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    幽門螺桿菌感染胃癌患者胃黏膜MIF和P-gp與FasL的表達及意義

    2023-12-05 06:06:24于小雨
    中華養(yǎng)生保健 2023年22期
    關鍵詞:分化陽性率試劑盒

    于小雨

    (赤峰市醫(yī)院病理科,內(nèi)蒙古 赤峰, 024000)

    隨著人們生活方式、飲食結構的改變,我國胃癌發(fā)病率逐漸增高,調查顯示,2021年胃癌新發(fā)病例、死亡病例分別為47.9萬例、37.4萬例,2022年新發(fā)病例、死亡病例分別為68萬例、99.8萬例[1-2]。胃癌的發(fā)生和多方面因素存在聯(lián)系,以幽門螺桿菌(Helicobacter pylori,Hp)感染為主[3]。研究指出,F(xiàn)as配體(Fas ligand, Fast)在惡性腫瘤的發(fā)生中占據(jù)了重要的地位[4]。巨噬細胞移動抑制因子(Macrophage migration inhibition factor,MIF)參與了腫瘤細胞的增殖、轉移過程[5]。P-糖蛋白(P-glycoprotein,P-gp)參與了惡性腫瘤細胞的凋亡過程。所以,測定幽門螺桿菌感染胃癌患者胃黏膜MIF、P-gp、FasL的表達對胃癌后續(xù)治療方案的合理制訂具有重要的指導性意義。本研究選擇針對赤峰市醫(yī)院病理科2020年5月—2022年5月留存的胃癌患者胃黏膜組織開展研究,對其MIF、P-gp、FasL表達進行探究,旨在為幽門螺桿菌感染胃癌后續(xù)治療發(fā)展提供重要的參考依據(jù),現(xiàn)報道如下。

    1 資料與方法

    1.1 一般資料

    選取2020年5月—2022年5月赤峰市醫(yī)院病理科留存的胃癌患者胃黏膜組織為A組(n=59),選取同期留存的距離癌組織邊緣超過5 cm且經(jīng)過病理確診為正常黏膜組織為B組(n=59)。A組男30例,女29例;年齡28~70歲,平均年齡(44.61±4.37)歲;B組男32例,女27例;年齡30~70歲,平均年齡(45.21±5.07)歲。上述兩組患者一般資料比較,差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05),具有可比性。另外,以Warthin-Starry銀染法測定結果為依據(jù),確定A組有無合并Hp感染分組:①Hp陰性組(n=35),包括男性患者20例,女性患者15例;年齡29~70歲,平均年齡(43.69±3.41)歲;TNM分期為19例Ⅰ期+Ⅱ期、16例Ⅲ期+Ⅳ期;分化程度為15例高分化、中低分化20例,有淋巴結轉移9例、無淋巴結轉移26例。②Hp陽性組(n=24),包括男性患者16例,女性患者8例;年齡31~70歲,平均(44.21±4.05)歲;TNM分期為14例Ⅰ期+Ⅱ期、10例Ⅲ期+Ⅳ期;分化程度為11例高分化、中低分化13例,有淋巴結轉移10例、無淋巴結轉移14例。上述一般資料(年齡、性別結構、TNM分期、分化程度等)比較,差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05),具有可比性。本研究納入對象對研究內(nèi)容知曉并簽署知情同意書。本研究經(jīng)赤峰市醫(yī)院醫(yī)學倫理委員會審批。

    1.2 納入與排除標準

    納入標準:①受檢者神志清楚,可與他人正常溝通、交流,依從性良好;②符合《中國胃癌篩查與早診早治指南(2022,北京)》[6],結合臨床表現(xiàn)、影像學檢查、病理組織活檢等確診為胃癌。

    排除標準:①胃癌復發(fā)或伴有認知障礙、心理疾??;②合并凝血功能障礙、先天性免疫缺陷病、重要臟器功能衰竭等;③取材前已進行放化療;④既往存在Hp感染史。

    1.3 檢測方法

    安排同一組醫(yī)生進行取材及MIF、P-gp、FasL水平測定操作。

    檢測前,與受檢者主動交談,介紹MIF、P-gp、FasL表達陽性率的意義,以取得患者的理解,同時指導患者簽署知情同意書。

    檢測時,抗MIF的試劑盒為人巨噬細胞移動抑制因子酶聯(lián)免疫吸附檢測試劑盒(生產(chǎn)企業(yè):上海西格生物科技有限公司),抗P-gp的試劑盒為人P-糖蛋白酶聯(lián)免疫吸附檢測試劑盒(生產(chǎn)企業(yè):北京中科質檢生物技術有限公司),抗FasL的試劑盒為人凋亡相關因子配體酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒(生產(chǎn)企業(yè):武漢伊萊瑞特生物科技股份有限公司)。按照免疫組化法測定MIF、P-gp、FasL表達陽性率情況,即取出適量的胃癌患者胃黏膜組織、距離癌組織邊緣超過5 cm且經(jīng)過病理確診為正常的黏膜組織,分別進行10%甲醛固定,再完成常規(guī)石蠟包埋;石蠟切片,并放在67 ℃烘箱內(nèi)烘片2 h,脫蠟至水,經(jīng)磷酸緩沖鹽溶液(PBS)(pH=7.4)沖洗,共3次,3 min/次;取一定量檸檬酸鹽緩沖液(<500 mL)于微波盒內(nèi),加熱至沸騰,將脫蠟水化后的組織放在已煮沸的緩沖液內(nèi)繼續(xù)煮20 min進行修復;除去檸檬酸鹽緩沖液,于切片滴入適量的新鮮配制的二氨基聯(lián)苯胺,顯微鏡下觀察5 min;蒸餾水進行沖洗,用蘇木素復染,再經(jīng)自來水沖洗;將PBS作為陰性對照,而已知陽性切片為陽性對照。

    檢測后,安排2名病理醫(yī)生進行切片病理分析,結果有爭議時詢問高級職稱的影像學專家,得出最終結論。

    1.4 觀察指標

    以A組與B組為觀察指標,統(tǒng)計MIF、P-gp、FasL表達陽性率。MIF、P-gp、FasL表達定位均在細胞質,在顯微鏡下觀察5個視野,根據(jù)染色程度、染色細胞百分比進行評分,即(1)無染色為0分;淡黃色為1分;黃色為2分;棕黃色為3分。(2)著色細胞數(shù)在5%及以下,記錄0分;著色細胞數(shù)為6%~25%,記錄1分;著色細胞數(shù)為26%~50%,記錄2分;著色細胞在51%及以上,記錄3分。依照得分計算陽性表達情況,得分在1分及以下,視為陰性;得分為2~3分,視為弱陽性;得分為4~5分,視為中度陽性;得分在6分及以上,視為強陽性。

    分析MIF、P-gp、Fas與Hp陽性組的臨床病理特征關系,包括臨床分期、分化程度、有無淋巴結轉移等。

    以病理學組織活檢結果為金標準,聯(lián)合檢測時只要一項指標呈陽性標準,即可判斷為陽性。比較MIF、P-gp、FasL聯(lián)合項目指標與單一項目指標對Hp陽性組胃癌患者的診斷效能,包括敏感度、特異度。采用受試者操作特征(ROC)曲線分析MIF、P-gp、FasL診斷Hp陽性組患者的敏感度、特異度。

    (2)特異度=真陰性人數(shù)/(真陰性人數(shù)+假陽性人數(shù))×100%;

    (3)敏感度=真陽性人數(shù)/(真陽性人數(shù)+假陰性人數(shù))×100%。

    1.5 統(tǒng)計學分析

    選擇SPSS 25.0統(tǒng)計學軟件進行數(shù)據(jù)分析。計量資料以()表示,兩組組間差異比較采用t檢驗;計數(shù)資料采用[n(%)]描述,數(shù)據(jù)組間差異行χ2檢驗。用Medcalc軟件繪制ROC曲線,分析單一項目檢測及聯(lián)合檢測的診斷價值。以以P<0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

    2 結果

    2.1 比較A組與B組患者MIF、P-gp、FasL表達陽性率

    A組患者MIF、P-gp、FasL表達陽性率較B組高,差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05),見表1。

    表1 比較A組與B組患者MIF、P-gp、FasL表達陽性率 [n(%)]

    2.2 MIF、P-gp、Fas與Hp陽性組的臨床病理特征關系分析

    Ⅲ期+Ⅳ期Hp陽性組MIF、P-gp、FasL表達陽性率較Ⅰ期+Ⅱ期高,差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05);中低分化Hp陽性組MIF、P-gp、FasL表達陽性率較高分化組高,差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05);有淋巴結轉陽性組MIF、P-gp、FasL表達陽性率較無淋巴結轉高,差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05),見表2。

    表2 ZMIF、P-gp、Fas與Hp陽性組的臨床病理特征關系分析

    2.3 聯(lián)合項目指標檢測診斷Hp陽性組胃癌患者的ROC曲線分析

    聯(lián)合檢測篩查敏感度、特異性較MIF、P-gp、Fas單一項目指標檢測高,差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05),詳見表3、圖1。

    圖1 聯(lián)合項目指標檢測與單一項目指標檢測診斷Hp陽性組的ROC曲線圖

    表3 聯(lián)合檢測對Hp陽性組胃癌患者的診斷分析 (%)

    3 討論

    胃癌是一種較常見的疾病,具有起病隱匿、發(fā)病率高等特點,是目前危及人體健康安全的重要因素之一。胃癌的發(fā)生與飲食、環(huán)境、遺傳、藥物及Hp等存在聯(lián)系,早期癥狀缺乏特異性,表現(xiàn)為食欲減退、惡心、反酸等癥狀,不易被發(fā)現(xiàn),確診時已處于中晚期階段,錯過最佳手術治療時機[7]。有研究指出,早期胃癌患者經(jīng)手術治療預后較好,5年生存率超過90%以上[8]。

    Hp作為一種需氧螺旋狀革蘭氏陰性桿菌,具有一定的傳染性,持續(xù)感染已成為胃癌的重要誘因[9]。經(jīng)調查發(fā)現(xiàn),半數(shù)以上胃癌的發(fā)生與Hp感染有關[10],因此有理由認為Hp在胃癌發(fā)生、發(fā)展過程中起到了重要作用。

    隨著相關報道增多,人們對胃癌與Hp感染關系認識程度逐步加深,Hp誘發(fā)胃癌是一個復雜的免疫反應過程,即促進炎性細胞聚集,使其增生、釋放細胞因子,引發(fā)分子改變,造成癌變。胃癌的發(fā)生被認為是多因子、多步驟相互作用的復雜生物學過程[11]。MIF是一種由親水性原子排列構成,具有雙重作用特性的蛋白,參與惡性腫瘤發(fā)展、炎性反應過程,可促進細胞轉化、增殖、分裂、新生血管形成[12]。有研究指出,MIF在乳腺癌、胰腺癌、肝癌等惡性腫瘤中呈高表達[13]。研究顯示,A組患者MIF表達陽性率較B組高,說明MIF參與胃癌的發(fā)生,故呈高表達。P-gp是一種位于細胞膜上的ATP,參與機體能量代謝過程,也是參與介導腫瘤多藥耐藥性的重要蛋白[14]。有研究表明,惡性腫瘤細胞中P-gp呈高表達,參與腫瘤的復發(fā)、轉移、進展[15-16]。本研究結果顯示,A組P-gp表達陽性率較B組高,說明P-gp參與胃癌的發(fā)生,故呈高表達。Fasl是一種跨膜蛋白,可介導細胞的凋亡,當其結合受體Fas分子,并產(chǎn)生特異性反應,可向細胞內(nèi)傳遞細胞凋亡信號[17-18]。有研究指出,惡性腫瘤患者細胞內(nèi)P-gp明顯增高,攻擊浸潤性活化的T細胞,使惡性腫瘤細胞凋亡[19-20]。本研究結果顯示,A組Fasl表達陽性率較B組高,說明Fasl參與胃癌的發(fā)生,故呈高表達。

    結合上述分析,進一步探究Fasl、MIF、P-gp與Hp陽性組臨床分析、分化程度、有無淋巴結轉移的相關性,結果發(fā)現(xiàn)Fasl、MIF、P-gp高表達與Hp陽性胃癌患者密切相關,即臨床分期越高、分化程度越高、有淋巴結轉移的Hp陽性胃癌患者胃黏膜組織Fasl、MIF、P-gp高表達。此外,進一步分析聯(lián)合項目檢測對Hp陽性組胃癌患者的診斷效能,發(fā)現(xiàn)聯(lián)合檢測篩查敏感度、特異度較MIF、P-gp、Fas單一項目指標檢測高,說明聯(lián)合項目檢測效果更理想。

    綜上所述,MIF、P-gp、Fasl在胃癌患者胃黏膜組織中呈高表達,且胃癌合并Hp感染患者MIF、P-gp、Fasl水平更高,尤其是Ⅲ期+Ⅳ期、中低分化、有淋巴結轉移的胃癌合并Hp感染患者,而MIF、P-gp、Fasl的聯(lián)合檢測診斷效果更理想,能夠為其后續(xù)治療提供重要依據(jù)。

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