血清SIRT6、FBLN1水平與腹膜透析患者腹主動(dòng)脈鈣化的關(guān)系

王林琳，王晴嵐，林玉潔，李劍愷

上海中醫(yī)藥大學(xué)附屬曙光醫(yī)院血透室，上海 210000

腹膜透析（PD）是終末期腎臟?。‥SRD）患者常用的腎臟替代治療方法之一，其比血液透析具有簡便、安全和居家治療等優(yōu)勢。近年來隨著PD技術(shù)的進(jìn)步和器械的發(fā)展，PD 患者生存期顯著延長，但心血管疾病仍然嚴(yán)重威脅患者生命安全［1-2］。血管鈣化是PD 患者心血管疾病發(fā)生和導(dǎo)致其死亡的重要原因［3］。腹主動(dòng)脈鈣化（AAC）是反映PD 患者血管鈣化的重要指標(biāo)，因此早期發(fā)現(xiàn)AAC 對促進(jìn)PD 患者預(yù)后改善至關(guān)重要。研究表明，血管平滑肌細(xì)胞（VSMC）向成骨細(xì)胞轉(zhuǎn)化和凋亡參與血管鈣化發(fā)生、發(fā)展［4］。沉默信息調(diào)節(jié)因子6（SIRT6）是一種去乙?；?，能通過抗炎、抗氧化、抗凋亡等保護(hù)VSMC［5］。腓骨蛋白1（FBLN1）是一種糖蛋白，通過促進(jìn)VSMC 增殖、遷移從而促進(jìn)VSMC 表型轉(zhuǎn)化［6］。目前關(guān)于血清SIRT6、FBLN1與PD 患者AAC 的關(guān)系尚未可知。本研究擬探討PD 患者血清SIRT6、FBLN1 水平與AAC 的關(guān)系，以期為PD 患者血管鈣化防治提供參考。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 選取2020 年1 月—2022 年1 月本院收治的132 例PD 患者為PD 組，男81 例、女51 例，年齡20～87（52.82 ± 12.44）歲，體質(zhì)量指數(shù)17.25～28.20（22.20 ± 2.37）kg/m2，透析齡44.00（23.00，64.00）個(gè)月。納入標(biāo)準(zhǔn)：符合ESRD 診斷標(biāo)準(zhǔn)［7］；規(guī)律PD 時(shí)間≥6 個(gè)月；年齡≥18 歲；患者和家屬簽署知情同意書。排除標(biāo)準(zhǔn)：妊娠婦女或其他原因不能行腹部影像學(xué)檢查者；聯(lián)合血液透析或接受過血液透析者；合并嚴(yán)重心肝肺等疾病者；合并嚴(yán)重感染者；近3個(gè)月內(nèi)使用免疫抑制劑、激素制劑、血液制品治療者；合并結(jié)核、惡性腫瘤等消耗性疾病和甲狀腺功能亢進(jìn)等代謝性疾病患者；合并血液、免疫、神經(jīng)系統(tǒng)損害者；臨床資料不完整。同期另選取46名健康體檢者為對照組，男28 例、女18 例，年齡18～72（52.17 ± 10.52）歲，體 質(zhì) 量 指 數(shù)18.11～27.52（22.14 ± 2.13）kg/m2。納入標(biāo)準(zhǔn)：年齡≥18 歲；血尿便常規(guī)、肝腎功能檢查正常。排除標(biāo)準(zhǔn)：既往心、肝、腎等重要臟器功能損害者；近3 個(gè)月內(nèi)使用免疫抑制劑、激素制劑、血液制品治療者。兩組性別、年齡、體質(zhì)量指數(shù)比較差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P均＞0.05）。兩組均簽署知情同意書。本研究經(jīng)醫(yī)院倫理委員會批準(zhǔn)。

1.2 血清SIRT6、FBLN1 檢測 采集PD 患者入院后次日和對照組體檢時(shí)3 mL 靜脈血，3 000 r/min 離心20 min（半徑10 cm），采用酶聯(lián)免疫吸附法檢測血清SIRT6、FBLN1，試劑盒分別購自深圳海思安生物技術(shù)有限公司、南京賽泓瑞生物科技有限公司。

1.3 資料收集 收集PD 患者病歷資料，內(nèi)容包括性別、年齡、體質(zhì)量指數(shù)、透析齡、嗜好（吸煙、飲酒）、ESRD 病因、血紅蛋白、白蛋白、總膽固醇、甘油三酯、高密度脂蛋白膽固醇（HDL-C）、低密度脂蛋白膽固醇（LDL-C）、血鈣、血磷、全段甲狀旁腺素（iPTH）、血肌酐、血尿酸、血尿素氮、單室尿素清除指數(shù)［8］。

1.4 AAC判定和分組 PD患者入院后24 h內(nèi)采用德國西門子X 射線機(jī)行腹部X 線片檢查，由兩名經(jīng)驗(yàn)豐富的放射科醫(yī)生閱片并參考AAC 積分評估AAC，評價(jià)L1～L4，以各個(gè)腰椎長度為單元分別進(jìn)行腹主動(dòng)脈前、后壁評分。無鈣化為0分；鈣化長度＜1/3 為1 分；鈣化長度1/3～2/3 為2 分；鈣化長度＞2/3 為3 分。總分為所有椎單元評分總和，分值0～24分，0分表示無鈣化，得分越高則鈣化越嚴(yán)重。根據(jù)AAC 積分將PD 患者分為AAC 組53例、非AAC 組79例。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS28.0 統(tǒng)計(jì)軟件。符合正態(tài)分布的計(jì)量資料以±s表示，兩組比較采用t檢驗(yàn)；非正態(tài)分布計(jì)量資料以M（P25，P75）表示，兩組比較采用U檢驗(yàn)。AAC 患者血清SIRT6、FBLN1 水平與AAC 積分的相關(guān)性分析采用Spearman 相關(guān)法；PD患者AAC的影響因素采用多因素Logistic回歸分析；血清SIRT6、FBLN1 水平對PD 患者AAC 的評估價(jià)值采用受試者工作特征（ROC）曲線分析，曲線下面積比較采用Delong 檢驗(yàn)。P＜0.05 為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 PD組與對照組血清SIRT6、FBLN1水平比較PD 組血清SIRT6 水平低于對照組，F(xiàn)BLN1 水平高于對照組（P均＜0.05）。見表1。

表1 兩組血清SIRT6、FBLN1水平比較［M（P25，P75）］

2.2 AAC患者血清SIRT6、FBLN1水平與AAC積分的相關(guān)性 AAC 患者AAC 積分為1～18［11.00（7.50，14.00）］分。Spearman 相關(guān)性分析顯示，AAC患者AAC積分與血清SIRT6水平呈負(fù)相關(guān)，與FBLN1水平呈正相關(guān)（rs分別為-0.793、0.796，P均＜0.05）。

2.3 PD患者AAC的影響因素

2.3.1 單因素分析結(jié)果 透析齡、血磷、iPTH、SIRT6、FBLN1 為PD 患者AAC 的影響因素（P均＜0.05）。見表2。

表2 PD患者AAC影響因素的單因素分析

2.3.2 多因素Logistic 回歸分析結(jié)果 以透析齡、血磷、iPTH、SIRT6、FBLN1為自變量，AAC（是=1，否=0）為因變量。多因素Logistic 回歸分析顯示，透析齡延長和iPTH、FBLN1 升高為PD 患者AAC 的獨(dú)立危險(xiǎn)因素，SIRT6 升高為獨(dú)立保護(hù)因素（P均＜0.05）。見表3。

表3 PD患者AAC影響因素的多因素Logistic回歸分析

2.4 血清SIRT6、FBLN1 對PD 患者AAC 的評估價(jià)值 ROC 曲線分析顯示，血清SIRT6、FBLN1 水平單獨(dú)與聯(lián)合評估PD 患者AAC 的曲線下面積分別為0.781、0.780、0.866，血清SIRT6、FBLN1 聯(lián)合評估PD 的曲線下面積大于二者單獨(dú)評估（P均＜0.05）。見表4。

表4 血清SIRT6、FBLN1對PD患者AAC的評估價(jià)值

3 討論

慢性腎臟病進(jìn)展至ESRD 后僅能依靠昂貴的腎移植或透析維系生命［10］。PD 是使用腹膜作為透析膜分開血液與透析液，利用腹膜毛細(xì)血管豐富和面積大等特點(diǎn)，使浸泡在透析液中的腹膜毛細(xì)血管腔內(nèi)透析液與血液進(jìn)行物質(zhì)交換，以清除體內(nèi)代謝產(chǎn)物和毒物，達(dá)到糾正ESRD 患者酸堿平衡和水電解質(zhì)失衡的目的［11］。但PD 患者由于長期礦物質(zhì)代謝紊亂，可引起鈣磷礦物質(zhì)沉積于血管內(nèi)膜、中膜，引起血管鈣化，通過增加血管硬度、脆性，影響冠狀動(dòng)脈、頸動(dòng)脈等血液循環(huán)，增加心血管事件和全因死亡風(fēng)險(xiǎn)［12-13］。目前臨床主要參照改善全球腎臟病預(yù)后組織指南推薦的腹部側(cè)位X線片來評估透析患者血管鈣化［14］。但AAC 早期并無明顯癥狀，使用腹部X線片可能延誤患者治療，且腹部X 線片也不利于廣大PD患者血管鈣化篩查，因此有必要探索其他生物標(biāo)志物。

血管鈣化是多種細(xì)胞和多條復(fù)雜的信號網(wǎng)絡(luò)共同參與的復(fù)雜過程，其中VSMC 表型轉(zhuǎn)化引起的成骨細(xì)胞轉(zhuǎn)分化和VSMC 凋亡在血管鈣化中發(fā)揮重要作用。透析患者在礦物質(zhì)代謝紊亂、炎癥反應(yīng)、氧化應(yīng)激等因素刺激下，極易促進(jìn)VSMC 向成骨細(xì)胞轉(zhuǎn)分化和凋亡導(dǎo)致血管鈣化［15］。蛋白質(zhì)翻譯后修飾能使蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)和功能更完整，是生命活動(dòng)中各種功能的執(zhí)行者，蛋白的乙酰化修飾對其具有重要調(diào)控作用［16］。SIRT6 是NAD＋依賴蛋白去乙酰化酶沉默信息調(diào)節(jié)因子2家族的一員，主要分布于線粒體上，具有高度保守的NAD＋結(jié)合催化結(jié)構(gòu)域。SIRT6 除了具備乙?；富钚酝?，還在能量代謝、炎癥反應(yīng)、DNA 修復(fù)、抗衰老、維持基因組穩(wěn)定等方面發(fā)揮重要作用［5］。GROOTAERT 等［17］研究報(bào)道，上調(diào)SIRT6表達(dá)能防止VSMC 衰老，發(fā)揮抗動(dòng)脈粥樣硬化作用。LI 等［18］研究報(bào)道，上調(diào)SIRT6 表達(dá)能通過缺氧誘導(dǎo)因子1α/丙酮酸脫氫酶激酶4 途徑抑制VSMC 增殖和凋亡。敲除腹主動(dòng)脈瘤小鼠SIRT6基因可導(dǎo)致小鼠VSMC表型轉(zhuǎn)化［19］。上述研究表明，SIRT6在保護(hù)VSMC 功能和骨調(diào)節(jié)過程中發(fā)揮重要作用。上調(diào)SIRT6 表達(dá)能調(diào)節(jié)骨質(zhì)疏松癥模型大鼠骨間充質(zhì)干細(xì)胞的成骨細(xì)胞分化［20］。提示SIRT6還在成骨細(xì)胞分化中發(fā)揮重要作用，支持了我們推測SIRT6 可能參與血管鈣化過程的假設(shè)。本研究結(jié)果顯示，PD 患者血清SIRT6水平與AAC積分呈負(fù)相關(guān)，是PD患者AAC 的獨(dú)立保護(hù)因素，這說明血清SIRT6 水平升高可降低PD 患者AAC 風(fēng)險(xiǎn)。分析原因可能與SIRT6水平升高能通過抗衰老、抗炎等途徑抑制VSMC 增殖、凋亡和向成骨細(xì)胞轉(zhuǎn)化有關(guān)。WANG 等［21］和LI等［22］研究也報(bào)道，上調(diào)SIRT6表達(dá)能通過保護(hù)VSMC功能和抑制其向成骨細(xì)胞分化來抑制血管鈣化發(fā)生。

FBLN1 是由多種組織和細(xì)胞分泌的糖蛋白，因其能結(jié)合彈性纖維的無定形彈性蛋白，通過增強(qiáng)彈性蛋白穩(wěn)定性和抑制彈性纖維結(jié)構(gòu)降解導(dǎo)致細(xì)胞纖維化，又被稱為纖維蛋白1［23］。近年研究發(fā)現(xiàn)，F(xiàn)BLN1 不僅在纖維化中發(fā)揮重要作用，還參與動(dòng)脈粥樣硬化、血管硬化等多種病理過程［6］。ITO等［24］研究報(bào)道，F(xiàn)BLN1 在核因子-κB 誘導(dǎo)炎癥反應(yīng)中表達(dá)上調(diào)，F(xiàn)BLN1過表達(dá)能促進(jìn)VSMC 遷移，沉默F(xiàn)BLN1能抑制VSMC 遷移。COOLEY 等［25］研究報(bào)道，敲除FBLN1 可導(dǎo)致小鼠膜性骨和軟骨內(nèi)骨礦化減少，上調(diào)FBLN1表達(dá)能通過調(diào)節(jié)骨形態(tài)發(fā)生蛋白2促進(jìn)成骨細(xì)胞分化。上述研究提示，F(xiàn)BLN1 在VSMC 功能調(diào)節(jié)和成骨細(xì)胞分化中發(fā)揮重要作用。最近LIU等［26］研究報(bào)道，F(xiàn)BLN1 能在肺組織纖維化中激活轉(zhuǎn)化生長因子β/小母親對抗十肢癱瘓同源基因3（TGF-β/Smad3）信號通路。而TGF-β/Smad3 是血管鈣化的重要信號通路之一［27］。然而關(guān)于FBLN1與PD 患者AAC 的關(guān)系尚未可知。本研究結(jié)果顯示，PD 患者血清FBLN1 水平與AAC 積分呈正相關(guān)，是PD 患者AAC 的獨(dú)立危險(xiǎn)因素，這說明血清FBLN1 水平升高會增加PD 患者AAC 風(fēng)險(xiǎn)，分析原因可能與FBLN1 能激活TGF-β/Smad3 信號通路有關(guān)。梁小璐等［28］實(shí)驗(yàn)也證實(shí)，F(xiàn)BLN1 過表達(dá)能激活TGF-β/Smad3 信號通路，促進(jìn)VSMC 向成骨細(xì)胞轉(zhuǎn)化而導(dǎo)致血管鈣化。

本研究結(jié)果還顯示，透析齡延長和iPTH 升高也會增加PD 患者AAC 風(fēng)險(xiǎn)，分析原因可能是透析齡延長會加劇PD 患者礦物質(zhì)代謝紊亂而增加AAC 風(fēng)險(xiǎn)；iPTH 升高反映PD 患者高磷血癥和骨礦代謝紊亂，因此AAC 風(fēng)險(xiǎn)更高［4］。本研究ROC 曲線分析顯示，血清SIRT6水平為20.23 ng/mL時(shí)，評估PD患者AAC 的曲線下面積為0.781；血清FBLN1 水平為48.12 mg/L 時(shí)，評估PD 患者AAC 的曲線下面積為0.780；血清SIRT6 聯(lián)合FBLN1 評估PD 患者AAC 的曲線下面積為0.866，顯著大于SIRT6、FBLN1 單獨(dú)評估。這說明血清SIRT6、FBLN1 水平可能成為PD患者AAC 發(fā)生的輔助評估指標(biāo)，且二者聯(lián)合檢測能提升評估價(jià)值。

綜上所述，PD 患者SIRT6 水平降低和FBLN1 水平升高是AAC 發(fā)生的獨(dú)立影響因子，血清SIRT6、FBLN1 對PD 患者AAC 具有一定評估價(jià)值，二者聯(lián)合評估價(jià)值更高。但本研究結(jié)果仍需多中心研究證實(shí)。