49/110),圖2A-2D分別顯示Claudin18.2在淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移癌中強(qiáng)度0～3+。兩組間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。

圖1 胃腺癌組織中Claudin18.2的表達(dá)水平(EnVision,×200)

2.2.2胃腺癌原發(fā)灶中Claudin18.2的表達(dá)水平與臨床病理學(xué)特征之間的關(guān)系:不同年齡、性別、臨床分期的患者Claudin18.2的表達(dá)差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05);但Lauren分型中腸型較彌漫型的Claudin18.2的表達(dá)明顯增高,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見(jiàn)表1。

3 討論

在國(guó)外FAST研究[6]中顯示:在Claudin18.2表達(dá)陽(yáng)性的胃癌患者中,化療聯(lián)合zolbetuximab (IMAB362)的治療II期臨床試驗(yàn)已經(jīng)顯示了很好的療效,因而有必要進(jìn)一步研究明確Claudin18.2在中國(guó)胃癌患者中的表達(dá)情況及與臨床特征的關(guān)系。

本研究中選擇了110例原發(fā)性胃癌進(jìn)行Claudin18.2免疫組化檢測(cè),本研究發(fā)現(xiàn)Claudin18.2在胃腺癌中表達(dá)于腫瘤細(xì)胞基底及側(cè)膜,胃腺癌中的陽(yáng)性率為54.5%。FAST研究中共計(jì)篩選了689例歐美胃癌患者,其Claudin18.2陽(yáng)性率為49%。Rohde等[12]收集了134例日本胃癌患者,運(yùn)用與FAST研究相同的抗體及評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn),其Claudin18.2的陽(yáng)性率為52%,據(jù)此發(fā)現(xiàn)本研究與日本及歐美胃腺癌Claudin18.2的陽(yáng)性率相似。Dottermusch等共收集了德國(guó)278例胃癌患者,運(yùn)用免疫組化研究結(jié)果顯示Claudin18.2的陽(yáng)性率為42.2%。在陽(yáng)性患者中,1+、2+及3+的患者的陽(yáng)性率分別為患者的14.8%、13.3%及14.1%,≥40%的腫瘤細(xì)胞中≥2+膜染色強(qiáng)度的百分率僅僅為10%,該結(jié)果明顯比我們的研究及既往研究均低。進(jìn)一步分析原因,該研究使用的抗體是Abcam的CLDN18.2抗體(clone EPR19202,Cambridge,UK),與我們及FAST研究中使用的均不同,這可能是其中的原因之一,這些結(jié)果也提示,在Claudin18.2的檢測(cè)中使用一致的抗體及評(píng)價(jià)體系比較可靠。本研究中比較了胃腺癌和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移癌組織中Claudin18.2的陽(yáng)性率,結(jié)果顯示兩者陽(yáng)性率相似,這一結(jié)果和Rohde等[12]研究結(jié)果相似。此結(jié)果也初步提示,未來(lái)對(duì)于Claudin18.2的臨床檢測(cè)可以使用原發(fā)灶或轉(zhuǎn)移灶,增加了臨床檢測(cè)的便利性。

本研究中繼續(xù)分析了Claudin18.2的表達(dá)與臨床參數(shù)之間的關(guān)系,研究顯示Claudin18.2在不同年齡組、性別及臨床分期之間均未見(jiàn)明確的統(tǒng)計(jì)學(xué)差異,但是Claudin18.2的表達(dá)與Lauren分型由一定關(guān)系。Claudin18.2在腸型胃癌中表達(dá)近70%,彌漫型胃癌中僅30%,該研究結(jié)果和Dottermusch等[7]的研究結(jié)果相似。Kim等[13]檢測(cè)了彌漫型胃癌中Claudin18.2的表達(dá)水平,其用H-Score 對(duì)結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計(jì),結(jié)果即使H-Score 80分的患者約占25%,與本研究結(jié)果相似。這一結(jié)果提示,腸型胃癌比彌漫型胃癌將更有機(jī)會(huì)從Claudin18.2的治療中獲益。

本研究對(duì)Claudin18.2在胃癌中的表達(dá)水平及臨床參數(shù)之間的關(guān)系做了初步探討,初步提示約50%的中國(guó)胃癌患者未來(lái)有可能從Claudin18.2的治療中獲益。由于樣本量有限,尚需要進(jìn)一步擴(kuò)大樣本量來(lái)驗(yàn)證該結(jié)果。