腫瘤異常蛋白在肺癌診斷中的應(yīng)用價值研究

肖驪錦，郭瑩

（錦州醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院，遼寧 錦州 121000 ）

盡管醫(yī)學(xué)的發(fā)展和治療手段的進(jìn)步，肺癌的發(fā)生率和死亡率仍然很高，早發(fā)現(xiàn)、早診斷仍是我們診治肺癌的關(guān)鍵?；颊咴谠缙诤苌俦憩F(xiàn)與肺癌有關(guān)的癥狀與體征，致使難以早期發(fā)現(xiàn)或就診已為晚期。針對目前肺癌早期篩查的主要手段是低劑量計算機(jī)斷層掃描，由于早期肺癌多表現(xiàn)為肺結(jié)節(jié)，與良性肺內(nèi)淋巴結(jié)或非鈣化肉芽腫容易混淆，導(dǎo)致假陽性結(jié)果較多見。腫瘤標(biāo)志物在血液中存在不同程度的異常表達(dá)，是早期發(fā)現(xiàn)腫瘤的一個指標(biāo)，但傳統(tǒng)腫瘤標(biāo)志物普遍在靈敏度、特異度方面較差，不能很好的輔助診斷。病理組織活檢作為肺癌診斷金標(biāo)準(zhǔn)，是一種有創(chuàng)的檢查，具有一定危險性，患者面臨巨大恐懼，普遍不能接受。更加準(zhǔn)確的基因檢測技術(shù)等，價格更加高昂，難以普遍開展。

尋找更準(zhǔn)確、簡便的檢測方法來進(jìn)行肺癌的早期篩查和診斷就尤為重要。大量研究報道，腫瘤異常蛋白（tumor abnormal protein,TAP）是癌細(xì)胞增殖過程中糖蛋白糖鏈結(jié)構(gòu)或加工酶基因異常表達(dá)的糖蛋白，在惡性腫瘤細(xì)胞異常增殖時表達(dá)明顯增加，一旦這些物質(zhì)達(dá)到一定體積，它們就會進(jìn)入血液，并大量留在外周血中［1］。在早期腫瘤細(xì)胞異常時即可監(jiān)測腫瘤動態(tài)，通過數(shù)量上的變化趨勢提示病情。在腫瘤的發(fā)生、進(jìn)展、轉(zhuǎn)移、預(yù)后都有顯著影響［2］。已發(fā)現(xiàn)TAP 在肺癌早期的檢出率較高［3］，對肺癌的診斷具有一定的輔助作用。因此，本研究將TAP 與其他腫瘤標(biāo)志物相比較，探討TAP 在肺癌早期診斷、病情判斷及療效評估中的意義。

1 資料與方法

1.1 一般資料

收集2021 年6 月至2022 年6 月于錦州醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院住院的159 例肺癌患者和89 例非腫瘤患者的臨床資料。159 例肺癌患者中，男89 例，女70 例；年齡26～82 歲，平均（62.25±9.09）歲；浸潤程度為T1～2患者89 例，浸潤程度T3～4患者70 例；有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移37 例，無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移122 例；Ⅰ和Ⅱ期患者58 例，Ⅲ和Ⅳ期患者101 例。89 例非腫瘤患者中，男65 例，女24 例；年齡37～77 歲，平均（61.92±8.91）歲。60 例手術(shù)治療患者中，男35 例，女25 例；年齡26～78 歲，平均（60.63±9.32）歲。納入標(biāo)準(zhǔn)：均完善腫瘤異常蛋白、腫瘤標(biāo)志物、凝血功能檢測；病理組織活檢為初診肺癌。排除標(biāo)準(zhǔn)：診斷不明確或合并有其他部位腫瘤；既往已行抗腫瘤治療；患有免疫缺陷、糖尿病、結(jié)核病等干擾TAP 結(jié)果的疾??；臨床資料不完全者。

1.2 TAP 檢測

從被測試者的指尖提取第一滴和第二滴新鮮全血，并涂抹在載玻片上作為準(zhǔn)備。自然風(fēng)干后，使用TAP 檢測試劑盒和檢測系統(tǒng)（浙江瑞盛醫(yī)療科技有限公司）檢測TAP。在顯微鏡下觀察凝聚粒子，并測量凝聚粒子的粒子面積。TAP 與試劑發(fā)生反應(yīng)，產(chǎn)生結(jié)晶狀凝結(jié)物。當(dāng)TAP 為陽性時，凝聚物面積≥225 μm2，TAP 為弱陽性時，凝聚物面積為121～225 μm2，TAP 為陰性時，凝聚物面積＜121 μm2。

1.3 統(tǒng)計學(xué)方法

采用SPSS 25.0 統(tǒng)計學(xué)軟件對納入的數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計分析，并使用R 4.1.0 軟件進(jìn)行繪圖。計量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示，兩組間比較采用獨立樣本或配對t檢驗；計數(shù)資料以百分率（%）表示，兩組間比較使用χ2檢驗；以受試者工作特征（receiver operating characteristic,ROC）曲線評價TAP 及3 種傳統(tǒng)腫瘤標(biāo)志物在肺癌中的診斷效能，并比較曲線下面積（area under curve,AUC）、敏感性、特異性；TAP 與肺癌組臨床病理特征的關(guān)系采用Spearman 相關(guān)性檢驗分析。P＜0.05 為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兩組受試對象TAP 表達(dá)水平比較

肺癌組TAP凝聚物面積為（172.545±45.131）μm2，非腫瘤組TAP 凝聚物面積為（107.767±21.294）μm2，肺癌組TAP 表達(dá)水平明顯高于非腫瘤組，兩組間差異有統(tǒng)計學(xué)意義（t=12.761，P＜0.001）。

2.2 TAP 與傳統(tǒng)腫瘤標(biāo)志物的相關(guān)性分析

通過相關(guān)性分析，得出TAP、癌胚抗原（carcino embryonic antigen,CEA）、胃泌素釋放肽前體（progastrin releasing peptide,ProGRP）、細(xì)胞角蛋白19 片段（cytokeratin 19 fragment,CYFRA21-1）之間的相關(guān)性，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。并通過R 4.1.0 軟件中的corrplot 包繪制相關(guān)性熱圖。見圖1。

圖1 TAP、CEA、ProGRP、CYFRA21-1 之間的相關(guān)性熱圖

2.3 TAP 與傳統(tǒng)腫瘤標(biāo)志物對肺癌的診斷效能研究

繪制關(guān)于TAP 和3 種傳統(tǒng)腫瘤標(biāo)志物的ROC 曲線，結(jié)果顯示TAP 檢測曲線下面積最大，AUC=0.894（95%CI：0.853～0.936），而 CEA，ProGRP，CYFRA21-1 的ROC 曲線下面積分別為0.811、0.658 和0.706。并且TAP 診斷靈敏度為85.40%，特異度為91.00%，高于CEA、ProGRP、CYFRA21-1 的靈敏度0.755、0.818、0.563 和特異度0.809、0.483、0.876。見圖2。

圖2 TAP、CEA、ProGRP、CYFRA21-1 診斷肺癌的ROC 曲線

2.4 肺癌患者TAP 表達(dá)與臨床資料的關(guān)系

159 例肺癌患者中，不同性別、年齡、分型的外周血TAP 表達(dá)水平比較，差異均無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）；浸潤程度為T3～4的患者TAP 陽性表達(dá)水平高于T1～2患者（P＜0.05），有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者TAP 陽性表達(dá)高于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者（P＜0.05）；Ⅲ+IV 期肺癌患者TAP 表達(dá)水平明顯高于I+II 期患者，且隨著臨床分期的提高，TAP 表達(dá)水平也跟著增高，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。肺癌患者浸潤程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、臨床分期與TAP 的表達(dá)呈正相關(guān)，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。見表1、表2。

表1 臨床資料與TAP 表達(dá)的關(guān)系（例）

表2 臨床病理資料與TAP 表達(dá)的相關(guān)性

2.5 TAP 表達(dá)與手術(shù)前后的關(guān)系

肺癌組中60 例手術(shù)治療患者，術(shù)后1 個月復(fù)查外周血TAP 為（154.540±31.004）μm2，低于手術(shù)前的（175.429±36.382）μm2，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（t=14.193,P＜0.001）。

3 討論

肺癌是臨床致死率最高的惡性腫瘤之一，其早期癥狀缺乏特異性，導(dǎo)致診斷困難。四分之三的病例就診時已處于疾病晚期［4］，通常錯過最佳治療時機(jī)，從而增加死亡風(fēng)險。因此，較早發(fā)現(xiàn)并診斷為肺癌，始終是臨床研究的熱點。近年來，越來越多的學(xué)者致力于研究腫瘤的發(fā)生、發(fā)展和預(yù)后，以更好提高患者的生存，延長患者生命。尋找能夠早期診斷腫瘤發(fā)展的可靠生物標(biāo)志物，對肺癌患者的治療及預(yù)后更是有著舉足輕重的意義。許多研究表明TAP 對腫瘤的早期篩查、診斷和預(yù)后具有敏感性和特異性［5-6］。

TAP 又被稱為腫瘤異常糖鏈糖蛋白，由國外學(xué)者伽利欣最早發(fā)現(xiàn)［7］，是正常細(xì)胞癌變時，細(xì)胞膜上的蛋白質(zhì)發(fā)生異常糖基化［8-9］，形成幾十種糖鏈結(jié)構(gòu)異常的糖蛋白［10］。當(dāng)異常糖蛋白達(dá)到一定的數(shù)量，釋放到外周血中，通過檢測外周血中是否存在異常糖鏈糖蛋白及其含量的多少，即TAP 檢測，來預(yù)測腫瘤的發(fā)生和發(fā)展。TAP 檢測特異識別“糖鏈”結(jié)構(gòu)而不同于常規(guī)腫瘤標(biāo)志物檢測，它是對同一反應(yīng)體系中多種腫瘤標(biāo)志物的綜合反應(yīng)，如糖蛋白抗原系列等。解決了抗原抗體反應(yīng)一次只能檢測一種特異性物質(zhì)，無法實現(xiàn)腫瘤的個體化檢測的問題，有效地降低漏檢率，提高腫瘤檢測的準(zhǔn)確率。對常見腫瘤敏感，用于多種腫瘤標(biāo)志物的檢測，如乳腺癌、結(jié)腸癌、胃癌等［11-12］，還對一些單獨檢測不出的標(biāo)志物有效。臨床試驗數(shù)據(jù)表明TAP 檢測的靈敏度為83.9%，特異性為96.5%，準(zhǔn)確率高達(dá)80.4%。正常細(xì)胞惡變，分子生物學(xué)改變比細(xì)胞形態(tài)學(xué)改變和影像學(xué)改變更早。有文章表明［8］TAP 檢測可提前1 至3 年發(fā)現(xiàn)腫瘤的存在。同JIA 等［13］提出的，TAP檢測比發(fā)現(xiàn)臨床體征和相關(guān)癥狀以及惡性腫塊早兩年的觀點相似。因此，外周血TAP 的檢測可能向我們較早做出提示，同時血液中TAP 的含量隨著腫瘤的發(fā)展而增加，間接反映癌細(xì)胞的數(shù)量和程度，也是早期發(fā)現(xiàn)癌癥的重要線索。

本文對159 例肺癌患者及89 例非腫瘤患者外周血TAP 檢測進(jìn)行比較，發(fā)現(xiàn)肺癌組TAP 表達(dá)為（172.545±45.131）μm2，明顯高于非腫瘤組（107.767±21.294）μm2（t=12.761,P＜0.001），丁好［14］、黃婷婷等［15］提出肺癌患者中TAP 表達(dá)水平明顯高于健康人群，同本研究TAP 在肺癌中表達(dá)水平較高相一致。說明TAP 在肺癌篩查和診斷中具有一定意義。腫瘤早期可發(fā)生外周血TAP 的變化，在腫瘤異常蛋白檢測系統(tǒng)中可顯示。本研究進(jìn)一步通過相關(guān)性分析，得出TAP、CEA、ProGRP、CYFRA21-1 之間具有相關(guān)性，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。說明TAP 與傳統(tǒng)腫瘤標(biāo)志物一樣都能對肺癌診斷給出一定指導(dǎo)，之間互相聯(lián)系。再次證明TAP 檢測是多種腫瘤標(biāo)志物的綜合表現(xiàn)。張紅軍等［16］提出TAP 是腫瘤異常蛋白的綜合體現(xiàn)，與傳統(tǒng)腫瘤標(biāo)志物具有很好的相關(guān)性，這與本研究的結(jié)果相一致。進(jìn)一步繪制ROC 曲線，得出TAP 的曲線下面積為0.894（95%CI：0.853～0.936），靈敏度為0.854，特異度為0.910，均高于其他三項腫瘤標(biāo)志物，CEA、ProGRP、CYFRA21-1 的靈敏度為0.755、0.818、0.563 和特異度為0.809、0.483、0.876。說明TAP 對肺癌的診斷效能相比于其他三項指標(biāo)更佳。袁仁順等［17］通過ROC 曲線比較TAP 和CEA、癌抗原19-9（CA19-9）對結(jié)直腸癌的診斷效能，得出TAP 在結(jié)直腸癌的早期診斷有更高價值。吳昊程等［18］對膽道惡性腫瘤中TAP、CA19-9、CEA 及糖類抗原CA125 的表達(dá)進(jìn)行比較分析，發(fā)現(xiàn)TAP 較其他腫瘤指標(biāo)的靈敏度和特異度高。均與本研究得出TAP 有較高診斷效能相一致。

對肺癌組患者臨床資料與TAP 表達(dá)分析，得出在159 例肺癌組患者中，浸潤程度為T3～4的肺癌患者TAP 表達(dá)水平高于浸潤程度為T1～2的肺癌患者（P＜0.05），有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的肺癌患者陽性表達(dá)高于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的肺癌患者（P＜0.05），臨床分期為Ⅲ+Ⅳ的肺癌患者TAP 表達(dá)率高于臨床分期為Ⅰ+Ⅱ的肺癌患者，并且臨床分期越高，TAP 表達(dá)水平越高（P＜0.05）。肺癌患者的浸潤程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況、臨床分期與TAP 的表達(dá)呈正相關(guān)（r=0.214,P=0.007；r=0.292,P＜0.001；r=0.232,P=0.003），提示患者的浸潤程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、臨床分期是影響外周血TAP 表達(dá)的重要因素，TAP對腫瘤患者病情判斷有重要意義，能指導(dǎo)后續(xù)治療方案。TAP 表達(dá)水平與患者的性別、年齡、病理類型比較，差異均無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。與徐瑞彤等［19］、劉哲等［20］、李艷杰等［21］報道的TAP 與臨床分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移等臨床病理特征參數(shù)分析相符。但與黃婷婷等［15］報道TAP 僅在肺癌伴有胸腔積液及有遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移者有相關(guān)性，與患者其他臨床特征參數(shù)無明顯相關(guān)報道存在差異，考慮與選擇的樣本差異有關(guān)。

最后，為了評估TAP 表達(dá)與手術(shù)前后關(guān)系，對肺癌組中手術(shù)治療的60 例患者，比較術(shù)前和術(shù)后1 個月TAP 表達(dá)水平，發(fā)現(xiàn)術(shù)后TAP 表達(dá)為（154.540±31.004）μm2，低于手術(shù)前的（175.429±36.382）μm2（P＜0.05）。與黃亮等［22］提出TAP 在乳腺癌手術(shù)后表達(dá)明顯下降相同，說明外周血TAP 檢測是預(yù)測治療療效的有價值指標(biāo)。

綜上所述，外周血TAP 在肺癌中高表達(dá)，且靈敏度和特異度較傳統(tǒng)腫瘤標(biāo)志物更好，與臨床病理特征密切相關(guān)，還能作為手術(shù)治療后療效評估指標(biāo)，可見TAP 檢測可作為肺癌的輔助診斷方法。在一些良惡性判斷困難的肺部疾病中，TAP檢測具有較強(qiáng)應(yīng)用價值。