CTCs、IGF-1R 及RNPC1 對非小細(xì)胞肺癌患者術(shù)后復(fù)發(fā)的預(yù)測價(jià)值

李娜 于宏彬 張茜 葉鑫

目前，肺癌位居我國腫瘤死亡原因首位。肺癌分為非小細(xì)胞肺癌（Non-small-cell lung carcinoma，NSCLC）和小細(xì)胞肺癌兩大類，其中，NSCLC最常見，約占肺癌總發(fā)病率的85%［1］。NSCLC 又可分為腺癌、鱗狀細(xì)胞癌、腺鱗癌、大細(xì)胞癌、類癌和肉瘤樣癌等亞型，目前腺癌發(fā)病率最高，其可通過局部浸潤、淋巴系統(tǒng)、血液系統(tǒng)轉(zhuǎn)移到其他部位。循環(huán)腫瘤細(xì)胞（Circulating Tumor Cells，CTCs）是存在于外周血中的各類腫瘤細(xì)胞的統(tǒng)稱，因自發(fā)或診療操作從實(shí)體腫瘤病灶（原發(fā)灶、轉(zhuǎn)移灶）脫落，大部分CTCs 在進(jìn)入外周血后發(fā)生凋亡或被吞噬，少數(shù)能夠逃逸并錨著發(fā)展成為轉(zhuǎn)移灶，增加惡性腫瘤患者死亡風(fēng)險(xiǎn)。研究發(fā)現(xiàn)腫瘤細(xì)胞的擴(kuò)散傳播是腫瘤患者死亡的主要原因［2］。胰島素樣生長因子1 受 體（Insulin like growth factor 1 receptor，IGF-1R）是在人細(xì)胞表面發(fā)現(xiàn)的蛋白質(zhì)，其在生長中起重要作用，可以誘導(dǎo)細(xì)胞中原癌細(xì)胞的表達(dá)，并可抑制細(xì)胞凋亡。RNA 結(jié)合蛋白（RNA binding protein，RNPC1）是P53基因家族的一個(gè)靶細(xì)胞，具有RNA 結(jié)合活性，它可以通過結(jié)合并調(diào)節(jié)癌細(xì)胞中靶基因的表達(dá)來充當(dāng)腫瘤抑制因子。現(xiàn)有研究發(fā)現(xiàn)，RNPC1 蛋白在肺腺癌中有明顯表達(dá)，且與患者臨床病理特征有一定關(guān)系［3］。本文旨在分析CTCs、IGF-1R 及RNPC1 對非小細(xì)胞肺癌患者術(shù)后復(fù)發(fā)的預(yù)測價(jià)值，報(bào)道如下。

1 一般資料與方法

1.1 一般資料

選取2021 年4 月至2022 年1 月于首都醫(yī)科大學(xué)附屬北京朝陽醫(yī)院進(jìn)行肺切除術(shù)治療NSCLC 患者132 例為研究對象，其中男性82 例，女50 例，平均年齡（46.57±9.32）歲，BMI（21.57±2.89）kg/m2。低分化NSCLC 患者28 例，中分化NSCLC 患者36 例，高分化NSCLC 患者68 例；Ⅰ期患者29 例，Ⅱ期患者35 例，Ⅲ期患者68 例。本研究經(jīng)院醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)批準(zhǔn)通過，受試者或家屬已簽署知情同意書。

納入標(biāo)準(zhǔn)：①經(jīng)病理學(xué)檢查均符合《中國肺癌篩查與早診早治指南》［4］中NSCLC 的診斷標(biāo)準(zhǔn)。②臨床資料無缺乏；③無精神障礙，可以配合治療。排除標(biāo)準(zhǔn)：①妊娠期患者；②患有其他腫瘤者；③重要器官功能異常者。

1.2 方法

1.2.1 CTCs、IGF-1R、RNPC1 檢測方法

1.2.1.1 CTCs 檢測方法 于術(shù)前、術(shù)后1 w 抽取研究對象5 mL 靜脈血，置于抗凝管中，混合均勻后，將其放入冰箱內(nèi)保存，在24 h 內(nèi)進(jìn)行檢測。采取密度梯度離心法對樣本進(jìn)行富集，使用Cell Search 循環(huán)腫瘤細(xì)胞檢測試劑，試劑中的鐵磁流體試劑含有帶磁芯的納米微粒，在磁芯周圍的聚合物層上涂覆有針對上皮細(xì)胞粘附因子抗原的抗體用來捕獲CTCs，添加熒光劑用來識(shí)別并計(jì)數(shù)CTCs。

1.2.1.2 IGF-1R 檢測方法 于術(shù)前、術(shù)后1 w 分別抽取研究對象5 mL 靜脈血，并置入干燥管中，于常溫環(huán)境下靜置4 h 后做離心處理，使用血型血清學(xué)離心機(jī)HT12MM，以3 000 r/min 的轉(zhuǎn)速進(jìn)行離心10 min 處理，離心半徑為10 cm，提取血清，將其倒入1.5 mL 的聚丙二醇脂管內(nèi)，于-60℃保存。采取放射免疫分析法對IGF-1R 進(jìn)行檢測。

1.2.1.3 RNPC1 檢測方法 于術(shù)前、術(shù)后1 w 提取肺部組織，所有的組織均制作呈標(biāo)本，經(jīng)石蠟包埋后作連續(xù)切片，厚度約4 mm，采用免疫組化鏈霉卵白素-生物素復(fù)合體法染色，二氨基聯(lián)苯胺顯色。使用通用型二抗、SP 試劑盒和DNB 顯色盒（均來自北京中杉金橋生物技術(shù)開發(fā)公司）檢測PNPC1，在高倍顯微鏡下觀察PNPC1 蛋白的表達(dá)情況。具體染色步驟嚴(yán)格按照SP 試劑盒說明書進(jìn)行操作。

1.2.2 隨訪

患者出院后，通過電話、門診等方式隨訪12 個(gè)月，隨訪截止至2023 年1 月，統(tǒng)計(jì)所有患者的復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移等情況。隨訪內(nèi)容：CT、腫瘤標(biāo)志物檢測等。

1.3 觀察指標(biāo)

整理12 個(gè)月隨訪資料，對比手術(shù)前與術(shù)后1 w CTCs、IGF-1R、RNPC1 變化情 況，分析影 響NSCLC 患者術(shù)后復(fù)發(fā)的單因素，采用多元Logistic回歸分析CTCs、IGF-1R、RNPC1 對NSCLC 患者術(shù)后復(fù)發(fā)的相關(guān)因素。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS 21.0 統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，計(jì)量資料采用（）描述，兩兩間使用t檢驗(yàn)；計(jì)數(shù)資料通過n（%）表示，并采用χ2檢驗(yàn)，采用多元Logistic回歸分析影響NSCLC 患者術(shù)后復(fù)發(fā)的多因素；均以P＜0.05 為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 手術(shù)前后CTCs、IGF-1R、RNPC1 水平的比較

患者術(shù)后1 w CTCs、IGF-1R、RNPC1 水平均低于術(shù)前，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。見表1。

表1 手術(shù)前后CTCs、IGF-1R、RNPC1 水平對比（）Table 1 Comparison of CTCs，IGF-1R，and RNPC1 levels before and after surgery（）

表1 手術(shù)前后CTCs、IGF-1R、RNPC1 水平對比（）Table 1 Comparison of CTCs，IGF-1R，and RNPC1 levels before and after surgery（）

2.2 隨訪情況

經(jīng)過12 個(gè)月隨訪，發(fā)現(xiàn)132 例NSCLC 患者中87 例未出現(xiàn)復(fù)發(fā)，歸為非復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移組；45 例復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移患者（34.09%），其中腦轉(zhuǎn)移20 例（44.44%），肺內(nèi)轉(zhuǎn)移13 例（28.89%），骨轉(zhuǎn)移9 例（20.00%），肝臟轉(zhuǎn)移3 例（6.67%），歸為復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移組。

2.3 影響NSCLC 患者術(shù)后復(fù)發(fā)的單因素

兩組性別、年齡、BMI、高血壓史、糖尿病史、吸煙比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。兩組TNM分期、分化程度與CTCs、IGF-1R、RNPC1 測量值比較差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。見表2。

表2 影響NSCLC 患者術(shù)后復(fù)發(fā)的單因素［n（%），（）］Table 2 Single factor influencing postoperative recurrence in NSCLC patients［n（%），（）］

表2 影響NSCLC 患者術(shù)后復(fù)發(fā)的單因素［n（%），（）］Table 2 Single factor influencing postoperative recurrence in NSCLC patients［n（%），（）］

2.4 影響NSCLC 患者術(shù)后復(fù)發(fā)的多因素

經(jīng)Logistic 回歸分析顯示：TNM 分期為Ⅲ～Ⅳ期、分化程度為中低分化、CTCs＞14.05±11.73 個(gè)/mL、IGF-1R＞256.39±23.47 μg/L、RNPC1＞0.89±0.12 IU/mL 均是影響NSCLC 患者術(shù)后復(fù)發(fā)的危險(xiǎn)因素（P＜0.05）。見表3。

表3 影響NSCLC 患者術(shù)后復(fù)發(fā)的多因素logistic 回歸分析Table 3 Multivariate logistic regression analysis on postoperative recurrence in NSCLC patients

3 討論

NSCLC 主要是指源自于支氣管粘膜上皮或者肺泡上皮的惡性腫瘤，屬于最常見的肺癌類型，主要癥狀為咳嗽、血痰、胸痛、發(fā)熱、氣促、消瘦等［5］。NSCLC 其治療方法為手術(shù)切除。按照現(xiàn)有的統(tǒng)計(jì)，肺癌整個(gè)5 年生存率非常低，死亡的極大原因便是術(shù)后復(fù)發(fā)［6］。有報(bào)道指出，可以通過檢測循環(huán)腫瘤細(xì)胞的相關(guān)數(shù)據(jù)對惡性腫瘤進(jìn)行診斷與復(fù)發(fā)預(yù)測［7］。

CTCs 檢測通過捕捉檢測外周血中痕量存在的CTC，檢測CTC 類型和數(shù)量變化的趨勢，以實(shí)時(shí)檢測腫瘤動(dòng)態(tài)、評估治療效果，實(shí)現(xiàn)實(shí)時(shí)個(gè)體治療。程煌榮等學(xué)者［8］指出，腫瘤細(xì)胞侵入到原發(fā)腫瘤細(xì)胞的周圍組織中，進(jìn)入血液和淋巴管系統(tǒng)，形成循環(huán)腫瘤細(xì)胞CTCs，并轉(zhuǎn)運(yùn)到遠(yuǎn)端組織，再滲出，適應(yīng)新的微環(huán)境，最終“播種”、“增殖”、“定植”、形成轉(zhuǎn)移灶，因此，早期發(fā)現(xiàn)血液中的CTCs，對于患者預(yù)后判斷、療效評價(jià)和個(gè)體化治療都有著重要的指導(dǎo)作用。腫瘤細(xì)胞可以通過血液和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移形成轉(zhuǎn)移灶，手術(shù)治療后血液中的殘余腫瘤細(xì)胞可能是造成腫瘤復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移的重要因素［9］。對轉(zhuǎn)移腫瘤患者進(jìn)行預(yù)后評估是目前CTCs臨床應(yīng)用最廣泛的領(lǐng)域，惡性腫瘤患者治療前后的CTCs 類型和數(shù)目的變化具有重要的預(yù)后提示價(jià)值［10］。大量實(shí)驗(yàn)證明，CTCs 的出現(xiàn)與惡性腫瘤患者的預(yù)后密切相關(guān)［11］。本次研究顯示，NSCLC患者術(shù)后CTCs 檢測值低于術(shù)前，且經(jīng)Logistic回 歸分析發(fā)現(xiàn)CTCs＞14.05±11.73 個(gè)/mL 是影響NSCLC 患者術(shù)后復(fù)發(fā)的危險(xiǎn)因素之一，說明CTCs在NSCLC 的復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移過程中發(fā)揮著重要作用。

IGF-1R 是一類多功能細(xì)胞增殖調(diào)控因子，在細(xì)胞的分化、增殖、個(gè)體的生長發(fā)育中具有重要的促進(jìn)作用，其廣泛分布于各個(gè)組織中。IGF-1R 一旦表達(dá)過度，IGF-1R 附著的細(xì)胞將可能向惡性轉(zhuǎn)化［12］。當(dāng)IGF-1R 與靶細(xì)胞結(jié)合時(shí)，IGF-1R 會(huì)抑制細(xì)胞凋亡以及蛋白質(zhì)合成，刺激惡性腫瘤的發(fā)生［13］。劉曉鑫等［14］指出，血液中IGF-1R 濃度的增加將導(dǎo)致惡性腫瘤病復(fù)發(fā)的易感性增加，且有利于腫瘤的快速生長。本次研究顯示，NSCLC 患者術(shù)前術(shù)后IGF-1R檢測值比較差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，且Logistic 回歸分析發(fā)現(xiàn)IGF-1R＞256.39±23.47 μg/L 會(huì)對NSCLC 患者術(shù)后復(fù)發(fā)情況產(chǎn)生影響，說明IGF-1R 可作為NSCLC 患者術(shù)后復(fù)發(fā)評估的重要參考指標(biāo)。

本次研究顯示，RNPC1 檢測值在術(shù)前術(shù)后的差距較小，但仍具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；且Logistic 回歸分析顯示RNPC1＞0.89±0.12 IU/mL 是影響NSCLC患者術(shù)后復(fù)發(fā)的危險(xiǎn)因素，說明RNPC1 對NSCLC 術(shù)后復(fù)發(fā)具有預(yù)測價(jià)值。分析原因：RNPC1 的RNA 結(jié)合作用能夠交錯(cuò)式激活患者體內(nèi)的癌細(xì)胞轉(zhuǎn)錄調(diào)控因子，提高癌細(xì)胞DNA 的擴(kuò)散速度；且RNPC1 對于一些微小RNA 的調(diào)控作用可以促進(jìn)癌細(xì)胞膜表面糖蛋白配體的激活［15］。而以往有研究指出［16］，RNPC1 的功能異常會(huì)導(dǎo)致癌癥的發(fā)生與轉(zhuǎn)移，尤其是在上皮細(xì)胞中。RNPC1 的表達(dá)能夠提高癌細(xì)胞黏附淋巴結(jié)內(nèi)皮細(xì)胞的能力，促進(jìn)癌細(xì)胞對于臨近正常肺泡上皮組織的浸潤過程，從而影響NSCLC 預(yù)后［17］。本次研究結(jié)果與上述研究相似。

綜上所 述，CTCs、IGF-1R、RNPC1 水平在NSCLC 術(shù)后均明顯下降，對預(yù)后評估具有重要的指導(dǎo)價(jià)值；因此，可將CTCs、IGF-1R、RNPC1 水平作為評估NSCLC 患者術(shù)后復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移的重要參考依據(jù)。