針灸治療對疼痛動物模型中TRPV亞家族蛋白表達(dá)量影響的Meta分析

趙志斌 董 睿 李偉紅 張玥琦 鞠申丹*

1.海軍軍醫(yī)大學(xué)中醫(yī)系針灸推拿學(xué)教研室，上海 200433；2.海軍軍醫(yī)大學(xué)第一附屬醫(yī)院腎內(nèi)科，上海 200433；3.上海市黃浦區(qū)外灘街道社區(qū)衛(wèi)生服務(wù)中心，上海 200001

針灸治療各類疾病的作用機制一直是學(xué)術(shù)界討論的熱點。近年來，有越來越多的動物試驗都將瞬時受體電位(transient receptor potential，TRP)作為研究針灸治療作用機制的新靶點。TRP通道是存在于人體組織細(xì)胞膜上的一組非選擇性陽離子通道，對鈣離子和其他陽離子都具有通透性，但絕大部分還是鈣離子[1]。根據(jù)同源性分類它包括TRPC、TRPV、TRPML、TRPP、TRPA、TRPM及TRPN等7個亞家族。其中又由于瞬時受體電位香草酸亞家族(transient receptor potential vanilloid，TRPV)通道中的TRPV1、TRPV2、TRPV4等在炎性疼痛、內(nèi)臟痛以及痛覺敏化中發(fā)揮著重要作用而被研究者采納并進行廣泛研究。目前認(rèn)為，TRPV亞家族中的成員可以被辣椒素、4α-PDD和花生四烯酸代謝產(chǎn)物、熱以及機械刺激所激活，并參與到機體的抗炎反應(yīng)中去[2]。這也被認(rèn)為是闡釋針灸作用機制的一種途徑。廣義的針灸療法包括針刺(電針、皮膚針、頭針、腕踝針、火針等)、拔罐刮痧(刺絡(luò)放血)、艾灸(溫和灸、雀啄灸、熱敏灸)、敷貼療法(臍療)等多種治療方法，所以有不少動物實驗進行了各種針灸療法對于TRPV亞家族的調(diào)節(jié)來研究針灸的作用機制，其中尤以疼痛模型的研究較多。本文對該種療法治療不同疼痛模型動物試驗中TRPV亞家族蛋白表達(dá)量的影響進行系統(tǒng)評價，旨在拓展針灸療法治療各類疾病機制的證據(jù)，為后期研究提供參考。

1 資料與方法

1.1 檢索策略 兩名研究人員通過計算機檢索PubMed、Embase、Web of Science、CNKI、Wanfang數(shù)據(jù)庫并且進行手工檢索圖書館管目錄，查找電針、灸法、貼敷相關(guān)療法影響TRPV表達(dá)量的相關(guān)動物實驗。中文檢索式為(針刺or電針or艾灸or針灸)and TRPV and動物；英文檢索式為(acupuncture or moxibustion or massage)and TRPV and animal。見框1。

1.2 納入標(biāo)準(zhǔn)與排除標(biāo)準(zhǔn)

1.2.1 研究對象 不同疼痛類型的動物模型鼠(大鼠、小鼠)。

1.2.2 結(jié)局指標(biāo) 不同組織中TRPV家族各成員的表達(dá)量。

框1 pubmed主題詞檢索策略

1.2.3 納入標(biāo)準(zhǔn) ①與針刺、艾灸、針灸相關(guān)以及與TRPV相關(guān)的研究；②設(shè)置干預(yù)組和對照組；③有相關(guān)表達(dá)量數(shù)據(jù)。

1.2.4 排除標(biāo)準(zhǔn) ①不相關(guān)文獻(xiàn)；②相關(guān)的綜述類文獻(xiàn)；③未設(shè)置對照組；④無相關(guān)表達(dá)量數(shù)據(jù)。

1.3 文獻(xiàn)納入篩選 由兩位獨立研究者嚴(yán)格按照納入和排除標(biāo)準(zhǔn)對文獻(xiàn)進行篩選并提取資料，通過文獻(xiàn)管理軟件Endnote7進行文獻(xiàn)導(dǎo)入，通過標(biāo)題的瀏覽初步篩除綜述、明顯不符合納入標(biāo)準(zhǔn)的文獻(xiàn)；隨后閱讀摘要剔除文獻(xiàn)中的隨機或者對照組設(shè)置不符合納入標(biāo)準(zhǔn)的文獻(xiàn)，將剩余文獻(xiàn)下載全文，無法獲取全文的通過郵件與作者聯(lián)系獲取全文，仔細(xì)閱讀，比對納入標(biāo)準(zhǔn)，通過篩選確定最后納入文獻(xiàn)。然后兩名研究者交叉核對，如遇到分歧則交由第三方解決，如遇資料缺如則聯(lián)系文獻(xiàn)作者或通訊作者咨詢。

1.4 資料提取 采用Excel表格設(shè)計文獻(xiàn)資料的提取。提取的數(shù)據(jù)信息中包括：作者、發(fā)表年份、研究對象、干預(yù)措施、檢測方法、指標(biāo)、試驗組和對照組的樣本量、均值、標(biāo)準(zhǔn)差和其它信息等。

1.5 納入研究的偏移風(fēng)險評估 SYRCLE動物實驗偏倚風(fēng)險評估工具是目前唯一專門用于評估動物實驗固有真實性的工具，它避免了在評估偏差風(fēng)險時系統(tǒng)評估動物干預(yù)所產(chǎn)生的差異。評估由兩名研究人員獨立進行，然后進行檢查。如有異議，可與第三方進行討論或協(xié)商。評估的結(jié)果以“是(Y)”“否(N)”以及“不確定(U)”來代表低風(fēng)險偏倚、高風(fēng)險偏倚以及不確定風(fēng)險偏倚。

1.6 統(tǒng)計分析 采用Revman 5.0軟件進行Meta分析。采用表達(dá)倍數(shù)和樣本量計算效應(yīng)量，采用Z檢驗分析研究結(jié)果間的異質(zhì)性，當(dāng)I2<50%時，異質(zhì)性較小，當(dāng)I2>50%時，異質(zhì)性較大，采用隨機效應(yīng)模型進行合并分析，并采用亞組分析解釋異質(zhì)性來源。采用Begg’s漏斗圖檢驗發(fā)表偏倚。Meta分析的檢驗水準(zhǔn)為α=0.05。

2 結(jié)果與分析

2.1文獻(xiàn)檢索結(jié)果 一共檢索到了121篇中文文獻(xiàn)和55篇英文文獻(xiàn)，根據(jù)標(biāo)題和摘要初篩剔除后還有28篇文獻(xiàn)，通過全文瀏覽最后是納入18項[3-20]研究。文獻(xiàn)篩選流程和結(jié)果圖如圖1所示。

圖1 文獻(xiàn)篩選流程及結(jié)果圖

2.2 納入研究的基本特征 本研究共納入18篇文獻(xiàn)；納入研究的動物模型主要以炎性疼痛、神經(jīng)病理性痛癥為主，干預(yù)措施包括針刺(手針和電針)、艾灸(隔藥灸、溫和灸)等針灸相關(guān)治療方法。納入研究的基本特征見表1。

表1 納入研究的基本特征表

2.3 納入研究的偏倚風(fēng)險評估 偏倚評估說明：SYRCLE動物偏見風(fēng)險評估工具由10個項目組成，如果沒有在研究中提到，所有這些項目都被評為不確定偏倚風(fēng)險。其中，一般資料的基線水平根據(jù)動物鼠的性別、年齡、飼養(yǎng)環(huán)境3個方面進行評估，如果有1項信息缺失則評委“不確定”。詳見表2。

表2 文獻(xiàn)偏倚評估表

2.4 Meta分析

2.4.1 TRPV的整體表達(dá)量 干預(yù)組相較于對照組TRPV的表達(dá)量下降(SMD=-2.28，95%CI=-2.95～-1.61，P<0.01；異質(zhì)性χ2=404.04，I2=90%，隨機效應(yīng)模型)。如圖2所示。

2.4.2 TRPV1的表達(dá)量 TRPV1干預(yù)組相較于對照組TRPV1的表達(dá)量下降(17篇文獻(xiàn))(SMD=-1.77，95%CI=-2.53～-1.01，P<0.01；異質(zhì)性χ2=230.63，I2=89%，隨機效應(yīng)模型)。如圖3所示。

2.4.3 TRPV2的表達(dá)量 TRPV2干預(yù)組相較于對照組TRPV2的表達(dá)量下降(2篇文獻(xiàn))(SMD=-13.50，95%CI=-24.72～-2.29，P<0.00001；異質(zhì)性χ2=32.33，I2=94%，隨機效應(yīng)模型)。如圖4所示。

圖4 TRPV2的表達(dá)量圖

2.4.4 TRPV4的表達(dá)量 TRPV4干預(yù)組相較于對照組TRPV4的表達(dá)量下降(6篇文獻(xiàn))。(SMD=-2.68，95%CI=-4.03～-1.33，P<0.01；異質(zhì)性χ2=97.28，I2=89%，隨機效應(yīng)模型)。如圖5所示。

圖5 TRPV4的表達(dá)量圖

2.4.5 亞組分析 所有數(shù)據(jù)合并后顯示異質(zhì)性較大，故須探究異質(zhì)性來源，根據(jù)可能的因素，產(chǎn)生異質(zhì)性的原因包括不同的檢測方法、不同的動物模型、不同的干預(yù)措施，故根據(jù)以上因素進行亞組分析。

2.4.5.1 不同檢測方法 采用western blot檢測法進行檢測，結(jié)果：SMD=-2.72，95%CI=-3.85～-1.59，P<0.01；異質(zhì)性χ2=127.44，I2=88%，隨機效應(yīng)模型，采用PT-PCR檢測法進行檢測，結(jié)果SMD=-1.63，95%CI=-2.47～-0.79，P<0.00001；異質(zhì)性χ2=28.84，I2=76%，隨機效應(yīng)模型，采用免疫組化檢測法，結(jié)果：SMD=-2.46，95%CI=-3.71～-1.21，P<0.01；異質(zhì)性χ2=245.32，I2=93%，隨機效應(yīng)模型。三組亞組分析顯示，無論何種檢測方法都顯示針灸治療能夠降低TRPV的表達(dá)。三組亞組異質(zhì)性檢驗(test for subgroup differences：Chi2=2.66df=2(P=0.26)，I2=24.9%)

2.4.5.2 不同干預(yù)方法 電針治療法結(jié)果：SMD=-1.93，95%CI=-2.54～-1.32，P<0.01；異質(zhì)性χ2=150.09，I2=83%，隨機效應(yīng)模型，間接灸法進行干預(yù)，結(jié)果：SMD=-3.63，95%CI=-5.42～-1.84，P<0.01；異質(zhì)性χ2==101.38，I2=91%，隨機效應(yīng)模型，隔物灸進行干預(yù)，結(jié)果：SMD=-370，95%CI=-7.11～-0.30，P<0.01；異質(zhì)性χ2==114.91，I2=96%，隨機效應(yīng)模型，三組亞組異質(zhì)性檢驗[Test for subgroup differences：Chi2=3.93，df=2(P=0.14)，I2=49.1%]。

2.4.5.3 不同動物模型 在神經(jīng)病理性疼痛模型中，結(jié)果SMD=-1.33，95%CI=-2.16～-0.50，P<0.01；異質(zhì)性χ2=152.86，I2=87%，隨機效應(yīng)模型；在癌性疼痛模型中，結(jié)果SMD=-5.87，95%CI=-17.51～-5.77，P>0.01；異質(zhì)性χ2==21.61，I2=95%，隨機效應(yīng)模型；在炎癥疼痛模型中，結(jié)果SMD=-3.44，95%CI=-4.55～-2.32，P<0.01；異質(zhì)性χ2==219.60，I2=91%，隨機效應(yīng)模型；三組亞組異質(zhì)性檢驗[Test for subgroup differences：Chi2=9.21，df=2(P=0.77)，I2=78.3%]。

2.5 發(fā)表偏倚 漏斗圖分析顯示，研究存在發(fā)表偏倚。如圖6所示。

圖6 漏斗圖

3 討論

針灸在臨床上運用廣泛，尤其是在治療各種類型的疼痛疾病中效果突出，如腰突癥、急性胃痛、偏頭痛等。針灸在鎮(zhèn)痛方面是確實有效的，但是針灸鎮(zhèn)痛的機制仍然不是十分明確。

通過文獻(xiàn)檢索發(fā)現(xiàn)，針灸能夠調(diào)節(jié)TRPV的通道的活性，可能是針灸鎮(zhèn)痛的機制之一。目前研究[21]表明TRPV通道亞家族成員均能響應(yīng)各種理化刺激，作為感受器參與各種傷害后的反應(yīng)，因此，TRPV通道被認(rèn)為是參與疼痛反應(yīng)中的重要環(huán)節(jié)之一，也是近年來的研究熱點。TRPV家族是哺乳動物溫度感受密切相關(guān)的離子通道，其中TRPV1通道參與溫度感受、鈣穩(wěn)態(tài)、細(xì)胞增殖、分化和凋亡等過程。TRPV1通道響應(yīng)多種傷害性刺激而參與痛覺感知。TRPV4能夠介導(dǎo)多種原因?qū)е碌臋C械痛和熱敏痛；而溫度和電刺激能夠直接調(diào)節(jié)TRPV1通道與TRPV4通道的活性。電針或者艾灸能夠通過溫?zé)嵝?yīng)或者電刺激降低TRPV通道的活性提高痛閾而具有預(yù)防多種疼痛的效應(yīng)。為了證實針灸對于TRPV通道的調(diào)控，筆者進行文獻(xiàn)篩選，納入符合標(biāo)準(zhǔn)的文獻(xiàn)進行Meta分析，來進一步研究針灸與TRPV亞家族的關(guān)系，為針灸鎮(zhèn)痛的機制提供循證醫(yī)學(xué)證據(jù)。

3.1 針灸能夠降低疼痛疾病中的TRPV通道活性 本次共納入文獻(xiàn)的18篇，包括4篇英文文獻(xiàn)，14篇中文文獻(xiàn)，都采取了隨機對照實驗，都未提及盲法的使用，18篇文獻(xiàn)分別測量了TRPV家族不同蛋白的表達(dá)。筆者將18篇文獻(xiàn)數(shù)據(jù)提取出來，通過Meta分析發(fā)現(xiàn)，針灸療法對于TRPV家族的表達(dá)下降，有統(tǒng)計學(xué)意義(SMD=-2.28，95%CI=-2.95～-1.61)，并且針灸治療方法降低包括TRPV1通道(SMD=-1.22，95%CI=-1.46～-0.98，P<0.01)、TRPV4通道(SMD=-1.34，95%CI=-1.74～-0.93，P<0.01)和TRPV2通道(SMD=-6.13，95%CI=-7.75～-4.50，P<0.00001)的活性亦有統(tǒng)計學(xué)意義。

針灸鎮(zhèn)痛的可能機制包括減少致痛物質(zhì)的表達(dá)[22]，而TRPV是重要的致痛物質(zhì)之一，本研究也證實了針灸，無論電針亦或者是艾灸(溫和灸、隔物灸)均能夠降低TRPV家族痛的活性，這也在動物實驗方面提供了針灸通過降低TRPV痛的活性而改善疼痛效應(yīng)的證據(jù)。尤其是研究較多的TRPV1和TRPV4。

3.2 TRPV通道與多種疾病相關(guān) TRPV1與心血管疾病、高血壓、癌癥、消化系統(tǒng)疾病息息相關(guān)[23]；TRPV2在維持心臟的結(jié)構(gòu)與功能中意義重大，TRPV2基因敲除小鼠會出現(xiàn)心力衰竭[24-25]，TRPV3與皮膚的生理病理密切相關(guān)，介導(dǎo)皮膚疼痛、瘙癢等感覺的信號傳導(dǎo)，影響角質(zhì)細(xì)胞的增殖分化和毛囊發(fā)育的生理過程[26-28]；TRPV4參與骨骼生長過程中的機械傳導(dǎo)、血管舒張和血壓調(diào)節(jié)過程。TRPV亞家族與人體諸多疾病相關(guān)，而各種疾病的病理改變皆會引起不同程度的疼痛，如胃痛、偏頭痛、骨骼肌肉疼痛。所以針灸鎮(zhèn)痛作用與調(diào)節(jié)TRPV亞家族的通道的活性存在相關(guān)性。本研究發(fā)現(xiàn)，針灸治療能夠降低TRPV亞家族TRPV4、TRPV1和TRPV2的活性，而TRPV亞家族蛋白可能作為致痛因素的一個重要環(huán)節(jié)成為針灸鎮(zhèn)痛的靶點之一。

3.3 針灸治療急性疼痛效果較好 針灸療法在癌痛的Meta分析顯示，SMD=-5.87，95%CI=-17.51～-5.77，P>0.01，通過兩篇文獻(xiàn)的Meta分析，筆者發(fā)現(xiàn)針灸治療在癌痛的緩解上，TRPV的降低，無統(tǒng)計學(xué)意義，說明針灸在癌痛的治療上未能降低TRPV通道的活性。臨床上也發(fā)現(xiàn)，針灸對于如炎性疼痛或者神經(jīng)病理性疼痛的急性疼痛效果較好，而癌痛為慢性疼痛，針灸效果不明顯。對于長時間的疼痛，在TRPV通道的調(diào)節(jié)上，針灸存在一定的局限性，這也提示針灸具有耐受性，對于初次接受針灸鎮(zhèn)痛效果較好。

3.4 異質(zhì)性來源 可能18篇文獻(xiàn)的異質(zhì)性較高(χ2=404.04，I2=90%)，為了探究異質(zhì)性來源，筆者進行了進一步的數(shù)據(jù)分析，根據(jù)可能的異質(zhì)性來源，進行了亞組分析，來挖掘原因。

根據(jù)不同的檢測方法，分為3個亞組，通過亞組分析，筆者發(fā)現(xiàn)，無論何種檢測方法下，針灸對于TRPV的表達(dá)下降都有統(tǒng)計學(xué)意義，并且組間異質(zhì)性降低[(Test for subgroup differences：Chi2=2.66df=2(P=0.26)，I2=24.9%]。而據(jù)不同的干預(yù)方式，分為3個亞組，分別為電針組、間接灸組和隔物灸治療組，3種干預(yù)方式法對于TRPV的表達(dá)下降具有統(tǒng)計學(xué)意義。并且在亞組間的異質(zhì)性檢驗中，3組之間的異質(zhì)性出現(xiàn)降低[Chi2=3.93，df=2(P=0.14)，I2=49.1%]。根據(jù)不同的動物模型分組，無論是炎性疼痛還是神經(jīng)病理性疼痛，TRPV的表達(dá)下降都具有統(tǒng)計學(xué)意義，而癌性疼痛亞組中，針灸對于TRPV表達(dá)無統(tǒng)計學(xué)意義。3組間的組間異質(zhì)性較大[Chi2=9.21，df=2(P=0.77)，I2=78.3%]。從亞組分析，不同的檢測方法能夠消除組間異質(zhì)性，故認(rèn)為異質(zhì)性來源可能是檢測方式的不同，導(dǎo)致最后得出的數(shù)據(jù)出現(xiàn)了異質(zhì)性。

從目前的證據(jù)分析來看，針灸療法中溫針、電針、艾灸療法能夠降低動物模型中的TRPV1、TRPV4的表達(dá)，而TRPV2、TRPV3的表達(dá)研究文獻(xiàn)比較少，還不能夠支持針灸治療能夠有效降低這兩種蛋白的表達(dá)的說法；而根據(jù)敏感性分析，TRPV3的文獻(xiàn)僅有一篇，而本文獻(xiàn)對于Meta分析的結(jié)果沒有影響，說明針灸療法的能夠降低TRPV家族的活性。從文獻(xiàn)搜索來看，TRPV1和TRPV4是目前疼痛疾病研究的靶點之一。也是研究熱點，而針灸療法目前在臨床上較多用于鎮(zhèn)痛的治療，TRPV家族離子通道的活性影響致痛物質(zhì)的釋放，而針灸治療能夠調(diào)節(jié)TRPV的活性，從而起到鎮(zhèn)痛的作用。在文獻(xiàn)篩選的過程中，筆者發(fā)現(xiàn)有文獻(xiàn)研究灸法治療肛門瘙癢小鼠的模型，檢測TPRV1的表達(dá)，而TRPV3與皮膚生理病理密切相關(guān)，并且介導(dǎo)瘙癢感覺信號的傳導(dǎo)，故考慮文獻(xiàn)測量指標(biāo)出現(xiàn)偏差故未納入，根據(jù)亞組分析的異質(zhì)性檢驗，考慮異質(zhì)性可能來源于針灸療法中不同的檢測和不同的動物模型之間的差異。

3.5 針灸對TRPV1、TRPV4調(diào)節(jié)影響較大 本次研究中所述的TRPV家族于1997年首次被報道[29]。TRPV家族中被研究較多的TRPV1和TRPV4通道，兩者都與鈣離子內(nèi)流有關(guān)。關(guān)于針灸對于TRPV的動物實驗研究，也證實了TRPV1的研究最多，其次是TRPV4。通過Meta分析結(jié)果，也發(fā)現(xiàn)兩者的研究結(jié)果數(shù)據(jù)中的可信區(qū)間范圍較TRPV2小，所以針灸對TRPV1和TRPV4的調(diào)節(jié)占主要作用，而TPRV2的研究較少，并且可信區(qū)間范圍較大，從而說明針灸對于TRPV2的調(diào)節(jié)可能不是主要作用。TRPV1通道激活后，鈣離子大量內(nèi)流，引起一系列細(xì)胞內(nèi)信號通路被激活，TRPV4也可直接介導(dǎo)細(xì)胞鈣離子的內(nèi)流，通過影響膜電位和鈣離子內(nèi)向驅(qū)動力等間接參與鈣離子的內(nèi)流[30]，這兩種蛋白在疼痛的產(chǎn)生中發(fā)揮重要作用[31]。炎癥反應(yīng)過程中產(chǎn)生的蛋白酶、5-羥色胺、組胺、TNF-α、IL-17等可以通過促進TRPV4向質(zhì)膜轉(zhuǎn)移、磷酸化以及產(chǎn)生內(nèi)源性TRPV4激動劑等方式使免疫細(xì)胞上TRPV4表達(dá)增加或功能增強[32]。細(xì)菌表面的脂多糖(LPS)也被證實可直接激活TRPV4[33]。所以針灸鎮(zhèn)痛機制主要與TRPV1和TRPV4通道調(diào)節(jié)相關(guān)。

4 研究展望

所納入文獻(xiàn)動物模型可以分為炎性疼痛的模型(大多數(shù)與腸道疾病有關(guān))，以及神經(jīng)病理性疼痛(與脊柱骨關(guān)節(jié)相關(guān))，針灸鎮(zhèn)痛的靶點也主要與TRPV1和TRPV4的調(diào)節(jié)相關(guān)。而TRPV1廣泛分布于三叉神經(jīng)節(jié)、背根神經(jīng)節(jié)等神經(jīng)組織中以及腸胃、骨骼肌肉中；TPRV4也在皮膚、腎臟、肺、脾臟多個組織器官中表達(dá)，這也與疼痛產(chǎn)生的位置相同。通過不同TPRV亞家族的分析，筆者發(fā)現(xiàn)針灸主要影響TRPV1和TRPV4通道。TRPV1通道一直是開發(fā)治療疼痛新藥物的主要TRP通道。很多前期臨床研究[34]表明，不同類別的TRPV1通道拮抗劑如AMG-517、AZD1386，均會使體溫升高，而這種不良反應(yīng)是阻礙其臨床發(fā)展的最主要原因[34]。而針灸沒有此副作用，所以可以替代藥物作為TRPV1鎮(zhèn)痛的方法之一。

綜上，通過大量搜索針灸療法在動物實驗中的研究，在各類疾病中與研究中，針灸鎮(zhèn)痛的效果較好，而Meta分析結(jié)果顯示針灸能夠降低TRPV亞家族的活性，給針灸療法鎮(zhèn)痛機制提供新的依據(jù)，并且其中占主要影響的是TRPV1和TRPV4通道；同時發(fā)現(xiàn)針灸也可用于其他疾病的治療例如瘙癢以及血脂的調(diào)節(jié)[35-36]，但是研究的靶點可能出現(xiàn)異質(zhì)性。所以，可以通過另外的研究分析給針灸治療疾病提供更多思路，并且可以找尋新的TRPV1和TRPV4上下游信號通路來進一步研究針灸鎮(zhèn)痛和治療疾病的機制。

由于本次納入的文獻(xiàn)都是動物實驗，尚不能評價針灸治療疼痛的真正機制，但是給未來的研究指明了一種可能性，由于各研究間干預(yù)方式不同，檢驗方法不同以及疼痛模型種類的差異，合并結(jié)果存在較高的異質(zhì)性風(fēng)險，通過敏感性分析和亞組分析，異質(zhì)性未完全解決。并且在Meta分析過程中，不可回避的一個問題是發(fā)表偏移。本研究存在發(fā)表偏移，在動物實驗的過程中，實驗員盡可能會尋找陽性的結(jié)果，并且可能由于一些陰性結(jié)果沒有發(fā)表，或者在處理過程中忽略的陰性結(jié)果導(dǎo)致發(fā)表偏移，但是針灸療法鎮(zhèn)痛也是有大量的臨床數(shù)據(jù)得到支持的。