• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    低溫馴化馬占相思對(duì)橡膠樹白粉病的抗性機(jī)制初探

    2023-11-11 02:23:12黃曦澤馮德宇梁曉宇
    熱帶作物學(xué)報(bào) 2023年10期
    關(guān)鍵詞:蠟質(zhì)嫩葉白粉

    王 燕,黃曦澤,馮德宇,王 萌,梁曉宇*,張 宇*

    1. 海南大學(xué)植物保護(hù)學(xué)院,海南海口 570228;2. 海南大學(xué)三亞南繁研究院,海南三亞 572025

    由白粉菌(Erysiphe quercicola)引起的白粉病是近年來(lái)影響橡膠樹產(chǎn)膠量的主要因素之一,在環(huán)境條件適宜情況下極易暴發(fā)成災(zāi),造成橡膠樹反復(fù)落葉,嚴(yán)重推遲割膠時(shí)間。橡膠樹白粉病暴發(fā)大多起始于每年的冬春交替之際,此時(shí)林段中橡膠樹大多處于落葉期,可為白粉菌提供寄生的葉片較少。因此尋找橡膠樹白粉菌的其他寄主植物,控制其初侵染的菌源,可在一定程度上降低白粉病的危害規(guī)模。目前已報(bào)道的橡膠樹白粉菌寄主主要有馬占相思(Acacia mangium)、飛揚(yáng)草(Euphorbia hirtaL.)、麻風(fēng)樹(Jatropha curcasL.)和刺頭婆(Urena lobatasp.)等[1]。其中馬占相思是豆科(Leguminosae)含羞草亞科(Mimosoideae)金合歡屬(Vachellia)的一種熱帶常綠高大喬木。作為重要的膠園防護(hù)林樹種,馬占相思有降低風(fēng)速、貯水防旱、保護(hù)水土、降溫防寒、改良土壤等生態(tài)效能,可為橡膠樹的生長(zhǎng)和產(chǎn)膠提供良好的條件,還可生產(chǎn)上等薪炭材料,創(chuàng)造豐厚的經(jīng)濟(jì)效益[2-4]。研究馬占相思與橡膠樹白粉菌的生物互作,可進(jìn)一步了解白粉菌在寄主上的行為反應(yīng),為橡膠樹白粉病的高效防治提供理論基礎(chǔ)。

    低溫馴化是植物感受和傳遞低溫信號(hào)引起低溫適應(yīng)性反應(yīng),提高抗凍性的過(guò)程[5]。低溫馴化過(guò)程中植物體內(nèi)發(fā)生許多生理與生化變化,如滲透調(diào)節(jié)物質(zhì)大量積累、抗氧化酶活性增強(qiáng)、細(xì)胞膜脂質(zhì)組成發(fā)生變化等[6]。前期研究發(fā)現(xiàn),在低溫環(huán)境中馬占相思的新抽嫩葉不再感染橡膠樹白粉菌,獲得了顯著的抗病性,推測(cè)是低溫馴化提高了馬占相思對(duì)橡膠樹白粉病的抗性。為了探究其中的抗性誘導(dǎo)機(jī)制,本研究以23、19、15 ℃溫度條件下培養(yǎng)的馬占相思植株葉片為試驗(yàn)材料,驗(yàn)證這一抗性現(xiàn)象,利用掃描電鏡和GC-MS/MS等儀器分析低溫馴化對(duì)馬占相思嫩葉蠟質(zhì)的晶體結(jié)構(gòu)和組成的影響,并測(cè)定接種橡膠樹白粉菌的植株氧化酶活性,初步解析其抗病誘導(dǎo)機(jī)制。

    1 材料與方法

    1.1 材料

    1.1.1 植物材料 供試品種為馬占相思1年生幼苗,該品種購(gòu)自廣州市瑞景園林景觀設(shè)計(jì)有限公司,在自然條件下繼續(xù)培養(yǎng)待用;橡膠樹品種為熱研73397橡膠樹芽接苗,購(gòu)自中國(guó)熱帶農(nóng)業(yè)科學(xué)院橡膠研究所,在自然條件下培養(yǎng)抽古銅葉片待接種。

    1.1.2 菌株 橡膠樹白粉菌OH-3菌株由本實(shí)驗(yàn)室分離純化,接種至熱研73397橡膠樹芽接苗上擴(kuò)繁培養(yǎng)。

    1.2 方法

    1.2.1 低溫馴化 馬占相思的原產(chǎn)地屬于熱帶濕潤(rùn)氣候,年均溫度不低于23 ℃[7]。故本研究以23 ℃作為馬占相思的自然生長(zhǎng)溫度,19 ℃和15 ℃作為馬占相思的低溫馴化溫度,將長(zhǎng)勢(shì)一致且健康的馬占相思幼苗分別轉(zhuǎn)移至上述3個(gè)溫度的人工氣候箱(光照時(shí)間12 h/d,光照強(qiáng)度10 000 lx,空氣相對(duì)濕度85%)中培養(yǎng)30 d。

    1.2.2 橡膠樹白粉菌接種 用軟毛筆刷將橡膠樹芽接苗葉片上白粉菌的孢子粉輕輕掃到燒杯中,加入無(wú)菌水渦旋振蕩搖勻,用血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù),制備濃度為105個(gè)/mL的孢子懸浮液。用噴壺將孢子懸浮液均勻地噴霧至馬占相思幼苗葉片表面,后將幼苗置于培養(yǎng)條件為19 ℃、光照時(shí)間12 h/d,光照強(qiáng)度10 000 lx,濕度85%~90%的人工氣候室中培養(yǎng)并觀察病程。每個(gè)馴化溫度下接種6株苗,實(shí)驗(yàn)重復(fù)3次。

    1.2.3 掃描電鏡觀察 將馬占相思葉片剪成1 cm2大小的片段,用2.5%戊二醛浸泡后,4 ℃下固定12 h;0.1 mol/L磷酸緩沖液沖洗3次,每次20 min;梯度酒精脫水(30%、50%、70%、90%、100%)各20 min,醋酸異戊酯置換酒精清洗1次;冷凍干燥12 h。將樣品粘于導(dǎo)電膠并固定在托盤上,抽真空后噴金,利用掃描電鏡(Phenom G6 pure)對(duì)葉片表面進(jìn)行蠟質(zhì)晶體形態(tài)的觀察[8-9]。每個(gè)馴化溫度下處理3片葉,實(shí)驗(yàn)重復(fù)3次。

    1.2.4 蠟質(zhì)提取 蠟質(zhì)提取參照趙帥等[10]的方法稍加改進(jìn)。將馬占相思葉片至于裝有20 mL三氯甲烷的燒杯中,輕輕搖晃燒杯加速蠟質(zhì)溶解,后將液體轉(zhuǎn)移至旋蒸瓶中,待三氯甲烷在40 ℃下完全蒸干,分別加入30 μL吡啶和30 μL雙(三甲基硅烷基)三氟乙酰胺,密封后放入70 ℃水浴鍋中衍生反應(yīng)1 h,反應(yīng)完全后再次40 ℃旋蒸干,分次加入1 mL三氯甲烷溶解,轉(zhuǎn)移至進(jìn)樣瓶。每個(gè)馴化溫度下處理9片葉,實(shí)驗(yàn)重復(fù)2次。

    1.2.5 GC-MS/MS分析 使用Trace1300-TSQ 9000氣相質(zhì)譜聯(lián)用儀(美國(guó)賽默飛)對(duì)上述蠟質(zhì)提取液進(jìn)行成分的定性定量分析。GC-MS/MS條件:載氣為氦氣,進(jìn)樣量1 μL,進(jìn)樣口溫度280 ℃,檢測(cè)器溫度320 ℃;檢測(cè)程序:50 ℃保持2 min,以20 ℃/min升溫至240 ℃保持2 min,再以1.5 ℃/min升溫至320 ℃保持15 min。參考計(jì)算機(jī)質(zhì)譜數(shù)據(jù)庫(kù),依據(jù)蠟質(zhì)成分中酸、醇、醛和烷烴均有其明顯的M-15特殊離子峰判定各蠟質(zhì)組分種類以及碳原子數(shù),檢索后判定化合物名稱[11]。蠟質(zhì)中各組分相對(duì)含量根據(jù)其離子峰面積占總離子峰面積的比值進(jìn)行計(jì)算。

    1.2.6 氧化酶活性測(cè)定 稱取0.2 g馬占相思葉片,在預(yù)冷研缽中研磨成粉后加入4 mL磷酸緩沖液(0.05 mol/L, pH 7.8),4 ℃條件下10 000 r/min離心20 min,轉(zhuǎn)移上清液至新離心管中用于抗氧化酶活性測(cè)定。超氧化物歧化酶(SOD)活性采用氮藍(lán)四唑法NBT法測(cè)定[12];過(guò)氧化氫酶(CAT)活性采用過(guò)氧化氫法測(cè)定;過(guò)氧化物酶(POD)活性采用愈創(chuàng)木酚法測(cè)定[13]。每個(gè)馴化溫度下處理6片葉子,實(shí)驗(yàn)重復(fù)3次。酶活性單位均以單位蛋白含量的酶活性表示,U/g。

    1.3 數(shù)據(jù)處理

    采用Excel軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)整理,采用DPS和Origin軟件進(jìn)行差異顯著性分析和制圖。

    2 結(jié)果與分析

    2.1 低溫馴化增強(qiáng)馬占相思對(duì)橡膠樹白粉病的抗性

    將馬占相思幼苗分別置于23、19、15 ℃溫度條件下培養(yǎng)抽出嫩葉,后轉(zhuǎn)移至橡膠樹白粉菌最適溫度19 ℃條件下接種(圖1)。接種12 d后發(fā)現(xiàn),23 ℃培養(yǎng)的植株嫩葉發(fā)病嚴(yán)重,上下表面布滿含有大量菌絲的病斑;23 ℃培養(yǎng)的植株成熟葉均不發(fā)??;19 ℃培養(yǎng)的嫩葉發(fā)病較輕,上下表面有少量且菌絲稀少的病斑,19 ℃培養(yǎng)的成熟葉均不發(fā)病;15 ℃培養(yǎng)的嫩葉和成熟葉均不發(fā)病,將低溫馴化后不發(fā)病植株重新置于23 ℃下培養(yǎng)至抽出嫩葉,新抽葉片接種白粉菌后發(fā)病嚴(yán)重。由此可見,低溫馴化顯著增強(qiáng)了馬占相思對(duì)橡膠樹白粉病的抗性。

    圖1 不同培養(yǎng)溫度下馬占相思葉片接種橡膠樹白粉菌的病癥Fig. 1 Lesion of A. mangium leaves inoculated with E. quercicola under different culture temperature conditions

    2.2 低溫馴化對(duì)馬占相思嫩葉蠟質(zhì)晶體結(jié)構(gòu)的影響

    通過(guò)觀察不同溫度條件培養(yǎng)的馬占相思葉片表面形態(tài)(圖2),發(fā)現(xiàn)23 ℃培養(yǎng)的嫩葉表面不平整,有明顯的凹凸,19 ℃和15 ℃培養(yǎng)的嫩葉表面趨于平滑,有輕微的凹凸,葉片形態(tài)更趨近于23 ℃培養(yǎng)的成熟葉。利用掃描電鏡觀察了馬占相思葉片表面的蠟質(zhì)層結(jié)構(gòu),發(fā)現(xiàn)23 ℃嫩葉蠟質(zhì)層凸起、排列不規(guī)則,晶體結(jié)構(gòu)相互疊加纏繞;19 ℃嫩葉蠟質(zhì)層凸起,結(jié)構(gòu)排列有序;23 ℃成熟葉和15 ℃嫩葉蠟質(zhì)層平滑,有明顯的晶體狀蠟質(zhì)。綜上所述,低溫馴化可促進(jìn)馬占相思嫩葉蠟質(zhì)晶體結(jié)構(gòu)的成熟化。

    圖2 不同培養(yǎng)溫度條件下馬占相思葉片的上表面形態(tài)Fig. 2 Morphology of the upper surface of A. mangium leaves under different culture temperature conditions

    2.3 低溫馴化對(duì)馬占相思嫩葉蠟質(zhì)組分的影響

    提取不同溫度條件下培養(yǎng)的馬占相思葉片蠟質(zhì),利用GC-MS/MS檢測(cè)體系對(duì)蠟質(zhì)組分進(jìn)行定性定量分析,不同葉片的蠟質(zhì)檢測(cè)總離子峰圖如圖3所示。與23 ℃嫩葉的蠟質(zhì)檢測(cè)離子峰相比,15 ℃嫩葉、19 ℃嫩葉和23 ℃成熟葉的檢測(cè)離子峰更多,峰圖更趨近一致,說(shuō)明15 ℃嫩葉、19 ℃嫩葉和23 ℃成熟葉的蠟質(zhì)組成更復(fù)雜。進(jìn)一步篩選到10個(gè)響應(yīng)強(qiáng)度高的離子峰,經(jīng)檢索質(zhì)譜數(shù)據(jù)庫(kù),推測(cè)出這些化合物的種類。10個(gè)蠟質(zhì)成分主要?dú)w為5類,其中烷烴類化合物有5種,分別為C25烷、C27烷、C31烷、C36烷、C44烷;酚類化合物有2種,分別為C14酚和C23酚;酮類、醇類和酯類化合物各1種,分別為C30酮、C30醇和C32酯。

    圖3 不同培養(yǎng)溫度條件下馬占相思葉片的蠟質(zhì)成分檢測(cè)總離子峰Fig. 3 The total ion peak of A. mangium leaf wax under different culture temperature conditions

    以檢測(cè)總離子峰為100%分析比較以上化合物在不同溫度條件下培養(yǎng)的馬占相思葉片蠟質(zhì)中的相對(duì)含量(表1)。結(jié)果表明,馬占相思葉片蠟質(zhì)中C30酮的相對(duì)含量最高,不同培養(yǎng)溫度的葉片C30酮相對(duì)含量差異顯著,由低到高排列依次為:15 ℃嫩葉<23 ℃成熟葉<19 ℃嫩葉<23 ℃嫩葉。另外,在23 ℃嫩葉中相對(duì)含量較高的有C36烷、C32酯和C30醇,而15 ℃嫩葉和23 ℃成熟葉中的相對(duì)含量均顯著降低。由此可見,不同溫度對(duì)馬占相思葉片蠟質(zhì)成分的影響較大,低溫馴化使葉片蠟質(zhì)組成更復(fù)雜,一定程度上使嫩葉的主要蠟質(zhì)成分趨近于成熟葉。

    表1 不同培養(yǎng)溫度條件下馬占相思葉片蠟質(zhì)主要成分的相對(duì)含量Tab. 1 Relative contents of the main components of wax in A. mangium leaves under different culture temperature conditions

    2.4 低溫馴化對(duì)馬占相思嫩葉氧化酶活性的影響

    通過(guò)比較23 ℃和15 ℃培養(yǎng)的馬占相思嫩葉接種橡膠樹白粉菌后SOD、CAT和POD氧化酶活性發(fā)現(xiàn)。隨著侵染時(shí)間延長(zhǎng),2種溫度培養(yǎng)的嫩葉的3種氧化酶活性均呈先升高后降低的趨勢(shì),且在24 h時(shí)達(dá)到最高值。與23 ℃嫩葉相比,15 ℃嫩葉的SOD、CAT和POD酶活性在部分侵染時(shí)間內(nèi)顯著增強(qiáng),其中SOD酶表現(xiàn)最為明顯(圖4)。綜上表明,低溫馴化可以在一定程度上提高馬占相思嫩葉在接種白粉菌時(shí)的氧化酶活性。

    圖4 23 ℃和15 ℃培養(yǎng)的馬占相思嫩葉的氧化酶活性Fig. 4 Oxidase activity of young leaves of A. mangium incubated at 23 ℃ and 15 ℃

    3 討論

    溫度是影響植物生理過(guò)程的重要非生物因素[14]。本研究利用不同溫度馴化的馬占相思幼苗嫩葉接種橡膠樹白粉菌后發(fā)現(xiàn),15 ℃溫度條件下抽出的嫩葉不發(fā)病,說(shuō)明低溫馴化可顯著增強(qiáng)馬占相思嫩葉對(duì)橡膠樹白粉病的抗性。已有研究表明,植物可以通過(guò)改變根、莖、葉的形態(tài),解剖結(jié)構(gòu)和超微結(jié)構(gòu)來(lái)適應(yīng)低溫環(huán)境[15]。植物還可以通過(guò)積累細(xì)胞內(nèi)滲透調(diào)節(jié)物質(zhì)[16],增加代謝相關(guān)蛋白、分子伴侶、抗凍蛋白的合成來(lái)耐受或抵抗低溫脅迫[17]。推測(cè)馴化過(guò)程中的低溫脅迫引起馬占相思的嫩葉形態(tài)結(jié)構(gòu)或組成物質(zhì)的變化,從而產(chǎn)生了對(duì)橡膠樹白粉病的抗性。

    本研究觀察了不同馴化溫度條件下馬占相思葉片的表面形態(tài),發(fā)現(xiàn)19 ℃和15 ℃培養(yǎng)的嫩葉表面相對(duì)平滑,形態(tài)更接近23 ℃培養(yǎng)的成熟葉。掃描電鏡結(jié)果表明15 ℃嫩葉和23 ℃成熟葉蠟質(zhì)層結(jié)構(gòu)趨近一致,表面平滑且有明顯的晶體狀蠟質(zhì),這進(jìn)一步說(shuō)明低溫馴化可促進(jìn)馬占相思嫩葉蠟質(zhì)晶體結(jié)構(gòu)的成熟化。植物表皮蠟質(zhì)是植物抵御外界生物脅迫的第一屏障,通過(guò)提高表皮的機(jī)械強(qiáng)度和疏水性,能有效防止真菌等病原體的侵害[18-19]。蠟質(zhì)晶體結(jié)構(gòu)容易受溫度誘導(dǎo)產(chǎn)生重組現(xiàn)象,當(dāng)植物處于低溫環(huán)境時(shí),蠟質(zhì)晶體結(jié)構(gòu)容易形成棒狀、管狀等結(jié)構(gòu),而處于高溫環(huán)境時(shí)容易形成板狀、片狀結(jié)構(gòu)[20]。本研究中,馬占相思的嫩葉易受橡膠樹白粉菌侵染,而成熟葉片對(duì)橡膠樹白粉病具有天然抗性,因此,推測(cè)低溫馴化可能是通過(guò)促進(jìn)馬占相思嫩葉蠟質(zhì)晶體結(jié)構(gòu)的成熟化,形成了更具防御性的物理屏障,通過(guò)阻礙白粉菌的侵染發(fā)揮抗病作用。

    環(huán)境溫度不僅能夠影響植物蠟質(zhì)的晶體結(jié)構(gòu),還會(huì)影響烷烴、烯烴、醇、酮、酯和酚等蠟質(zhì)組分的分布和比例[21]。本研究利用GC-MS/MS檢測(cè)技術(shù)對(duì)不同溫度馴化的馬占相思葉片蠟質(zhì)組分進(jìn)行了定性定量分析,發(fā)現(xiàn)其主要含有烷烴、醇、酮、酯、酚等5類有機(jī)化合物,C30酮相對(duì)含量最高。總離子峰圖和相對(duì)含量結(jié)果進(jìn)一步表明,低溫培養(yǎng)使葉片蠟質(zhì)組成更復(fù)雜,15 ℃嫩葉和23 ℃成熟葉的蠟質(zhì)組成較一致,說(shuō)明低溫馴化在一定程度促進(jìn)嫩葉的主要蠟質(zhì)成分比例趨近于成熟葉。已有研究表明,一些植物蠟質(zhì)組分可以抑制或者刺激真菌孢子的萌發(fā)。水稻葉片蠟質(zhì)組分十六烷二醇可以誘導(dǎo)稻瘟菌附著胞的分化形成,并促進(jìn)灰霉菌孢子萌發(fā)和角質(zhì)酶的表達(dá)[22]。因此,推測(cè)低溫馴化也可能促進(jìn)或抑制了馬占相思嫩葉的某種蠟質(zhì)成分,從而調(diào)控病原菌的侵染和增殖分化來(lái)實(shí)現(xiàn)蠟質(zhì)的化學(xué)防御功能。

    另外,一些植物蠟質(zhì)成分被真菌角質(zhì)酶降解的產(chǎn)物,也可作為植物損傷相關(guān)分子模式的誘導(dǎo)子被植物模式識(shí)別受體所識(shí)別,通過(guò)誘導(dǎo)植物活性氧的積累,繼而啟動(dòng)下游包括超敏反應(yīng)在內(nèi)的一系列防御反應(yīng)[23-24]。如,外施無(wú)抑菌活性的蠟質(zhì)單體可增加大麥對(duì)白粉菌的抗性[25]。本研究測(cè)定了23 ℃和15 ℃培養(yǎng)的馬占相思嫩葉接種橡膠樹白粉菌后的SOD、CAT和POD氧化酶活性,發(fā)現(xiàn)低溫馴化可以在一定程度上提高馬占相思嫩葉在接種白粉菌時(shí)的氧化酶活性。因此,推測(cè)低溫馴化也可能促進(jìn)馬占相思嫩葉生成可作為誘導(dǎo)子的蠟質(zhì)組分,當(dāng)被白粉菌侵染時(shí)激發(fā)了下游的免疫反應(yīng),從而產(chǎn)生抗病性。當(dāng)然本研究還有許多值得探討的問(wèn)題,如,馬占相思葉片中哪種蠟質(zhì)成分發(fā)揮了對(duì)橡膠樹白粉病的抗病作用?低溫馴化是否還會(huì)通過(guò)影響蠟質(zhì)之外的物質(zhì)來(lái)提高馬占相思的抗病性?抗病相關(guān)機(jī)制需要代謝組和轉(zhuǎn)錄組等高通量分析手段和分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)進(jìn)行進(jìn)一步驗(yàn)證。

    4 結(jié)論

    本研究對(duì)不同溫度培養(yǎng)的馬占相思接種橡膠樹白粉菌,發(fā)現(xiàn)低溫馴化顯著增強(qiáng)了馬占相思對(duì)橡膠樹白粉菌的抗性;通過(guò)比較不同馴化溫度的嫩葉蠟質(zhì)晶體結(jié)構(gòu)和組分差異,發(fā)現(xiàn)低溫馴化可促進(jìn)馬占相思嫩葉蠟質(zhì)晶體結(jié)構(gòu)和主要成分的成熟化;進(jìn)一步比較不同溫度培養(yǎng)的葉片氧化酶活性發(fā)現(xiàn),低溫馴化可以一定程度提高馬占相思接種橡膠樹白粉菌后的氧化酶活性。本研究初步探索了橡膠樹白粉病寄主的抗病機(jī)制,為橡膠樹的抗病育種提供了理論依據(jù)。

    猜你喜歡
    蠟質(zhì)嫩葉白粉
    大麥表皮蠟質(zhì)組分及晶體結(jié)構(gòu)的差異性分析
    董長(zhǎng)貴
    蔬菜白粉虱 秋防正當(dāng)時(shí)
    枸杞嫩葉補(bǔ)虛益精
    益壽寶典(2018年17期)2018-01-26 15:44:57
    保護(hù)地蔬菜白粉虱的發(fā)生與防治
    像一枚嫩葉(外一首)
    旗葉蠟質(zhì)含量不同小麥近等基因系的抗旱性
    白僵菌防治溫室大棚白粉虱藥效試驗(yàn)
    生物酶法制備蠟質(zhì)玉米淀粉納米晶及其表征
    鑒定出紐荷爾臍橙果皮蠟質(zhì)中的六甲氧基黃酮
    在线观看人妻少妇| 亚洲不卡免费看| 少妇裸体淫交视频免费看高清| 欧美精品一区二区大全| 中文字幕免费在线视频6| 97超视频在线观看视频| 欧美+日韩+精品| 在线 av 中文字幕| 久久人人爽人人爽人人片va| 国产成人精品无人区| 十八禁高潮呻吟视频 | 亚洲av在线观看美女高潮| 啦啦啦中文免费视频观看日本| 日韩欧美 国产精品| 又爽又黄a免费视频| 久久97久久精品| 精品一区二区免费观看| 成人亚洲精品一区在线观看| 亚洲人成网站在线播| 国国产精品蜜臀av免费| 成年美女黄网站色视频大全免费 | 麻豆乱淫一区二区| 一级毛片 在线播放| av国产久精品久网站免费入址| 91久久精品电影网| 欧美97在线视频| 欧美变态另类bdsm刘玥| 国产精品国产三级国产专区5o| 久久6这里有精品| 国产综合精华液| 高清不卡的av网站| 国产一区亚洲一区在线观看| 国内揄拍国产精品人妻在线| 街头女战士在线观看网站| 国产熟女欧美一区二区| 大陆偷拍与自拍| 中文字幕人妻丝袜制服| 一个人看视频在线观看www免费| 国产精品不卡视频一区二区| 青春草视频在线免费观看| 香蕉精品网在线| 欧美日韩av久久| 欧美日韩国产mv在线观看视频| 国产综合精华液| 夫妻午夜视频| 一级毛片 在线播放| 欧美日韩在线观看h| 精品人妻偷拍中文字幕| 黄色日韩在线| 青春草视频在线免费观看| 亚洲国产精品国产精品| 亚洲三级黄色毛片| 国产一区二区三区综合在线观看 | 婷婷色综合www| 国产片特级美女逼逼视频| 久久久久久久国产电影| 夜夜爽夜夜爽视频| 人妻 亚洲 视频| 人人妻人人爽人人添夜夜欢视频 | 日本午夜av视频| freevideosex欧美| 蜜臀久久99精品久久宅男| 最新中文字幕久久久久| 国国产精品蜜臀av免费| 久久6这里有精品| 免费在线观看成人毛片| 精品亚洲乱码少妇综合久久| 99国产精品免费福利视频| 伦理电影大哥的女人| 欧美区成人在线视频| 伊人久久精品亚洲午夜| 日本黄色日本黄色录像| 午夜福利在线观看免费完整高清在| 亚洲精品亚洲一区二区| 国产极品粉嫩免费观看在线 | 你懂的网址亚洲精品在线观看| 人妻夜夜爽99麻豆av| 精华霜和精华液先用哪个| 两个人的视频大全免费| 免费高清在线观看视频在线观看| 色吧在线观看| 亚洲高清免费不卡视频| av不卡在线播放| 亚洲精品成人av观看孕妇| 蜜桃久久精品国产亚洲av| 80岁老熟妇乱子伦牲交| 高清午夜精品一区二区三区| 天天操日日干夜夜撸| av网站免费在线观看视频| 国产伦精品一区二区三区视频9| 亚洲国产av新网站| 人人澡人人妻人| 丰满少妇做爰视频| 久久99热6这里只有精品| 香蕉精品网在线| 国产高清三级在线| 亚洲性久久影院| 午夜福利在线观看免费完整高清在| 日本色播在线视频| 五月玫瑰六月丁香| 亚洲国产欧美在线一区| 少妇裸体淫交视频免费看高清| 成年人午夜在线观看视频| 中文字幕免费在线视频6| 国产精品人妻久久久久久| 伊人亚洲综合成人网| 亚洲国产av新网站| 偷拍熟女少妇极品色| 国产精品久久久久成人av| 久热久热在线精品观看| 精品一品国产午夜福利视频| av天堂中文字幕网| 亚洲欧美精品专区久久| 五月玫瑰六月丁香| 一区二区三区免费毛片| 国产精品一区www在线观看| 三上悠亚av全集在线观看 | 七月丁香在线播放| 久久97久久精品| 欧美日韩视频高清一区二区三区二| 99九九在线精品视频 | 国产精品偷伦视频观看了| 欧美精品国产亚洲| 偷拍熟女少妇极品色| 女性被躁到高潮视频| 国产69精品久久久久777片| 欧美97在线视频| 99国产精品免费福利视频| 两个人的视频大全免费| 久久久久久伊人网av| 综合色丁香网| 亚洲四区av| 老熟女久久久| 高清视频免费观看一区二区| 永久免费av网站大全| 亚洲国产av新网站| 精品少妇久久久久久888优播| 欧美精品亚洲一区二区| 老女人水多毛片| 女人久久www免费人成看片| 免费人妻精品一区二区三区视频| 免费久久久久久久精品成人欧美视频 | 99久国产av精品国产电影| 欧美 日韩 精品 国产| 久久毛片免费看一区二区三区| 一级毛片黄色毛片免费观看视频| 久久国产乱子免费精品| 国产视频首页在线观看| 午夜老司机福利剧场| 18禁动态无遮挡网站| 久久久欧美国产精品| 久久免费观看电影| 丰满人妻一区二区三区视频av| 综合色丁香网| 狂野欧美白嫩少妇大欣赏| 国产免费又黄又爽又色| 99视频精品全部免费 在线| 久久精品久久久久久噜噜老黄| 成人特级av手机在线观看| 国产高清有码在线观看视频| 亚洲精品成人av观看孕妇| 亚洲av在线观看美女高潮| 又黄又爽又刺激的免费视频.| 久热这里只有精品99| 成年美女黄网站色视频大全免费 | 国产精品人妻久久久影院| 欧美 亚洲 国产 日韩一| 乱码一卡2卡4卡精品| 久久久久国产网址| 少妇被粗大的猛进出69影院 | 韩国av在线不卡| 亚洲国产最新在线播放| 麻豆乱淫一区二区| 久久毛片免费看一区二区三区| 亚洲av欧美aⅴ国产| 成人国产av品久久久| 国产精品一区二区在线不卡| 欧美日韩亚洲高清精品| 又黄又爽又刺激的免费视频.| 热99国产精品久久久久久7| 在线观看www视频免费| 大又大粗又爽又黄少妇毛片口| av有码第一页| 久久99精品国语久久久| 国产亚洲最大av| 亚洲精品日本国产第一区| 一级爰片在线观看| 精品国产露脸久久av麻豆| 色吧在线观看| 亚洲va在线va天堂va国产| 丁香六月天网| 全区人妻精品视频| 97超视频在线观看视频| 国产精品久久久久成人av| tube8黄色片| 插逼视频在线观看| 国产成人91sexporn| 丰满少妇做爰视频| 国产乱人偷精品视频| 国产男女超爽视频在线观看| 一区二区av电影网| 91精品伊人久久大香线蕉| 免费黄网站久久成人精品| 欧美激情极品国产一区二区三区 | 99热这里只有精品一区| 五月开心婷婷网| 亚洲欧美成人综合另类久久久| 天美传媒精品一区二区| 国产无遮挡羞羞视频在线观看| 91精品一卡2卡3卡4卡| 亚洲精品久久久久久婷婷小说| 欧美少妇被猛烈插入视频| 男人爽女人下面视频在线观看| 国产色爽女视频免费观看| 一级毛片黄色毛片免费观看视频| 成人国产av品久久久| 亚洲成人av在线免费| 久久久久久伊人网av| 一本久久精品| 成人美女网站在线观看视频| 边亲边吃奶的免费视频| 国产精品三级大全| 狂野欧美激情性bbbbbb| 亚洲欧美成人精品一区二区| 如日韩欧美国产精品一区二区三区 | 美女cb高潮喷水在线观看| av在线app专区| 国产成人精品久久久久久| 国产成人91sexporn| 国语对白做爰xxxⅹ性视频网站| 中文在线观看免费www的网站| 久久人妻熟女aⅴ| 国产男女内射视频| 亚洲精品成人av观看孕妇| a级片在线免费高清观看视频| 免费人妻精品一区二区三区视频| 国产综合精华液| 中文字幕亚洲精品专区| 人人妻人人澡人人爽人人夜夜| 九九久久精品国产亚洲av麻豆| 午夜91福利影院| 在线观看一区二区三区激情| 亚洲欧美一区二区三区黑人 | 国产中年淑女户外野战色| 熟女av电影| 亚洲天堂av无毛| 精品少妇内射三级| 国产精品麻豆人妻色哟哟久久| 国产成人精品久久久久久| 亚洲欧洲日产国产| 少妇熟女欧美另类| 一个人看视频在线观看www免费| 国内揄拍国产精品人妻在线| 亚洲国产最新在线播放| 在线观看一区二区三区激情| 国产永久视频网站| 狂野欧美激情性xxxx在线观看| 久久精品久久久久久久性| 五月开心婷婷网| 亚洲欧洲国产日韩| 精品久久久精品久久久| 久久久久久久亚洲中文字幕| 男的添女的下面高潮视频| av天堂久久9| 免费看av在线观看网站| av有码第一页| 日本av免费视频播放| 久久久久久久精品精品| 在线免费观看不下载黄p国产| 少妇的逼水好多| 日本av免费视频播放| 久久国产亚洲av麻豆专区| 国产日韩欧美亚洲二区| 久久人妻熟女aⅴ| 久久久国产一区二区| 久久人人爽人人片av| 欧美日本中文国产一区发布| 成人黄色视频免费在线看| 精品少妇内射三级| 亚洲第一av免费看| 亚洲一区二区三区欧美精品| 一级毛片久久久久久久久女| 狠狠精品人妻久久久久久综合| 蜜桃在线观看..| 国产精品久久久久久久电影| 国产男女内射视频| 久久国产亚洲av麻豆专区| 99热这里只有精品一区| 肉色欧美久久久久久久蜜桃| 国国产精品蜜臀av免费| 成人二区视频| av福利片在线观看| 亚洲内射少妇av| 日本黄色片子视频| 女性生殖器流出的白浆| 免费不卡的大黄色大毛片视频在线观看| 亚洲欧美中文字幕日韩二区| 日日摸夜夜添夜夜添av毛片| 精品久久久久久久久亚洲| 亚洲欧美清纯卡通| 日韩一区二区视频免费看| 国产黄频视频在线观看| 久久 成人 亚洲| 久久久国产欧美日韩av| 欧美精品人与动牲交sv欧美| 免费大片18禁| av线在线观看网站| 永久免费av网站大全| 综合色丁香网| 老熟女久久久| 国产永久视频网站| 18禁在线播放成人免费| 亚洲精品乱码久久久v下载方式| 三级国产精品欧美在线观看| 国产视频首页在线观看| 亚洲国产成人一精品久久久| 精品熟女少妇av免费看| av天堂久久9| 老熟女久久久| 亚洲激情五月婷婷啪啪| 少妇猛男粗大的猛烈进出视频| 成人美女网站在线观看视频| 国产精品成人在线| 国产亚洲精品久久久com| 亚洲欧美日韩东京热| 午夜久久久在线观看| 超碰97精品在线观看| av天堂中文字幕网| 精品一区在线观看国产| 内地一区二区视频在线| 欧美精品人与动牲交sv欧美| 免费观看无遮挡的男女| 成年女人在线观看亚洲视频| 最黄视频免费看| 亚洲国产色片| 久久鲁丝午夜福利片| 一本—道久久a久久精品蜜桃钙片| 免费黄色在线免费观看| 亚洲成色77777| av一本久久久久| 黑人巨大精品欧美一区二区蜜桃 | 亚洲国产毛片av蜜桃av| 久久久午夜欧美精品| 毛片一级片免费看久久久久| 在线观看免费视频网站a站| 3wmmmm亚洲av在线观看| 老司机影院成人| 精品人妻熟女毛片av久久网站| 爱豆传媒免费全集在线观看| 国产视频内射| 日本免费在线观看一区| 成人18禁高潮啪啪吃奶动态图 | 香蕉精品网在线| 日本黄大片高清| 校园人妻丝袜中文字幕| 黄色欧美视频在线观看| 少妇丰满av| 精品人妻熟女av久视频| 黄色配什么色好看| 色哟哟·www| 日日啪夜夜爽| 久久久午夜欧美精品| 99九九在线精品视频 | 偷拍熟女少妇极品色| 免费少妇av软件| 91午夜精品亚洲一区二区三区| 一级毛片电影观看| 久久精品国产a三级三级三级| 日韩av在线免费看完整版不卡| 91久久精品国产一区二区成人| 在线观看免费视频网站a站| 日韩精品有码人妻一区| 亚洲欧美一区二区三区国产| 黑丝袜美女国产一区| 国产精品欧美亚洲77777| 亚洲不卡免费看| 亚洲av中文av极速乱| av国产久精品久网站免费入址| 在线播放无遮挡| 亚洲精品乱久久久久久| 超碰97精品在线观看| 两个人的视频大全免费| 少妇裸体淫交视频免费看高清| av在线老鸭窝| 五月伊人婷婷丁香| 欧美日韩av久久| 亚洲成人av在线免费| 日韩成人av中文字幕在线观看| 欧美97在线视频| 亚洲美女视频黄频| 最近的中文字幕免费完整| 亚洲成色77777| 18禁在线播放成人免费| 国产免费又黄又爽又色| 日韩精品有码人妻一区| 99热全是精品| 寂寞人妻少妇视频99o| 国产av国产精品国产| 少妇的逼水好多| 亚洲精品色激情综合| 熟妇人妻不卡中文字幕| 亚洲av中文av极速乱| 美女cb高潮喷水在线观看| 国产欧美亚洲国产| 成人18禁高潮啪啪吃奶动态图 | 中文字幕制服av| 最新的欧美精品一区二区| 日本欧美国产在线视频| 五月开心婷婷网| 在线观看国产h片| 中文字幕久久专区| 色婷婷av一区二区三区视频| 嘟嘟电影网在线观看| 久久免费观看电影| 夜夜骑夜夜射夜夜干| 成人免费观看视频高清| 天堂8中文在线网| 乱码一卡2卡4卡精品| 日本av免费视频播放| 国产精品一区www在线观看| 高清午夜精品一区二区三区| av国产精品久久久久影院| 免费看不卡的av| 啦啦啦在线观看免费高清www| 纯流量卡能插随身wifi吗| 久久久午夜欧美精品| 五月天丁香电影| 成人亚洲欧美一区二区av| 亚洲精品久久午夜乱码| 免费人成在线观看视频色| 亚洲怡红院男人天堂| 一本大道久久a久久精品| 免费看不卡的av| 在线观看三级黄色| av一本久久久久| 少妇精品久久久久久久| 国内揄拍国产精品人妻在线| 免费看av在线观看网站| 精品人妻偷拍中文字幕| 我要看黄色一级片免费的| 免费大片黄手机在线观看| 亚洲精品国产色婷婷电影| 男人添女人高潮全过程视频| 精品一区二区免费观看| 如何舔出高潮| 亚洲av国产av综合av卡| 国产精品一区www在线观看| 国产精品久久久久久久电影| 免费观看无遮挡的男女| 国产成人一区二区在线| 欧美国产精品一级二级三级 | 国产国拍精品亚洲av在线观看| 免费黄频网站在线观看国产| 搡女人真爽免费视频火全软件| 晚上一个人看的免费电影| 日本av免费视频播放| 丰满饥渴人妻一区二区三| 91午夜精品亚洲一区二区三区| 简卡轻食公司| 日韩欧美 国产精品| 中文乱码字字幕精品一区二区三区| 一级毛片黄色毛片免费观看视频| 王馨瑶露胸无遮挡在线观看| 久久久久国产网址| 日本爱情动作片www.在线观看| 人妻一区二区av| 亚洲情色 制服丝袜| 中文资源天堂在线| 91久久精品国产一区二区三区| 蜜臀久久99精品久久宅男| 99久久精品国产国产毛片| 最近中文字幕2019免费版| videossex国产| 国产精品.久久久| 久久 成人 亚洲| 亚洲中文av在线| 亚洲,一卡二卡三卡| 国产成人freesex在线| 天美传媒精品一区二区| 99re6热这里在线精品视频| 少妇裸体淫交视频免费看高清| 人人妻人人爽人人添夜夜欢视频 | 久久精品国产亚洲av天美| 亚洲av成人精品一二三区| 亚洲不卡免费看| 精品久久久久久电影网| 亚洲精品一区蜜桃| 日本wwww免费看| 99久久人妻综合| 日韩不卡一区二区三区视频在线| 国产欧美日韩一区二区三区在线 | 久久人人爽人人爽人人片va| 黄色欧美视频在线观看| 欧美精品国产亚洲| 青春草视频在线免费观看| 午夜激情久久久久久久| 一级毛片aaaaaa免费看小| √禁漫天堂资源中文www| 80岁老熟妇乱子伦牲交| 国产亚洲最大av| 国产伦理片在线播放av一区| 天堂8中文在线网| 不卡视频在线观看欧美| 亚洲欧美日韩卡通动漫| 国产黄片美女视频| av国产久精品久网站免费入址| 99视频精品全部免费 在线| 免费观看的影片在线观看| 大话2 男鬼变身卡| a 毛片基地| freevideosex欧美| 在线观看www视频免费| av免费观看日本| 久久久久久人妻| 日本vs欧美在线观看视频 | 免费不卡的大黄色大毛片视频在线观看| 久久久a久久爽久久v久久| 亚洲国产欧美在线一区| 精品一品国产午夜福利视频| 激情五月婷婷亚洲| 亚洲无线观看免费| 91在线精品国自产拍蜜月| 99国产精品免费福利视频| 久久精品国产自在天天线| 在线亚洲精品国产二区图片欧美 | 成人特级av手机在线观看| 亚洲欧美成人精品一区二区| 综合色丁香网| 亚洲中文av在线| 一级毛片我不卡| 在线看a的网站| 亚洲人与动物交配视频| 一区二区三区精品91| 丝袜在线中文字幕| 少妇丰满av| 国产日韩欧美亚洲二区| 777米奇影视久久| 另类亚洲欧美激情| 在线观看美女被高潮喷水网站| 欧美激情极品国产一区二区三区 | 搡女人真爽免费视频火全软件| 涩涩av久久男人的天堂| xxx大片免费视频| 99久久精品一区二区三区| 99九九线精品视频在线观看视频| 国产在线视频一区二区| 美女内射精品一级片tv| 午夜福利在线观看免费完整高清在| 欧美日韩av久久| 在线观看免费日韩欧美大片 | 在线观看免费视频网站a站| 久久久久人妻精品一区果冻| 亚洲欧美日韩东京热| 午夜91福利影院| 日韩欧美 国产精品| 青春草国产在线视频| 26uuu在线亚洲综合色| 精品亚洲成国产av| 精品久久久久久久久av| 午夜福利,免费看| 久久韩国三级中文字幕| 日本免费在线观看一区| 日韩 亚洲 欧美在线| 国产精品无大码| 久久精品国产a三级三级三级| 五月玫瑰六月丁香| 免费看不卡的av| 国精品久久久久久国模美| 在线天堂最新版资源| 亚洲欧美一区二区三区国产| 午夜av观看不卡| 黑人巨大精品欧美一区二区蜜桃 | 免费观看av网站的网址| 亚洲欧美中文字幕日韩二区| 亚洲精品,欧美精品| 黑人巨大精品欧美一区二区蜜桃 | 你懂的网址亚洲精品在线观看| 欧美日韩av久久| 如日韩欧美国产精品一区二区三区 | 国产视频首页在线观看| 在线精品无人区一区二区三| 高清不卡的av网站| 肉色欧美久久久久久久蜜桃| 97精品久久久久久久久久精品| 哪个播放器可以免费观看大片| 黑人巨大精品欧美一区二区蜜桃 | 亚洲欧美一区二区三区黑人 | 色94色欧美一区二区| 国产精品嫩草影院av在线观看| 免费高清在线观看视频在线观看| 久久久久久久国产电影| 五月玫瑰六月丁香| 亚洲国产精品999| 久久午夜福利片| 欧美精品人与动牲交sv欧美| 国产精品伦人一区二区| 最近最新中文字幕免费大全7| 少妇被粗大的猛进出69影院 | 黄色配什么色好看| 国产精品久久久久成人av| 亚洲精品久久久久久婷婷小说| 久久久久久人妻| 日韩av免费高清视频| 高清视频免费观看一区二区| 最后的刺客免费高清国语| 日韩av在线免费看完整版不卡| 在线亚洲精品国产二区图片欧美 | 91在线精品国自产拍蜜月| 精品熟女少妇av免费看| 天堂俺去俺来也www色官网| 久久久久精品久久久久真实原创| 国产色婷婷99| 日本av手机在线免费观看| 熟女电影av网| 亚洲精品第二区|