黔產(chǎn)油麻血藤薄層色譜鑒別研究

楊從武,鄒大維,譚 霖

(黔東南苗族侗族自治州食品藥品檢驗(yàn)檢測中心,貴州 凱里 556011)

0 引言

油麻血藤Caults mucunae sempervirentis是貴州省苗族、侗族等少數(shù)民族常用藥材,來源于豆科植物常春油麻藤M(fèi)ucuna sempervirens Hemsl.的干燥藤莖。分布于貴州黔東南州、黔西南州和黔南州等地。其性味甘、微苦、溫,具有活血調(diào)經(jīng),補(bǔ)血舒筋等功效。用于月經(jīng)不調(diào),痛經(jīng),閉經(jīng),產(chǎn)后血虛,風(fēng)濕痹痛,四肢麻木,跌撲損傷[1]。成分指標(biāo)為:脂肪酸占1%～10%[2]、總黃酮類占12.43 %[3]、酚類、蛋白質(zhì)[4]、七個(gè)成分一致的揮發(fā)油(比較主要的包括3-辛醇、β-紫羅蘭酮等)[5]。我省《貴州省中藥材質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)》2003版收錄[1],其質(zhì)量控制指標(biāo)僅性狀、顯微橫切面鑒別內(nèi)容。為完善質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)修訂,控制油麻血藤質(zhì)量,本試驗(yàn)對(duì)油麻血藤藥材進(jìn)行薄層色譜定性鑒別研究。

1 材料與儀器

1.1 藥材

三批藥材經(jīng)貴州中醫(yī)藥大學(xué)孫慶文教授準(zhǔn)確鑒定為豆科植物常春油麻藤M(fèi)ucuna sempervirens Hemsl.的干燥藤莖,其相關(guān)的憑證標(biāo)本儲(chǔ)存于黔東南苗族侗族自治州食品藥品檢驗(yàn)檢測中心化學(xué)藥品檢驗(yàn)科實(shí)驗(yàn)室,藥材具體信息見表1。

表1 3批藥材收集信息表

1.2 儀器

5L-DK-98-ⅡA型數(shù)控電熱恒溫水浴鍋單列六;DYF-500搖擺式高速中藥粉粹機(jī);XPE205型萬分之一電子天平(梅特勒);玻璃儀器;SK8200HP—型數(shù)控超聲波清洗器(500W;53kHz);鼓風(fēng)烘箱。

1.3 試劑

甲醇,95%乙醇,乙酸乙酯(川東化工試劑公司,AR),石油醚(60～90 ℃)、環(huán)己烷、甲酸等購自國藥集團(tuán)化學(xué)試劑公司,均為AR。

1.4 材料

青島海洋化工有限公司硅膠G板(批號(hào):20170811)、青島勝海精細(xì)硅膠化工有限公司硅膠G板(批號(hào):20180507)、默克硅膠G板。

2 方法與結(jié)果

2.1 樣品的制備

取三批油麻血藤藥材500 g,切片,于干燥箱中低溫下烘干,放冷,打粉過四號(hào)篩,密封儲(chǔ)存?zhèn)溆谩?/p>

2.2 樣品溶液的制備

取粉末約2.0 g,加95%乙醇40 mL,超聲提取30 min,放冷濾過,濾液水浴蒸干,再加水10 mL溶解,用10 mL乙酸乙酯振搖提取,水浴蒸干乙酸乙酯液,用甲醇1 mL溶解,作為樣品溶液。

2.3 對(duì)照藥材溶液的制備

取批號(hào)S1樣品,照2.2項(xiàng)下同法操作。

2.4 專屬性試驗(yàn)

照(《中國藥典》2020版四部 通則0502)薄層色譜法試驗(yàn)[6],取樣品溶液5 μL、對(duì)照藥材溶液5 μL,點(diǎn)于硅膠G薄層板上,在石油醚(60～90 ℃)-環(huán)己烷-乙酸乙酯-甲酸(V∶V;6∶3∶1∶0.2)體系中展開,取出,揮干,1%香草醛硫酸溶液,105 ℃下顯色,結(jié)果如圖1所示。

圖1 薄層色譜鑒別系統(tǒng)適用性試驗(yàn)

2.5 展開體系的考察

取2.2項(xiàng)下樣品溶液和2.3項(xiàng)下對(duì)照藥材溶液照(《中國藥典》2020版四部 通則0502)薄層色譜法試驗(yàn)[6],取樣品溶液5 μL、對(duì)照藥材溶液5 μL,點(diǎn)于硅膠G薄層板上,在各體系中展開,取出,揮干,1%香草醛硫酸溶液,105 ℃下顯色,分別考察了石油醚(30～60 ℃)-乙酸乙酯(9∶1)、環(huán)己烷-乙酸乙酯(9∶1)、石油醚(60～90 ℃)-環(huán)己烷-乙酸乙酯-甲酸(5∶4∶1∶0.1)、石油醚(60～90 ℃)-環(huán)己烷-乙酸乙酯-甲酸(6∶3∶1∶0.2)展開體系,結(jié)果石油醚(60～90 ℃)-環(huán)己烷-乙酸乙酯-甲酸(6∶3∶1∶0.2)展開體系斑點(diǎn)清晰、分離度好,如圖2所示。

圖2 各展開體系考察色譜圖

2.6 點(diǎn)樣量考察

取2.3項(xiàng)下溶液各3 μL、5 μL、10 μL,點(diǎn)于硅膠G薄層板上,在石油醚(60～90 ℃)-環(huán)己烷-乙酸乙酯-甲酸(V∶V;6∶3∶1∶0.2)體系中展開,取出,揮干,1%香草醛硫酸溶液,105 ℃下顯色,結(jié)果5 μL點(diǎn)樣最好,如圖3所示。

圖3 點(diǎn)樣量考察色譜圖

2.7 穩(wěn)定性試驗(yàn)

將批號(hào)S2樣品按2.2項(xiàng)下的方法制備樣品溶液放置48 h、24 h、0 h,取樣品溶液5 μL、對(duì)照藥材溶液5 μL,點(diǎn)于硅膠G薄層板上,在石油醚(60～90 ℃)-環(huán)己烷-乙酸乙酯-甲酸(V∶V;6∶3∶1∶0.2)體系中展開,取出,揮干,1%香草醛硫酸溶液,105 ℃下顯色,結(jié)果顯示,放置48 h、24 h、0 h的供試品溶液展開后的色譜圖基本一致,表明供試品溶液在48 h內(nèi)穩(wěn)定性良好,如圖4所示。

圖4 穩(wěn)定性的色譜圖

2.8 不同品牌硅膠薄層色譜板考察

照擬定的薄層色譜鑒別方法,分別考察了青島海洋化工有限公司硅膠G板(批號(hào):20170811)與青島勝海精細(xì)硅膠化工有限公司硅膠G板(批號(hào):20180507),默克硅膠G板,分別按擬定的試驗(yàn)方法試驗(yàn)。不同廠家薄層板斑點(diǎn)均清晰且分離較好,如圖5所示。

圖5 不同廠家薄層板展開色譜圖

2.9 展開濕度考察

分別以相對(duì)濕度為70%、50%、30%環(huán)境中,在25 ℃溫度下考察。濕度太大時(shí)展開Rf無明顯變化,整體色譜行為一致,在上述條件下都能較好分離,說明該方法受濕度的影響不明顯,如圖6所示。

圖6 不同展開濕度色譜圖

2.10 展開溫度考察

分別在5 ℃、25 ℃、35 ℃,相對(duì)濕度為50%下考察,溫度太大時(shí)展開Rf變化明顯,但整體色譜行為一致,如圖7所示。

圖7 不同展開溫度色譜圖

2.11 樣品測定

取3批樣品照2.1、2.2、2.3、2.4項(xiàng)下方法進(jìn)行測定,結(jié)果圖8所示。

圖8 樣品測定薄層色譜鑒別圖

3 討論

本次研究通過對(duì)不同展開體系、點(diǎn)樣量等考察,其專屬性、重現(xiàn)性、重復(fù)性良好、斑點(diǎn)清晰。但在不同展開溫度考察中溫度太高時(shí)展開Rf變化明顯,但整體色譜行為一致,因此建議在實(shí)驗(yàn)過程中,根據(jù)實(shí)際情況對(duì)環(huán)境溫度進(jìn)行相應(yīng)控制。該方法能滿足油麻血藤定性鑒別,為質(zhì)量控制和評(píng)價(jià)提供依據(jù)。