黑曲霉ZJ-17 配合有機肥和化肥施用對白芷生長、產(chǎn)量和品質(zhì)的影響

劉思琴，江美彥，劉仁浪，張宇柔，侯 凱，馮冬菊，徐東北，鄭全林，吳 衛(wèi)*

（1 四川農(nóng)業(yè)大學(xué)農(nóng)學(xué)院，四川成都 611130；2 四川全泰堂川白芷產(chǎn)業(yè)有限公司, 四川成都 629000）

中藥白芷為傘形科植物白芷Angelicadahurica(Fisch.ex Hoffm) Benth.et Hook.f.或杭白芷Angelica dahurica(Fisch.ex Hoffm) Benth.et Hook.f.var.formosana(Boiss) Shan et Yuan 的干燥根，始載于《神農(nóng)本草經(jīng)》，被列為中品，在我國有著悠久的藥食兩用的歷史[1-2]。白芷藥材中的主要藥效成分是香豆素[3]，包括歐前胡素、異歐前胡素和氧化前胡素等[4]。長期以來一直作為中藥用于治療感冒、發(fā)熱引起的頭痛和傷口引起的疼痛[5]。在食品、保健品、香料和美容等方面也有廣泛的用途[6-7]。白芷適應(yīng)性很強，喜溫暖濕潤氣候，宜種植在土層深厚、疏松肥沃的砂質(zhì)壤土地[8]?，F(xiàn)藥用的白芷主要有川白芷、杭白芷、禹白芷和祁白芷等4 大藥材商品[9]。川白芷主產(chǎn)于四川遂寧、安岳等地，其中遂寧白芷種植歷史最久，其產(chǎn)量和品質(zhì)都最佳，為道地藥材[10-11]。但目前川白芷生產(chǎn)中存在盲目施肥，嚴(yán)重影響其產(chǎn)量和品質(zhì)等問題，采用適宜有效的綠色種植技術(shù)迫在眉睫。

我國農(nóng)業(yè)生產(chǎn)中化肥過量施用問題較為普遍，肥料利用率不高、資源浪費、環(huán)境污染等問題時有發(fā)生?！笆奈濉逼陂g，我國政府提出化肥減量增效目標(biāo)為到2025 年末全國農(nóng)用化肥施用量實現(xiàn)穩(wěn)中有降，三大糧食作物化肥利用率達(dá)到43%[12]。隨著人口的增加和耕地的減少，作物增產(chǎn)與生態(tài)環(huán)境保護(hù)的矛盾將日益尖銳，實現(xiàn)化肥減量增效是農(nóng)業(yè)綠色可持續(xù)發(fā)展的必然要求[13]。研究發(fā)現(xiàn)根際促生菌具有分解土壤內(nèi)部營養(yǎng)物質(zhì)[14]、分泌生長素[15]、調(diào)節(jié)植物生命周期某些或所有階段植物體內(nèi)促生菌含量[16]、抑制有害菌生長[17]等作用，從而可促進(jìn)作物生長，提高作物產(chǎn)量[18-21]和品質(zhì)[22]。但關(guān)于根際促生菌應(yīng)用于白芷的研究報道很少。隨著中藥材市場的擴大與發(fā)展，中藥材產(chǎn)業(yè)優(yōu)質(zhì)高效發(fā)展越來越關(guān)鍵。因此在白芷中應(yīng)用根際促生菌并將其推廣具有重要意義。本研究前期從白芷根際分離出一株具有固氮、溶磷和解鉀活性的真菌黑曲霉ZJ-17，盆栽試驗發(fā)現(xiàn)其對白芷具有促生作用，因此推測黑曲霉ZJ-17 在田間對白芷生長、產(chǎn)量和品質(zhì)也具有促進(jìn)效果，本試驗利用此黑曲霉ZJ-17 制成微生物菌劑，與化肥和有機肥聯(lián)合使用，探究其在田間的實際促生效果，以期為實現(xiàn)白芷高產(chǎn)、優(yōu)質(zhì)和綠色種植提供科學(xué)支撐。

1 材料和方法

1.1 試驗地概況

試驗點設(shè)在四川省遂寧市船山區(qū)唐家鄉(xiāng)余建村白芷生產(chǎn)基地 (30°50′N，105°57′E)。試驗地為平地，年平均氣溫為16.7℃～17.4℃，年平均降雨量是887.3～927.6 mm，前茬為白芷，土壤為灰潮土，土壤理化性質(zhì)：pH7.8，有機質(zhì)含量為10.41 g/kg，堿解氮含量為24.34 mg/kg，速效磷含量為12.66 mg/kg，速效鉀含量為78.10 mg/kg。

1.2 田間試驗

田間試驗始于2021 年9 月，為一年期試驗，共設(shè)置8 個處理，T0：不施肥；T1：半肥；T2：全肥；T3：半肥+種施黑曲霉ZJ-17；T4：半肥+黑曲霉ZJ-17 灌根；T5：全肥+種施黑曲霉ZJ-17；T6：全肥+黑曲霉ZJ-17 灌根；T7：全肥+種施市售黑曲霉，每個處理重復(fù)3 次，共24 個小區(qū)，小區(qū)面積20 m2(5 m×4 m)，隨機區(qū)組排列。

黑曲霉ZJ-17 真菌置于PDA 培養(yǎng)基中，28℃恒溫培養(yǎng)箱培養(yǎng)7 天后，收集黑曲霉孢子，加入無菌水，調(diào)整其濃度為3.0×108CFU/mL，按照30 L/hm2施用量，每個小區(qū)0.06 L，稀釋100 倍，將市面購買黑曲霉孢子粉的濃度調(diào)整一致。播前覆上油枯，施入磷酸鈣和硫酸鉀，開溝播種，按行距40 cm 進(jìn)行條播，最后將稀釋后的菌液均勻澆在種子表面 (次年3 月為灌根施用)。當(dāng)白芷株高4～7 cm 時，進(jìn)行1～2 次間苗，株距10 cm。全肥量為油枯750 kg/hm2、尿素139.5 kg/hm2、過磷酸鈣2193.8 kg/hm2、硫酸鉀240 kg/hm2，半肥量為上述肥料施用量減半。尿素分3 次施用，即苗肥 (12 月)、冬肥 (次年2 月)、春肥 (次年3 月)，施用比例為2:5:3；過磷酸鈣與硫酸鉀分2 次施用 (底肥、春肥)，施用比例為5:5。施用時將3 種化肥混勻撒入土壤中。有機肥作為底肥施用。其余栽培措施與當(dāng)?shù)卦耘啻胧┍３忠恢隆０总破贩N為四川農(nóng)業(yè)大學(xué)吳衛(wèi)教授選育的‘川芷2 號’白芷品種，原植物為杭白芷Angelicadahurica(Fisch.ex Hoffm) Benth.et Hook.f.var.formosana(Boiss) Shan et Yuan。供試菌株為課題組前期從‘川芷2 號’根際土壤分離篩選的黑曲霉 (Aspergillusniger) ZJ-17 菌株，具有較強固氮、溶磷和解鉀活性；另市場購買黑曲霉孢子粉 (有效活菌數(shù)≥100 億/g，沂源康源生物科技有限公司)。

1.3 測定項目及方法

2021 年9 月播種后連續(xù)取樣至次年收獲期，每兩月進(jìn)行1 次采樣，分別為2021 年11 月及2022 年1 月、3 月、5 月和7 月收獲期。每次每個小區(qū)取5 株有代表性、長勢一致、健康無病蟲害的白芷植物樣品，測定株高、根長和根粗。于收獲期測產(chǎn)[23]。采用高效液相色譜法[24]測定白芷歐前胡素、異歐前胡素、氧化前胡素、白當(dāng)歸素、佛手柑內(nèi)酯、白當(dāng)歸腦和水合氧化前胡素含量，參照《土壤農(nóng)化分析》測定氮、磷、鉀含量[25]，熒光定量法測定收獲期白芷土壤中黑曲霉ZJ-17 定植率。根據(jù)黑曲霉ZJ-17 基因序列，參考Rinttil?等[26]的方法進(jìn)行實時熒光定量PCR 反應(yīng)引物序列設(shè)計，熒光定量PCR 反應(yīng)體系見表1。

表1 實時熒光定量PCR 反應(yīng)體系Table 1 Real-time fluorescence quantitative PCR

1.4 數(shù)據(jù)處理

采用Excel 2016、SPSS 23.0 和GraphPad Prism 8等軟件進(jìn)行統(tǒng)計分析和作圖。

2 結(jié)果與分析

2.1 黑曲霉在白芷根際的定植情況

從圖1 可知，種施菌劑后黑曲霉均能有效定植于土壤，且其定植率與僅施肥料處理差異顯著(P<0.05)，在全肥條件下種施ZJ-17 菌劑 (T5)的定植率最高，與半肥條件下種施黑曲霉ZJ-17 菌劑處理(T3)差異不顯著。種施市售黑曲霉 (T7)也能定植于土壤，定植率顯著高于不施肥(T0)處理 (P<0.05)。種施菌劑處理黑曲霉定植情況顯著優(yōu)于菌劑灌根處理。因此，種施黑曲霉ZJ-17 菌劑更有助于其在土壤中定植。

圖1 不同處理土壤中黑曲霉基因拷貝數(shù)Fig.1 A.niger gene copies in different treatment soils

2.2 黑曲霉ZJ-17 對白芷株高的影響

從表2 可見，施肥促進(jìn)了白芷的生長，尤其是收獲前兩個月 (5 月下旬)的效果達(dá)到顯著水平 (P<0.05)。全肥條件下，收獲期T5 處理株高較T2 處理顯著提高11.57% (P<0.05)。與市售黑曲霉 (T7)相比，在11 月下旬T5 處理的株高顯著增加，生長后期(2022–01–28 至2022–07–21)二者無顯著性差異。半肥條件下，種施黑曲霉ZJ-17 菌劑 (T3)處理白芷的株高在2022 年5 月下旬、7 月下旬與T1 無顯著差異，與菌劑灌根處理 (T4)比，苗期(2021–11–30)株高顯著增加，其他時期無顯著差異。

表2 不同處理各時期白芷株高 (cm)Table 2 Plant height of A.dahurica var.formosana under different treatments in each period

2.3 黑曲霉ZJ-17 對白芷根長的影響

從表3 可知，與不施肥 (T0)比，施肥后白芷的根長總體都增長。全肥條件下，種施黑曲霉ZJ-17 菌劑 (T5) 與僅全肥 (T2) 處理比較，白芷的根長在2022 年1 月下旬、3 月下旬和收獲期(2022–07–21)均顯著增加 (P<0.05)，收獲期該處理下白芷根長達(dá)21.19 cm，較僅全肥處理顯著增加10.85% (P<0.05)。與市售黑曲霉 (T7)比，T5 在在2022 年11 月下旬根長顯著增加24.52% (P<0.05)，生長后期無顯著性差異。半肥條件下，種施黑曲霉ZJ-17 菌劑 (T3)白芷與僅半肥 (T1)處理比較，白芷根長在2022 年3 月下旬和收獲期均顯著增加 (P<0.05)。種施黑曲霉ZJ-17 菌劑與灌根處理比，生長后期白芷的根長差異不顯著。

表3 不同處理各時期白芷根長 (cm)Table 3 Root length of A.dahurica var.formosana under different fertilizer treatments in each period

2.4 黑曲霉ZJ-17 對白芷根粗的影響

從表4 可知，與不施肥 (T0)比，施用全肥后白芷的根粗均顯著增加 (P<0.05)。全肥條件下，種施黑曲霉ZJ-17 菌劑 (T5) 處理與僅全肥 (T2) 處理比較，白芷的根粗在各時期均顯著增加 (P<0.05)，收獲期根粗最大，可達(dá)50.23 mm，顯著提高16.70%，比市售黑曲霉處理 (T7)顯著提高10.69% (P<0.05)。半肥條件下，種施黑曲霉ZJ-17 菌劑 (T3)處理與僅半肥 (T1)處理比較，白芷的根粗從苗期至2022 年3 旬下旬均顯著增加 (P<0.05)。種施黑曲霉ZJ-17 菌劑處理與菌劑灌根處理比較，在收獲期全肥條件下差異顯著 (P<0.05)。

表4 各時期不同處理白芷的根粗 (mm)Table 4 Root thickness of A.dahurica var.formosana under different fertilizer treatments in each period

2.5 黑曲霉ZJ-17 對白芷產(chǎn)量和經(jīng)濟效益的影響

由表5 可知，與不施肥 (T0)相比，施肥后白芷的產(chǎn)量均提高，全肥 (T2) 處理白芷產(chǎn)量顯著提高19.55% (P<0.05)。全肥條件下，種施黑曲霉ZJ-17 菌劑 (T5)處理的產(chǎn)量、總產(chǎn)值和經(jīng)濟效益 (注：當(dāng)年市場價為7.5 元/kg，鮮貨)與僅全肥 (T2)處理比均顯著增加，產(chǎn)量顯著增加16.33%，經(jīng)濟效益顯著增加19.94% (P<0.05)，與不施肥 (T0)處理比產(chǎn)量顯著增加32.69% (P<0.05)，與市售黑曲霉 (T7)處理比產(chǎn)量和經(jīng)濟效益均無顯著性差異。半肥條件下，施加黑曲霉ZJ-17 菌劑處理的產(chǎn)量、總產(chǎn)值和經(jīng)濟效益與僅半肥處理比無顯著差異。產(chǎn)量和總產(chǎn)值由大到小排序為：全肥+種施黑曲霉ZJ-17 (T5)>全肥+種施市售黑曲霉 (T7)>全肥+黑曲霉ZJ-17 灌根 (T6)>全肥(T2)>半肥+種施黑曲霉ZJ-17 (T3)>半肥+黑曲霉ZJ-17 灌根 (T4)>半肥 (T1)>不施肥 (T0)，產(chǎn)量分別為24819、24819、26529、26529、22064、22197、20706、17857 kg/hm2。經(jīng)濟效益排序為：全肥+種施黑曲霉ZJ-17 (T5)>全肥+種施市售黑曲霉 (T7)>全肥+黑曲霉ZJ-17 灌根 (T6)>半肥+種施黑曲霉ZJ-17(T3)>全肥 (T2)>半肥+黑曲霉ZJ-17 灌根 (T4)>半肥 (T1)>不施肥 (T0)。由此可知，全肥條件下，在播期施用黑曲霉ZJ-17 菌劑能顯著提高白芷產(chǎn)量(P<0.05)，總產(chǎn)值達(dá)198966 元/hm2，經(jīng)濟效益可達(dá)160066 元/ hm2。

表5 各處理白芷產(chǎn)量和經(jīng)濟效益Table 5 Yield and economic benefit of A.dahurica var.formosana under different fertilizer treatments

2.6 黑曲霉ZJ-17 對白芷養(yǎng)分積累的影響

從收獲期各處理白芷地上部養(yǎng)分積累量(圖2a)可以看出，與不施肥 (T0)對照比較，施用全肥(T2) 后白芷地上部氮、磷和鉀積累量均顯著增加(P<0.05)。全肥條件下，種施黑曲霉ZJ-17 菌劑(T5)后白芷地上部磷積累量顯著增加，與市售黑曲霉處理 (T7)比，白芷地上部磷和鉀積累量顯著增加(P<0.05)。種施黑曲霉菌劑 (T5)白芷地上部磷和鉀積累量與該菌劑灌根處理 (T 6) 比顯著提高(P<0.05)。從收獲期各處理白芷地下部分養(yǎng)分積累量(圖2b)可以看出，與不施肥 (T0)相比，施用全肥(T2)后白芷地下部分氮、磷和鉀積累量分別顯著增加40.38%、32.65%和34.55% (P<0.05)。全肥條件下，種施黑曲霉ZJ-17 菌劑 (T5) 后，白芷地下部氮、磷和鉀的積累量與僅全肥(T2)處理比分別顯著增加37.73%、21.18%和28.75%，且T5 處理白芷養(yǎng)分積累量顯著高于菌劑灌根處理 (T6) (P<0.05)；與市售黑曲霉處理 (T7)比，白芷地下部氮和鉀積累量顯著增加 (P<0.05)。半肥條件下，種施黑曲霉ZJ-17 菌劑 (T3)與僅半肥(T1)處理相比白芷地下部氮和鉀的積累量也顯著增加 (P<0.05)。

圖2 收獲期不同處理白芷養(yǎng)分積累量Fig.2 Nutrient accumulation of A.dahurica var.formosana at harvest stage under different treatments

2.7 黑曲霉ZJ-17 對白芷香豆素類成分含量的影響

通過測定白芷根部7 種香豆素發(fā)現(xiàn)，白芷歐前胡素、佛手柑內(nèi)酯、白當(dāng)歸素和水合氧化前胡素含量在生育期內(nèi)總體呈先下降后上升的趨勢，但不同種類香豆素變化趨勢不盡一致(圖3a)。歐前胡素含量在2022 年5 月下旬較高，此時無論在半肥還是全肥條件下，種施黑曲霉ZJ-17 菌劑處理與僅半肥(T1) 和僅全肥(T2) 處理比白芷歐前胡素含量均提高，最高可達(dá)4.46 mg/g。收獲時，半肥條件下黑曲霉ZJ-17 種施 (T3)和灌根(T4)處理后的歐前胡素含量較僅半肥(T1)處理分別提高9.82%和13.73%，全肥條件下種施菌劑 (T5)處理與僅全肥 (T2)處理比，在5 月下旬歐前胡素含量明顯升高，7 月下旬差異不明顯。由圖3c 和圖3d 可知，氧化前胡素和白當(dāng)歸腦含量總體先上升再降低，收獲期，在半肥條件下黑曲霉ZJ-17 菌劑種施和灌根處理與僅半肥處理比氧化前胡素和白當(dāng)歸腦含量均增加。由圖3b 可知，隨著時間的推移，異歐前胡素含量整體逐漸上升，2022 年3 月下旬至5 月下旬上升速率最快，在收獲期，半肥條件下種施ZJ-17 菌劑 (T3)處理異歐前胡素含量最高，與僅半肥 (T1)處理和僅全肥 (T2)處理比分別增加22.45% 和26.53%，與市售黑曲霉(T7)處理比增加46.94%。由圖3e 和圖3g 可知，半肥條件下，黑曲霉ZJ-17 菌劑灌根 (T4)處理與僅半肥(T1)處理比，在生長后期佛手柑內(nèi)酯和水合氧化前胡素含量迅速增加，在收獲期分別比半肥 (T1)處理增加26.09%和25.00%。

圖3 不同處理白芷各時期香豆素類成分含量Fig.3 Coumarin contents of A.dahurica var.formosana under different treatments in each period

2.8 黑曲霉ZJ-17 對白芷香豆素類成分積累量的影響

由圖4a、c、和e、f、g 發(fā)現(xiàn)，與不施肥 (T0)相比，施肥后白芷歐前胡素、氧化前胡素、佛手柑內(nèi)酯、白當(dāng)歸素和水合氧化前胡素積累量均顯著增加(P<0.05)。全肥條件下，種施黑曲霉ZJ-17 菌劑(T5)與僅全肥 (T2)處理比較，除佛手柑內(nèi)酯積累量無顯著性差異外，其他香豆素類成分積累量均顯著增加，其中歐前胡素和異歐前胡素分別增加34.83%和22.67% (P<0.05)。種施菌劑 (T5)處理與菌劑灌根(T6) 處理相比，各香豆素類成分積累量均顯著增高，與市售黑曲霉 (T7)處理比各香豆素類成分積累量也均顯著增高 (P<0.05)。由圖4a、b、c、d 可知，半肥條件下，種施黑曲霉ZJ-17 菌劑 (T3)處理白芷與僅半肥 (T1)處理比白芷歐前胡素、異歐前胡素、氧化前胡素和白當(dāng)歸腦積累量分別顯著增加26.92%、34.65%、30.45%和34.83%，種施菌劑 (T3)白芷歐前胡素、異歐前胡素、氧化前胡素和白當(dāng)歸腦積累量均顯著高于黑曲霉ZJ-17 菌劑灌根 (T4) 處理(P<0.05)，佛手柑內(nèi)酯和白當(dāng)歸素含量二者無顯著差異。由此，種施黑曲霉ZJ-17 菌劑能顯著提高白芷歐前胡素、異歐前胡素、氧化前胡素和白當(dāng)歸腦積累量，且效果顯著優(yōu)于黑曲霉ZJ-17 菌劑灌根處理和市面售賣黑曲霉處理 (P<0.05)。

圖4 不同處理收獲期白芷香豆素類成分積累量Fig.4 Accumulation of coumarins in A.dahurica var.formosana at harvest stage

3 討論

3.1 白芷的生長指標(biāo)和產(chǎn)量

研究表明植物根際促生真菌具有促進(jìn)植物生長、提高植物抗逆性，增加作物產(chǎn)量和提高質(zhì)量的作用[27]。在目前化肥農(nóng)藥大量施用破壞生態(tài)環(huán)境的背景下，促生菌作為生物制劑，在農(nóng)業(yè)、林業(yè)和環(huán)境修復(fù)等方面具有良好應(yīng)用前景[28]。

課題組前期通過篩選白芷根際促生菌發(fā)現(xiàn)，所篩促生綜合潛力最強的真菌為黑曲霉ZJ-17，其具有較強的固氮、溶磷、溶鉀活性，與不施菌對照處理相比，接種菌株ZJ-17 后，遂寧土壤白芷的株高、根粗、地上鮮重和根鮮重均顯著增長，崇州土壤白芷的株高和根鮮重均顯著增加[29]。本試驗結(jié)果進(jìn)一步證實，在大田生產(chǎn)條件下，黑曲霉ZJ-17 與有機肥和化肥聯(lián)合使用確實可明顯促進(jìn)白芷生長，其植株株高、根長和根粗均明顯高于不施肥處理以及全肥處理，白芷單位面積產(chǎn)量也明顯增加。在全肥條件下，播種期施用菌劑處理的產(chǎn)量明顯高于未施用菌劑處理，增產(chǎn)率16.33%，產(chǎn)量最大值為26529 kg/hm2，與市面售賣黑曲霉處理間差異不顯著；半肥條件下施用黑曲霉ZJ-17 菌劑能保證其不減產(chǎn)，且與僅全肥處理差異不明顯，說明黑曲霉ZJ-17 菌劑確實能替代部分化肥用量。究其原因，可能是施入土壤中的根際促生菌株能改善植物根際營養(yǎng)環(huán)境，增加了對作物營養(yǎng)的供應(yīng)，對植物生長和發(fā)育起到促進(jìn)作用[30]。王丹等[31]發(fā)現(xiàn)巨大芽孢桿菌在正常氮磷供應(yīng)條件下改善了油菜生長，促進(jìn)了油菜對P、K、Zn 和B 等營養(yǎng)元素的吸收。申佳麗等[32]將膠質(zhì)芽孢桿菌菌液對小黃瓜進(jìn)行灌根，結(jié)果發(fā)現(xiàn)小黃瓜根中鉀、磷，莖中鉀、氮，小黃瓜葉中磷、鉀受到顯著影響。本試驗的進(jìn)一步測定分析也發(fā)現(xiàn)，全肥條件下，播期施加黑曲霉ZJ-17 菌劑后白芷地下部分全氮、全磷和全鉀的積累量均顯著增加。半肥條件下，播期施加黑曲霉ZJ-17 菌劑白芷地下部分全氮和全鉀的積累量也顯著增加。據(jù)此認(rèn)為，施加黑曲霉ZJ-17 能增強白芷獲得養(yǎng)分的能力，進(jìn)而促進(jìn)其生長和產(chǎn)量提升。

3.2 白芷的品質(zhì)

本研究中供試黑曲霉ZJ-17 對白芷品質(zhì)也有明顯促進(jìn)作用。至于全肥條件下施加黑曲霉ZJ-17 菌劑處理白芷的生長性狀及產(chǎn)量高于半肥條件下施加菌劑者，但半肥條件下施加菌劑處理白芷的香豆素含量明顯升高的原因，推測與全肥條件下施加黑曲霉ZJ-17 菌劑處理的白芷根生長較快，根比較粗大，韌皮部在根中所占比例較小，其分泌組織分布較少，香豆素含量相對較低有關(guān)。曾有學(xué)者研究發(fā)現(xiàn)白芷香豆素相對含量與直徑間呈非正相關(guān)關(guān)系[33]。馬逾英等[34]測定了兩個產(chǎn)地不同商品等級 (注：主要根據(jù)根大小劃分等級)川白芷樣品，也發(fā)現(xiàn)三等品總香豆素含量均高于一、二等品。雷雨恬等[35]研究也表明白芷6 種香豆素成分含量的總和以三等品最高，一等品最低。本試驗還發(fā)現(xiàn)，全肥條件下施用黑曲霉ZJ-17，盡管白芷香豆素含量未提升，但其香豆素成分積累量均明顯增加，這與江美彥等[29]的研究結(jié)果一致，進(jìn)一步表明黑曲霉ZJ-17 對白芷品質(zhì)確實具有明顯影響，但如何將黑曲霉ZJ-17 與化肥和有機肥合理配施，在提高產(chǎn)量的同時也增加主要有效成分含量值得進(jìn)一步探討。本試驗中，施用黑曲霉ZJ-17 條件下白芷香豆素累積量顯著高于市售黑曲霉處理，充分說明從白芷根際分離的促生菌黑曲霉ZJ-17 更適合用于白芷專用微生物肥料的開發(fā)利用。

3.3 黑曲霉ZJ-17 施用時間分析

本試驗還探討了黑曲霉ZJ-17 菌劑的最佳施用時間。研究表明，微生物肥料不是速效肥，所以，要在作物的營養(yǎng)臨界期和大量吸收期前7～10 天施用效果最佳。同時對不同作物或同一作物的不同時期，要選用不同的施用方法。最適施用時間是清晨和傍晚或無雨陰天，避免陽光中紫外線將肥料中的微生物殺死[36]。種肥15 kg 配施不同量微生物菌劑，玉米根莖性狀及產(chǎn)量均明顯優(yōu)于微生物肥料和高于常規(guī)施肥[37]。本研究中，半肥條件下，播期施用該菌劑使苗期白芷株高和根粗明顯增加；全肥條件下播期施用該菌劑使大部分生長階段白芷的株高、根長和根粗均明顯增加。至于次年3 月施用黑曲霉ZJ-17菌劑對白芷生長無明顯促進(jìn)作用，可能與菌劑施入時間短，菌的定植率相對低有關(guān)。綜合考慮，建議實際生產(chǎn)中于播期施入該菌劑。

4 結(jié)論

常規(guī)有機肥和化肥用量下，播期種子表面澆施黑曲霉ZJ-17 菌劑能顯著促進(jìn)白芷生長、養(yǎng)分吸收和香豆素類成分積累量，促進(jìn)白芷生長，提高白芷產(chǎn)量和品質(zhì)，提高了經(jīng)濟效益。本實驗室鑒定的黑曲霉ZJ-17 菌株制備的菌劑效果顯著好于市售菌劑，但采用生育中期 (3 月)灌根的方法施用該菌劑的效果不明顯。在半肥條件下，種施黑曲霉ZJ-17 菌劑可顯著提高白芷根中的歐前胡素和異歐前胡素含量，但產(chǎn)量和經(jīng)濟效益不及全肥條件下種施黑曲霉ZJ-17 菌劑處理。需進(jìn)一步研究實際生產(chǎn)中，保障產(chǎn)量且增加主要有效成分含量的肥料用量。