GP 1200 干式熒光免疫定量分析儀檢測PCT、SAA 及IL-6 項目性能評價

劉愛玲，劉愛勝，凌秀婷，鐘偉傳

目前，急診危重患者越來越多，病情復(fù)雜且變化快，臨床診斷對檢驗結(jié)果的依賴性不斷增強，造成檢驗工作量大大增加，并對檢驗質(zhì)量和效率提出更高要求，給檢驗工作帶來很大壓力。 為了更好地滿足臨床需要及為患者提供更高、更有效率的服務(wù)，深圳市龍華區(qū)人民醫(yī)院急診檢驗科購買了一臺高效檢測的基蛋生物干式熒光免疫定量分析儀 （Getein 1200，GP 1200）。 根據(jù)國際標(biāo)準(zhǔn)化組織（International Organization for Standardization，ISO）15189 CNAS-CL02：2012《醫(yī)學(xué)實驗室質(zhì)基和能力認(rèn)可準(zhǔn)則》[1]， 對新購置的儀器實驗室必須對其方法學(xué)分析性能予以驗證，并對廠家提供的主要性能評價數(shù)據(jù)予以確認(rèn)。 因此，筆者研究參照美國臨床和實驗室標(biāo)準(zhǔn)化協(xié)會文件（Clinical and Laboratory Standards Institute，CLSI）、ISO 15189《醫(yī)學(xué)實驗室質(zhì)量和能力的專用要求》 及ISO 17025相關(guān)文件[2～4]，并以參與室間質(zhì)評的DXI 800 全自動化學(xué)發(fā)光免疫分析系統(tǒng)為參照，對GP 1200 檢測血清降鈣素原（procalcitonin，PCT）、淀粉樣蛋白A（serum amyloid A protein，SAA）及白細胞介素6（interleukin-6，IL-6）項目的精密度、正確度、攜帶污染率、靈敏度、線性及相關(guān)性等性能進行了評價。

1 材料與方法

1.1 實驗材料

1.1.1 評價標(biāo)本

采用GP 1200 分析儀（基蛋生物，中國）配套使用的精密度參考品、準(zhǔn)確度參考品及不同濃度線性參考品。同時隨機收集80 份臨床標(biāo)本，分離血清用于對比分析。

1.1.2 主要儀器與試劑

GP 1200、校準(zhǔn)品及質(zhì)控品（基蛋生物科技股份有限公司， 中國）；DXI 800 分析儀、 校準(zhǔn)品及質(zhì)控品（Bankman 公司，美國）；PCT、SAA 及IL-6 試劑盒（基蛋生物，中國）。

1.2 方法

1.2.1 質(zhì)控準(zhǔn)備

分析前做好儀器維護及校準(zhǔn)，分析期間做好室內(nèi)質(zhì)控，所有操作均嚴(yán)格按照儀器和試劑說明書及科室標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程 （Standard Operating Procelure，SOP）操作規(guī)程進行。以DXI 800 全自動化學(xué)發(fā)光免疫分析系統(tǒng)為參照，對GP 1200 分析儀檢測項目進行評價。

1.2.2 檢測項目

1.2.2.1 精密度 取GP 1200 配套用的精密度參考品反復(fù)測定8 次，計算平均值（average value，AV）、標(biāo)準(zhǔn)差（standard deviation，SD）及批內(nèi)變異系數(shù)（coefficient of variation，CV）。

1.2.2.2 正確度 取低、高GP 1200 配套的正確度參考品各1 份，每份測定2 次，分別計算AV 及相對偏倚（Bias）。 計算公式：Bias（%）=（測定值A(chǔ)V-靶值）/靶值×100%。

1.2.2.3 線性 取4 種不同濃度線性參考品各1 份，每份檢測2 次，計算AV 及其與理論值進行相關(guān)系數(shù)（R2）及回歸方程分析。

1.2.2.4 攜帶污染率 取1 份高濃度標(biāo)本連續(xù)測定3次（H1、H2、H3），再取1 份低濃度標(biāo)本連續(xù)測定3 次（L1、L2、L3）。 計算公式：攜帶污染率（%）=（L1-L3）/（H3-L3）×100%。

1.2.2.5 靈敏度 分別取PCT、SAA 及IL-6 試劑盒中的空白液連續(xù)測定10 次， 計算AV 和SD， 并以2SD 作為相應(yīng)檢測項目的靈敏度。

1.2.2.6 相關(guān)性 分別采用GP 1200 和DXI 800 對80 份臨床標(biāo)本進行PCT、SAA 及IL-6 項目對比檢測，計算兩者結(jié)果的一致性。

1.2.3 判斷標(biāo)準(zhǔn)

精密度判斷標(biāo)準(zhǔn)：CV ≤10%為驗證通過； 正確度判斷標(biāo)準(zhǔn)：Bias ＜±20%為可接受；線性判斷標(biāo)準(zhǔn)：R2≥0.975 為驗證通過。

1.3 統(tǒng)計學(xué)方法

采用SPSS 21.0 統(tǒng)計軟件對檢測結(jié)果進行統(tǒng)計分析。 計數(shù)資料采用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示；相關(guān)性采用Pearman 分析。P＜0.05 為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 精密度評價結(jié)果

GP 1200 檢測PCT、SAA 及IL-6 水平分別為（2.62±0.14）ng/mL、（54.56 ±4.13）ng/mL、（882.93 ±44.06）pg/mL，其CV 分別為5.29%、7.57%、5.00%。

2.2 正確度評價結(jié)果

GP 1200 檢測PCT、SAA 及IL-6 項目Bias （低值、 高值） 分別為-0.71%、-4.25%，4.43%、6.29%，10.39%及1.84%。 見表1。

表1 GP 1200 檢測PCT、SAA 及IL-6 項目正確度評價結(jié)果Tab. 1 Comparison of accuracy evaluation results of PCT， SAA and IL-6 detected by GP 1200

2.3 線性評價結(jié)果

GP 1200 檢測PCT、SAA 及IL-6 項目R2分別為0.999、0.996 及0.999。 見表2、圖1。

圖1 PCT、SAA 及IL-6 線性評價檢測平均值與理論值相關(guān)性Fig.1 Correlation between mean value and theoretical value of linear evaluation and detection of PCT，SAA and IL-6

表2 GP 1200 檢測PCT、SAA 及IL-6 項目線性評價結(jié)果Tab.2 Comparison of linear evaluation results of PCT，SAA and IL-6 detected by GP 1200

2.4 攜帶污染率

GP 1200 檢測PCT、SAA 及IL-6 項目攜帶污染率分別為0.089 4%、0.165 8%及0.018 4%。 表明儀器檢測PCT、SAA 及IL-6 的污染率很低。 見表3。

表3 GP 1200 檢測PCT、SAA 及IL-6 項目攜帶污染率Tab.3 Comparison of contamination rate of PCT，SAA and IL-6 detected by GP 1200

2.5 靈敏度

GP 1200 檢測PCT、SAA 及IL-6 項目靈敏度分別為0.102 ng/mL、0.146 mg/L 及0.315 pg/mL。 說明儀器檢測PCT、SAA 及IL-6 的靈敏度高。

2.6 相關(guān)性

GP 1200 檢測PCT、SAA 及IL-6 的結(jié)果與DXI 800 分析儀檢測的結(jié)果具有良好的相關(guān)性，相關(guān)系數(shù)（r）分別為0.941 8、0.908 6 及0.889 1，儀器間檢測結(jié)果相關(guān)性很好。

3 討論

PCT、SAA 及IL-6 檢測是嚴(yán)重細菌感染/膿毒癥早期鑒別診斷最優(yōu)的觀察指標(biāo)，也可輔助用于臨床細菌和病毒感染快速鑒別診斷及細菌感染嚴(yán)重程度的判斷，同時對臨床抗生素的使用具有指導(dǎo)意義[5～7]。 因此，PCT、SAA 及IL-6 水平快速檢測對臨床急診危重患者的診斷、鑒別診斷、病情評估及治療具有重要的意義。

GP 1200 是一種全自動POCT 分析設(shè)備，其采用熒光免疫法，樣品中抗原與附著熒光顆粒的相應(yīng)抗體結(jié)合形成熒光標(biāo)記的抗原抗體免疫復(fù)合體，儀器可根據(jù)樣品區(qū)和質(zhì)控區(qū)帶上免疫復(fù)合體發(fā)射熒光強度的不同來檢測待測物的相應(yīng)濃度[8～10]。因其操作簡便、快速、靈敏度高及穩(wěn)定性好，且檢測項目多，目前常用于急診危重疾病的診療工作。但不同實驗室工作人員操作習(xí)慣、水質(zhì)、室內(nèi)溫度及濕度等因素可能存在很大差異，從而影響儀器的各項性能。因此，實驗室必須對新購置的儀器和檢測系統(tǒng)性能進行驗證，這不僅是檢驗質(zhì)量的保證，也是ISO 15189《醫(yī)學(xué)實驗室質(zhì)量和能力認(rèn)可準(zhǔn)則》的基本要求。

有研究表明，精密度、正確度、線性、攜帶污染、靈敏度及相關(guān)性是定量分析儀和系統(tǒng)檢測性能評價常用的幾個指標(biāo)[11～14]，其中精密度是反映同一樣品反復(fù)檢測結(jié)果之間的吻合程度， 是評價實驗隨機誤差大小，是所有性能評價中的基礎(chǔ)。 正確度是反映同一樣品多次檢測結(jié)果的均值與理論值之間的差異性，是評價實驗系統(tǒng)誤差大小。線性是指分析儀能直接測出待測物（待測物檢測前不進行濃縮或稀釋預(yù)處理）濃度范圍，是評價方法學(xué)性能的重要指標(biāo)之一。 攜帶污染是評價待測物受檢測前后標(biāo)本對其檢測結(jié)果影響嚴(yán)重程度的指標(biāo)。靈敏度是評價儀器檢測待測物最低濃度的能力。相關(guān)性是評價新儀器和系統(tǒng)檢測結(jié)果與參照儀器結(jié)果的一致性， 確保不同儀器和系統(tǒng)檢測結(jié)果的可比性和準(zhǔn)確。 筆者評價結(jié)果顯示，GP 1200 檢測PCT、SAA 及IL-6 的CV 在5.00 % ～7.57 %，低值、 高值正確度參考品PCT、SAA 及IL-6 的Bias 值在-4.25%～10.39%，PCT、SAA 及IL-6 的AV 與理論值線性R2值在0.996 ～0.999，斜率（a）在0.960 5 ～1.100 3，攜帶污染率極低，在0.018 4%～0.165 8%，檢測靈敏度高，且對比相關(guān)性好，這表明GP 1200 在急診檢驗室的環(huán)境下其以上各項評價指標(biāo)均符合臨床質(zhì)量要求。

綜上所述，PG 1200 干式熒光免疫定量分析儀檢測PCT、SAA 及IL-6 的性能經(jīng)初步評價， 其精密度、正確度均在廠家允許范圍內(nèi)，線性好、攜帶污染率低、靈敏度高及相關(guān)性好，且檢測速度快，操作簡單，體積小，能滿足急診危重患者常規(guī)檢測及科研需求。