經(jīng)典名方溫膽湯物質(zhì)基準(zhǔn)總黃酮、柚皮苷和新橙皮苷含量測(cè)定

楊思雨，鄒妍，李寅慶，4，張紅梅

（1.上海中醫(yī)藥大學(xué) 中藥學(xué)院，上海 201203；2.中藥創(chuàng)新藥物研發(fā)上海高校工程研究中心，上海 201203；3.神威藥業(yè)集團(tuán)有限公司，河北 石家莊 051430；4.河北省經(jīng)典名方與現(xiàn)代中藥質(zhì)量過程控制重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，河北 石家莊 051430）

在國(guó)家中醫(yī)藥管理局頒布的《古代經(jīng)典名方目錄（第一批）》中，溫膽湯為第一批可進(jìn)行復(fù)方制劑簡(jiǎn)化注冊(cè)的經(jīng)典名方?！秱浼鼻Ы鹨健分嘘P(guān)于溫膽湯的記載為“半夏、竹茹、枳實(shí)各二兩，橘皮三兩，甘草一兩，生姜四兩，上六味?咀，以水八升煮取二升，分三服”［1］，主要用于治療神經(jīng)系統(tǒng)［2］、內(nèi)分泌系統(tǒng)［3-4］、消化系統(tǒng)［5］、心血管系統(tǒng)［6］等疾病。

目前關(guān)于溫膽湯及其加減方的報(bào)道，大多集中在臨床應(yīng)用及藥理作用方面，對(duì)于質(zhì)量控制方面的研究較少，主要集中在指紋圖譜的研究［7-8］及代表成分的含量測(cè)定［9-10］，對(duì)于評(píng)價(jià)溫膽湯的質(zhì)量提供了一定的方法，但是對(duì)于溫膽湯物質(zhì)基準(zhǔn)中所含化學(xué)成分無法整體了解，目前溫膽湯大類成分研究只見于多糖類成分［11］的報(bào)道。經(jīng)過前期研究以及查閱文獻(xiàn)發(fā)現(xiàn)［9］，溫膽湯中黃酮類成分最為豐富，是治療高血壓、動(dòng)脈粥樣硬化的主要活性成分［12］。黃酮類成分中又以柚皮苷和新橙皮苷含量為主，常作為評(píng)價(jià)溫膽湯質(zhì)量的指標(biāo)成分，具有促進(jìn)胃腸運(yùn)動(dòng)和抗?jié)兊茸饔茫?3-14］。

紫外分光光度法（Ultraviolet and visible spectrophotometry， UV）適用于總黃酮的測(cè)定，具有操作簡(jiǎn)便快速，準(zhǔn)確度高，精密度好的特點(diǎn)。目前黃酮類化合物測(cè)定法有直接測(cè)定法和比色法。比色法是將化合物加入顯色劑后測(cè)定吸光度再進(jìn)行換算測(cè)定的方法，常用的顯色方法有NaNO2-Al（NO3）3-NaOH法、AlCl3法、三乙胺法［15］。高效液相色譜（High performance liquid chromatography， HPLC）技術(shù)分辨率高、分析速度快且能夠?qū)崿F(xiàn)重復(fù)分析，藥品檢驗(yàn)時(shí)所需樣品量少，在藥品含量測(cè)定中有著較高的適用性［16］。

物質(zhì)基準(zhǔn)為經(jīng)典名方制劑研發(fā)過程中的基礎(chǔ)，是經(jīng)典名方制劑生產(chǎn)工藝和質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究的依據(jù)。本研究采用UV法測(cè)定溫膽湯物質(zhì)基準(zhǔn)中總黃酮含量，同時(shí)采用HPLC法測(cè)定溫膽湯物質(zhì)基準(zhǔn)中柚皮苷和新橙皮苷含量。為溫膽湯的進(jìn)一步研究和開發(fā)提供參考依據(jù)。

1 儀器與材料

1.1 儀器

Waters e2695 高效液相色譜儀（美國(guó)Waters公司）； Reprosil-Pur ODS-3 色譜柱（德國(guó)邁可公司）；UES1810001 紫外分光光度計(jì)（上海美普達(dá)儀器有限公司）；JYH-A30A1 全自動(dòng)煎藥壺（廣東佛山小熊電器有限公司）；7670571 臺(tái)式真空冷凍干燥機(jī)（美國(guó)拉博科公司）；CP224C 電子天平（d = 0.1 mg）［奧豪斯儀器（常州）有限公司］；KQ5200DE 超聲清洗器（昆山市超聲儀器有限公司）。

1.2 試劑與藥材

色譜純乙腈、甲醇、甲酸，均購自上海泰坦科技有限公司；水為娃哈哈純凈水，購自杭州娃哈哈集團(tuán)有限公司。對(duì)照品柚皮苷（批號(hào)：110722-201815；質(zhì)量分?jǐn)?shù)為98%）、新橙皮苷（批號(hào)：Z31J6L2067；質(zhì)量分?jǐn)?shù)為98%）均購自上海源葉生物科技有限公司。溫膽湯物質(zhì)基準(zhǔn)（自制，批號(hào)：20210101、20210102、20210103）。乙醇、氫氧化鈉、亞硝酸鈉、硝酸鋁均購自上海泰坦科技有限公司；氯化鋁購自上海潤(rùn)捷化學(xué)試劑有限公司；三乙胺購自國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司，以上試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 溫膽湯物質(zhì)基準(zhǔn)制備

稱取半夏、竹茹、枳實(shí)各6 g，陳皮9 g，甘草3 g，生姜12 g，加水1600 mL，先武火（500 W）煮沸后轉(zhuǎn)文火（200 W）煎煮，約3.5 h后，以80目濾布趁熱過濾，濾液放涼后加水至400 mL，得到溫膽湯提取液。提取液冷凍干燥（預(yù)凍溫度：-80℃；冷阱溫度：-45℃；真空度： ＜ 100 Pa），得到溫膽湯凍干粉，作為溫膽湯物質(zhì)基準(zhǔn)對(duì)應(yīng)實(shí)物。

2.2 總黃酮的含量測(cè)定

2.2.1 對(duì)照品溶液制備

取柚皮苷對(duì)照品適量，精密稱定，置于10 mL容量瓶中，加入70%乙醇溶解，并稀釋至刻度，制成202.2 μg/mL的對(duì)照品溶液。

2.2.2 供試品溶液制備

稱取溫膽湯物質(zhì)基準(zhǔn)20 mg，加入70%乙醇溶解，并稀釋至10 mL，稱定重量，超聲30 min，稱重，補(bǔ)足減失的重量，濾過。精密吸取過濾液1 mL，加70%乙醇定容至25 mL，即得。

2.2.3 總黃酮測(cè)定方法考察

總黃酮含量作為質(zhì)量控制指標(biāo)，常采用紫外-可見分光光度法測(cè)定。比色法應(yīng)用較廣的有NaNO2-Al（NO3）3-NaOH法、AlCl3法、三乙胺法。本研究考察并比較以上三種比色法與直接測(cè)定法對(duì)溫膽湯物質(zhì)基準(zhǔn)中總黃酮含量測(cè)定的影響，并確定含量測(cè)定方法。

2.2.3.1 直接測(cè)定法

量取濃度為202.2 μg/mL的柚皮苷對(duì)照品溶液1 mL，精密稱定，加 70%乙醇定容至10 mL。稱取溫膽湯對(duì)應(yīng)實(shí)物20 mg，加入70%乙醇，定容至10 mL，超聲30 min，濾過，量取過濾液1 mL加70%乙醇定容至25 mL。在波長(zhǎng)200 ～ 800 nm內(nèi)進(jìn)行掃描測(cè)定，見圖1。

圖1 直接測(cè)定法全波長(zhǎng)掃描圖Fig.1 Full spectrum scan of direct determination method

2.2.3.2 NaNO2-A（lNO3）3-NaOH法

量取濃度為202.2 μg/mL的柚皮苷對(duì)照品溶液0.03 mL，加入5% NaNO2溶液0.8 mL，10% Al（NO3）3溶液0.8 mL，4% NaOH溶液4 mL，加70%乙醇定容至10 mL。稱取溫膽湯對(duì)應(yīng)實(shí)物20 mg，加入70%乙醇，定容至10 mL，超聲30 min，濾過，取濾液0.03 mL，加入5% NaNO2溶液0.8 mL，10% Al（NO3）3溶液0.8 mL，4% NaOH溶液4 mL，加70%乙醇定容至10 mL。在波長(zhǎng)200 ～ 800 nm內(nèi)進(jìn)行掃描測(cè)定，見圖2。

圖2 硝酸鋁顯色法全波長(zhǎng)掃描圖Fig.2 Full spectrum scan of NaNO2-Al（NO3）3-NaOH method

2.2.3.3 AlCl3法

稱取AlCl30.13 g于10 mL容量瓶中，加入70%乙醇定容至刻度線，制成0.1 mol/L三氯化鋁溶液；醋酸-醋酸鈉緩沖液（pH值為5.2）制備，甲液為0.2 mol/L醋酸（量取114 μL冰醋酸用蒸餾水稀釋至10 mL），乙液為0.2 mol/L醋酸鈉（稱取醋酸鈉0.2722 g用蒸餾水稀釋至10 mL），量取甲液1.05 mL，乙液3.95 mL，混合，最后用蒸餾水稀釋至10 mL。量取濃度為202.2 μg/mL的柚皮苷對(duì)照品溶液0.6 mL，加入0.1 mol/L三氯化鋁溶液2 mL，醋酸-醋酸鈉緩沖液（pH值為5.2）2 mL，加 70%乙醇定容至10 mL。稱取溫膽湯物質(zhì)基準(zhǔn)20 mg，加入70%乙醇，定容至10 mL，超聲30 min，濾過，取濾液0.4 mL，加入0.1 mol/L三氯化鋁溶液2 mL，醋酸-醋酸鈉緩沖液（pH值為5.2）2 mL，加 70%乙醇定容至10 mL。在波長(zhǎng)200 ～ 800 nm內(nèi)進(jìn)行掃描測(cè)定，見圖3。

圖3 三氯化鋁顯色法全波長(zhǎng)掃描圖Fig.3 Full spectrum scan of AlCl3 method

2.2.3.4 三乙胺法

量取濃度為202.2 μg/mL的柚皮苷對(duì)照品溶液0.6 mL，加1%三乙胺乙醇溶液4 mL，加 70%乙醇定容于10 mL。稱取溫膽湯對(duì)應(yīng)實(shí)物20 mg，加入70%乙醇，定容至10 mL，超聲30 min，濾過，取濾液0.5 mL，加1%三乙胺乙醇溶液4 mL，加70%乙醇定容至10 mL。在波長(zhǎng)200 ～ 800 nm內(nèi)進(jìn)行掃描測(cè)定，見圖4。

圖4 三乙胺顯色法全波長(zhǎng)掃描圖Fig.4 Full spectrum scan of triethylamine method

按照上述方法分別測(cè)定溫膽湯物質(zhì)基準(zhǔn)總黃酮含量（n=3），結(jié)果見表1。四種測(cè)定方法的供試品溶液和對(duì)照品溶液峰的吸收特性均無明顯差異。但NaNO2-Al（NO3）3-NaOH法測(cè)定總黃酮含量時(shí)，容易受溶劑加入量和加入時(shí)間等影響，穩(wěn)定性差，最大吸收波長(zhǎng)處有雜峰干擾，需要現(xiàn)配現(xiàn)用，且重復(fù)性差；以AlCl3法測(cè)定總黃酮含量時(shí)，最大吸收波長(zhǎng)處吸收峰較鈍，最大吸收峰重復(fù)性差；三乙胺法與直接測(cè)定法最大吸收波長(zhǎng)重疊，未見紅移，因此無法判斷是試樣吸收還是反應(yīng)產(chǎn)物吸收?？紤]直接測(cè)定法偏差較小，重復(fù)性較好，且操作簡(jiǎn)便，因此選擇直接測(cè)定法測(cè)定總黃酮的含量，直接測(cè)定法在284 nm有最大吸收，且干擾較小，故選擇284 nm作為測(cè)定波長(zhǎng)。

表1 不同顯色方法測(cè)定溫膽湯總黃酮含量Tab.1 The determined content of total flavonoids in samples by different color developing method

2.2.4 標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制

精密量取柚皮苷對(duì)照品溶液1.0、1.5、2.0、2.5、3.0、4.0 mL，置于10 mL容量瓶中，加入70%乙醇溶解，并稀釋至刻度線，搖勻。按紫外-可見分光光度法（《中國(guó)藥典》2020年版四部通則0401）在284 nm波長(zhǎng)處測(cè)定吸光度（n=3），以吸光度為縱坐標(biāo)，濃度為橫坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，計(jì)算回歸方程，得到柚皮苷標(biāo)準(zhǔn)曲線Y= 24.462X+ 0.116（r= 0.9996），且柚皮苷在20.22 ～ 80.88 μg/mL范圍內(nèi)與吸光度呈良好的線性關(guān)系，見圖5。

圖5 柚皮苷對(duì)照品標(biāo)準(zhǔn)曲線Fig.5 Standard curve of naringin reference substance

2.2.5 精密度試驗(yàn)

按“2.7”項(xiàng)下制備供試品溶液，連續(xù)測(cè)定六次，結(jié)果測(cè)得供試品溶液的吸光度的RSD為0.18%，表明儀器精密度良好。

2.2.6 重復(fù)性試驗(yàn)

取同一批次溫膽湯對(duì)應(yīng)實(shí)物6份，按照“2.7”項(xiàng)下同法操作，測(cè)定各樣品吸光度，計(jì)算總黃酮含量，測(cè)得總黃酮含量的RSD為1.29%，表明重復(fù)性良好。

2.2.7 穩(wěn)定性試驗(yàn)

按“2.7”項(xiàng)下制備供試品溶液，于室溫分別放置0、20、40、60、80、100 min，計(jì)算總黃酮平均含量的RSD為0.07%，表明樣品溶液在100 min內(nèi)穩(wěn)定。

2.2.8 加樣回收率試驗(yàn)

取已知總黃酮含量的溫膽湯物質(zhì)基準(zhǔn)9份，每份約0.5 mL，分別按已知總黃酮量的80%、100%、120%加入柚皮苷對(duì)照品溶液，加入70%乙醇定容至25 mL，加樣回收率結(jié)果見表2。

表2 加樣回收率試驗(yàn)考察結(jié)果Tab.2 Results of recovery test

2.2.9 提取條件優(yōu)化

2.2.9.1 溶媒種類考察

稱取溫膽湯物質(zhì)基準(zhǔn)20 mg，分別加入水、70%甲醇和70%乙醇并定容至10 mL，超聲30 min，過濾，量取1 mL置于25 mL容量瓶中，加入對(duì)應(yīng)的提取溶媒至刻度線，搖勻。分別測(cè)定其吸光度值，按“2.3.4”項(xiàng)下標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算總黃酮含量，依次為11.42%、14.22%、14.96%，結(jié)果顯示當(dāng)提取溶媒為70%乙醇時(shí)，總黃酮含量測(cè)定值最高。

2.2.9.2 溶媒濃度考察

稱取溫膽湯物質(zhì)基準(zhǔn)20 mg，分別加入30%、50%、70%、90%、100%乙醇并定容至10 mL，超聲30 min，過濾，量取1 mL置于25 mL容量瓶中，加入對(duì)應(yīng)不同濃度的乙醇至刻度線，搖勻。分別測(cè)定其吸光度值，按“2.3.4”項(xiàng)下標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算總黃酮含量，依次為14.61%、12.44%、14.96%、12.66%、7.94%，結(jié)果顯示，當(dāng)提取溶媒濃度為70%乙醇時(shí)，總黃酮含量測(cè)定值最高，見圖6。

圖6 溫膽湯物質(zhì)基準(zhǔn)總黃酮含量提取溶媒濃度考察Fig.6 The determined content of total flavonoids in Wendan decoction from different extraction solvent concentration

2.2.9.3 提取時(shí)間考察

稱取溫膽湯物質(zhì)基準(zhǔn)20 mg，加入70%乙醇并定容至10 mL，分別超聲提取10、20、30、40、50 min，搖勻，并過濾，量取1 mL置于25 mL容量瓶中，加70%乙醇定容至刻度線，搖勻。分別測(cè)定其吸光度值，按“2.3”項(xiàng)下標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算總黃酮含量，依次為12.97%、14.03%、14.96%、13.96%、12.32%，結(jié)果顯示當(dāng)提取時(shí)間為30 min時(shí)，總黃酮含量值最高，見圖7。

圖7 溫膽湯物質(zhì)基準(zhǔn)總黃酮提取時(shí)間考察Fig.7 The determined content of total flavonoids in Wendan decoction from different extraction time

2.3 柚皮苷和新橙皮苷的含量測(cè)定

2.3.1 色譜條件

色譜柱為Reprosil-Pur ODS-3（5 μm，250 mm ×4.6 mm）；流動(dòng)相為乙腈-0.1%甲酸水；梯度洗脫：0 ～ 35 min，0% ～ 19.5%乙腈，35 ～ 36 min，19.5% ～35%乙腈，36 ～ 60 min，35% ～ 45%乙腈；檢測(cè)波長(zhǎng)283 nm；柱溫30℃；體積流量為0.8 mL/min；進(jìn)樣量為5 μL。色譜圖見圖8。

圖8 柚皮苷和新橙皮苷含量測(cè)定圖譜Fig.8 Chromatographic determination of naringin and neohesperidin

2.3.2 對(duì)照品溶液制備

取柚皮苷、新橙皮苷對(duì)照品適量，精密稱定，加甲醇溶解，分別制成質(zhì)量濃度為0.047、0.031 mg/mL的對(duì)照品溶液。

2.3.3 供試品溶液制備

稱取0.1 g溫膽湯凍干粉，加水溶解定容至10 mL，14000 r/min離心15 min，吸取上清液，過親水性濾膜（0.22 μm），作為基準(zhǔn)樣品對(duì)應(yīng)實(shí)物供試品溶液備用。

2.3.4 線性關(guān)系考察

精密稱取柚皮苷、新橙皮苷對(duì)照品適量，用甲醇稀釋成6種不同質(zhì)量濃度的系列對(duì)照品溶液，按“2.2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣分析，以峰面積（Y）為縱坐標(biāo)，對(duì)照品濃度（X）為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，計(jì)算回歸方程，得到柚皮苷的回歸方程為Y= 20193513.70X- 6637.8209，r= 0.9998，且柚皮苷在0.01～ 0.51 mg/mL范圍內(nèi)與峰面積呈良好的線性關(guān)系；新橙皮苷的回歸方程為Y= 25607167.53X-77152.8199，r= 0.9998，且新橙皮苷在0.01 ～0.50 mg/mL范圍內(nèi)與峰面積呈良好的線性關(guān)系。

2.3.5 精密度試驗(yàn)

按“2.2.3”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，按“2.2.1”項(xiàng)下色譜條件連續(xù)進(jìn)樣6次，分別進(jìn)行日內(nèi)精密度和日間精密度測(cè)定，柚皮苷、新橙皮苷日內(nèi)精密度峰面積RSD分別為0.33%、0.83%，柚皮苷、新橙皮苷日間精密度峰面積RSD分別為0.77%、0.74%，表明儀器精密度良好。

2.3.6 重復(fù)性試驗(yàn)

按“2.2.3”項(xiàng)下方法平行制備6份供試品溶液，按“2.2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣分析，測(cè)得柚皮苷、新橙皮苷峰面積RSD分別為0.74%、1.22%，表明該方法重復(fù)性良好。

2.3.7 穩(wěn)定性試驗(yàn)

按“2.2.3”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，取同一供試品溶液，分別在0、4、8、12、24、48 h按“2.2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣分析，測(cè)得柚皮苷、新橙皮苷峰面積RSD分別為0.73%、1.14%，表明溶液在48 h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

2.3.8 加樣回收率試驗(yàn)

按“2.2.3”項(xiàng)下方法平行制備6份供試品溶液，分別加入一定量的對(duì)照品，按“2.2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣分析，計(jì)算可知柚皮苷、新橙皮苷平均加樣回收率分別為2.47%、1.59%，見表3。

表3 柚皮苷和新橙皮苷加樣回收率結(jié)果Tab.3 The extraction recovery test of naringin and neohesperidin

2.4 樣品含量測(cè)定

分別制備3批溫膽湯物質(zhì)基準(zhǔn)，按照“2.2.2”項(xiàng)下供試品溶液處理方法，在284 nm波長(zhǎng)處測(cè)定吸光度值，計(jì)算樣品中總黃酮含量；按“2.3.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，計(jì)算樣品中柚皮苷和新橙皮苷的含量，見表4。結(jié)果顯示建立的含量測(cè)定方法操作簡(jiǎn)單，結(jié)果準(zhǔn)確，重復(fù)性好?？傸S酮平均含量為15.03%，柚皮苷和新橙皮苷的平均含量分別為22.78 mg/g和9.75 mg/g。

表4 溫膽湯物質(zhì)基準(zhǔn)總黃酮、柚皮苷和新橙皮苷含量測(cè)定結(jié)果Tab.4 The content determination of total flavonoids， naringin and neohesperidin of Wendan Decoction

3 討論

3.1 指標(biāo)成分的選擇

目前，總黃酮含量測(cè)定的對(duì)照品大多為蘆?。?］，任珊珊等［15］研究表明進(jìn)行總黃酮含量測(cè)定時(shí)，所選對(duì)照品應(yīng)盡可能真實(shí)反應(yīng)待測(cè)樣品中黃酮類成分的結(jié)構(gòu)和組成。何珺等［17］研究表明在測(cè)定總黃酮含量時(shí)，當(dāng)藥材或制劑中不含蘆丁或蘆丁含量極少時(shí)，應(yīng)盡量選用自身成分作為對(duì)照。經(jīng)過前期研究發(fā)現(xiàn)溫膽湯中大多為二氫黃酮類結(jié)構(gòu)，柚皮苷在溫膽湯中含量較高，又能很好的代表復(fù)方中黃酮類成分，因此采用柚皮苷作為UV總黃酮含量測(cè)定的對(duì)照品。黃酮類成分是溫膽湯中的主要成分，柚皮苷和新橙皮苷作為其黃酮類成分的代表［18］，具有抑制平滑肌收縮的功能，與中醫(yī)理氣功效相符，是發(fā)揮藥效的重要物質(zhì)基礎(chǔ)［19-20］。因此選擇柚皮苷和新橙皮苷作為HPLC含量測(cè)定的指標(biāo)成分。

3.2 總黃酮提取因素確定

本實(shí)驗(yàn)分別對(duì)溶媒種類、溶媒濃度、提取時(shí)間三個(gè)因素進(jìn)行考察，選擇總黃酮提取率最高的提取條件，最終確定溫膽湯物質(zhì)基準(zhǔn)供試品溶液制備方法為取溫膽湯物質(zhì)基準(zhǔn)20 mg，加入70%乙醇溶解，并定容至10 mL容量瓶，超聲30 min，濾過，精密吸取過濾液1 mL，加70%乙醇定容至25 mL，即得。

3.3 柚皮苷和新橙皮苷色譜條件優(yōu)化

本研究以各成分分離度、保留時(shí)間、峰型為指標(biāo)，比較了不同流動(dòng)相比例（0.05%甲酸-水、0.10%甲酸-水、0.15%甲酸-水）、不同波長(zhǎng)（250、260、283 nm）、不同流速（0.6、0.8、1.0 mL/min）、不同色譜柱（Reprosil-Pur ODS-3、Alltima TM C18、Shimadzu-VP ODS）、不同柱溫（25、30、35℃），最終確定色譜條件為以乙腈-0.1%甲酸水溶液梯度洗脫，檢測(cè)波長(zhǎng)283 nm，流速0.8 mL·min-1，色譜柱為Reprosil-Pur ODS-3，柱溫為30℃。

3.4 檢測(cè)結(jié)果分析

目前對(duì)溫膽湯大類成分的研究?jī)H有多糖類，多糖類成分占比較少，為2% ～ 4%。本研究首次采用紫外分光光度法對(duì)溫膽湯總黃酮類成分進(jìn)行含量測(cè)定，結(jié)果顯示，溫膽湯物質(zhì)基準(zhǔn)中總黃酮平均含量為15.03%，高于多糖類成分，為溫膽湯物質(zhì)基準(zhǔn)中主要化學(xué)成分。進(jìn)一步采用高效液相色譜法對(duì)溫膽湯物質(zhì)基準(zhǔn)中兩個(gè)主要黃酮類活性成分柚皮苷和新橙皮苷進(jìn)行定量研究，結(jié)果顯示，柚皮苷和新橙皮苷的平均含量分別為22.78 mg/g和9.75 mg/g。

本實(shí)驗(yàn)分別通過建立UV法和HPLC法分別測(cè)定了溫膽湯物質(zhì)基準(zhǔn)中總黃酮、柚皮苷和新橙皮苷含量。經(jīng)方法學(xué)驗(yàn)證，測(cè)定方法符合定量分析要求，操作簡(jiǎn)單，重復(fù)性好，為溫膽湯質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的提升提供依據(jù)。