高抗桃流膠病的砧木品種‘山梨桃’組織培養(yǎng)快繁技術(shù)

趙韻 方連明 邢博聞 王赟 孫宇紅 陸錦明 湯桂鈞 王水燕

（1 上海市閔行區(qū)三農(nóng)綜合服務(wù)中心，上海 201109；2 上海市閔行區(qū)農(nóng)業(yè)技術(shù)服務(wù)中心，上海 201199；3 上海閔行區(qū)苗圃有限公司，上海 201109）*為通信作者

桃流膠病又叫疣皮病、瘤皮病、桃樹脂病，是發(fā)生在桃樹以及很多核果類果樹上的主要病害之一。該病主要在桃樹枝干部位發(fā)生，以主干發(fā)病較為嚴(yán)重，會引起樹勢衰弱、果實品質(zhì)下降，且在發(fā)生嚴(yán)重時會造成桃樹整株死亡[1-2]。桃流膠病分為非侵染性流膠和侵染性流膠兩種，前者是一種生理性病害，在我國桃樹種植地區(qū)均有不同程度的發(fā)生，前者發(fā)生時會嚴(yán)重削弱樹勢并降低產(chǎn)量；后者為真菌侵染致病，主要發(fā)生在江蘇、浙江、上海、安徽、江西、湖北等長江中下游地區(qū)。桃流膠病發(fā)生持續(xù)時間較長，在4 月—10 月均可發(fā)生，其中以5 月—9 月發(fā)生較為嚴(yán)重。桃流膠病的發(fā)病機理復(fù)雜，防治難度較大，目前生產(chǎn)上主要通過加強果園管理增強樹勢以及噴施化學(xué)農(nóng)藥來進(jìn)行防治，但這些方法往往難以根治桃流膠病。

桃樹的種苗生產(chǎn)主要采用嫁接技術(shù)，其中嫁接苗的砧木品種對桃流膠病的抗性決定了整株桃樹的抗流膠病特性。鑒于此，在桃樹嫁接種苗生產(chǎn)上，選用高抗桃流膠病的砧木品種，可從源頭上防止桃流膠病的發(fā)生，從而保證桃樹的正常生長。目前，砧木種苗的繁育方法主要有種子播種、扦插、組織培養(yǎng)等，其中種子播種、扦插受外界環(huán)境因素的干擾較多，且繁殖速度慢、植株長勢弱。而應(yīng)用組織培養(yǎng)技術(shù)，既可獲得提純復(fù)壯、脫病毒（脫病菌）的種苗，又可達(dá)到快速繁育種苗的目的。目前，已有一些應(yīng)用“嫩莖段離體培養(yǎng)法”“莖尖離體培養(yǎng)法”等組織培養(yǎng)技術(shù)繁殖砧木種苗的報道[3]。

‘山梨桃’是筆者近年引進(jìn)的具有高抗桃流膠病的桃砧木品種。為盡快將該高抗桃流膠病品種應(yīng)用于嫁接苗生產(chǎn)中，筆者借鑒薔薇科、杜鵑科、杉科等木本植物的組織培養(yǎng)技術(shù)，應(yīng)用“莖尖離體培養(yǎng)法”繁育了高抗桃流膠病的優(yōu)良砧木品種‘山梨桃’種苗，并取得了成功，這為生產(chǎn)高抗桃流膠病的嫁接種苗打下了扎實的基礎(chǔ)?，F(xiàn)筆者擬將相關(guān)研究結(jié)果報道如下，以供參考。

1 外植體的誘導(dǎo)發(fā)生培養(yǎng)

1.1 外植體材料的選擇與清洗

選取‘山梨桃’樹當(dāng)年春季萌發(fā)、葉片已展平轉(zhuǎn)綠、枝條柔軟有彈性的半木質(zhì)化新枝，剪下新枝頂端3～5 cm，剪去已展平的葉片，將枝條用洗潔精沖洗3 遍后，用紗布包裹置于自來水下沖洗3 h。

1.2 外植體材料的消毒

在無菌室超凈臺上對枝條進(jìn)行消毒，先用75%乙醇溶液消毒1 min，再用2%潔爾敏溶液消毒15 min，然后用10%次氯酸鈉溶液消毒15 min（值得注意的是，為提高消毒殺菌效果，需反復(fù)搖晃玻璃瓶，以使殺菌劑滲透進(jìn)枝條內(nèi)部），最后，用無菌水沖洗3 遍后，用無菌濾紙吸干水分備用。

1.3 莖尖剝?nèi)∨c接種

在超凈臺上于80 倍解剖鏡下用手術(shù)刀、解剖針剝?nèi)∏o尖（長度在0.5 mm 左右），將0.5 cm 長的頂端連同莖尖一起切下，接種于發(fā)生培養(yǎng)基上誘導(dǎo)莖尖生長，以育成無菌系新芽。實踐證明，與嫩莖段培養(yǎng)、葉片培養(yǎng)、根尖培養(yǎng)、花托（花蕾）培養(yǎng)等方法相比，莖尖培養(yǎng)法具有發(fā)生快、發(fā)生率高、脫病毒等優(yōu)點，這是因為莖尖屬于頂端分生組織，而頂端分生組織產(chǎn)生的植株幾乎沒有病毒[4]，故莖尖培養(yǎng)是產(chǎn)生脫病毒種苗的捷徑。

1.4 莖尖發(fā)生培養(yǎng)基配方

莖尖發(fā)生培養(yǎng)基配方宜為1/2MS+ZT 2.0 mg/L+IBA 0.2 mg/L+ 瓊脂粉5.5 g/L+ 蔗糖30 g/L，pH 為5.6，誘導(dǎo)成功率可達(dá)96%。每培養(yǎng)瓶灌裝培養(yǎng)基30 mL 左右，然后放置于消毒鍋中消毒（溫度121 ℃、0.11 MPa），待瓶內(nèi)瓊脂溶液冷卻凝固后，每瓶接種1 個莖尖。

1.5 莖尖培養(yǎng)的溫度和光照管理

莖尖培養(yǎng)的室內(nèi)溫度為24 ℃，光照強度為3 000 lx，每天光照時間為12 h（上午7 時—下午7 時）。培養(yǎng)7 d 后，莖尖開始萌動生長；培養(yǎng)15 d 時，莖尖長至長度為0.5 cm 以上；培養(yǎng)30 d 后，莖尖長至長度為1.0 cm 以上，亦有4、5 片新葉長出，且在基部葉腋內(nèi)長出1～3個腋芽（“叢生芽”），少數(shù)長出3 個以上腋芽，預(yù)示著無菌系培育成功。

2 無菌系繼代增殖培養(yǎng)

將發(fā)生成功的無菌系叢生芽切開進(jìn)行繼代增殖培養(yǎng)，每瓶接種3～5 株，增殖培養(yǎng)基配方宜為WP(木本培養(yǎng)基)+BA 2.0 mg/L+NAA 0.2 mg/L+瓊脂粉5.5 g/L+ 蔗糖30 g/L，pH 為5.6，消毒方法同發(fā)生培養(yǎng)。培養(yǎng)室溫度為24 ℃，光照強度為3 000 lx ，每天光照時間為12 h（上午7 時—下午7 時），每30～40 d 增殖1 次，增殖系數(shù)可達(dá)1∶3.0～3.5。

3 生根培養(yǎng)

當(dāng)瓶苗增殖至一定基數(shù)、幼苗長至高2 cm 以上時，將瓶苗切成單株轉(zhuǎn)入生根培養(yǎng)基進(jìn)行誘導(dǎo)生根，以培育成完整的瓶苗。

3.1 生根培養(yǎng)基配方

生根培養(yǎng)基配方宜為1/2MS+IBA 0.5 mg/L+活性炭2 mg/L+瓊脂粉5.5 g/L+蔗糖20 g/L+鐵鈉鹽38.23 mg/L（全量不減半），pH 為5.6，生根率可達(dá)95%，消毒方法同發(fā)生培養(yǎng)。在生根培養(yǎng)過程中，很多木本植物在植株離體后，會在枝條基部切口處逐漸發(fā)生褐化，從而喪失生根功能，這主要是因為枝條離體后產(chǎn)生了很多多酚類化學(xué)物質(zhì)，從而使枝條基部切口逐漸褐化甚至死亡。而活性炭是一種無機礦物質(zhì)，也是一種吸附劑，既對褐化現(xiàn)象有一定的抑制作用[5]，又可促進(jìn)養(yǎng)分吸收、改善通透性[6]。因此，筆者在本試驗培養(yǎng)基配方中添加了活性炭2 mg/L，以抑制幼苗基部褐化，促進(jìn)其生根。

3.2 生根培養(yǎng)的溫度、光照管理

在生根培養(yǎng)階段，掌握適宜的生根培養(yǎng)溫度也是重要一環(huán)，溫度過高，會造成枝條徒長，葉色變淡，使生根推遲或不生根。生根培養(yǎng)階段的培養(yǎng)室適宜溫度為23～24 ℃，光照強度為3 000 lx，每天光照時間為12 h（上午7 時—下午7 時）。

3.3 常溫?zé)捗?/h3>

當(dāng)培養(yǎng)瓶內(nèi)幼苗根長約1 cm 時，將瓶苗移出培養(yǎng)室，打開瓶口，將其置于室內(nèi)光亮處，進(jìn)行常溫?zé)捗?4 h，然后用鑷子輕輕將瓶苗取出，在清水中漂凈根部（根部沾染瓊脂會使瓶苗感染細(xì)菌和真菌），以防瓶苗栽入基質(zhì)后爛根死苗。

4 煉苗馴化

4.1 煉苗時間與保護(hù)設(shè)施

煉苗時間以3月上旬至5月上旬為好，此階段光照充足、氣溫適宜、雨水充沛，是一年中瓶苗煉苗馴化的最佳季節(jié)。煉苗設(shè)施以寬8 m、長30 m 的標(biāo)準(zhǔn)大棚（簡稱8型棚）或連棟大棚為好，大棚內(nèi)外需設(shè)置2層黑色、75%遮光率的遮陽網(wǎng)（即在大棚外離頂部60 cm 處安裝1 層可伸縮遮陽網(wǎng)，在大棚內(nèi)增設(shè)1 層遮陽網(wǎng)或在苗床上架設(shè)小環(huán)棚遮陽網(wǎng)），以減少因日光直射導(dǎo)致棚內(nèi)溫度驟升引發(fā)的弊病，從而確保瓶苗能在移栽后7～10 d 內(nèi)成活。煉苗苗床采用鍍鋅鋼架網(wǎng)狀苗床，苗床一般離地高度為80.0 cm、寬為1.3 m、長為14.0 m，通風(fēng)透氣性良好，操作管理方便。此外，在苗床上方1 m 左右高度處架設(shè)自動噴霧塑料管帶，每隔1.2 m 安裝1 個噴頭，由自動機械系統(tǒng)控制，根據(jù)幼苗不同生長時期的需水情況調(diào)節(jié)噴霧次數(shù)。

4.2 基質(zhì)配比

煉苗基質(zhì)為泥炭+珍珠巖（質(zhì)量配比為3∶1），充分拌勻后鋪設(shè)于苗床上，厚度在8 cm 左右。

4.3 瓶苗移栽

在瓶苗移栽前，先對基質(zhì)稍噴些水，然后用鑷子、小刀或竹木片將幼苗淺栽于基質(zhì)中（移栽株行距為4 cm×4 cm），栽后澆足活棵水。同時，苗床上需搭建小環(huán)棚并用塑料薄膜覆蓋，以防幼苗失水萎蔫。

4.4 移栽后主要管理措施

4.4.1 水分管理

在幼苗移栽后第2天，進(jìn)行葉面噴霧補水，每天噴水3～5次（陰雨天可少噴或不噴），噴水后覆蓋塑料薄膜。大棚內(nèi)空氣相對濕度保持在75%～80%，持續(xù)一周左右。

4.4.2 光照管理

在幼苗移栽后一周內(nèi)，如遇晴天日光較強，需用75%遮光率的遮陽網(wǎng)自上午9 時至下午4 時進(jìn)行遮陽；一周后，若幼苗已成活，且有新根、新葉長出，可適當(dāng)進(jìn)行照光，若遇高溫強光天氣，仍需進(jìn)行遮陽。當(dāng)幼苗長至苗高5 cm 以上、具有4 張葉片以上時（約30 d），需加強光照，以促進(jìn)主莖不斷加粗、幼苗健壯生長。

4.4.3 溫度管理

在幼苗移栽后15 d 內(nèi)，大棚內(nèi)溫度宜控制在20～25 ℃，極端溫度不宜超過30 ℃，若超過30℃，應(yīng)立即采用通風(fēng)、遮陽、噴霧等措施進(jìn)行降溫。在幼苗移栽15 d 后，大棚內(nèi)溫度宜控制在25～28℃，極端溫度不超過30 ℃。

4.4.4 其他管理措施

在幼苗移栽15 d 后、幼苗高達(dá)5 cm 左右、具4張葉片以上時，需及時追肥，以促進(jìn)幼苗健壯生長。一般可用0.5%尿素加0.5%磷酸二氫鉀兌水澆灌，每月澆灌2次。幼苗移栽后幾乎沒有病害發(fā)生，但如果苗床基質(zhì)水分過多則會引發(fā)根莖病，從而造成爛苗，此時需用殺菌劑澆灌防治；蟲害主要為蚜蟲、紅蜘蛛，可噴施蟲螨光1 000倍液或噻蟲嗪1 000～2 000倍液進(jìn)行防治。

5 砧木用幼苗種植移栽

幼苗煉苗馴化4個月以上，苗高一般可達(dá)10 cm以上、具8 張葉片以上，此時可將其移栽至苗圃基地內(nèi)作砧木苗進(jìn)行培育。經(jīng)1～2 個月的苗木培育后，即可直接進(jìn)行嫁接育苗。該砧木苗的親和力極高，不同桃樹接穗品種（如水蜜桃、黃桃等）可通過芽接、劈接等方法進(jìn)行嫁接，且嫁接苗種植至果園后，可避免桃流膠病的侵染，確保桃樹正常生長及開花結(jié)果。