奶牛細管凍精人工授精技術要點

文│劉芬（西藏自治區(qū)拉薩市畜牧獸醫(yī)總站）

歐珠措姆（西藏自治區(qū)墨竹工卡縣扎雪鄉(xiāng)人民政府）

人工授精在奶牛配種中被廣泛應用，更多的是用于加速新品種擴繁，一般采用直腸把握輸精法。

一、奶牛發(fā)情鑒定

人工授精過程中最基本的是要判斷母牛是否發(fā)情和發(fā)情后母牛的最佳授精時間。有的母牛在發(fā)情后表現(xiàn)明顯，有的母牛發(fā)情后表現(xiàn)不明顯，甚至不會表現(xiàn)出發(fā)情癥狀，實際生產(chǎn)中常用無生育能力的公牛進行試情。

1.奶牛的發(fā)情特征。發(fā)情是母牛性活動的表現(xiàn)，大致分為3個時期：發(fā)情初期、發(fā)情盛期和發(fā)情末期，準確掌握發(fā)情規(guī)律是提高人工授精受胎率的關鍵。

（1）發(fā)情初期。母牛表現(xiàn)出興奮不安、喜叫、反應敏感，喜歡爬跨其他牛，但不愿意讓其他牛爬跨；陰門開始腫脹，流出雞蛋清樣、透明的黏液，黏性差；陰道壁充血而潮紅。

（2）發(fā)情盛期。母牛接受爬跨，被爬跨時主動舉尾拱背，四肢站立不動，排尿頻繁；陰門腫大飽滿，柔軟而松弛，陰唇黏膜充血、潮紅、有光澤，從陰道排出的黏液增多，像玻璃棒狀，具有很強的牽縷性，俗稱“吊線”，易黏著于尾根、臀端或后肢飛關節(jié)處的被毛上；子宮頸紅潤，頸口開張，約能容納一個手指。

（3）發(fā)情末期。母牛性欲逐漸消失，轉入平靜期，不再接受爬跨，子宮頸口慢慢閉合；陰道黏膜充血、潮紅現(xiàn)象逐漸消退，從陰道流出的黏液逐漸變白且濃厚黏稠，量減少，牽縷性差。

2.奶牛發(fā)情鑒定。確定母牛發(fā)情的方法稱為發(fā)情鑒定，母牛發(fā)情鑒定的主要方法有外部觀察法、直腸檢查法和陰道檢查法3種。

（1）外部觀察法。發(fā)情早期，母牛陰門開始腫脹，陰門濕潤，流出黏液量逐漸增多，呈絲縷狀掛在陰門下方。發(fā)情末期，外陰部腫脹稍微減退，流出較黏的乳白色渾濁狀黏液，此時是人工授精的最佳時期；再往后黏液量少并黏稠，逐漸從乳白色變?yōu)闇\黃紅色。如果觀察到母牛排出較多的血液（俗稱“排紅”），通常在發(fā)情后的2～3天。

（2）直腸檢查法。檢查者穿好工作服，衣袖挽起，戴長臂手套，將五指并攏成錐形伸進母牛的直腸內(nèi)，隔著直腸壁觸摸檢查卵泡的發(fā)育情況，以便確定配種時期。

（3）陰道檢查法。用開腔器打開母牛陰道，借助一定光源觀察陰道黏膜的色澤、黏液性狀及子宮頸口開張情況，判斷母牛發(fā)情程度。發(fā)情母牛陰道黏膜充血潮紅，表面光滑濕潤；子宮頸外口充血、松弛、柔軟開張，排出大量透明、具有牽縷性的黏液，不易掛斷。

二、細管凍精的解凍

凍精的解凍操作關系到配種后的受胎率。在掌握標準解凍操作的同時也應學會凍精活力的檢測。如果因為凍精活力不達標，而我們又沒有及時檢測，也會對受胎率造成非常大的影響。

1.解凍前的準備工作。物品的準備：存放好凍精的液氮罐、長鑷子、凍精剪刀、解凍杯、兩只不同廠家的溫度計、衛(wèi)生紙、計時器、輸精槍、輸精槍外套等。

2.凍精的保存。凍精必須存放在充滿液氮的生物容器（液氮罐）內(nèi)。

3.凍精的解凍。

（1）在干凈的解凍杯中加入適量的熱水和涼水，插入兩只不同廠家的溫度計，攪拌均勻，將水溫調(diào)至37～40℃。

（2）用長鑷子從液氮罐內(nèi)提取精液時，提桶的頂端提取高度要低于罐口8厘米，或者控制在霜白線以下。

（3）盡量在5秒鐘內(nèi)取出凍精細管，未能取出再放入液氮中至少10秒后重試；向另一液氮罐轉移凍精時，提筒離開液氮面的時間不能超過5秒。

（4）水浴解凍的容器最好能將細管凍精橫置，如果需將細管垂直放入，應將棉塞端朝下；取出凍精細管后輕甩尾部，或者在空氣中停留2～3秒，然后放入解凍杯中解凍15～45秒。

（5）拿干凈的紙巾或毛巾擦拭輸精槍頂端，將輸精槍溫度預熱到與體溫接近，并貼身保存。

（6）將解凍好的細管凍精用紙巾（毛巾）包裹吸干水分，核對種公牛信息，將細管綿塞端插入預熱好的輸精槍內(nèi)。

（7）用凍精剪刀將裝好的細管凍精封口端水平剪開，注意不要剪錯方向。

（8）將輸精槍外套套在裝好凍精的輸精槍上，下拉使細管卡在槍套頂部，推動槍芯，使精液到達輸精槍套頂端。

（9）將裝好凍精的輸精槍貼身存放，3～5分鐘之內(nèi)完成輸精操作。

（10）注意事項：全程避光操作，防止紫外線殺死精子。

4.凍精的活力檢測。凍精活力檢測前期凍精解凍操作與授精解凍操作一致，區(qū)別在于檢測凍精活力需要準備好顯微鏡、剪刀、載玻片、蓋玻片等物品。在解凍前把顯微鏡的電源連接上，使恒溫板預熱到38℃左右，同時將載玻片和蓋玻片也放在恒溫板上預熱。此時方可進行標準的解凍操作。

（1）將解凍好的細管凍精用紙巾（毛巾）吸干水分后平放，用凍精剪刀將細管前后三分之一處剪掉，留取細管中間三分之一段備用。

（2）將備用細管傾斜，一端精液流出，均勻地滴3滴在載玻片上，再將蓋玻片從一端輕輕地壓上去；將載玻片放在恒溫板上平衡30秒左右。

（3）平衡好以后調(diào)整目鏡，多尋找?guī)讉€活力視野點，找到最佳活力視野，將3片蓋玻片下方的活力都檢測一遍。

（4）如果顯微鏡沒有恒溫板需提前預熱，操作時間盡量在3分鐘之內(nèi)完成。

（5）普通常規(guī)凍精國家標準：凍精活力點35，畸形率小于18%，有效精子數(shù)不低于800萬。達不到標準的為不合格產(chǎn)品。

（6）及時將檢測結果進行登記存檔。

作為學習資源的微課程，提升了資源的實用性.對學生而言，微課程可滿足學生對不同知識點的個性化學習、按需選擇學習，既可查缺補漏又能強化鞏固知識，是傳統(tǒng)課堂學習的一種重要補充和拓展資源.對教師而言，微課程既使得教師的備課、教學和反思方面的資源更具有針對性和實效性，又成為校本研修、區(qū)域網(wǎng)絡和教師專業(yè)發(fā)展的重要途徑.由于微課程具有靈活性，資源建成之后并非一成不變，而是呈現(xiàn)半開放的形態(tài)，在不斷使用中動態(tài)更新，適應新的環(huán)境需求.

三、適時輸精

（1）一般母牛發(fā)情的外部表現(xiàn)持續(xù)時間為18～24小時，排卵發(fā)生在發(fā)情結束后的6～12小時，精子在母牛生殖道的存活時間為12～20小時；卵子排出后能保證正常受精的時間為6～12小時。

（2）母牛適宜輸精時間為發(fā)情后9～24小時，也可以在6～27小時內(nèi)配種。

（3）凌晨或上午發(fā)情的?？稍谙挛缁虬砼浞N，下午或傍晚發(fā)情的?？稍诘?天上午配種。約12小時后再次檢查，必要時再次輸精，有些發(fā)情持續(xù)時間長、排卵延遲的牛需第3次輸精，以確保精卵能結合受精。

四、輸精操作

1.輸精操作原則。輸精前對母牛和凍精進行檢查鑒定，嚴格執(zhí)行無菌操作規(guī)程，確定最佳輸精時間，正確的解凍處理技術，細致準確的輸精操作，做到“輕插、適深、慢推、緩出”，盡量縮短輸精時間。

2.輸精前的準備。

（1）物品的準備。存放好凍精的液氮罐、長鑷子、凍精剪刀、解凍杯、兩只不同廠家的溫度計、衛(wèi)生紙、計時器、輸精槍、輸精槍外套等。

（2）配種牛的準備。青年牛：13.5月齡以上，身高130厘米以上，體重380千克以上的發(fā)情牛；泌乳牛：頭胎牛產(chǎn)后61天，經(jīng)產(chǎn)牛產(chǎn)后51天以上的發(fā)情牛。

（1）先把母牛保定在配種架內(nèi)，尾巴用細繩拴好拉向一側。

（2）左手套上輸精手套，涂上潤滑劑或少量水，輕柔觸摸肛門，使肛門肌肉松弛。

（3）并攏左手手指形成錐形插入母牛直腸，邊塞邊轉動，以使手背和肛門周圍充分潤滑，觸摸子宮、卵巢、子宮頸的位置。

（4）分次掏出糞便，清洗消毒母牛外陰。避免努責，避免與直腸蠕動相逆的方向移動，避免空氣進入直腸引起直腸膨脹。

（5）左手插入母牛直腸向盆腔底部前后、左右探索子宮頸，縱向握在手中，手心朝右柔和握住子宮頸（宮頸外口在手中）。

（6）用前臂下壓會陰，使陰門開張；也可先將陰唇掰開（或由助手協(xié)助），把輸精器插入陰道后再將左手伸入直腸，這樣輸精器頭部不會碰到陰唇外部，不易被污染。

（7）右手趁勢將輸精槍約向上40°角插入10～15厘米越過尿道口，再轉為平插。

（8）向左手心中探插（可將宮頸靠在骨盆邊，并輕輕擠壓宮頸周圍的陰道壁，使輸精器只能進入子宮頸口，不會誤入陰道穹窿），或將宮頸拉向陰道方，憑手指感覺將輸精器套入子宮頸。

（9）插入頸口前扯出輸精器薄膜防塵軟外套。

（10）輸精器進入子宮頸外口后，可用改變方向、回抽、擺動、滾動等方法向前探插。

（11）左手將子宮頸前端稍作抬高，并向輸精器上套。

（12）感到暢通無阻后可觸摸到輸精器前端。

（13）向后抽退一點，勿使子宮壁堵住輸精器尖端出口。

（14）緩慢地將精液注入子宮體與子宮角結合部。熟練者可注入排卵側子宮角大彎處。

（15）輕輕抽出輸精器，完成操作。

五、結語

綜上所述，在奶牛配種中人工授精技術應用非常廣泛，通常使用直腸把握輸精法。在奶牛養(yǎng)殖過程中，使用人工授精技術可以迅速改良奶牛群基因庫，還能對很多偏遠地區(qū)的牛群進行品種改良，提高良種覆蓋率；應用的精液量較少，一次公牛射精量可分成多份對母牛進行人工授精；購買精液不僅能選擇優(yōu)良品種，還可以減少公牛飼養(yǎng)數(shù)量，為養(yǎng)殖場節(jié)省成本；同時可以有效避免公母牛之間的接觸，減少某些疾病通過直接接觸、消化道或呼吸道等進行傳播，有效控制疾病傳播。本文著重介紹了奶牛細管凍精人工授精的技術要點，希望為該人工授精技術的快速推廣提供支持，進而為奶牛養(yǎng)殖提供更好的技術支持。