溫補(bǔ)氣血膏方的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究

甘裕昌 黎曉曲 謝志平

（河源市中醫(yī)院，廣東 河源 517000）

河源市中醫(yī)院自制膏方溫補(bǔ)氣血膏方（處方組成為：黨參、黃芪、茯苓、白術(shù)、當(dāng)歸、白芍、酒川芎、熟地黃、肉桂、干姜、枸杞子、黃精、酒萸肉、山藥、甘草）[1]。其中黨參性味甘平，可補(bǔ)中益氣，健脾益肺；黃芪味甘微溫，有補(bǔ)氣升陽(yáng)、益衛(wèi)固表、托毒生肌、利水消腫等多種作用；茯苓味甘淡、性平，可利水滲濕、健脾和中、寧心安神；徐飛飛等[2]研究顯示，黨參-茯苓-甘草水提取物具抗氧化及調(diào)節(jié)免疫力的作用。白術(shù)味苦甘、性溫，有補(bǔ)脾、益胃、燥濕、和中、安胎之效；當(dāng)歸味甘、性溫，趙翔鳳等[3]通過(guò)歸納發(fā)現(xiàn)當(dāng)歸除《中華人民共和國(guó)藥典》中所提到的功效主治外,尚有止咳止嘔、止血止汗、明目養(yǎng)心、滋肝潤(rùn)木、安胎催產(chǎn)、排膿生肌等功效；酒川芎味辛、性溫，具有改善心臟功能、解痙、抑制肺血管收縮、祛風(fēng)止痛等功效；熟地黃味甘、性溫，可滋陰補(bǔ)血，益精填髓；肉桂味辛甘、性熱，可補(bǔ)元陽(yáng)，暖脾胃，除積冷，溫通心陽(yáng)[4]；干姜味辛、性熱，有溫中逐寒，回陽(yáng)通脈之效；枸杞子味甘、性平，可滋腎、潤(rùn)肺、補(bǔ)肝、明目；黃精味甘、性平，可養(yǎng)陰潤(rùn)肺，補(bǔ)脾益氣，滋腎填精；酒萸肉味酸澀、性微溫，主補(bǔ)肝腎，澀精氣，固虛脫；山藥味甘性平，可補(bǔ)脾養(yǎng)胃，生津益肺，補(bǔ)腎澀精。黨參、茯苓均有健脾之功，黃芪具補(bǔ)氣升陽(yáng)之效，白芍可養(yǎng)血柔肝，四藥合用可具健脾和胃，補(bǔ)氣養(yǎng)血之效，用于脾胃虛弱、氣血不足證。溫補(bǔ)氣血膏方的療效確切，口感佳，深受臨床患者使用好評(píng)。

根據(jù)中成藥中膏方的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，膏方應(yīng)達(dá)到優(yōu)質(zhì)、高效、安全、穩(wěn)定的標(biāo)準(zhǔn)，即達(dá)到“三效”（高效、速效、長(zhǎng)效）“三小”（劑量小、毒性小、副作用?。叭恪保ǚ梅奖?、攜帶方便、儲(chǔ)存方便）的要求[5-6]。通過(guò)本實(shí)驗(yàn)研究，形成溫補(bǔ)氣血膏方的質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)，保證膏方質(zhì)量，實(shí)現(xiàn)膏方生產(chǎn)的穩(wěn)定性，保障臨床療效，亦為其他類(lèi)型的膏方質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)提供參考依據(jù)。

1 材料

1.1 儀器 勻漿儀漯河金田JT-C、電子分析天平FA2204N、生化培養(yǎng)箱MJ50、水分測(cè)定儀ESH105、超聲清洗機(jī)KQ3200E、電熱恒溫水浴鍋HWS-24、電熱恒溫干燥箱（東方-A）、恒溫培養(yǎng)箱（東方DF-420SB）、電熱恒溫培養(yǎng)箱PHD9032、暗箱式紫外儀WFH-203B、便攜式密度儀、電子生物顯微鏡（BM2000）。

1.2 藥物 來(lái)自河源市中醫(yī)院膏方藥房的溫補(bǔ)氣血膏方，批次分別為：230301、230401、230501。見(jiàn)表1。

表1 溫補(bǔ)氣血膏方中所用中藥飲片批號(hào)

1.3 標(biāo)準(zhǔn)品和試劑 芍藥苷對(duì)照品（中檢所：110736-201438），茯苓對(duì)照藥材（中檢所：121072-201611），枸杞子對(duì)照藥材（中檢所：121117-2019110），薄層G板（自制），所用其他試劑均為分析純（analytical reagent，AR）。

2 方法與結(jié)果

2.1 膏方性狀 膏方的外觀(guān)性狀、色澤、氣味見(jiàn)表2。

表2 不同批次溫補(bǔ)氣血膏方的外觀(guān)性狀、色澤、氣味

2.2 膏方相對(duì)密度 依據(jù)2020年版《中華人民共和國(guó)藥典》（下文簡(jiǎn)稱(chēng)《中國(guó)藥典》）[7]第四部通則0601煎膏劑中相對(duì)密度的測(cè)定方法進(jìn)行測(cè)量，取供試品適量，加水約2倍，混勻作為供試品溶液。按下式計(jì)算，結(jié)果應(yīng)符合各品種項(xiàng)下的有關(guān)規(guī)定。

（式中W1為比重瓶?jī)?nèi)供試品溶液的重量，單位為g；W2為比重瓶?jī)?nèi)水的重量，單位為g）

取供試品15 g，加水30 g，混勻，按照2020年版《中國(guó)藥典》通則0601相對(duì)密度測(cè)定法中的比重瓶法進(jìn)行測(cè)定。3批次溫補(bǔ)氣血膏方的相對(duì)密度結(jié)果見(jiàn)表3。

表3 不同批次溫補(bǔ)氣血膏方相對(duì)密度測(cè)定結(jié)果

煎膏劑的密度控制在1.3～1.4之間，平均相對(duì)密度為1.33。批次間差異較低，質(zhì)量較穩(wěn)定。

2.3 不溶物 依據(jù)2020年版《中國(guó)藥典》第四部通則0183煎膏劑中不溶物的測(cè)定方法。取供試品5 g，加60～80℃的蒸餾水200 ml，攪拌使溶化，放置3 min后，觀(guān)察，不得有焦屑等物質(zhì)。三批次的不溶物觀(guān)察結(jié)果見(jiàn)表4。

2.4 裝量差異 本膏方為用小包裝單劑量包裝，依據(jù)2020年版《中國(guó)藥典》第四部通則0942最低裝量檢查法（適用于標(biāo)示裝量以重量計(jì)的制劑）檢查。

重量法，除非另有規(guī)定，取供試品5個(gè)，除去外蓋和標(biāo)簽，容器外壁清潔并干燥，分別精密稱(chēng)定重量，除去內(nèi)容物，容器洗凈并干燥，再分別精密稱(chēng)定空容器的重量，求出每個(gè)容器內(nèi)容物的裝量與平均裝量，結(jié)果應(yīng)全部符合相關(guān)規(guī)定。如有1個(gè)容器裝量不符合規(guī)定，則另取5個(gè)（50 g以上者3個(gè)）復(fù)試，直至全部符合規(guī)定。標(biāo)示裝量為20～50 g，平均裝量不得少于標(biāo)示裝量，每個(gè)容器的裝量不得少于標(biāo)示裝量的95%。

設(shè)定內(nèi)容物的標(biāo)示裝量為28 g。取供試品3批次，每批次抽檢5個(gè)。精密稱(chēng)定空包裝膜的重量，再稱(chēng)重裝好膏的整體重量。求出每袋裝量和平均裝量。結(jié)果見(jiàn)表5。

2.5 膏滋含水量 溫補(bǔ)氣血膏方3個(gè)批次各2～5 g，精密稱(chēng)定，按照2020年版《中國(guó)藥典》0832水分測(cè)定法中的第二法（烘干法）進(jìn)行含水量測(cè)定。三批樣品測(cè)定結(jié)果見(jiàn)表6。

表6 不同批次溫補(bǔ)氣血膏方膏滋含水量測(cè)定結(jié)果

2.6 薄層色譜鑒別 膏方成分較復(fù)雜，應(yīng)用2020年版《中國(guó)藥典》第四部通則0502薄層色譜法分離鑒別膏方樣品中的各組分。

2.6.1 白芍的薄層色譜鑒別：取樣品5 g，加60～80℃的蒸餾水15 ml使其溶解，放冷，加乙醚各15 ml，振搖2次，棄去乙醚液；水液用正丁醇提取兩次，每次15 ml，合并正丁醇液，用15 ml水洗滌后，正丁醇液蒸干，殘?jiān)蛹状? ml使溶解，作為供試品溶液；按處方配比取各味藥材（白芍除外）適量，同法制成陰性對(duì)照溶液；另取芍藥苷對(duì)照品，加甲醇制成1 ml含3.2 mg的對(duì)照品溶液。吸取上述3種溶液各5 μl，分別點(diǎn)于同一以羧甲基纖維素鈉為粘合劑的硅膠G薄層板上，使成條狀，以三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-濃氨試液（8∶1∶2∶0.1）為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，晾干。噴5%香草醛硫酸溶液，加熱至斑點(diǎn)顯色清晰。供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色藍(lán)紫色斑點(diǎn)，陰性無(wú)干擾。見(jiàn)圖1。

圖1 白芍的薄層色譜測(cè)定結(jié)果

2.6.2 茯苓的薄層色譜鑒別：取樣品10 g，加乙醚回流1 h，濾過(guò)，濾液蒸干，殘?jiān)蛹状? ml使溶解，作為供試品溶液；按處方配比取各味藥材（茯苓除外）適量，同法制成陰性對(duì)照溶液；另取茯苓對(duì)照藥材0.4 g，同法制成陰性對(duì)照溶液。上述3種溶液各吸取5 μL，分別點(diǎn)于同一以羧甲基纖維素鈉為粘合劑的硅膠G薄層板上，使成條狀，以甲苯-乙酸乙酯-甲酸（20∶5∶0.5）為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，晾干。噴2%香草醛硫酸溶液-乙醇（4∶1），在105℃加熱至斑點(diǎn)顯色清晰。供試品色譜中，在與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色斑點(diǎn)，陰性有干擾。見(jiàn)圖2。

圖2 茯苓的薄層色譜測(cè)定結(jié)果

2.6.3 枸杞子的薄層色譜鑒別：取樣品5 g，加60～80℃的蒸餾水25 ml使溶解，放冷后，用乙酸乙酯振搖提取兩次（20 ml、15 ml），合并乙酸乙酯液，蒸干，殘?jiān)右宜嵋阴?ml使溶解，作為供試品溶液；按處方配比取各味藥材(枸杞子除外)適量，同法制成陰性對(duì)照溶液；另取枸杞子對(duì)照藥材0.2 g，加水50 ml煮沸5 min，過(guò)濾，濾液用乙酸乙酯振搖提取兩次（20 ml、15 ml），合并乙酸乙酯液，蒸干，殘?jiān)右宜嵋阴? ml使溶解，作為對(duì)照藥材溶液。上述3種溶液各吸取10 μL，分別點(diǎn)于同一以羧甲基纖維素鈉為粘合劑的硅膠G薄層板上，使成條狀，以甲苯-甲醇-冰醋酸（40∶8∶0.1）為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，晾干，置紫外燈（365 nm）下檢視。供試品色譜中，在與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色斑點(diǎn)，陰性有干擾。見(jiàn)圖3。

圖3 枸杞子的薄層色譜測(cè)定結(jié)果

2.7 微生物限度 取3個(gè)批次的溫補(bǔ)氣血膏，分別取10 g，加入pH 值7.0 氯化鈉-蛋白胨緩沖液至100 ml，混勻，制成1∶10供試液。取1∶10 供試液適量，按照2020年版《中國(guó)藥典》第四部通則1105微生物計(jì)數(shù)法的平皿法進(jìn)行測(cè)定。微生物限度標(biāo)準(zhǔn)：需氧菌數(shù)≤1 000 cfu/g，霉菌數(shù)≤100 cfu/g，不得檢出大腸埃希菌。測(cè)定結(jié)果符合藥典中相關(guān)微生物限量標(biāo)準(zhǔn)。結(jié)果見(jiàn)表7。

表7 不同批次溫補(bǔ)氣血膏方的微生物限度檢測(cè)結(jié)果

3 討論

膏方，又名膏劑，屬于中醫(yī)里丸、散、膏、丹、酒、露、湯、錠八種劑型之一，有外敷和內(nèi)服兩種。通常人們說(shuō)的膏方就是內(nèi)服膏方，又稱(chēng)為膏滋，是經(jīng)過(guò)多道工序?qū)⒅兴庯嬈磸?fù)煎熬，蒸發(fā)濃縮后摻入某些輔料而制成的一種稠厚狀半流質(zhì)。目前內(nèi)服膏方又分為成方膏滋藥（市場(chǎng)上、藥店銷(xiāo)售的現(xiàn)成膏方）和臨方膏滋藥（經(jīng)過(guò)醫(yī)師針對(duì)患者進(jìn)行辨證處方，做到一人一方、一人一膏）兩種[8]。由于不同處方藥材種類(lèi)不同，不同膏劑制作流程又有差異，因此制作流程應(yīng)按照國(guó)家規(guī)定的相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)對(duì)工藝流程中的關(guān)鍵環(huán)節(jié)進(jìn)行質(zhì)量控制，以使膏方的制備工藝流程符合科學(xué)化、合理化、規(guī)范化[9]。中醫(yī)膏方在臨床領(lǐng)域發(fā)揮的作用日益顯著，《江蘇中醫(yī)膏方臨床應(yīng)用專(zhuān)家共識(shí)（2021）》的出臺(tái)進(jìn)一步規(guī)范了膏方的臨床應(yīng)用和制備工藝。但由于膏方制作的相關(guān)設(shè)備、工作人員素質(zhì)、質(zhì)量管理標(biāo)準(zhǔn)等多個(gè)因素各不相同，導(dǎo)致制成的中藥膏方成品質(zhì)量差別很大。因此，有必要對(duì)膏方制備工藝和質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行進(jìn)一步研究。本研究抽查了對(duì)我院制定的三個(gè)批次的溫補(bǔ)氣血膏，并按照質(zhì)量相關(guān)檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)對(duì)膏方進(jìn)行了各方面鑒定。

3.1 溫補(bǔ)氣血膏外觀(guān)性狀、色澤、氣味質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn) 通過(guò)觀(guān)察我院三批次溫補(bǔ)氣血膏的外觀(guān)性狀、色澤、氣味，外觀(guān)性狀為半流體、無(wú)焦屑，色澤黑褐色，氣味微甜，符合膏方相關(guān)質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。

3.2 溫補(bǔ)氣血膏的相對(duì)密度、不溶物標(biāo)準(zhǔn) 國(guó)內(nèi)學(xué)者研究發(fā)現(xiàn)，成品膏的相對(duì)密度與膏方成品的質(zhì)量呈正相關(guān)，與含水量呈負(fù)相關(guān)[10]。河源市中醫(yī)院溫補(bǔ)氣血膏方經(jīng)過(guò)兩次煎煮，濾出，濃縮收膏，膏體的平均相對(duì)密度在1.33左右，無(wú)焦屑，符合煎膏劑的要求。

3.3 溫補(bǔ)氣血膏的膏滋含水量標(biāo)準(zhǔn) 既往研究顯示，如果加水量、煎煮次數(shù)過(guò)少，有效成分析出太少，已經(jīng)溶出的藥效成分會(huì)被藥渣重新吸附，影響膏方的質(zhì)量和療效；如果加水量、煎煮次數(shù)過(guò)多，容易導(dǎo)致有效成分被稀釋而濃度降低，且藥液量增多，影響下一步的濃縮效率，同時(shí)導(dǎo)致膏方中出現(xiàn)較多的無(wú)效成分，嚴(yán)重影響膏方質(zhì)量[11]。溫氣補(bǔ)血膏制作過(guò)程合并兩次濾液后濃縮，嚴(yán)格控制收膏過(guò)程，其連續(xù)三批次膏滋含水量平均為42.01%。

3.4 溫補(bǔ)氣血膏的薄層色譜鑒別實(shí)驗(yàn)質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn) 芍藥的薄層色譜組分鑒別結(jié)果表明：供試品和陰性對(duì)照液顯示的斑點(diǎn)分離效果較佳，陰性對(duì)照液在供試品主斑點(diǎn)相應(yīng)位置處無(wú)斑點(diǎn)出現(xiàn)，說(shuō)明在該薄層色譜條件下，溫補(bǔ)氣血膏中的其他組分不干擾測(cè)定組分的鑒別。該方法專(zhuān)屬性強(qiáng)，可作為溫補(bǔ)氣血膏的薄層色譜定性鑒別組分的質(zhì)量控制方法。而茯苓、枸杞子的薄層色譜鑒別試驗(yàn)結(jié)果中，陰性對(duì)照液均出現(xiàn)干擾的主斑點(diǎn)，方法專(zhuān)屬性不強(qiáng)，不建議作為定性鑒別膏方組分的標(biāo)準(zhǔn)方法。

3.5 溫補(bǔ)氣血膏的含水量測(cè)定及微生物限度標(biāo)準(zhǔn) 含水量測(cè)定結(jié)果表明我院的溫氣補(bǔ)血膏含水量較低，小包裝密封，不容易霉變，利于保存。對(duì)連續(xù)三批次溫補(bǔ)氣血膏的微生物學(xué)進(jìn)行驗(yàn)證，各指標(biāo)完全符合國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)。為達(dá)到更好的保存效果，保證膏方的保存質(zhì)量和微生物檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)，建議膏方保存時(shí)溫度和相對(duì)濕度不能太高，同時(shí)應(yīng)注意制作和包裝過(guò)程的環(huán)境及人員衛(wèi)生，應(yīng)嚴(yán)格遵循中藥制作流程的衛(wèi)生檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)。

綜上，通過(guò)對(duì)溫補(bǔ)氣血膏方的膏滋相對(duì)密度、不溶物、裝量差異、微生物限度檢查、膏滋含水量、薄層色譜定性鑒別組分等質(zhì)量穩(wěn)定性指標(biāo)進(jìn)行了研究測(cè)定，基本確定了溫補(bǔ)氣血膏方的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)評(píng)價(jià)方法，通過(guò)研究證實(shí)溫補(bǔ)氣血膏方在現(xiàn)有制備條件下，質(zhì)量可控，擬定的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)可行。在日后的生產(chǎn)過(guò)程中需嚴(yán)格執(zhí)行相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)，為市民提供質(zhì)量穩(wěn)定可控的膏方，亦可為其他膏方的質(zhì)量控制研究提供參考依據(jù)。