蒲公英提取物對凡納濱對蝦優(yōu)勢腐敗菌群體感應(yīng)及保鮮效果的影響

劉泰戈，許騰騰，錢怡霖，閆師杰*，劉尊英*

蒲公英提取物對凡納濱對蝦優(yōu)勢腐敗菌群體感應(yīng)及保鮮效果的影響

劉泰戈1，許騰騰2，錢怡霖2，閆師杰1*，劉尊英2*

（1.天津農(nóng)學(xué)院 食品科學(xué)與生物工程學(xué)院，天津 300392； 2.中國海洋大學(xué) 食品科學(xué)與工程學(xué)院，山東 青島 266003）

旨在探究蒲公英提取物（Extracts，TME）對凡納濱對蝦的優(yōu)勢腐敗菌嗜水氣單胞菌（）群體感應(yīng)（Quorum Sensing，QS）系統(tǒng)的抑制作用，并探究TME對凡納濱對蝦低溫貯藏保鮮效果的影響。本研究采用菌株紫色桿菌（，CV026）測定TME群體感應(yīng)抑制活性，并在亞抑菌濃度下測定TME對嗜水氣單胞菌群體感應(yīng)系統(tǒng)的抑制作用；隨后測定凡納濱對蝦儲藏過程中的菌落總數(shù)、揮發(fā)性鹽基氮（Total Volatile Base Nitrogen，TVB-N）、pH值、汁液流失率以及感官評分的變化。TME對嗜水氣單胞菌的最小抑菌濃度（Minimum Inhibitory Concentration，MIC）值為32 mg/mL。在1/4 MIC濃度下，TME顯著抑制了嗜水氣單胞菌群體感應(yīng)信號分子的產(chǎn)生，并顯著抑制嗜水氣單胞菌群集運(yùn)動能力和蛋白酶活性（<0.05），TME處理顯著抑制了凡納濱對蝦儲存過程中感官評分的降低和菌落總數(shù)、TVB-N、pH值、汁液流失率的上升（<0.05）。蒲公英提取物通過調(diào)控腐敗菌的QS系統(tǒng)，降低了腐敗菌的致腐能力，有效延長了凡納濱對蝦的保質(zhì)期。

蒲公英提取物；嗜水氣單胞菌；群體感應(yīng)抑制劑；保鮮技術(shù)

嗜水氣單胞菌（）是一種常見的革蘭氏陰性水產(chǎn)品腐敗菌，其毒力因子表達(dá)和生物膜形成受群體感應(yīng)系統(tǒng)調(diào)控[1]。群體感應(yīng)是一種細(xì)菌細(xì)胞之間依靠自誘導(dǎo)物（Autoinducers, AIs）作為信號分子進(jìn)行交流的系統(tǒng)，自誘導(dǎo)物在環(huán)境中積累達(dá)到一定濃度時會通過結(jié)合受體蛋白激活特定基因表達(dá)，并導(dǎo)致細(xì)菌的多種群體性行為的產(chǎn)生，如毒力因子分泌、生物發(fā)光、生物被膜的產(chǎn)生、細(xì)菌胞外酶的分泌等[2-3]。革蘭氏陰性菌存在由N-?；呓z氨酸內(nèi)酯（Acyl Homoserine Lactones，AHLs）及其衍生物類信號分子介導(dǎo)的QS系統(tǒng)和由自誘導(dǎo)物-2（Autoinducer-2，AI-2）信號分子介導(dǎo)的QS系統(tǒng)[4-5]。

下面討論d(v)≥7的情況。如果v是7-點(diǎn),由(c)得,對于所有的i=1,2,…,7有c(v)=8, f3(v)≤5,d(vi)≥3。由引理2知,v至多關(guān)聯(lián)兩個有3-點(diǎn)的3-面,并且這兩個3-面至多從v處獲得假設(shè)關(guān)聯(lián)v的3-面相鄰一個3-點(diǎn)w,則v的鄰點(diǎn)除了w都是4+-點(diǎn)。首先,我們討論3-面相鄰3-點(diǎn)的情況。假設(shè)f3(v)=5,則假設(shè)f3(v)=4,則假設(shè)f3(v)=3,則假設(shè)f3(v)=2,則c*(v)=假設(shè)f3(v)=1,則假設(shè)f3(v)=0,則其次,討論3-面不相鄰3-點(diǎn)的情況。假設(shè)f3(v)=5,則假設(shè)f3(v)=4,則假設(shè)f3(v)=3,則c*(v)=假設(shè)f3(v)=2,則

傳統(tǒng)的食品防腐劑會誘導(dǎo)細(xì)菌產(chǎn)生耐藥性，而群體感應(yīng)抑制劑（Quorum Sensing Inhibitor, QSI）可以在亞抑菌濃度下通過多種方式干擾細(xì)菌群體感應(yīng)過程來抑制細(xì)菌行為，并有效降低細(xì)菌的耐藥性[6-7]。研究表明，天然植物提取物有群體感應(yīng)抑制活性，可以降低信號分子的產(chǎn)量。例如，紅洋蔥皮、三葉金絲桃和銀杏葉外果皮提取物均可通過抑制細(xì)菌的QS系統(tǒng)有效抑制不同腐敗菌和致病菌的致腐能力、毒性和生物膜產(chǎn)生能力[8-10]。

蒲公英（）是菊科多年生草本植物，營養(yǎng)豐富且有多重生理及抑菌功能，其提取物中的黃酮類、多酚類等物質(zhì)可對大腸桿菌、沙門氏菌和金黃色葡萄球菌等常見的食品腐敗菌和致病菌有不同程度的抑制作用[11]。但是目前缺乏蒲公英提取物對嗜水氣單胞菌QS系統(tǒng)抑制作用及機(jī)理的報道。本研究利用報告菌株紫色桿菌CV026測試蒲公英提取物的QSI活性，進(jìn)而探究其對嗜水氣單胞菌群體感應(yīng)系統(tǒng)的抑制效果和對冷藏凡納濱對蝦保鮮效果的影響，為開發(fā)以蒲公英為原料的新型抑菌劑提供理論依據(jù)。

1 實驗

1.1 材料與儀器

主要材料：蒲公英，購于青島醫(yī)保城藥業(yè)集團(tuán)有限公司；新鮮的凡納濱對蝦，購買于青島南山水產(chǎn)市場；紫色桿菌CV026，接受自美國Texas State University的McLean JC教授；嗜水氣單胞菌，分離自凡納濱對蝦，實驗室保存[12]；C4-HSL標(biāo)準(zhǔn)品，Sigma公司；卡那霉素和5-溴-4-氯-3-吲哚-β-D-半乳糖苷（X-gal），北京索萊寶科技有限公司。

主要儀器：THZ-98AB全溫振蕩培養(yǎng)箱，上海潤度生物科技有限公司；Multiskan FC酶標(biāo)儀、NanoDrop Lite Plus分光光度計，Thermo Fisher Scientific公司；H2-16KR高速冷凍離心機(jī)，湖南賽特湘儀離心機(jī)儀器有限公司。

實驗數(shù)據(jù)采用Origin 2021進(jìn)行統(tǒng)計分析。每個處理有3個平行，數(shù)據(jù)均采用平均值±標(biāo)準(zhǔn)偏差的形式表示，0.05表示差異性顯著。

1.2 蒲公英提取物的制備與MIC測定

1.8.3 pH的測定

1.3 蒲公英提取物群體感應(yīng)抑制活性檢測

參考潘玉榮等[14]的方法進(jìn)行檢測，在含有20.00 μg/mL C4-HSL的LB肉湯中添加TME使?jié)舛确謩e為1.00、2.00、4.00和8.00 mg/mL。接種1%的紫色桿菌CV026，在160 r/min、28 ℃條件下振蕩培養(yǎng)24 h。另設(shè)置一組不含C4-HSL的LB肉湯培養(yǎng)基做空白對照[15]。依次取添加了C4-HSL的培養(yǎng)液500 μL，然后將其放置在4 ℃、1 000 r/min的條件下離心5 min，最后將上清液棄去，將二甲亞砜溶解紫色菌素加入沉淀中，再將其放置在4 ℃、1 000 r/min的離心器內(nèi)離心5 min，最終測定上清液的OD585值。

1.4 嗜水氣單胞菌生長及群集運(yùn)動的測定

在LB肉湯中添加TME使其質(zhì)量濃度分別為2.00、4.00和 8.00 mg/mL，接種嗜水氣單胞菌，以160 r/min的速率、28 ℃的溫度進(jìn)行振蕩，每隔2 h檢查一次，記錄48 h的生長情況。

1.8.2 揮發(fā)性鹽基氮菌落總數(shù)的測定

通過測遷移圈直徑計算TME對嗜水氣單胞菌群集運(yùn)動的抑制率[16]。活化嗜水氣單胞菌備用，在200 mL蒸餾水中分別加入2 g胰蛋白胨、1.0 g氯化鈉、1.0 g瓊脂及1.0 g葡萄糖制成群集培養(yǎng)基。將不同質(zhì)量濃度的TME（0.00、2.00、4.00和8.00 mg/mL）加入到群集培養(yǎng)基中，然后倒板，凝固后在平板中央加2 μL菌液于28 ℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)48 h，并測量遷移直徑。

1.5 嗜水氣單胞菌蛋白酶活性的測定

將滅菌的15%脫脂乳與LB瓊脂培養(yǎng)基冷卻至50 ℃，并按體積比1∶9混合均勻后倒平板并打孔。將1.4節(jié)中的嗜水氣單胞菌菌液于9 000 r/min下離心10 min，吸取100 μL上清液加入牛奶平板中，在28 ℃恒溫培養(yǎng)48 h后測量分解圈直徑并計算抑制率[17]，以未加提取物組作為對照。

1.6 蒲公英提取物對嗜水氣單胞菌N-?；呓z氨酸內(nèi)酯產(chǎn)量的影響

提取并采用報告平板法檢測N-酰基高絲氨酸內(nèi)酯（AHLs）[18-19]。將嗜水氣單胞菌以1%的體積分?jǐn)?shù)種于200 mL LB肉湯中，添加TME使其終質(zhì)量濃度分別為4.00 mg/mL和8.00 mg/mL。在28 ℃、160 r/min下振蕩培養(yǎng)18 h后于4 ℃、10 000 r/min離心10 min，用等體積含0.5%甲酸的乙酸乙酯萃取上清液，于40 ℃下旋蒸上層有機(jī)相，并用1.00 mL甲醇溶解得到AHL粗提液，經(jīng)0.22 μm濾膜過濾粗提液除菌，置于?20 ℃儲存，以未添加提取物的液體培養(yǎng)基組作為陰性對照組。

The mRNA level of HMGB1 in the myocardium of the baseline group was positively correlated with BNP and LVEDD(r=0.850,P=0.003;r=0.916,P=0.001,Figure 6),but negatively correlated with LVEF(r=0.880,P=0.001,Figure 6).

準(zhǔn)確稱取不同處理組的樣品10 g，加水至100 mL，混合均勻后進(jìn)行打漿，取過濾后的濾液使用pH計進(jìn)行測定。

1.7 凡納濱對蝦處理

1.8.6 凡納濱對蝦中AHLs的提取及檢測

1.8 保鮮效果測定

1.8.1 菌落總數(shù)的測定

參照GB 4789.2—2022《食品微生物學(xué)檢驗菌落總數(shù)測定》中的方法測定[20]。

（二）加強(qiáng)護(hù)理 治療期間應(yīng)禁食禁水，對其排泄物要嚴(yán)格消毒，注意對病犬保暖?？祻?fù)期應(yīng)停喂牛奶、雞蛋、肉類等高蛋白、高脂肪性飼料，以減輕胃腸負(fù)擔(dān)，提高治愈率。對病犬的用具、犬舍、場地等進(jìn)行嚴(yán)格的消毒以防感染其它癥狀。

揮發(fā)性鹽基氮（Total Volatile Base Nitrogen，TVB-N）參照GB 5009.228—2016《食品中揮性鹽基氮的測定》中微量擴(kuò)散法測定[21]。準(zhǔn)確稱取不同處理組的樣品20 g，加入100.0 mL水，均勻混合后，浸漬30 min，過濾收集濾液。然后參照標(biāo)準(zhǔn)中的方法進(jìn)行TVB-N值的測定。

蒲公英提取物（extracts，TME）制備：蒲公英在50 ℃烘箱中烘烤24 h，磨碎，按照料液比1∶10（質(zhì)量體積比）加入蒸餾水煮沸15 min，上清液冷凍干燥成干粉狀并貯存于?20 ℃。使用時需在復(fù)溶后用0.22 μm濾膜過濾除菌。TME對嗜水氣單胞菌的最小抑菌濃度通過倍比稀釋法確定[13]。

過夜培養(yǎng)的紫色桿菌CV026以2%的體積分?jǐn)?shù)接種于LB瓊脂中（加入卡那霉素使質(zhì)量濃度為20.00 mg/mL），倒平板打孔并加入20 μL上述不同濃度的AHL粗提液。在28 ℃恒溫培養(yǎng)箱靜置培養(yǎng)24 h，并測量紫色暈圈直徑。

1.8.4 感官評分的測定

感官評定參考文獻(xiàn)[22]中的方法。感官評價小組由7名人員組成，評定內(nèi)容主要包括色澤、氣味、組織形態(tài)等方面。評價總分在0～10分，當(dāng)分?jǐn)?shù)低于6分時，視為不可接受。具體評分標(biāo)準(zhǔn)如表1所示。

1.8.5 汁液流失率測定測定

同時，計算所有監(jiān)測點(diǎn)平均累計沉降量，分析平均累計沉降量與時間的變化規(guī)律。如圖3所示，監(jiān)測開始時，建筑物整體有0.6 mm左右的上升，這是因為地鐵施工方式引起的暫時性上升，隨后，建筑物整體處于沉降階段?？梢钥闯觯瑥谋O(jiān)測開始的第5天到第150天左右，建筑物都處于沉降過程，并且沉降量和監(jiān)測時間呈線性相關(guān)關(guān)系。150天以后建筑物沉降曲線趨于平緩，表明建筑物沉降量已幾乎不再變化，建筑物處于穩(wěn)定狀態(tài)。

根據(jù)岑劍偉等[23]的方法加以修改，測定汁液流失率。測定貯藏過程中樣品及殘留在包裝袋內(nèi)的汁液質(zhì)量（1）、取出蝦肉后袋內(nèi)滲出的汁液質(zhì)量（2）。汁液流失率（）的計算公式如下：=（2/1）×100%。

鮮活的凡納濱對蝦加冰猝死，去掉蝦頭、蝦殼，使用無菌牙簽挑出蝦線，流水沖洗2～3次。將蝦仁隨機(jī)等量地分為3組（每組1.0 kg±0.1 kg），分別為空白對照組（未經(jīng)提取物處理）、陽性對照組（經(jīng)8.00 mg/mL卡那霉素浸泡處理15 min）、蒲公英處理組（經(jīng)8.00 mg/mL TME浸泡處理15 min）。然后將處理后的樣品無菌密封保存，并于4 ℃條件下進(jìn)行貯藏，每間隔2 d隨機(jī)取樣進(jìn)行相關(guān)指標(biāo)測定。每個實驗均重復(fù)3次。

參考文獻(xiàn)[18]中的方法對凡納濱對蝦體內(nèi)的AHLs進(jìn)行提取。取不同處理組切碎后的對蝦樣品200 g，加入200 mL含有0.5%甲酸的乙酸乙酯，均質(zhì)8 min后，以8 000 r/min的轉(zhuǎn)速離心5 min；收集乙酸乙酯相，經(jīng)過旋蒸濃縮后使用1 mL DMSO溶解，冷凍儲存?zhèn)溆谩?/p>

表1 感官評分標(biāo)準(zhǔn)

將提取物、根癌農(nóng)桿菌A136裂解物和KH2PO4（20 mmol/L）以1∶1∶2的體積比均勻混合，取200 μL于無菌96孔板中，加入X-gal（500 μg/mL），28～30 ℃培養(yǎng)3 h，測定OD635處吸光度值。以等體積DMSO作為對照。

1.9 數(shù)據(jù)處理

1) Wλ=1，WMAC=1，wp=0，以1∶6階模態(tài)頻率和1∶6階振型相關(guān)系數(shù)為目標(biāo)(圖4-圖6)。

2 研究結(jié)果

2.1 蒲公英提取物最小抑菌濃度的結(jié)果

如圖1所示，蒲公英提取物對的MIC值為32.00 mg/mL，低于該濃度的TME僅抑制的群體感應(yīng)行為而不直接殺滅細(xì)菌。后續(xù)實驗濃度可選擇的亞抑菌濃度為0.00、1.00、2.00、4.00和8.00 mg/mL。

1)在Matlab中對每個網(wǎng)絡(luò)在10個TRs(23.4 s)的滑動時間窗口內(nèi)的時間序列數(shù)據(jù)執(zhí)行SVD，得到每個參與者、網(wǎng)絡(luò)和時間窗口的酉矩陣。

圖1 TME對嗜水氣單胞菌的最小抑菌濃度

2.2 蒲公英提取物的群體感應(yīng)抑制活性

如圖2所示，細(xì)菌密度顯示亞抑菌濃度下TME對紫色桿菌CV026的生長沒有顯著影響，但顯著影響紫色菌素的產(chǎn)生，8 mg/mL的TME對紫色素產(chǎn)量的抑制率達(dá)到49.04%（<0.05）。表明TME可在不影響紫色桿菌生長的情況下調(diào)控其群體感應(yīng)系統(tǒng)，從而抑制紫色菌素的產(chǎn)生。

2.3 蒲公英提取物對嗜水氣單胞菌群集運(yùn)動的影響

如圖3所示，隨TME濃度增加，嗜水氣單胞菌遷移直徑減小，細(xì)菌的群集運(yùn)動受到明顯抑制。當(dāng)TME質(zhì)量濃度為4.00 mg/mL和8.00 mg/mL時，對嗜水氣單胞菌群集運(yùn)動的抑制率分別為32.67%和80.78%（<0.05）（表2），表明蒲公英提取物在亞抑菌濃度下可以顯著抑制嗜水氣單胞菌的群集運(yùn)動能力。

為普通群眾亮嗎？理論上是對的，但現(xiàn)實中真這么做的話，會被一些人認(rèn)為不是傻子就是瘋子。因為，群眾的眼睛既是“雪亮的”又是“不亮的”。在一個單位，大家一起學(xué)習(xí)，一起工作，低頭不見抬頭見，誰工作勤奮，作風(fēng)正派，群眾的眼睛看得很準(zhǔn)?？梢坏搅岁P(guān)鍵事情上，在一些單位比如提拔重用，調(diào)職調(diào)級，評選先進(jìn)等，群眾的眼睛又“不亮”了，只有局長的眼睛是“雪亮的”。局長說誰行誰就行不行也行，群眾大多不知情，等到知情時，已下發(fā)紅頭文件。到這時，不管群眾心中如何想，都必須在政治上思想上組織上行動上與局長保持高度一致，不得妄議。

圖2 TME對紫色桿菌CV026生長和產(chǎn)紫色菌素的影響

圖3 不同質(zhì)量濃度TME對A. hydrophila群集運(yùn)動的影響

2.4 蒲公英提取物對嗜水氣單胞菌蛋白酶活性的影響

微生物分泌的蛋白酶可以分解食物中的蛋白質(zhì)，并加速食品品質(zhì)劣變[24]。如圖4所示，隨TME濃度增加，嗜水氣單胞菌蛋白酶分解透明圈直徑逐漸減小，蛋白酶活性逐漸降低。TME對嗜水氣單胞菌蛋白酶活性抑制率在其質(zhì)量濃度為4.00、8.00 mg/mL時分別達(dá)到10.81%和20.91%（<0.05）（表3），表明蒲公英提取物在亞抑菌濃度下可以顯著抑制嗜水氣單胞菌的蛋白酶活性。

業(yè)主的成員權(quán)是指業(yè)主從專有部分的所有權(quán)中產(chǎn)生的對共有財產(chǎn)以及其他物業(yè)所享有的管理權(quán)、監(jiān)督權(quán)等。基于所有權(quán)的成員權(quán)是區(qū)分所有人在所有人團(tuán)體中的資格，成員憑借這種資格而享有表決權(quán)、選舉權(quán)等。成員權(quán)的實現(xiàn)主要體現(xiàn)為一種財產(chǎn)利益以及圍繞財產(chǎn)權(quán)利形成的共同管理權(quán)。這種共有權(quán)和共同管理權(quán)的行使必然通過全體業(yè)主的共同意志來表達(dá)，與全體業(yè)主外部的公共利益沒有直接關(guān)系，而全體業(yè)主的共同意志必須在民主的基礎(chǔ)上形成，要求業(yè)主平等、自愿地參與小區(qū)物業(yè)共有權(quán)的行使，具體表現(xiàn)為成員權(quán)的內(nèi)容和形式由業(yè)主團(tuán)體自治來決定。這種權(quán)利不同于所有權(quán)，而是成員參與管理，體現(xiàn)基層民主和自治，并不完全由私法來調(diào)整。?

表2 不同質(zhì)量濃度TME對嗜水氣單胞菌群集遷移直徑及抑制率的影響

Tab.2 Effect of different concentrations of TME on the swarming motility and inhibition rate of A. hydrophila

圖4 不同質(zhì)量濃度TME對嗜水氣單胞菌胞外蛋白酶活性的影響

表3 不同質(zhì)量濃度TME對嗜水氣單胞菌胞外蛋白酶的抑制效果

Tab.3 Inhibition effect of different concentrations of TME on proteinase activity of A. hydrophila

2.5 蒲公英提取物對嗜水氣單胞菌AHLs的影響

紫色桿菌CV026本身不產(chǎn)生AHLs型信號分子，但在外源信號分子AHLs存在時產(chǎn)生紫色素。因此，可用深色暈圈直徑表示AHLs的相對產(chǎn)量。如圖5所示，隨TME濃度增加，嗜水氣單胞菌信號分子所展示的紫色暈圈逐漸減小。低濃度TME對嗜水氣單胞菌信號產(chǎn)率無顯著影響，當(dāng)濃度增加至8.00 mg/mL時，對嗜水氣單胞菌信號分子抑制率可達(dá)7.48%（<0.05）。表明蒲公英提取物可以通過抑制嗜水氣單胞菌AHLs的產(chǎn)生干擾其QS系統(tǒng)，進(jìn)而影響其代謝能力與行為特征[25]。

2.6 蒲公英提取物對凡納濱對蝦菌落總數(shù)的影響

菌落總數(shù)是表征食品腐敗變質(zhì)的重要指標(biāo)。如圖6所示，對照組與處理組的菌落總數(shù)均隨著貯藏時間的延長而增加，其中空白對照組增加最快。貯藏前2 d，對照組及不同處理組的細(xì)菌增加緩慢，無明顯差異。在約第6天時空白對照組菌落總數(shù)值增加至7.45 lg(CFU/g)，超過微生物上限7 lg(CFU/g)；蒲公英提取物處理組以及陽性對照組的菌落總數(shù)值分別為6.11、6.04 lg(CFU/g)，顯著低于對照組的（<0.05）。

圖5 TME對嗜水氣單胞菌C4-HSL合成的影響

圖6 TME對冷藏凡納濱對蝦菌落總數(shù)的影響

2.7 蒲公英提取物對凡納濱對蝦貯藏品質(zhì)的影響

揮發(fā)性鹽基氮（TVB-N）是反映水產(chǎn)品新鮮度的重要指標(biāo)，新鮮水產(chǎn)品的TVB-N值可接受水平為300 mg/kg[26-27]。如圖7a所示，空白對照組以及不同處理組的TVB-N值均隨著貯藏時間的延長而逐漸上升；第6天時空白對照組的TVB-N含量為324.8 mg/kg，超過可接受范圍。TME處理組樣品的TVB-N值為245.5 mg/kg，顯著低于空白對照組的（<0.05）。

透光良好的越冬水體、水中無大量浮游動物、水色又較深（透明度低于50cm）而溶氧仍大幅度下降時，就應(yīng)當(dāng)施肥。對一些長時間不能補(bǔ)充水或補(bǔ)水而水源營養(yǎng)鹽含量極少的水體，在封冰后不久就應(yīng)著手施肥。生物增氧施用化肥時，最好使用磷肥，少用或不用氮肥，避免氨氮升高，致魚中毒。

樣品的pH值在貯藏期間表現(xiàn)出先降低后增加的趨勢（圖7b）。這是因為在貯藏初期，對蝦體內(nèi)的糖原發(fā)生分解產(chǎn)生酸從而導(dǎo)致pH值的降低，而隨貯藏時間的延長，蛋白質(zhì)分解并產(chǎn)生堿性含氮物質(zhì)，又使得pH值升高。與空白對照組相比，經(jīng)過蒲公英提取物和陽性對照處理后，樣品的pH值在后期升高緩慢。在貯藏第8天時，蒲公英提取物處理組和陽性對照組的pH值分別為7.19和7.18，顯著低于空白對照組的pH值（7.43）（<0.05）。上述結(jié)果可能與添加群體感應(yīng)抑制劑降低了細(xì)菌的蛋白酶活性從而引起蛋白質(zhì)降解變慢有關(guān)，這與Wang等研究結(jié)果相一致[28]。

水產(chǎn)品貯藏過程中品質(zhì)劣變可導(dǎo)致汁液流失，而流失的汁液為微生物的生長繁殖提供了有利條件[23]，從而進(jìn)一步加速水產(chǎn)品腐敗。凡納濱對蝦汁液流失率均隨著貯藏時間的延長而增高（圖7c），在貯藏第8天，處理組樣品的汁液流失率均低于對照組的。由圖7d結(jié)果可知，在貯藏過程中，TME處理組及陽性對照組的感官評分下降較慢，表明其可以延緩冷藏凡納濱對蝦的品質(zhì)劣變時間。在貯藏期內(nèi)，感官評分的分值從大到小為陽性對照組、蒲公英處理組、空白對照組。在貯藏第8天時，空白對照組的感官評分降至6分以下，樣品發(fā)生嚴(yán)重腐敗并達(dá)到不可接受程度，而蒲公英處理組的樣品在第8天時仍高于6分，延緩了凡納濱對蝦的品質(zhì)劣變時間。

圖7 TME對冷藏凡納濱對蝦貯藏品質(zhì)的影響

2.8 對蝦貯藏過程中AHLs含量變化

嗜水氣單胞菌可以產(chǎn)生C4-HSL，啟動自身QS系統(tǒng)，調(diào)控蛋白酶活性、群集運(yùn)動遷移等，從而增加嗜水氣單胞菌的致腐能力[29]。冷藏凡納濱對蝦貯藏過程中體內(nèi)的AHLs含量變化如圖8所示。在貯藏期間各處理組的AHLs含量顯著低于空白對照組，且蒲公英提取物處理組的AHLs含量顯著低于陽性對照組（<0.05）。在第8天時，蒲公英提取物處理組對AHLs產(chǎn)生的抑制率達(dá)到21.25%，而陽性對照組對AHLs產(chǎn)生的抑制率僅為11.36%。表明，蒲公英提取物延緩凡納濱對蝦的品質(zhì)劣變可能與其阻礙了腐敗菌之間的群體感應(yīng)信號交流有關(guān)。

圖8 冷藏凡納濱對蝦貯藏過程中AHLs相對含量的變化

3 結(jié)語

蒲公英提取物可顯著抑制嗜水氣單胞菌群集運(yùn)動、蛋白酶活性和信號分子AHLs的產(chǎn)生，表現(xiàn)出了良好的群體感應(yīng)抑制效果。

“那你的胳膊肯定會麻木，你的肌肉也會極度緊張，最后，你必須要到醫(yī)院去治療你這條胳膊……”一個同學(xué)的回答引得全班哄堂大笑。

蒲公英提取物可降低貯藏期間凡納濱對蝦的菌落總數(shù)、TVB-N含量和汁液流失率，維持較高的感官評分保持了對蝦的新鮮度。蒲公英提取物可通過抑制腐敗菌的信號分子產(chǎn)生從而調(diào)控腐敗菌的QS系統(tǒng)，進(jìn)而降低腐敗菌的致腐能力，保持凡納濱對蝦的良好品質(zhì)。因此，蒲公英提取物可作為群體感應(yīng)抑制劑作用于腐敗菌群體感應(yīng)系統(tǒng)，可為開發(fā)以腐敗菌群體感應(yīng)為靶點(diǎn)的新型防腐劑奠定理論基礎(chǔ)。

主站單元接收到數(shù)據(jù)后首先進(jìn)行4位CRC校驗,校驗通過則將數(shù)據(jù)發(fā)送到上位機(jī),校驗失敗將舍棄該組數(shù)據(jù)重新查詢。如果重新查詢?nèi)我琅f出錯則使從站地址自增1跳過該從站,同時上報上位機(jī)。當(dāng)某個從站從總線脫離可由主站通過查詢超時判斷,避免整個總線癱瘓,提高了RS-485總線的通信效率,實現(xiàn)了熱拔插,增加了整個信號采集系統(tǒng)的可靠性和穩(wěn)定性。

本文僅探究了蒲公英提取物對凡納濱對蝦嗜水氣單胞菌群體感應(yīng)的調(diào)控作用，而蒲公英提取物對水產(chǎn)品腐敗菌菌群結(jié)構(gòu)的調(diào)控、群體感應(yīng)信號分子對菌群結(jié)構(gòu)的影響，以及嗜水氣單胞菌群體感應(yīng)系統(tǒng)與其他腐敗菌之間的作用關(guān)系與機(jī)制等仍待進(jìn)一步研究。

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Effects ofExtract on Quorum Sensing System of Specific Spoilage Organism and Preservation of

LIU Tai-ge1, XU Teng-teng2, QIAN Yi-lin2, YAN Shi-jie1*, LIU Zun-ying2*

(1. College of Food Science and Bioengineering, Tianjin Agricultural University, Tianjin 300392, China; 2. College of Food Science and Engineering, Ocean University of China, Shandong Qingdao 266003, China)

The work aims to explore the inhibitory effect ofextracts (TME) on the quorum sensing (QS) system ofand the specific spoilage organism of, and explore the preservation effect of TME on the refrigerated. The quorum-sensing inhibitory activity of TME was investigated by using(CV026). The preservation effect of TME onand its inhibitory effect on the quorum sensing system ofwere measured at the subminimal inhibitory concentration. The total number of colonies, volatile base nitrogen (TVB-N), pH value, drip loss rate and sensory score ofduring storage were determined. The minimum inhibitory concentration (MIC) value of TME againstwas 32 mg/mL. At 1/4 MIC, TME significantly inhibited the production of quorum sensing signal molecules, and inhibited the mobility and protease activity of(0.05). TME significantly inhibited the decrease of sensory score and the increase of the total number of colonies, TVB-N, pH value and drip loss of(0.05). TME can reduce the spoilage ability of spoilage bacteria and effectively prolong the shelf life ofby regulating QS system of the bacteria.

extract;; quorum sensing inhibitor; preservation technology

TB484.3；S983

A

1001-3563(2023)23-0103-08

10.19554/j.cnki.1001-3563.2023.23.012

2023-04-25

國家重點(diǎn)研發(fā)計劃（2021YFD2100504）；國家自然科學(xué)基金（31972141）

責(zé)任編輯：曾鈺嬋