血清miR-384、LIN28B 在糖尿病視網(wǎng)膜病變中的表達及其診斷價值分析

唐云戶,趙 媛,代 艷

（電子科技大學醫(yī)學院附屬綿陽醫(yī)院/綿陽市中心醫(yī)院眼科，四川 綿陽 621000）

糖尿病視網(wǎng)膜病變（diabetic retinopathy，DR）是2 型糖尿病常見的微血管并發(fā)癥，是老年人視力喪失的主要原因[1-2]。DR 的發(fā)展與糖尿病病程、高血糖密切相關[3]。目前，DR 的治療已取得了進展，但由于醫(yī)療資源有限，部分地區(qū)眼底檢查率較低，導致DR 的治療延誤，患者預后不佳[4]。因此，尋找更多的血液學生物標志物診斷DR 十分重要。miR-384 作為非編碼內源性microRNA（miRNAs）被廣泛研究。研究表明，miRNAs 可通過調控血管內皮生長因子的表達，從而在血管生成過程中發(fā)揮重要作用[5]。也有研究指出，miR-384-3p 在DR 小鼠模型中低表達，可影響模型小鼠視網(wǎng)膜新生血管的形成[6]，提示miR-384 可能參與DR 的發(fā)生發(fā)展。LIN28B 是一種高度保守的RNA 結合蛋白，在調控機體發(fā)育中具有重要作用。研究發(fā)現(xiàn)，乳腺癌組織中LIN28B 的陽性率明顯高于癌旁組織，LIN28B的表達與患者遠處轉移、腫瘤分化程度、淋巴結轉移呈正相關[7]。據(jù)報道，在糖尿病中miR-384和LIN28B 之間具有一定聯(lián)系[8]。然而，關于miR-384 和LIN28B在DR患者血清中的表達水平及作用目前仍未可知。基于此，本研究通過檢測DR 患者、非DR 患者及健康體檢者血清中miR-384 及LIN28B 的表達水平，分析其與DR 患者臨床資料的關系，并繪制受試者工作特征（receiver operating characteristic,ROC）曲線以評價miR-384、LIN28B在DR患者中的臨床診斷價值。

1 資料與方法

1.1 臨床資料

選取2020 年1 月至2021 年11 月于本院確診的100 例2 型糖尿病患者作為觀察組，其中男52 例，女48 例；年齡39～70 歲，平均（56.51±7.92）歲。納入標準：①符合2 型糖尿病診斷標準[9]；②完成DR 篩查；③首次確診并接受治療。排除標準：①精神狀態(tài)異常，無法正常交流；②合并青光眼、白內障等眼部疾病；③處于妊娠期或哺乳期；④臨床信息不完整；⑤合并惡性腫瘤。根據(jù)是否合并視網(wǎng)膜病變將觀察組患者分為非DR組（40例）和DR組（60例）；另選取同期本院的健康體檢者40 例作為對照組，其中男18 例，女22 例；年齡38～68 歲，平均（54.78±6.56）歲。觀察組與對照組年齡和性別比較，差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）。本研究通過本院醫(yī)學倫理委員會的批準（20191108002），患者及其家屬了解本研究并簽署知情同意書。

1.2 研究方法

收集整理患者年齡、性別、吸煙史、飲酒史、BMI、糖尿病病程、血糖等臨床資料。采用qRT-PCR 法檢測DR 組、非DR 組患者及對照組健康體檢者血清miR-384、LIN28B的相對表達水平，并進行比較。

1.3 統(tǒng)計學分析

利用SPSS 25.0 統(tǒng)計軟件進行數(shù)據(jù)分析，計數(shù)資料以率（%）表示，采用χ2檢驗；計量資料以均數(shù)±標準差（±s）表示，采用t或F檢驗。Pearson法分析DR 患者血清中miR-384 與LIN28B 表達的相關性。Logistic回歸分析DR 發(fā)生的影響因素。ROC曲線分析血清miR-384、LIN28B 水平對DR 患者的診斷價值。P＜0.05表示差異有統(tǒng)計學意義。

2 結果

2.1 各組血清miR-384、LIN28B表達水平比較

DR 組患者血清miR-384水平明顯低于非DR 組和對照組（P＜0.05），且非DR 組低于對照組（P＜0.05）；DR 組患者血清LIN28B 水平明顯高于非DR 組和對照組（P＜0.05），且非DR 組高于對照組（P＜0.05），見表1。

表1 各組血清miR-384、LIN28B的表達情況（±s）

表1 各組血清miR-384、LIN28B的表達情況（±s）

*:與對照組比較，P＜0.05；#：與非DR組比較，P＜0.05

組別對照組非DR組DR組F P n 40 40 60 miR-384 0.97±0.21 0.72±0.20*0.62±0.15*#44.390＜0.001 LIN28B 1.03±0.26 1.31±0.32*1.61±0.44*#31.137＜0.001

2.2 DR 患者血清miR-384、LIN28B 表達水平與臨床資料的關系

分別以DR 患者血清miR-384、LIN28B 表達水平的中位數(shù)0.64、1.38 為臨界值，將DR 組患者分為miR-384 高、低表達組和LIN28B 高、低表達組，各30 例。分析miR-384、LIN28B 表達水平與DR 患者臨床資料的關系，結果顯示，miR-384、LIN28B 表達水平與患者年齡、性別、吸煙史、飲酒史、BMI無關（P＞0.05），與糖尿病病程、血糖有關（P＜0.05），見表2。

表2 DR患者血清miR-384、LIN28B表達水平與臨床資料的關系[例（%）]

2.3 DR患者血清miR-384與LIN28B的相關性分析

Pearson法分析結果顯示，DR 患者血清中miR-384與LIN28B 的表達呈負相關（r=-0.296，P＜0.05），見圖1。

圖1 DR患者血清miR-384與LIN28B的相關性分析

2.4 多因素Logistic回歸分析DR發(fā)生的危險因素

將2型糖尿病患者是否發(fā)生DR作為因變量（1=發(fā)生，0=未發(fā)生），以血清miR-384、LIN28B 水平為自變量進行Logistic回歸分析，結果顯示，miR-384、LIN28B是DR發(fā)生的獨立影響因素（P＜0.05），見表3。

表3 Logistic回歸分析影響DR發(fā)生的危險因素

2.5 血清miR-384、LIN28B 水平對DR 患者的診斷效能

ROC曲線分析結果顯示，miR-384、LIN28B 單獨診斷DR 患者的ROC曲線下面積（area under the curve，AUC）及特異度均低于二者聯(lián)合診斷的AUC及特異度，見表4、圖2。

圖2 血清miR-384、LIN28B水平對DR患者的診斷效能

表4 血清miR-384、LIN28B水平對DR患者的診斷效能

3 討論

DR 是由高血糖誘導的代謝應激引起神經(jīng)膠質和血管損傷之間復雜的相互作用而導致的[10]。臨床上DR 可分為非增殖性DR 和增殖性DR，非增殖性DR 代表DR 的早期階段，其中血管通透性增加和毛細血管閉塞是視網(wǎng)膜脈管系統(tǒng)中的2 個主要觀察結果；增殖性DR 是DR 的晚期階段，其特征是新生血管形成[11]。目前，DR 的發(fā)病率不斷增加，對其進行早期診治，可提高患者及家屬的生活質量。因此，尋求潛在的DR血清學生物標志物以盡早診斷DR，對該病的治療尤為重要。

miRNA是一種具有18～25個核苷酸的單鏈非編碼RNA，其可以參與胚胎分化、增殖、血管生成的過程。研究發(fā)現(xiàn)，miRNA 可影響DR 分期及病程，對DR 的病情發(fā)展具有較強的診斷價值[12]。miR-384 作為一種小分子RNA，近年來被廣泛研究。據(jù)報道，miR-384在癌細胞中呈低表達，其在多種腫瘤中發(fā)揮抑制細胞增殖、遷移和促進凋亡的作用[13-14]。也有研究指出，與正常細胞相比，大鼠缺血心肌細胞和缺氧H9c2 細胞中miR-384-5p 的表達水平降低[15]，提示miR-384-5p 可能是機體內一種重要的保護因子。因此，本研究通過檢測DR 患者中miR-384 的表達探討其在DR 中的作用，結果顯示，DR 組患者血清中miR-384 水平明顯低于非DR 組和對照組，且非DR 組低于對照組。表明miR-384 異常與DR 的進展密切相關。通過分析miR-384 表達水平與DR 患者臨床資料的關系發(fā)現(xiàn)，血清miR-384 表達水平與患者年齡、性別、吸煙史、飲酒史、BMI 無關，與糖尿病病程、血糖有關，這提示miR-384可能是DR發(fā)生的臨床診斷指標。

LIN28B是一種高度保守的結構蛋白，可在調節(jié)干細胞活性方面發(fā)揮作用，也是調節(jié)發(fā)育分化的關鍵因子[16-17]。研究發(fā)現(xiàn)，在結腸癌組織中檢測到LIN28B 過表達[18]。也有研究表明，LIN28B 可促進神經(jīng)母細胞瘤遷移，沉默LIN28B 可抑制腫瘤的生長，并明顯延長患者的生存期[19]。LIN28 屬于Blet-7 miRNA 家族的一員，Blet-7 miRNA 通過抑制LIN28B 的表達來減弱糖尿病相關動脈粥樣硬化中的炎癥作用[20]，提示LIN28B 可能參與了糖尿病并發(fā)癥的進程。Fu 等[21]研究發(fā)現(xiàn)，miR-152/LIN28B 軸可以通過調節(jié)VEGF 信號來影響高糖誘導的人視網(wǎng)膜內皮細胞的血管生成，并可影響DR 的進程。然而血清LIN28B 在DR 中的作用目前尚不清楚。本研究結果顯示，DR 組患者血清中LIN28B水平明顯高于非DR 組和對照組，且非DR 組高于對照組；LIN28B 表達水平與糖尿病病程、血糖有關。以上結果均提示LIN28B 可能參與了DR 的病理過程，值得進一步的探究。

本研究采用Pearson法分析DR 患者血清中miR-384 與LIN28B 表達的相關性，結果發(fā)現(xiàn)，DR 患者血清中miR-384與LIN28B 表達呈負相關，且miR-384、LIN28B 均是DR 發(fā)生的獨立影響因素。這表明miR-384與LIN28B的表達密切相關，miR-384、LIN28B可能是DR潛在的生物標志物，從基因水平增加miR-384的表達或干擾LIN28B 的表達，可能是治療DR 的一個新思路。ROC曲線結果顯示，miR-384、LIN28B二者聯(lián)合檢測診斷DR 患者的AUC及特異度均高于單項檢測?？梢姡呗?lián)合能夠彌補單項血清LIN28B 或miR-384檢測的不足，對DR的臨床診斷具有較高的應用價值。

綜上所述，DR 患者血清中miR-384 呈低表達，LIN28B 呈高表達，miR-384、LIN28B 表達水平與DR 患者糖尿病病程、血糖有關；且DR 患者血清中miR-384與LIN28B 表達呈負相關，miR-384、LIN28B 均是DR 發(fā)生的影響因素，二者有望成為DR臨床診斷的指標。