泛素偶聯(lián)酶E2C及非轉(zhuǎn)移細(xì)胞基因2與乳腺癌臨床病理特征關(guān)系及其在預(yù)后評(píng)估中的臨床價(jià)值

沈蘇琴 丁玲玲 汪曉曼

乳腺癌是一種高發(fā)于乳腺腺上皮組織的惡性腫瘤[1-2]。目前,乳腺癌根治術(shù)、化療、放療是主要的治療手段,但術(shù)后的局部復(fù)發(fā)、遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移與耐藥是導(dǎo)致病人死亡的主要原因,預(yù)后不理想[3-4]?；诖?探索發(fā)現(xiàn)有效的預(yù)后評(píng)估手段,指導(dǎo)臨床醫(yī)生對(duì)病人進(jìn)行早期個(gè)體化干預(yù)具有重要的臨床意義。人類泛素偶聯(lián)酶E2C(UBE2C)是細(xì)胞周期蛋白和有絲分裂因子在泛素化修飾中必不可少的蛋白質(zhì),與腫瘤的分化程度、侵襲和遷移、增殖等惡性生物學(xué)行為密切相關(guān)[5]。非轉(zhuǎn)移細(xì)胞基因2(NME2)是一種DNA結(jié)合蛋白,通過其DNA結(jié)合活性調(diào)節(jié)癌癥轉(zhuǎn)移相關(guān)基因的表達(dá),從而參與癌癥細(xì)胞的侵襲和遷移過程[6]。本研究通過檢測(cè)乳腺癌病人組織中UBE2C、NME2水平,分析UBE2C、NME2表達(dá)與乳腺癌病人臨床病理特征及預(yù)后的關(guān)系,旨在明確其在乳腺癌預(yù)后評(píng)估中的臨床價(jià)值。

對(duì)象與方法

一、對(duì)象

2018年1月～2019年12月在我院收治乳腺癌手術(shù)病人127例,同期體檢的51例健康女性為對(duì)照組。納入標(biāo)準(zhǔn):(1)術(shù)前未接受放、化療和免疫治療;(2) 經(jīng)手術(shù)病理切片確診為乳腺癌;(3) 均行根治性乳腺切除及淋巴結(jié)清掃術(shù);(4) 術(shù)后嚴(yán)格按照乳腺癌診療規(guī)范進(jìn)行相應(yīng)治療。排除標(biāo)準(zhǔn):伴有其他惡性腫瘤及免疫系統(tǒng)疾病; 接受新輔助放療、化療; 臨床資料、隨訪資料不完整。根據(jù)納入、排除標(biāo)準(zhǔn),共納入127例乳腺癌病人,按照6∶4比例將病人分為建模隊(duì)列(77例)和驗(yàn)證隊(duì)列(50例)。乳腺癌組年齡30～73歲,平均年齡(45.78±10.46)歲;對(duì)照組年齡29～72歲,平均年齡(44.32±10.12)歲。兩組研究對(duì)象基線資料比較,差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。本研究經(jīng)醫(yī)院倫理委員會(huì)審核批準(zhǔn),且均獲得病人知情同意。

二、方法

1.乳腺癌組織中UBE2C、NME2蛋白表達(dá):采用免疫組化SP法。乳腺腫瘤組織出現(xiàn)棕黃色或棕褐色細(xì)顆粒樣物質(zhì)判定為陽(yáng)性表達(dá)。染色強(qiáng)度評(píng)分:0分(無著色);1分(呈淡黃染色);2分(呈棕黃染色);3分(呈棕褐染色)。陽(yáng)性細(xì)胞占比評(píng)分:0分(<5%),1分(5%～10%),2分(10%～50%),3分(51%～80%),4分(>80%)。細(xì)胞染色強(qiáng)度與陽(yáng)性細(xì)胞占比乘積>6分為陽(yáng)性表達(dá),0～5分為陰性表達(dá)。

2.生物信息學(xué)分析:通過在線網(wǎng)站(http://gepia.cancer-pku.cn/)分析乳腺癌組織和正常乳腺組織中UBE2C、NME2表達(dá)。利用在線Kaplan-Meier Plotter(http://www.kmplot.com)分析UBE2C、NME2表達(dá)與乳腺癌病人生存情況。

3.隨訪:對(duì)乳腺癌病人進(jìn)行術(shù)后隨訪,以第1次手術(shù)日期為隨訪開始時(shí)間,每3個(gè)月以電話形式或門診復(fù)查形式進(jìn)行,以2021年12月為隨訪截止日期,隨訪結(jié)局變量為預(yù)后不良包括乳腺癌復(fù)發(fā)、轉(zhuǎn)移、死亡,其余為預(yù)后良好。

三、統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

采用SPSS 23.0軟件對(duì)所得數(shù)據(jù)進(jìn)行分析,計(jì)數(shù)資料以例(%)表示,采用χ2檢驗(yàn)。多因素Cox回歸模型分析影響乳腺癌不良預(yù)后的危險(xiǎn)因素。采用受試者工作特征(ROC)曲線對(duì)乳腺癌預(yù)后的診斷效能進(jìn)行評(píng)估。P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

結(jié)果

1.在線GEPIA數(shù)據(jù)庫(kù)分析UBE2C、NME2的表達(dá)見圖1。 結(jié)果顯示,乳腺癌組織中UBE2C和NME2表達(dá)水平高于對(duì)照組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。

2.臨床乳腺癌組織中UBE2C、NME2表達(dá)見表1。結(jié)果表明,乳腺癌組織臨床病理特征中,UBE2C、NME2的陽(yáng)性表達(dá)率在不同淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、臨床分期以及病理分級(jí)的病人比較,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=7.826,4.116,5.460,P=0.005,0.042,0.019;χ2=4.400,6.211,11.63,P=0.036,0.013,0.001)。

A:UBE2C蛋白的表達(dá),與N組比較,aP<0.05;B:NME2蛋白的表達(dá),與N組比較,bP<0.05 (BRCA:乳腺浸潤(rùn)癌;T:乳腺癌組織,N:正常對(duì)照組織)

表1 乳腺癌組織中UBE2C、NME2表達(dá)與臨床病理特征的關(guān)系(例,%)

3.UBE2C、NME2表達(dá)與乳腺癌病人生存曲線關(guān)系見圖2。在線分析結(jié)果表明,隨著UBE2C和NME2表達(dá)水平的增加,病人的生存率均顯著降低,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P分別為0.029,0.013)。

4.多因素Cox回歸模型分析影響乳腺癌不良預(yù)后的危險(xiǎn)因素:變量賦值情況見表2。結(jié)果顯示,淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、臨床分期Ⅲ～Ⅳ期、病理分級(jí)G3級(jí)及UBE2C陽(yáng)性表達(dá)、NME2陽(yáng)性表達(dá)是乳腺癌病人不良預(yù)后的危險(xiǎn)因素(P=0.009, 0.034, 0.023, 0.038, 0.020, 0.034)。構(gòu)建乳腺癌不良預(yù)后風(fēng)險(xiǎn)預(yù)測(cè)模型:Z=1.259+0.701X1+1.007X2+0.790X3+1.120X4+1.123X5,其中,X1為淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移,X2為臨床分期,X3為病理分級(jí),X4為UBE2C陽(yáng)性,X5為NME2陽(yáng)性。見表3。

表2 變量賦值情況

A:UBE2C表達(dá)與乳腺癌病人生存曲線分析,P=0.029;B:NME2表達(dá)與乳腺癌病人生存曲線分析,P=0.013

表3 多因素Cox回歸模型分析影響乳腺癌預(yù)后的危險(xiǎn)因素

5.乳腺癌不良預(yù)后風(fēng)險(xiǎn)預(yù)測(cè)模型效果見圖3～4。使用ROC曲線對(duì)模型的預(yù)測(cè)能力進(jìn)行評(píng)估,模型組曲線下面積(AUC)為0.835[95%CI(0.758～0.894),P<0.000 1],以Youden指數(shù)最大值(0.681 4)為最佳臨界點(diǎn),該預(yù)測(cè)模型靈敏度為0.740 3,特異度為0.941 2;驗(yàn)證組AUC為0.826[95%CI(0.693～0.919),P<0.0001],以Youden指數(shù)最大值(0.720 0)為最佳臨界點(diǎn),靈敏度為0.880 0,特異度為0.840 0,提示模型對(duì)乳腺癌不良預(yù)后預(yù)測(cè)效果較好。

圖4 乳腺癌不良預(yù)后驗(yàn)證組ROC曲線(AUC:曲線下面積,P<0.001)

討論

隨著分子腫瘤病理研究的快速發(fā)展,多種生物學(xué)標(biāo)志物被證實(shí)參與惡性腫瘤的發(fā)生、發(fā)展,并與腫瘤細(xì)胞的侵襲和遷移、增殖、分化等過程密切相關(guān)。因此,監(jiān)測(cè)相關(guān)生物標(biāo)志物對(duì)于腫瘤病人預(yù)后評(píng)估具有重要的臨床指導(dǎo)價(jià)值[7-8]。乳腺癌是一種異質(zhì)性腫瘤,不同表型的乳腺癌病人,其臨床表現(xiàn)、治療結(jié)局和預(yù)后存在顯著性差異[9-11]。最新研究報(bào)道表明,UBE2C與非小細(xì)胞肺癌順鉑耐藥性有關(guān),沉默UBE2C基因可提高非小細(xì)胞肺癌化療藥物的敏感性[12]。在直腸癌中,miR-381通過靶向調(diào)控UBE2C促進(jìn)直腸癌的進(jìn)展[13]。有研究證實(shí),NME2高表達(dá)于多種腫瘤組織,與惡性腫瘤細(xì)胞分化、侵襲和遷移具有高度相關(guān)性[14]。研究顯示,慢病毒沉默NME2基因,肝癌細(xì)胞致瘤能力顯著降低,其參與肝癌的發(fā)生發(fā)展[15]。因此,可將UBE2C和NME2作為評(píng)估腫瘤不良預(yù)后的重要指標(biāo)。

本研究中,通過在線GEPIA數(shù)據(jù)庫(kù)對(duì)UBE2C和NME2蛋白表達(dá)進(jìn)行分析,數(shù)據(jù)提示乳腺癌組織中UBE2C和NME2表達(dá)水平均高于正常對(duì)照組織。Kaplan-Meier生存曲線分析顯示,隨著UBE2C和NME2表達(dá)水平的增加,病人的生存率降低,且危險(xiǎn)率(HR)分別為1.4、1.5,提示UBE2C和NME2升高是乳腺癌病人不良預(yù)后的重要風(fēng)險(xiǎn)因素。進(jìn)一步分析顯示,UBE2C和NME2陽(yáng)性表達(dá)與乳腺癌病人的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況、臨床分期、病理分級(jí)密切相關(guān),這與之前其他學(xué)者研究報(bào)道相一致?；诖?我們推測(cè)UBE2C,NME2是潛在乳腺癌病人不良預(yù)后評(píng)價(jià)指標(biāo)。

最后,本研究結(jié)果表明,淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、臨床分期Ⅲ～Ⅳ期及病理分級(jí)G3級(jí),UBE2C陽(yáng)性表達(dá)、NME2陽(yáng)性表達(dá)是乳腺癌病人不良預(yù)后的危險(xiǎn)因素,由此構(gòu)成乳腺癌預(yù)后評(píng)估模型,模型組AUC為0.835,靈敏度為0.740 3,特異度為0.941 2,而驗(yàn)證組AUC為0.826,靈敏度為0.880 0,特異度為0.840 0。提示構(gòu)建乳腺癌預(yù)后模型具有良好的診斷效能,進(jìn)而對(duì)乳腺癌的治療方案進(jìn)行個(gè)體化指導(dǎo),提升病人預(yù)后質(zhì)量。本研究為單中心研究,納入病例數(shù)偏少。后續(xù)研究需要聯(lián)合多中心、將評(píng)估模型對(duì)乳腺癌的預(yù)后診斷效能進(jìn)行大規(guī)模驗(yàn)證。

利益沖突聲明:本文不存在任何利益沖突。

作者貢獻(xiàn)聲明:(1)負(fù)責(zé)設(shè)計(jì)論文框架,起草論文;(2)負(fù)責(zé)實(shí)驗(yàn)操作,研究過程的實(shí)施;(3)負(fù)責(zé)數(shù)據(jù)收集,統(tǒng)計(jì)學(xué)分析、繪制圖表;(4)負(fù)責(zé)論文修改;(5)負(fù)責(zé)擬定寫作思路,指導(dǎo)撰寫文章并最后定稿