免疫熒光分析法檢測(cè)ST2 蛋白的臨床性能評(píng)價(jià)

賴秀娟（通信作者），陸建偉，蔡美玲，陸葉青，黃小華

1 巴迪泰（廣西）生物科技有限公司 （廣西南寧 530031）；2 廣西中醫(yī)藥大學(xué)第一附屬醫(yī)院 （廣西南寧 530022）

心力衰竭主要指心臟結(jié)構(gòu)或功能發(fā)生障礙而引起的心臟循環(huán)障礙癥候群，是心肌疾病、高血壓、冠心病和心臟瓣膜病等心血管疾病的終末階段體現(xiàn)。心力衰竭好發(fā)于老年人，在70 歲以上人群中的發(fā)病率高于10%[1-2]。近年來，隨著人口老齡化不斷加劇，心力衰竭等心血管疾病患病人數(shù)不斷增加[3]。心力衰竭具有較高的發(fā)病率、復(fù)發(fā)率及病死率，嚴(yán)重影響人們的身體健康和生命質(zhì)量。因此，對(duì)心力衰竭患者進(jìn)行有效的早期診斷、控制病情惡化和預(yù)后評(píng)估具有十分重要的作用。臨床主要依據(jù)患者的體征、癥狀、病史、影像學(xué)檢查及實(shí)驗(yàn)室檢查等資料診斷心力衰竭。隨著臨床檢驗(yàn)技術(shù)的不斷發(fā)展，生物標(biāo)志物在預(yù)測(cè)及診斷心力衰竭中起到了重要的作用，目前應(yīng)用較廣泛的為N 末端腦鈉肽前體（N terminal proB-type natriureticpeptide，NT-proBNP）及腦鈉肽（brain natriuretic peptide，BNP）。國(guó)內(nèi)外研究發(fā)現(xiàn)，NT-proBNP 與心力衰竭患者病情﹑預(yù)后密切相關(guān)，可反映心室內(nèi)壓和容量負(fù)荷，診斷左心室活動(dòng)異常的靈敏度和特異度均較高[4-9]。但NT-proBNP 水平易受年齡、性別、腎臟功能、體質(zhì)量指數(shù)等多種因素的影響，無法準(zhǔn)確反映心力衰竭發(fā)生、發(fā)展的全過程。有研究發(fā)現(xiàn)，ST2 蛋白在心力衰竭患者中表現(xiàn)出獨(dú)特的生物學(xué)特征，對(duì)臨床具有一定的指導(dǎo)作用[10]。ST2 蛋白具有單一閾值，方便解讀，且?guī)缀醪皇苄詣e、年齡、體質(zhì)量指數(shù)和腎功能等因素的限制，能夠彌補(bǔ)常規(guī)生物標(biāo)志物（NT-proBNP、BNP）的不足。聯(lián)合檢測(cè)ST2 蛋白及常規(guī)生物標(biāo)志物可為心力衰竭的早期診斷、治療監(jiān)測(cè)、危險(xiǎn)分層及預(yù)后評(píng)估提供更全面的信息。

目前，酶聯(lián)免疫吸附法為檢測(cè)ST2 蛋白的主要方法，市場(chǎng)上主流產(chǎn)品包括美國(guó)Critical Diagnostics 公司的Presage ST2 試劑等。彭劍橋[11]的研究結(jié)果顯示，Presage ST2 檢測(cè)ST2 蛋白的批內(nèi)精密度分別為4.8%和2.8%，批間精密度分別為5.9%和6.7%，線性范圍為0.000～206.622 ng/ml。為了驗(yàn)證巴迪泰（廣西）生物科技有限公司生產(chǎn)的免疫熒光分析法ST2 蛋白檢測(cè)試劑的性能，本研究以Presage ST2 試劑為對(duì)照，比較兩種方法檢驗(yàn)結(jié)果的相關(guān)性與一致性，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 材料與方法

1.1 材料

血清樣本：選取2022 年11 月至2023 年2 月廣西中醫(yī)藥大學(xué)第一附屬醫(yī)院110 例患者的血清樣本，排除黃疸、溶血、脂血、高濁度或采樣量不足樣本。患者年齡37～86 歲，男62 例，女48 例；心力衰竭陽性樣本37 個(gè)，健康者血清樣本73 個(gè)。

試劑與儀器：美國(guó)Critical Diagnostics 公司生產(chǎn)的Presage ST2 檢測(cè)試劑及配套校準(zhǔn)品、酶標(biāo)儀；巴迪泰（廣西）生物科技有限公司生產(chǎn)的ST2 蛋白檢測(cè)試劑及配套的質(zhì)控品、A5000 PLUS 全自動(dòng)干式熒光免疫分析儀。

1.2 方法

1.2.1 試驗(yàn)前準(zhǔn)備

（1）操作人員熟悉并掌握對(duì)照產(chǎn)品和驗(yàn)證產(chǎn)品的樣本制備方法、檢測(cè)儀器操作方法；（2）試驗(yàn)前，對(duì)各檢測(cè)系統(tǒng)分別行質(zhì)控檢測(cè)，確保系統(tǒng)性能良好、檢測(cè)數(shù)據(jù)可靠；（3）對(duì)超過試劑盒線性范圍的樣本，按要求進(jìn)行稀釋。

1.2.2 相關(guān)性分析

采用對(duì)照試劑和驗(yàn)證試劑同時(shí)測(cè)試110 個(gè)臨床血清樣本，使用線性回歸法分析兩種檢測(cè)方法的相關(guān)性，擬合一元線性回歸方程，計(jì)算相關(guān)系數(shù)r，一元線性回歸方程斜率處于0.90～1.10 間，且r>0.975，說明線性相關(guān)良好。

1.2.3 一致性分析

采用Kappa檢驗(yàn)分析兩種方法檢測(cè)結(jié)果的陽性符合率、陰性符合率（定性判斷），Kappa≥0.75，認(rèn)為一致性高。采用Bland-Altman Plot 分析兩種方法定量檢測(cè)結(jié)果的一致性，將對(duì)比方法和驗(yàn)證方法每個(gè)樣本的檢測(cè)值之差與相應(yīng)兩個(gè)方法的檢測(cè)均值做散點(diǎn)圖，平均值之差作為基準(zhǔn)值，進(jìn)行散點(diǎn)展示，觀察離群值，90%在Mean±1.96s范圍內(nèi)即符合要求。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

采用SPSS 22.0 統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析。采用MedCalc（Version 19.4.0）作圖。相關(guān)性采用一元線性回歸分析，以相關(guān)系數(shù)r表示；一致性分析采用Kappa檢驗(yàn)和Bland-Altman Plot 法。

2 結(jié)果

2.1 相關(guān)性分析

線性回歸分析法擬合的一元線性回歸方程為y=0.9878x+1.6977，斜率b=0.9878，相關(guān)系數(shù)r=0.9959，表明兩種方法的相關(guān)性密切，見圖1。

圖1 對(duì)照方法與驗(yàn)證方法檢測(cè)結(jié)果線性相關(guān)圖

2.2 一致性分析

Kappa檢驗(yàn)結(jié)果顯示，Kappa系數(shù)為0.901，表明兩種方法定性判斷檢測(cè)結(jié)果的一致性高。Bland-Altman Plot 分析顯示，兩種方法檢測(cè)血清ST2 蛋白的結(jié)果位于Mean±1.96s內(nèi)的數(shù)值占96.36%（106/110），符合占比≥90%的要求，見圖2。

圖2 對(duì)照方法與驗(yàn)證方法檢測(cè)結(jié)果的Bland-Altman Plot 分析圖

3 討論

心力衰竭是由不同因素引起的心臟病的嚴(yán)重階段，復(fù)發(fā)率和病死率均較高，不僅對(duì)患者的生命安全造成威脅，也加重了社會(huì)及家庭的負(fù)擔(dān)。因此，實(shí)現(xiàn)對(duì)心力衰竭患者的早期診療，對(duì)抑制病情惡化和再次入院至關(guān)重要。除通過觀察癥狀、體征及采用心電圖、影像檢查等手段對(duì)心力衰竭進(jìn)行診斷篩查外，現(xiàn)代醫(yī)學(xué)亦通過檢測(cè)各種生物標(biāo)志物實(shí)現(xiàn)對(duì)心力衰竭的診治。生物標(biāo)志物檢測(cè)可快速、便捷、有效地對(duì)心力衰竭進(jìn)行早期診斷、治療監(jiān)測(cè)和預(yù)后評(píng)估。研究發(fā)現(xiàn)，ST2 蛋白是心力衰竭的重要生物標(biāo)志物，心力衰竭患者血清ST2 蛋白濃度顯著升高，且與其病情嚴(yán)重程度、重復(fù)入院和病死風(fēng)險(xiǎn)等存在密切關(guān)聯(lián)[12-14]。

酶聯(lián)免疫吸附法為檢測(cè)ST2 蛋白的主流方法，本研究以該法為對(duì)照，驗(yàn)證免疫熒光分析法檢測(cè)ST2 蛋白的性能。結(jié)果顯示，兩種方法的線性相關(guān)系數(shù)r為0.9959，具有密切的相關(guān)性；Kappa定性分析結(jié)果顯示，Kappa為0.901，一致性高；Bland-Altman Plot 定量分析結(jié)果顯示，檢測(cè)結(jié)果位于Mean±1.96s內(nèi)的占比為96.36%，表明兩種檢測(cè)方法具有很高的一致性。

綜上所述，巴迪泰（廣西）免疫熒光分析法的ST2 試劑與酶聯(lián)免疫吸附法的Presage ST2 試劑檢測(cè)ST2 蛋白的相關(guān)性密切、一致性高，等效性良好，均可滿足臨床檢驗(yàn)需求，臨床可根據(jù)需要選擇適合的檢測(cè)方法。