離子色譜法測(cè)定異甘草酸鎂注射液中鎂離子和鈉離子的含量

戴冬艷,徐 佳,朱 靜,楊寶衛(wèi)

1. 泰州市藥品檢驗(yàn)院,泰州 225300;2. 江蘇食品藥品職業(yè)技術(shù)學(xué)院,淮安 223003

異甘草酸鎂(C42H60MgO16·4H2O)是第4代甘草酸制劑,是從天然植物甘草中提取的主要成分18β-甘草酸經(jīng)堿催化異構(gòu)化后成鹽精制而得[1]。異甘草酸鎂中所含有效成分是單一的18α-甘草酸,含量達(dá)到98%以上。研究發(fā)現(xiàn),18α-甘草酸的親脂性好,在胃腸道呈單體形式,易被吸收,因其結(jié)構(gòu)與潑尼松龍類似故更易與類固醇激素的靶細(xì)胞受體結(jié)合,且肝臟靶向性高。因此,與其他甘草酸制劑比較,異甘草酸鎂具有更強(qiáng)的抗生物氧化、抗炎、保護(hù)肝細(xì)胞膜和改善肝功能的作用[2],且未發(fā)現(xiàn)以往使用甘草酸制劑常見(jiàn)的水鈉潴留和血壓升高等不良反應(yīng)。甘草酸及異甘草酸鎂的化學(xué)結(jié)構(gòu)見(jiàn)圖1。

注:A.18-β甘草酸;B.18-α甘草酸;C.異甘草酸鎂。

由正大天晴藥業(yè)集團(tuán)股份有限公司獨(dú)家生產(chǎn)的異甘草酸鎂注射液的主要成分為異甘草酸鎂,溶劑為生理鹽水。臨床上用異甘草酸鎂注射液治療慢性乙型肝炎、肝硬化和藥物性肝損傷等各種肝臟疾病,也用于預(yù)防惡性腫瘤化療藥導(dǎo)致的肝損傷[3-6]。其執(zhí)行質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)為國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理局國(guó)家藥品標(biāo)準(zhǔn) WS1-(X-062)-2012Z,用高效液相色譜法測(cè)定異甘草酸鎂的含量,用滴定法測(cè)定生理鹽水中氯化鈉的含量[7]。

近年來(lái)關(guān)于異甘草酸鎂注射液的研究報(bào)道以藥理研究居多,少見(jiàn)關(guān)于質(zhì)量研究的報(bào)道。有研究用ICP-OES法測(cè)定異甘草酸鎂注射液中的鎂離子和鈉離子含量,從而換算成異甘草酸鎂和氯化鈉的含量[8],也有研究用高效液相色譜法測(cè)定異甘草酸鎂原料中的有關(guān)物質(zhì)[9]。近年來(lái),離子色譜技術(shù)高速發(fā)展,其具有檢出限低、精密度高、線性范圍較寬和多元素同時(shí)測(cè)定等優(yōu)點(diǎn),已被廣泛應(yīng)用于藥物中陰陽(yáng)離子、氨基酸、糖類物質(zhì)的測(cè)定[10-14]。本實(shí)驗(yàn)建立的方法以鎂、鈉陽(yáng)離子為目標(biāo)檢測(cè)物,供試品無(wú)需前處理,溶液直接測(cè)定,且一種方法能同時(shí)測(cè)定2種成分,方便、快捷。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

Thermo ICS 6000離子色譜儀[配Dionex CERS 500(4 mm)抑制器、電導(dǎo)檢測(cè)器及甲烷磺酸(MSA)在線淋洗液發(fā)生器],購(gòu)自Thermo Fisher公司;Milli-Q純水機(jī)(Millipore公司)。

1.2 試藥

鈉元素標(biāo)準(zhǔn)溶液(GSB 04-1738-2004,批號(hào)218009-1,質(zhì)量濃度為1 000 μg·mL-1)、鈣元素標(biāo)準(zhǔn)溶液(GSB 04-1720-2004,批號(hào)20A034-6,質(zhì)量濃度為1 000 μg·mL-1)、鎂元素標(biāo)準(zhǔn)溶液(GSB 04-1735-2004,批號(hào)20A001-5,質(zhì)量濃度為1 000 μg·mL-1)、鉀元素標(biāo)準(zhǔn)溶液(GSB 04-1733-2004,批號(hào)20A012-5,質(zhì)量濃度為1 000 μg·mL-1),均由國(guó)家有色金屬及電子材料分析測(cè)試中心提供;銨元素標(biāo)準(zhǔn)溶液(BW 0900,批號(hào)L451,質(zhì)量濃度為1 000 μg·mL-1),由北京海岸鴻蒙標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)技術(shù)有限責(zé)任公司提供;異甘草酸鎂注射液(批號(hào):211103204、211107204、220112104,正大天晴藥業(yè)集團(tuán)股份有限公司);水為用Milli-Q純水系統(tǒng)制備的超純水。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

色譜柱為Dionex IonPacTMCS12A RFICTM分析柱(250 mm×4 mm,8 μm)和CG12A保護(hù)柱(50 mm×4 mm);淋洗液為20 mmol·L-1的甲烷磺酸溶液;抑制器為Dionex CERS 500(4 mm)[15];抑制電流為59 mA;流速為1.0 mL·min-1;電導(dǎo)檢測(cè)器;柱溫為30 ℃;檢測(cè)器溫度為35 ℃;進(jìn)樣體積為25 μL。

2.2 溶液的配制

2.2.1系統(tǒng)適用性溶液 精密量取鈉、鎂、鉀、鈣與銨各單元素標(biāo)準(zhǔn)溶液3、0.2、0.2、0.3、0.1 mL置于100 mL量瓶中,用超純水稀釋制成每1 mL中分別含鈉30 μg、鎂2 μg、鉀2 μg、鈣3 μg、銨1 μg的混合溶液,作為系統(tǒng)適用性溶液[16]。

2.2.2標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液 精密量取鎂元素標(biāo)準(zhǔn)溶液5 mL,置于50 mL量瓶中,用超純水稀釋并定容至刻度,制成100 μg·mL-1的鎂元素標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液Ⅰ。精密量取100 μg·mL-1的鎂元素標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液Ⅰ 10 mL,置于100 mL量瓶中,用超純水稀釋并定容至刻度,制成10 μg·mL-1的鎂元素標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液Ⅱ。精密量取鈉元素標(biāo)準(zhǔn)溶液5 mL,置于50 mL量瓶中,用超純水稀釋并定容至刻度,制成100 μg·mL-1的鈉元素標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液Ⅰ。

2.2.3系列對(duì)照品溶液 精密量取鎂元素標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液Ⅰ 1、1、2、1、1、1 mL和鈉元素標(biāo)準(zhǔn)溶液2、2、3、1、1、1 mL,分別置于200、100、100、25、20、10 mL量瓶中,加超純水稀釋并定容至刻度,充分搖勻,制成每1 mL分別含鎂離子為0.5、1、2、4、5、10 μg及鈉離子10、20、30、40、50、100 μg的S1～S6系列對(duì)照品溶液。

2.2.4供試品溶液 精密量取異甘草酸鎂注射液1 mL,置于100 mL量瓶中,用超純水稀釋定容至刻度,充分搖勻,作為供試品溶液。

2.2.5空白溶液 以超純水作為空白溶液。

2.3 系統(tǒng)適用性及專屬性實(shí)驗(yàn)

取2.2.1項(xiàng)下的系統(tǒng)適用性溶液,按照2.1項(xiàng)色譜條件進(jìn)樣測(cè)定,記錄色譜圖。見(jiàn)圖2。結(jié)果顯示,各陽(yáng)離子理論塔板數(shù)均>2 000,分離度均≥1.5,各離子峰之間的分離度良好[17]。供試品溶液與對(duì)照品溶液色譜圖相同保留時(shí)間出現(xiàn)鎂離子、鈉離子色譜峰,且空白溶液在此位置不出峰,對(duì)測(cè)定結(jié)果無(wú)干擾。

注:A.空白溶液;B.系統(tǒng)適用性溶液; C.對(duì)照品溶液;D.供試品溶液;1.鈉離子;2.銨離子;3.鉀離子;4.鎂離子;5.鈣離子。

2.4 線性關(guān)系考察

取2.2.3項(xiàng)下的系列對(duì)照品溶液,按照2.1項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定,記錄色譜圖,以鎂、鈉離子的質(zhì)量濃度(μg·mL-1)為橫坐標(biāo)(x)、峰面積為縱坐標(biāo)(y)進(jìn)行線性回歸,得鎂離子、鈉離子的線性方程分別為:y1=30.03x1-1.27,r=0.999 9;y2=16.38x2+6.64,r=0.999 8。結(jié)果表明鎂離子、鈉離子分別在0.5～10、10～100 μg·mL-1范圍內(nèi)與其峰面積線性關(guān)系良好。

2.5 精密度實(shí)驗(yàn)

取2.2.3項(xiàng)下的S3對(duì)照品溶液(鎂離子2 μg·mL-1、鈉離子30 μg·mL-1)連續(xù)進(jìn)樣6次,記錄各組分的峰面積,鎂離子、鈉離子峰面積的RSD值分別為0.47%、0.43%,表明儀器的精密度良好。

2.6 重復(fù)性實(shí)驗(yàn)

量取2.2.4項(xiàng)下制備同一批號(hào)(批號(hào)211103204)的供試品溶液6份進(jìn)行測(cè)定,測(cè)得鎂離子、鈉離子的平均含量分別為141.89、3 623.67 μg·mL-1,RSD值分別為1.07%、0.78%,表明該方法的重復(fù)性良好[18]。

2.7 穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)

取同一份供試品溶液(批號(hào)211103204)分別于0、1、2、4、10、20 h進(jìn)樣測(cè)定,記錄峰面積,RSD值分別為1.73%、1.16%,表明供試品溶液在20 h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

2.8 加樣回收實(shí)驗(yàn)

精密量取異甘草酸鎂注射液(批號(hào)21110304)5 mL,置于50 mL量瓶中,用超純水稀釋并定容至刻度,充分搖勻。精密量取1 mL置于20 mL量瓶中,同法量取9份,分別加入1、1.5、2 mL鎂元素標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液Ⅱ(質(zhì)量濃度為10 μg·mL-1)和2、3、4 mL鈉元素標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液Ⅰ(質(zhì)量濃度為100 μg·mL-1),用超純水稀釋并定容至刻度,搖勻,每個(gè)質(zhì)量濃度制備3份,得低、中、高3個(gè)質(zhì)量濃度的供試品溶液[19]。按照2.1項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定,計(jì)算回收率。鎂離子、鈉離子的低、中、高3個(gè)質(zhì)量濃度的平均回收率(n=9)分別為100.29%、101.39%,RSD值分別為1.09%、1.09%,表明回收率良好,見(jiàn)表1。

表1 鎂離子、鈉離子回收率的測(cè)定結(jié)果

2.9 定量限和檢測(cè)限

取2.2.3項(xiàng)下的S1對(duì)照品溶液逐級(jí)稀釋,按照2.1項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定,記錄峰面積,當(dāng)信噪比為10∶1時(shí),得鎂離子、鈉離子的定量限(limit of quantification,LOQ)分別為0.123 4、0.117 4 μg·mL-1;當(dāng)信噪比為3∶1時(shí),得鎂離子、鈉離子的檢測(cè)限(limit of detection,LOD)分別為0.040 67、0.038 24 μg·mL-1。

2.10 方法耐用性

取系統(tǒng)適用性溶液,在改變淋洗液甲烷磺酸溶液的濃度±5 mmol·L-1、柱溫±5 ℃、流速±0.1 mL·min-1等條件下測(cè)定,各條件下,各陽(yáng)離子的理論塔板數(shù)均>2 000,分離度均≥1.5。表明本方法的耐用性良好。

2.11 樣品測(cè)定

按上述方法對(duì)3批異甘草酸鎂注射液樣品進(jìn)行測(cè)定,按標(biāo)準(zhǔn)曲線法定量,結(jié)果以鎂離子、鈉離子含量計(jì);同時(shí)按照國(guó)家藥品標(biāo)準(zhǔn)WS1-( X-062)-2012Z中的方法用HPLC法測(cè)定3批樣品中的異甘草酸鎂含量、滴定分析法測(cè)定氯化鈉含量,并轉(zhuǎn)化成鎂離子、鈉離子含量,結(jié)果見(jiàn)表2。

表2 樣品中鎂離子、鈉離子含量的測(cè)定結(jié)果

3 討論

3.1 試劑的選擇

因?yàn)樽匀唤缰衅毡榇嬖阝c、鈣、鎂等離子,所以實(shí)驗(yàn)試劑的選擇特別重要,本實(shí)驗(yàn)直接選擇用水溶解、稀釋對(duì)照品和供試品,因此考察了實(shí)驗(yàn)用水對(duì)鈉離子、鎂離子測(cè)定的影響[20]。結(jié)果顯示,本實(shí)驗(yàn)所用的超純水在相應(yīng)的保留時(shí)間范圍內(nèi)不出現(xiàn)鎂離子、鈉離子色譜峰,對(duì)其測(cè)定無(wú)干擾。

3.2 色譜條件的選擇

本實(shí)驗(yàn)考察了IonPac CS12、CS12A 2種型號(hào)的色譜柱,與CS12比較,CS12A樹(shù)脂上鍵合的功能基除了羧基外加入了膦酸基,增加了鈣離子、鎂離子的選擇性,更加適用于樣品中的鈉離子、銨離子、鉀離子、鎂離子和鈣離子的快速等度分離。最終選擇了IonPac CS12A色譜柱,以甲烷磺酸溶液為淋洗液。考察不同柱溫(25、30、35 ℃)、不同流速(0.9、1.0、1.1 mL·min-1)、不同淋洗液濃度(15、20、25 mmol·L-1)和不同的推薦抑制電流對(duì)各陽(yáng)離子的分離效果,柱溫和流速對(duì)結(jié)果影響不大,甲磺酸淋洗液濃度越低時(shí),各陽(yáng)離子保留時(shí)間越長(zhǎng),結(jié)果顯示淋洗液濃度為20 mmol·L-1、流速為1.0 mL·min-1時(shí),可使鈉離子、銨離子、鉀離子、鎂離子和鈣離子達(dá)到有效分離,且出峰時(shí)間適中[21]。

3.3 方法的比較

目前,異甘草酸鎂注射液的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)僅收載于國(guó)家藥品標(biāo)準(zhǔn)WS1-(X-062)-2012Z,國(guó)外藥典未收載。本法測(cè)得的鎂離子、鈉離子含量和法定標(biāo)準(zhǔn)測(cè)得的異甘草酸鎂和氯化鈉換算出的鎂離子、鈉離子含量結(jié)果無(wú)明顯差異。本實(shí)驗(yàn)用一種方法直接測(cè)定鎂離子、鈉離子含量,可以換算成異甘草酸鎂和氯化鈉含量,和法定標(biāo)準(zhǔn)中高效液相法和滴定法分別測(cè)定2種成分含量比較,本法操作更簡(jiǎn)單、快速。本法用鎂、鈉元素標(biāo)準(zhǔn)溶液作為對(duì)照品,減少了對(duì)異甘草酸鎂對(duì)照品的需要量[22];實(shí)驗(yàn)中的溶劑僅為超純水,無(wú)需使用有機(jī)溶劑,所用的淋洗液簡(jiǎn)單、價(jià)廉、環(huán)保。

4 小結(jié)

本實(shí)驗(yàn)建立了同時(shí)測(cè)定異甘草酸鎂注射液中鎂離子和鈉離子含量的離子色譜法,該方法具有較高的專屬性,前處理簡(jiǎn)便、快速,測(cè)量結(jié)果準(zhǔn)確,且多種成分可同時(shí)測(cè)定,可用于異甘草酸鎂注射液的質(zhì)量控制。本方法既適用于藥物中鈣離子、鎂離子、鈉離子等離子含量的快速測(cè)定,也適用于其雜質(zhì)離子的檢測(cè)。