2021年上海市同型半胱氨酸項(xiàng)目正確度驗(yàn)證結(jié)果分析

金中淦 居 漪 張素潔

（上海市臨床檢驗(yàn)中心，上海 200126）

同型半胱氨酸（homocysteine，Hcy）每增加5 μmol/L，缺血性心臟病的風(fēng)險(xiǎn)會(huì)增加84%[1]。有研究發(fā)現(xiàn)，Hcy是腦卒中的獨(dú)立危險(xiǎn)因素，高于10.50 μmol/L人群的卒中風(fēng)險(xiǎn)可增加4.2倍[2]；Hcy檢測(cè)結(jié)果準(zhǔn)確與否，關(guān)系著臨床對(duì)患者病情的正確判斷。相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)[3-4]要求用參考測(cè)量程序或參考物質(zhì)驗(yàn)證常規(guī)檢驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性，實(shí)驗(yàn)室應(yīng)制定適宜的正確度驗(yàn)證計(jì)劃，采用有證參考物質(zhì)、正確度控制品等進(jìn)行正確度驗(yàn)證，或與參考方法進(jìn)行結(jié)果比對(duì)，從而保證檢驗(yàn)結(jié)果的計(jì)量學(xué)溯源性。通過(guò)參考測(cè)量程序賦值的正確度質(zhì)控品，可將臨床實(shí)驗(yàn)室的結(jié)果溯源到國(guó)際單位，實(shí)現(xiàn)臨床實(shí)驗(yàn)室結(jié)果可比[5-6]。2021年，上海市臨床檢驗(yàn)中心第1次開展Hcy正確度驗(yàn)證計(jì)劃。本研究通過(guò)分析此次正確度驗(yàn)證計(jì)劃數(shù)據(jù)，了解上海市臨床實(shí)驗(yàn)室Hcy 檢驗(yàn)質(zhì)量。

1 材料和方法

1.1 樣本來(lái)源

收集上海中醫(yī)藥大學(xué)附屬龍華醫(yī)院無(wú)溶血和脂血臨床檢驗(yàn)剩余新鮮血清樣本，離心、過(guò)濾后制備成高、低2個(gè)濃度水平正確度調(diào)查品，分別編號(hào)為HCY2021-A、HCY2021-B，每支0.45 mL。根據(jù)《能力驗(yàn)證樣品均勻性和穩(wěn)定性評(píng)價(jià)指南》[7]評(píng)估調(diào)查品的均一性和穩(wěn)定性。本次Hcy正確度驗(yàn)證計(jì)劃參加實(shí)驗(yàn)室共87家，包括醫(yī)療機(jī)構(gòu)臨床實(shí)驗(yàn)室和部分企業(yè)醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室。

1.2 標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)

1）參考方法賦值時(shí)采用的有證參考物質(zhì)為美國(guó)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)技術(shù)研究院NIST SRM 1950和中國(guó)計(jì)量科學(xué)研究院GBW 09863，均于-70 ℃保存，室溫平衡后使用。2）Hcy純品物質(zhì)購(gòu)自上海甄準(zhǔn)生物公司，純度為99.8%，不確定度為±2%，為參考測(cè)量程序賦值過(guò)程中使用的校準(zhǔn)品；D4-Hcy標(biāo)記物購(gòu)自加拿大C/D/N ISOTopes公司，同位素豐度為98.6%。

1.3 儀器和試劑

API 5000三重四極桿質(zhì)譜儀（美國(guó)AB sciex公司），Agilent 1290超高效液相色譜儀（美國(guó)Agilent公司），XP205天平（德國(guó)梅特勒-托利多公司），Thermo Reacti-Therm氮吹儀（美國(guó)賽默飛世爾科技公司）。乙腈（LC/MS級(jí)）、三氟乙酸等購(gòu)自美國(guó)Fisher公司。

1.4 方法

1.4.1 正確度調(diào)查品的發(fā)放和數(shù)據(jù)回報(bào)

采用冷鏈（干冰）將正確度調(diào)查品送至87家參評(píng)實(shí)驗(yàn)室，實(shí)驗(yàn)室收到調(diào)查品（每個(gè)濃度水平各3支）后立即存放在-20 ℃冰箱中，按照各實(shí)驗(yàn)室的標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程測(cè)定，每個(gè)濃度調(diào)查品重復(fù)測(cè)定3次，連測(cè)3 d，共需回報(bào)18個(gè)數(shù)據(jù)。通過(guò)上海市臨床檢驗(yàn)中心室間質(zhì)量評(píng)價(jià)管理平臺(tái)回報(bào)檢測(cè)方法（原理）、試劑、儀器、結(jié)果等信息。

1.4.2 參考測(cè)量程序賦值

用上海市臨床檢驗(yàn)中心參考實(shí)驗(yàn)自建的同位素稀釋液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜參考測(cè)量程序[8]進(jìn)行賦值。校準(zhǔn)物、有證參考物質(zhì)、樣本均進(jìn)行3個(gè)批次重復(fù)前處理，每批次重復(fù)測(cè)定9次，以均值作為最終有效數(shù)據(jù)。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法和評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)

通過(guò)上海市臨床檢驗(yàn)中心室間質(zhì)量評(píng)價(jià)管理平臺(tái)進(jìn)行數(shù)據(jù)的統(tǒng)計(jì)處理，以樣本均值為統(tǒng)計(jì)值，分析各參評(píng)實(shí)驗(yàn)室測(cè)定結(jié)果與靶值的偏移、實(shí)驗(yàn)室內(nèi)變異系數(shù)（coefficient of variation，CV）和按不同試劑分組后的偏移、實(shí)驗(yàn)室內(nèi)CV。以1/2允許總誤差（allowable total error，TEa）（≤10%）評(píng)價(jià)回報(bào)結(jié)果的合格率。

2 結(jié)果

2.1 調(diào)查品均勻性和穩(wěn)定性

分裝完畢后，分別隨機(jī)挑選2個(gè)濃度水平調(diào)查品中的10支進(jìn)行均勻性檢測(cè)，以s≤0.3σ為評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)，HCY2021-A、HCY2021-B的不均勻s分別為0.12、0.16 μmol/L；正確度驗(yàn)證調(diào)查品運(yùn)輸過(guò)程均有溫度監(jiān)控，評(píng)估HCY2021-A、HCY2021-B 2個(gè)濃度水平調(diào)查品-20 ℃存放1個(gè)月的穩(wěn)定性檢驗(yàn)結(jié)果分別為0.16、0.11 μmol/L，均低于相應(yīng)0.3σ對(duì)應(yīng)的0.37和0.62 μmol/L，滿足相關(guān)指南[7]對(duì)能力驗(yàn)證樣品均勻性和穩(wěn)定性的要求。

2.2 參考測(cè)量程序賦值結(jié)果

HCY2021-A和HCY2021-B參考測(cè)量程序賦值結(jié)果分別為（10.82±0.31）和（19.16±0.48）μmol/L。每個(gè)分析批同時(shí)測(cè)定了NIST SRM 1950（8.50±0.20）μmol/L，GBW 09863（17.9±0.7）μmol/L，測(cè)定結(jié)果均在靶值±不確定度范圍內(nèi)。

2.3 參評(píng)實(shí)驗(yàn)室回報(bào)結(jié)果分析

2.3.1 不同實(shí)驗(yàn)室數(shù)據(jù)與靶值的相對(duì)偏移和實(shí)驗(yàn)室內(nèi)CV

2021HCY-A和2021HCY-B測(cè)定結(jié)果與靶值的偏移分別為-20.21%～31.39%和-29.66%～23.93%。2021HCY-A測(cè)定結(jié)果實(shí)驗(yàn)室內(nèi)CV為0.28%～9.44%，有14.9%（13/87）的實(shí)驗(yàn)室CV＞1/3 TEa，有34.5%（30/87）的實(shí)驗(yàn)室CV＞1/4 TEa；2021HCY-B測(cè)定結(jié)果實(shí)驗(yàn)室內(nèi)CV為0.25%～10.69%，有6.9%（6/87）的實(shí)驗(yàn)室CV＞1/3 TEa，16.1%（14/87）的實(shí)驗(yàn)室CV＞1/4 TEa。見圖1、圖2。

圖1 單個(gè)實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)結(jié)果與靶值的偏移

圖2 單個(gè)實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)結(jié)果的實(shí)驗(yàn)室內(nèi)CV

2.3.2 不同試劑組的偏移和組內(nèi)不精密度

按試劑進(jìn)行分組，2021HCY-A、2021HCY-B測(cè)定結(jié)果與靶值的偏移分別為-25.33%～20.27%、-18.41%～23.00%；見圖3。有20.59%（7/34）的試劑2個(gè)濃度調(diào)查品檢測(cè)結(jié)果與靶值的偏移均＞10%。試劑品牌超過(guò)5家的實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)結(jié)果顯示，同一品牌實(shí)驗(yàn)室間CV為1.93%～12.91%，與靶值的偏移為1.01%～11.61%；見表1。

表1 不同試劑品牌檢測(cè)均值與靶值的偏移和CV

圖3 不同試劑組檢測(cè)結(jié)果均值與靶值的偏移

2.3.3 參評(píng)實(shí)驗(yàn)室合格率

參評(píng)實(shí)驗(yàn)室2個(gè)濃度水平調(diào)查品合格率分別為62.07%、65.52%。見表2。

表2 正確度調(diào)查合格率

3 討論

Hcy水平升高與多種疾病的發(fā)生、發(fā)展相關(guān)，如心腦血管疾病、腎臟疾病、老年癡呆、認(rèn)知障礙、高血壓、糖尿病[9-10]。一項(xiàng)基于2018年我國(guó)腦卒中高危人群篩查項(xiàng)目的研究發(fā)現(xiàn)，我國(guó)≥40歲的居民中，近1.8億人有高Hcy血癥，高血壓伴高Hcy血癥者發(fā)生腦卒中的風(fēng)險(xiǎn)增加75.2%[10-11]。臨床研究的結(jié)論是基于實(shí)驗(yàn)室的檢測(cè)結(jié)果，而臨床實(shí)驗(yàn)室在采用不同測(cè)量原理、測(cè)量方法的商品化試劑盒測(cè)量相同檢驗(yàn)指標(biāo)時(shí)，不可避免地會(huì)帶來(lái)檢驗(yàn)結(jié)果可比性問(wèn)題。目前，Hcy檢測(cè)方法有乳膠增強(qiáng)散射比濁法、酶聯(lián)免疫法、熒光偏振免疫法、化學(xué)發(fā)光免疫分析法、色譜質(zhì)譜法、循環(huán)酶法，臨床使用最廣泛的是循環(huán)酶法。因此，Hcy 的檢測(cè)質(zhì)量值得關(guān)注。

相關(guān)實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量管理文件和我國(guó)政府部門發(fā)布的檢驗(yàn)結(jié)果互認(rèn)的相關(guān)文件均要求臨床實(shí)驗(yàn)室建立適當(dāng)方法解決臨床檢驗(yàn)結(jié)果的溯源性問(wèn)題，其方法之一就是參加正確度驗(yàn)證計(jì)劃。正確度驗(yàn)證計(jì)劃相對(duì)常規(guī)室間質(zhì)量評(píng)價(jià)而言是比較理想的一種質(zhì)量評(píng)價(jià)方法，室間質(zhì)量評(píng)價(jià)質(zhì)控品制備時(shí)會(huì)加入一定的穩(wěn)定劑，可能會(huì)存在一定的基質(zhì)效應(yīng)；正確度驗(yàn)證計(jì)劃使用的調(diào)查品非常接近臨床樣本，分析靶值由參考測(cè)量程序測(cè)定，不易受基質(zhì)效應(yīng)、方法特異性等因素影響，且實(shí)驗(yàn)室多次重復(fù)測(cè)定，可不考慮隨機(jī)誤差的影響。本實(shí)驗(yàn)室建立的Hcy參考測(cè)量程序，近幾年參加國(guó)家參考實(shí)驗(yàn)室網(wǎng)絡(luò)比對(duì)，均取得較好的成績(jī)，為開展正確度驗(yàn)證計(jì)劃工作奠定了良好基礎(chǔ)。

本研究通過(guò)分析上海市臨床檢驗(yàn)中心第1次Hcy正確度驗(yàn)證計(jì)劃參評(píng)實(shí)驗(yàn)室回報(bào)數(shù)據(jù)，發(fā)現(xiàn)2021HCY-A、2021HCY-B測(cè)定結(jié)果與靶值的偏移分別為-20.21%～31.39%、-29.66%～23.93%，總體情況均不理想。2011-2016年全國(guó)Hcy室內(nèi)質(zhì)量控制的調(diào)查結(jié)果顯示，如以1/3 TEa為標(biāo)準(zhǔn)，實(shí)驗(yàn)室的通過(guò)率低于80%；以1/4 TEa為標(biāo)準(zhǔn)，實(shí)驗(yàn)室通過(guò)率僅為52.9%～58.7%，表明Hcy項(xiàng)目正確度并不令人滿意[9]。本研究結(jié)果表明，就精密度而言，2021HCY-A測(cè)定結(jié)果實(shí)驗(yàn)室內(nèi)CV為0.28%～9.44%，有14.9%的實(shí)驗(yàn)室CV＞1/3 TEa，有34.5%的實(shí)驗(yàn)室CV＞1/4 TEa；2021HCY-B測(cè)定結(jié)果實(shí)驗(yàn)室內(nèi)CV為0.25%～10.69%，有6.9%的實(shí)驗(yàn)室CV＞1/3 TEa，16.1%的實(shí)驗(yàn)室CV＞1/4 TEa，精密度優(yōu)于全國(guó)水平[12]。

本研究發(fā)現(xiàn)，8 7 家實(shí)驗(yàn)室使用了3 4 種試劑，不同試劑品牌的檢測(cè)結(jié)果差異較大，2021HCY-A、2021HCY-B測(cè)定結(jié)果與靶值的偏移分別為-25.33%～20.27%、-18.41%～23.00%，有20.59%的試劑2個(gè)濃度水平調(diào)查品檢測(cè)結(jié)果與靶值的偏移均＞10%，正確度值得關(guān)注。本研究分析了使用同一品牌試劑超過(guò)5家的實(shí)驗(yàn)室數(shù)據(jù)，發(fā)現(xiàn)用品牌3的實(shí)驗(yàn)室均值與靶值的偏移＜10%，但是實(shí)驗(yàn)室間CV均＞10%，表明某些品牌試劑組組內(nèi)CV較大，后續(xù)在檢測(cè)結(jié)果一致性方面需要加強(qiáng)，只有提高了檢驗(yàn)結(jié)果的一致性，正確度才有意義。值得注意的是，試劑品牌1實(shí)驗(yàn)室均值與靶值的偏移、實(shí)驗(yàn)室間CV＜5%，結(jié)果的正確度和試劑性能穩(wěn)定性均表現(xiàn)較好。

本研究以參考方法定值結(jié)果為靶值，以1/2 TEa（≤10%）為評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)，2個(gè)濃度水平調(diào)查品臨床實(shí)驗(yàn)室的合格率分別為62.07%、65.52%，提示上海市Hcy項(xiàng)目正確度水平還需改進(jìn)。實(shí)驗(yàn)室加強(qiáng)全面質(zhì)量管理是提高檢驗(yàn)結(jié)果準(zhǔn)確性的必要條件。本次調(diào)查中，部分實(shí)驗(yàn)室測(cè)量結(jié)果的精密度較差，這可能會(huì)導(dǎo)致部分測(cè)量結(jié)果不能真實(shí)體現(xiàn)實(shí)驗(yàn)室測(cè)量結(jié)果的正確度。保證正確度的前提是實(shí)驗(yàn)室方法要有較好的精密度，解決了精密度問(wèn)題后，實(shí)驗(yàn)室應(yīng)逐一排查，發(fā)現(xiàn)問(wèn)題并加以改進(jìn)，如校準(zhǔn)品是否具有溯源性、校準(zhǔn)品的定值是否可靠、檢驗(yàn)方法的特異性，試劑的有效期、人員操作、儀器設(shè)備問(wèn)題。另外，實(shí)驗(yàn)室應(yīng)盡可能選用經(jīng)驗(yàn)證、有溯源性的配套校準(zhǔn)品，確保其使用的校準(zhǔn)品可追溯到最高水平，以保證檢驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確、可靠。本研究使用無(wú)基質(zhì)效應(yīng)的血清樣本，可以更準(zhǔn)確地反映不同系統(tǒng)間檢測(cè)結(jié)果的差異，為臨床實(shí)驗(yàn)室提供參考[13]。為了提高Hcy檢驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性和可比性，仍需要試劑廠商、臨床實(shí)驗(yàn)室和質(zhì)量監(jiān)督管理機(jī)構(gòu)的共同努力。

綜上所述，通過(guò)本次正確度驗(yàn)證計(jì)劃參評(píng)實(shí)驗(yàn)室回報(bào)數(shù)據(jù)可以看出，上海市臨床實(shí)驗(yàn)室Hcy項(xiàng)目檢驗(yàn)正確度還有待改進(jìn)。