宮頸病變患者血清白細(xì)胞介素2、白細(xì)胞介素4、干擾素γ水平與高危型HPV感染相關(guān)性研究

曹泰華,劉雙愛,趙祖國

(1.廣東醫(yī)科大學(xué)微生物學(xué)與免疫學(xué)教研室,廣東 東莞 523808;2.東莞市婦幼保健院,廣東 東莞 523000)

人乳頭狀瘤病毒(Human papillomavirus,HPV)屬于無包膜的環(huán)狀閉合雙鏈DNA病毒,已鑒定出200多種HPV基因型,它們中的一些會感染生殖道,并具有較高的致癌潛力,即高危型HPV(High-risk human papilloma virus,HR-HPV)[1-2]。HR-HPV的持續(xù)感染引起的宮頸上皮內(nèi)瘤變(Cervical intraepithelial neoplasia,CIN)是宮頸癌發(fā)生的關(guān)鍵因素之一[3]。CIN Ⅰ、CIN Ⅱ、CIN Ⅲ發(fā)展為宮頸浸潤癌的風(fēng)險分別是正常組織的4倍、14.5倍、46.5倍。CIN Ⅰ可能自然恢復(fù)或通過治療不發(fā)展為宮頸癌,但部分患者會出現(xiàn)免疫逃逸現(xiàn)象[4]。腫瘤的免疫主要是細(xì)胞免疫,輔助性T細(xì)胞可通過分泌多種效應(yīng)因子,如:白細(xì)胞介素2(Interleukine-2,IL-2)、白細(xì)胞介素4(IL-4)、干擾素γ(Interferon-gamma,IFN-γ)等調(diào)節(jié)免疫應(yīng)答[5-7]。陰道微生態(tài)屬是抵御HPV入侵機(jī)體的關(guān)鍵所在,陰道中微生物群固有的生理功能能對潛在的病原體進(jìn)行清除,當(dāng)陰道菌群失衡,個體感染各種疾病的風(fēng)險顯著提升[8]。HR-HPV持續(xù)性感染所致的炎癥-癌變轉(zhuǎn)化也與宮頸局部微環(huán)境變化有關(guān)[9]。本研究分析HR-HPV感染的宮頸病變患者陰道微環(huán)境和血清IL-2、IL-4、IFN-γ水平變化,并探討這些細(xì)胞因子與HR-HPV感染關(guān)系,為宮頸病變及宮頸癌的防治提供參考依據(jù)。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選擇2021年8月至2022年6月本院就診的126例HR-HPV陽性并經(jīng)病理確診CIN或?qū)m頸癌患者為研究對象。病例納入標(biāo)準(zhǔn):經(jīng)病理確診宮頸病變;性生活史;HR-HPV持續(xù)感染史;患者家屬知曉試驗(yàn)內(nèi)容并在知情同意書上簽字。排除標(biāo)準(zhǔn):經(jīng)期、妊娠期、哺乳期女性;1個月內(nèi)有免疫抑制劑、激素、抗病毒藥物治療史;宮頸手術(shù)史;合并自身免疫疾病、精神疾病及惡性腫瘤者;伴有心、肝、腎、肺等重要器官功能障礙者;合并生殖道畸形者。126例宮頸病變患者為觀察組,同期42例正常體檢女性為對照組。觀察組年齡30～57歲,平均(40.26±7.82)歲,體重指數(shù)18.32～25.30 kg/m2,平均(22.41±2.42)kg/m2;生育次數(shù):無46例,1次80例;病理活檢:CIN Ⅰ級46例、CIN Ⅱ級30例、CIN Ⅲ級27例、宮頸癌23例。對照組年齡30～57歲,平均年齡(40.31±7.75)歲,體重指數(shù)18.25～25.40 kg/m2,平均(22.35±2.51)kg/m2;生育次數(shù):無46例,1次80例。兩組患者年齡、體重指數(shù)、生育次數(shù)比較,差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均P<0.05)。

1.2 研究方法

1.2.1 HR-HPV檢測:二代雜交捕獲法(HC-Ⅱ)檢測HR-HPV感染,專用取樣刷在宮頸口處取樣,逆時針旋轉(zhuǎn)3圈,靜置10 s后放入STM保存液中,檢測HPV13種高危型(16、18、31、33、35、39、45、51、52、56、55、59及65型),相對光單位(RLU)/陽性標(biāo)準(zhǔn)品閾值(CO)≥1為HR-HPV感染陽性,RLU/CO為病毒負(fù)荷量,病毒負(fù)荷量分為1～100、100～1000、>1000,共3級,RLU/CO值越高,表示病毒負(fù)荷量越大。

1.2.2 陰道微環(huán)境檢測:檢測前24 h內(nèi)禁性行為、陰道內(nèi)用藥或沖洗,囑患者截石位檢查,對陰道1/3側(cè)壁分泌物進(jìn)行采集,并放入菌試管中。pH值用精密pH試紙檢測,pH值≤4.5為正常,>4.5為異常。對乳酸桿菌、需氧菌性陰道炎(Aerobic vaginitis,AV)、細(xì)菌性陰道炎(Bacterial vaginosis,BV)、外陰陰道假絲酵母菌病(Vulvovaginal candidiasis,VVC)、滴蟲性陰道炎(Trichomonas vaginitis,TV)進(jìn)行檢測。陰道微生態(tài)評異常估如下:乳酸桿菌+或;BV:Nugent評分≥7分;TV:顯微鏡查出陰道毛滴蟲;AV:凝固酶或β-葡萄糖醛酸苷酶陽性;VVC:革蘭染色涂片中存在假菌絲與芽孢。

1.2.3 血清學(xué)指標(biāo)檢測:抽取各組患者空腹靜脈血5 ml,以3000 r/min的離心15 min將上層血清收集,放置于-80 ℃下保存待測,采用ELISA法檢測血清IL-2、IL-4、IFN-γ水平,試劑盒購自北京伊塔生物科技有限公司(貨號YK-00192、YK-00176、YK-00116)。

2 結(jié) 果

2.1 各組HR-HPV感染情況比較 126例宮頸病變患者中HPV 16、18、31、33、35、51、52、56、59型分別占14.28%、15.07%、11.90%、8.73%、9.52%、9.52%、9.52%、6.34%、8.73%、6.35%,混合感染占8.52%,不同程度宮頸病變患者感染比較,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均P>0.05),見表1。

表1 各組HR-HPV感染情況比較 [例(%)]

2.2 各組HR-HPV負(fù)荷量比較 CIN Ⅰ級組HR-HPV負(fù)荷量>1000患者比例低于宮頸癌、CIN Ⅱ級、CIN Ⅲ級組患者,HR-HPV負(fù)荷量1～100患者比例大于宮頸癌、CIN Ⅱ級、CIN Ⅲ級組患者,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均P<0.05),見表2。

表2 各組HR-HPV負(fù)荷量比較 [例(%)]

2.3 各組陰道微環(huán)境情況比較 宮頸癌、CIN Ⅰ級、CIN Ⅱ級、CIN Ⅲ級組患者AV比例比較,無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(均P>0.05),宮頸癌組患者乳酸桿菌分級、pH值>4.5、BV、TV、VVC比例高于CIN Ⅰ級組患者(均P<0.05),見表3。

表3 各組陰道微環(huán)境情況比較 [例(%)]

2.4 HR-HPV感染的多因素Logistic回歸分析 以是否存在HR-HPV感染為因變量,以乳酸桿菌、BV、AV、TV、VVC為自變量,賦值(0=無,1=有),經(jīng)多因素Logistic回歸分析顯示,BV、TV、VVC、乳酸桿菌為HR-HPV 感染的獨(dú)立危險因素(均P<0.05),見表4。

表4 HR-HPV感染的多因素Logistic回歸分析

2.5 各組血清IL-2、IL-4、IFN-γ水平比較 對照組血清IL-2、IFN-γ水平高于CIN Ⅰ級、CIN Ⅱ級、CIN Ⅲ級、宮頸癌組患者,IL-4低于CIN Ⅰ級、CIN Ⅱ級、CIN Ⅲ級、宮頸癌組患者,宮頸病變程度加重,IL-2、IFN-γ水平下降,IL-4升高(均P<0.05),見表5。

2.6 血清中IL-2、IL-4、IFN-γ水平與HR-HPV感染的相關(guān)性 血清IL-2、IFN-γ與HR-HPV感染呈負(fù)相關(guān),IL-4與HR-HPV感染呈正相關(guān)(均P<0.01),見表6。

表6 血清中IL-2、IL-4、IFN-γ水平與HR-HPV感染的相關(guān)性

3 討 論

宮頸癌為女性高發(fā)惡性腫瘤,全球范圍內(nèi)地區(qū)分布以發(fā)展中國家居多,高達(dá)80%[10]。HPV感染是引發(fā)宮頸病變的主要因素,85%～95%的宮頸癌癌組織中均能夠檢出HPV[11]。HPV的致癌機(jī)制與其型別、HR-HPV DNA負(fù)荷量有關(guān),亞洲地區(qū)以HPV 16、18型最常見[12]。本研究中,126例宮頸病變HR-HPV陽性患者中HPV 16、18、31型比例較高。CINⅠ級HR-HPV負(fù)荷量>1000患者比例低于宮頸癌、CINⅡ級、CINⅢ級患者,HR-HPV負(fù)荷量1～100患者比例大于宮頸癌、CINⅡ級、CINⅢ級患者。這說明HR-HPV負(fù)荷量越大,患者病情越嚴(yán)重。HPV致癌機(jī)制還與陰道微生態(tài)環(huán)境紊亂有關(guān)[13]。正常情況下,女性陰道內(nèi)菌群種類和數(shù)量是處于動態(tài)平衡中,特別是乳酸桿菌是維持陰道正常微環(huán)境的優(yōu)勢菌,能消滅致病菌,當(dāng)這種平衡被打破時,將會增加多種下生殖道感染的風(fēng)險,如:BV、AV、TV、VVC等[14]。本研究結(jié)果顯示,宮頸癌患者乳酸桿菌分級、pH值>4.5、BV、TV、VVC比例高于CINⅠ級患者,同時BV、TV、VVC、乳酸桿菌為HR-HPV感染的獨(dú)立危險因素,與葉雨藍(lán)等[15]報(bào)道基本相符。

免疫功能的異常會引起局部免疫狀態(tài)改變,這也利于宮頸癌的發(fā)生發(fā)展,尤其是T細(xì)胞功能的異常[16]。T細(xì)胞分類中Th細(xì)胞與人體免疫有關(guān)聯(lián),Th1細(xì)胞主要分泌IL-2、IFN-γ等,Th2 細(xì)胞主要分泌IL-4等,這些細(xì)胞因子增強(qiáng)殺傷細(xì)胞的細(xì)胞毒性,激發(fā)遲發(fā)型超敏反應(yīng),參與細(xì)胞免疫、移植排斥、體液免疫和過敏反應(yīng)[17]。本研究中對照組血清IL-2、IFN-γ水平高于CIN Ⅰ級、CIN Ⅱ級、CIN Ⅲ級、宮頸癌患者,IL-4低于CIN Ⅰ級、CIN Ⅱ級、CIN Ⅲ級、宮頸癌患者,表示高危型HPV感染會造成Th1細(xì)胞功能下降、Th2細(xì)胞功能增強(qiáng),機(jī)體更易被病毒侵襲,從而可能促進(jìn)了宮頸癌的發(fā)生發(fā)展。相關(guān)研究表明,HPV會逃避宿主的免疫反應(yīng),HPV16 E6、E7蛋白會下調(diào)宿主細(xì)胞中IFN-γ的表達(dá),出現(xiàn)Th1向Th2漂移的現(xiàn)象,不利于HPV感染的清除[18]。IL-2能誘導(dǎo)NK細(xì)胞和細(xì)胞毒性T淋巴細(xì)胞(CTL)等的分化,當(dāng)IL-2降低時,CTL活性降低,機(jī)體免疫系統(tǒng)功能下降。IL-4可促進(jìn)IL-5、IL-10等免疫抑制因子產(chǎn)生,使B細(xì)胞的抗原提呈能力下降,并導(dǎo)致機(jī)體出現(xiàn)免疫性炎性反應(yīng)和腫瘤血管新生[19]。張敏等[20]報(bào)道,HPV16感染組、HPV18感染組的IFN-γ含量低于非高危型HPV感染組。黃秋嬋等[21]研究中,宮頸病變程度加重患者血清IFN-γ、IL-2即會出現(xiàn)下降趨勢,并在宮頸癌患者血清中表達(dá)最低,IL-4出現(xiàn)升高。故宮頸病變程度加重,IL-2、IFN-γ水平下降,IL-4升高,研究結(jié)果可靠性較高。此外,為了進(jìn)一步論證上述指標(biāo)水平與HR-HPV的關(guān)系,進(jìn)行Spearman相關(guān)分析發(fā)現(xiàn),血清IL-2、IFN-γ與HR-HPV感染呈負(fù)相關(guān),IL-4與HR-HPV感染呈正相關(guān)。譚超月等[22]證實(shí),IL-2、IL-4、IFN-γ 3種細(xì)胞因子在宮頸病變血清中的表達(dá)呈正相關(guān)。黃秋嬋等[21]也認(rèn)為,機(jī)體免疫受到抑制時,Th2細(xì)胞因子水平明顯升高,IFN-γ、IL-2、IL-4水平也與宮頸病變的程度密切相關(guān)。以上結(jié)果說明HR-HPV感染患者的機(jī)體細(xì)胞免疫和宮頸局部免疫相互作用、相互制約。

綜上所述,HR-HPV感染患者陰道微環(huán)境改變,血清IL-2、IFN-γ水平升高,IL-4下降,HR-HPV感染與血清IL-2、IL-4、IFN-γ水平有關(guān)。在臨床診療中,一方面,可通過檢測IL-2、IL-4、IFN-γ水平判斷CIN情況,并篩選高危人群并密切監(jiān)測,另一方面,改善陰道局部微環(huán)境可阻斷CIN向?qū)m頸癌的進(jìn)展,對減少宮頸癌的發(fā)生可能具有重要意義。