一例蛋雞傳染性支氣管炎的診斷與防治

文│劉婷婷 馬妍 呂宗德（江蘇省南京市畜牧獸醫(yī)站）

朱冠全（江蘇省揚(yáng)中市三茅街道畜牧獸醫(yī)站）

雞傳染性支氣管炎（A v i a n infectious bronchitis）是由冠狀病毒科冠狀病毒屬雞傳染性支氣管炎病毒（IBV）引起的雞的一種急性高度接觸性呼吸道傳染病。其潛伏期短、發(fā)病快，具有非常強(qiáng)的傳染性，雛雞的死亡率可達(dá)30%及以上，但6周齡以上的死亡率很低。

該病一年四季均可發(fā)生，但在冬季和春季發(fā)生概率較高。該病主要通過(guò)呼吸道傳播，也可通過(guò)飼料、飼喂用具、污染的飲水經(jīng)消化道感染。此外，雞群過(guò)于擁擠，雞舍內(nèi)溫度太熱或太冷、通風(fēng)不暢、雞群缺乏維生素和礦物質(zhì)，以及飼料配比不當(dāng)或飼料供應(yīng)不足都會(huì)導(dǎo)致該病的發(fā)生。

各年齡的雞都會(huì)發(fā)病，其中雛雞的發(fā)病率最高，死亡率也高，多以40日齡以內(nèi)的雛雞最常見。雛雞感染會(huì)繼發(fā)其他病菌感染，以張口呼吸、發(fā)出啰音、咳嗽等呼吸道癥狀和生產(chǎn)性能下降為主要特征，臨床上多表現(xiàn)為假母雞、腎炎及產(chǎn)蛋量和蛋品質(zhì)下降。產(chǎn)蛋雞感染通常表現(xiàn)產(chǎn)蛋量降低，蛋品質(zhì)下降。因?yàn)樵摬》譃槎喾N血清型，并會(huì)不斷有新的變異株出現(xiàn)，給該病診斷及后期的治療效果帶來(lái)一定難度。此前，國(guó)內(nèi)就有雞傳染性支氣管炎病的報(bào)道，在不同地區(qū)均有發(fā)生，且雞傳染性支氣管炎病毒的血清型眾多，流行毒株也有地域差異。

一、發(fā)病情況

某蛋雞養(yǎng)殖場(chǎng)190日齡海蘭褐殼蛋雞2.1萬(wàn)羽，開產(chǎn)后產(chǎn)蛋率一直上不去，最高僅達(dá)75%，蛋殼質(zhì)量異常，次品蛋數(shù)量多、比例高，軟殼蛋、沙皮蛋多見，破蛋率高。場(chǎng)內(nèi)其他批次的蛋雞開產(chǎn)后無(wú)此類情況發(fā)生。

經(jīng)詢問(wèn)得知，該批次蛋雞非本場(chǎng)育雛，引進(jìn)的70日齡青年雞。引入雞群時(shí)供應(yīng)商僅提供了育雛期間的免疫程序，并無(wú)相關(guān)免疫抗體檢測(cè)證明，雞場(chǎng)也未對(duì)雞群開展相關(guān)疫病病原學(xué)抽檢。

二、臨床觀察

雞群整體精神狀態(tài)良好，群體采食量略低于正常。部分雞可見雞冠碩大鮮紅、羽毛光亮、體型健碩。解剖可見內(nèi)臟器官無(wú)明顯異常，但輸卵管發(fā)育不全，大部分病雞的輸卵管纖細(xì)且薄，有的輸卵管內(nèi)含白色或透明的液體，并混有白色絮狀物；有的輸卵管內(nèi)面形成盲端，與腹腔不通；有的輸卵管成為只有5～7厘米的纖細(xì)柱狀物。大部分病雞的卵巢正常，個(gè)別病雞的卵巢萎縮或變性。

三、實(shí)驗(yàn)室診斷

依據(jù)臨床發(fā)病情況和病理剖檢可初步判斷該批蛋雞在育雛早期感染了傳染性支氣管炎病毒，進(jìn)一步確診需進(jìn)行實(shí)驗(yàn)室RT-PCR診斷。

1.樣品的采集。無(wú)菌采集了4份公雞特征明顯的病雞咽喉-肛門雙拭子，放入盛有病毒保存液的離心管中，4～8℃冷藏箱保存，運(yùn)送至實(shí)驗(yàn)室。

2.儀器與試劑。核酸提取儀（美國(guó)應(yīng)用生物系統(tǒng)公司（ABI），型號(hào)：MagMAX Express）、熒光PCR儀（羅氏（Roche），型號(hào)：LightCycler 96）、病毒核酸提取試劑盒（美國(guó)應(yīng)用生物系統(tǒng)公司（ABI），批號(hào)：01077982）、雞傳染性支氣管炎病毒核酸測(cè)定試劑盒（北京森康生物科技有限公司，批號(hào)Q02-014-220520）。

3.試驗(yàn)方法。

（1）病毒RNA的提取。采用磁珠法進(jìn)行核酸提取，具體操作方法如下：在96孔提取板中，A排孔中各加20微升Bead Mix，130微升Lysis/Binding Solution，50微升樣品；B排孔和C排孔中各加入150微升Wash Solution 1；D排孔和E排孔中各加入150微升Wash Solution 2；F排孔中各加入50微升Elution Buffer。放入提取儀，選擇試劑盒匹配的程序，按“START”鍵，結(jié)束后F排中吸取核酸樣本。

（2）熒光RT-PCR擴(kuò)增。選擇25微升反應(yīng)體系，每個(gè)PCR反應(yīng)管內(nèi)分別加入19微升熒光RT-PCR反應(yīng)液、1微升酶混合物和5微升核酸樣本，設(shè)置陰、陽(yáng)性對(duì)照各1個(gè)，蓋緊管蓋，500轉(zhuǎn)/分鐘離心30秒。加樣后的PCR管放入熒光PCR儀，記錄樣品位置。反應(yīng)參數(shù)設(shè)置：

反轉(zhuǎn)錄42℃/15分鐘；

預(yù)變性95℃/3分鐘；

延 伸9 5 ℃/1 5 秒，5 3 ℃/1 0秒，60℃/30秒（采集熒光），循環(huán)40次。

選定F A M 檢測(cè)通道讀取檢測(cè)結(jié)果。

4.結(jié)果判定。

（1）質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)。陰性對(duì)照：無(wú)Ct值并且無(wú)擴(kuò)增曲線；陽(yáng)性對(duì)照：Ct值應(yīng)≤32，并出現(xiàn)典型的擴(kuò)增曲線。僅陰、陽(yáng)對(duì)照同時(shí)滿足以上條件時(shí)試驗(yàn)才成立。

（2）判定標(biāo)準(zhǔn)。無(wú)Ct值，且無(wú)特征性擴(kuò)增曲線的樣品判為陰性；Ct值應(yīng)≤36，且出現(xiàn)典型的擴(kuò)增曲線的樣品判為陽(yáng)性；Ct值＞36，且出現(xiàn)典型的擴(kuò)增曲線的樣品需進(jìn)行復(fù)檢，復(fù)檢仍出現(xiàn)上述結(jié)果判為陽(yáng)性，否則判為陰性。

（3）檢測(cè)結(jié)果。陰、陽(yáng)對(duì)照均成立，4份樣品中有1份陽(yáng)性，Ct值為32.08。說(shuō)明該雞群確實(shí)感染過(guò)雞傳染性支氣管炎病毒，且目前還存在帶毒的情況。

四、結(jié)果分析與處置

通過(guò)臨床表現(xiàn)和實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)結(jié)果可判斷，該雞群在育雛階段感染過(guò)雞傳染性支氣管炎病毒，且雞群仍然帶毒，部分雞只愈后輸卵管發(fā)育不良，導(dǎo)致不可逆的損傷，所以雞群產(chǎn)蛋率一直上不去。建議養(yǎng)殖場(chǎng)根據(jù)雞只外貌特征及時(shí)將疑似假母雞挑出單獨(dú)飼喂，確認(rèn)不產(chǎn)蛋后及時(shí)剔除，同時(shí)做好雞群的隔離與消毒工作，避免病毒傳播至其他雞舍。

五、防治措施

1.雞苗把控。選擇從優(yōu)質(zhì)的種雞場(chǎng)購(gòu)買雞苗，了解種雞場(chǎng)動(dòng)物疾病凈化情況和流行病學(xué)情況；引入青年雞的更要小心謹(jǐn)慎，了解育雛場(chǎng)的雞苗來(lái)源、雞群健康狀況、預(yù)防用藥情況，以及免疫過(guò)的疫苗，包括疫苗的名稱、種類和免疫時(shí)間。有條件的養(yǎng)殖場(chǎng)引入前可開展相關(guān)疾病免疫抗體水平和常見病病原的抽檢，以確保雞群質(zhì)量。

2.疫苗免疫。選擇與當(dāng)?shù)亓餍卸局晗嗥ヅ涞囊呙玳_展雞群免疫，雛雞的基礎(chǔ)免疫一定要選用活疫苗，加強(qiáng)免疫可用活疫苗和滅活疫苗聯(lián)合免疫。蛋雞傳染性支氣管炎病的免疫程序建議如下：1～3日齡，新支二聯(lián)活疫苗1倍劑量滴鼻或點(diǎn)眼或噴霧免疫；20日齡，新支二聯(lián)活疫苗1倍劑量滴鼻或點(diǎn)眼免疫；50～60日齡，新支二聯(lián)苗2倍量飲水免疫；105日齡新支減流四聯(lián)苗1倍量注射免疫；135日齡新支流三聯(lián)苗1倍劑量注射免疫；以后每2個(gè)月做1次新支二聯(lián)苗2倍量飲水免疫。

3.育雛管理。育雛前要對(duì)育雛雞舍做好消毒工作，尤其是發(fā)生過(guò)雞傳染性支氣管炎的雞舍，至少要空舍2～3個(gè)月，徹底清掃消毒，減少持續(xù)感染的可能。做好育雛舍保溫工作，濕度也要恒定，定期通風(fēng)，防止有害氣體濃度超標(biāo)，控制好飼養(yǎng)密度，避免雞群生存空間狹小、過(guò)擠。飼料營(yíng)養(yǎng)要全面，配比要合理，不同日齡的雞對(duì)營(yíng)養(yǎng)的需求也不同，要根據(jù)生長(zhǎng)情況及時(shí)做出調(diào)整，必要時(shí)可添加維生素或微生態(tài)制劑等營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，提高雞群抵抗力。

4.消毒滅源。重視場(chǎng)內(nèi)消毒工作，嚴(yán)格落實(shí)消毒制度。對(duì)進(jìn)出人員、車輛、場(chǎng)內(nèi)道路、器具、蛋筐及雞舍內(nèi)部都要定期開展消毒工作，場(chǎng)內(nèi)至少配備2種消毒藥，交替使用，并定期更換消毒藥的種類。有條件的雞場(chǎng)可以開展消毒效果試驗(yàn)，評(píng)估每次的消毒效果。