宮頸癌組織SGK3、SIK1表達(dá)及其對患者預(yù)后的預(yù)測價值分析

周立飛,高躍麗,耿欣,張靜亞,耿飛龍,康非,王亞凡

宮頸癌是常見的婦科惡性腫瘤之一,致死率僅次于乳腺癌,近年來宮頸癌發(fā)病率呈上升趨勢,嚴(yán)重威脅女性生命健康。2020年,全球新發(fā)宮頸癌有604 127例,死亡341 821例[1]?；颊咄ㄟ^手術(shù)切除癌組織后,預(yù)后情況較好。有報道指出,宮頸癌的病變期長,對此時期進(jìn)行干預(yù)治療能夠抑制癌癥發(fā)展[2-3]。血清和糖皮質(zhì)激素調(diào)節(jié)蛋白激酶(serum and glucocorticoid-induced protein kinase,SGK)是AGC亞家族中的一員,研究證實,SGK在多種惡性腫瘤中表達(dá)水平升高[4],SGK3是哺乳類SGK亞家族三種亞型之一。Machado等[5]研究表明,SGK3能夠使L-plastin Ser5磷酸化從而促進(jìn)乳腺癌細(xì)胞的遷移和侵襲。Wang等[6]研究發(fā)現(xiàn),宮頸癌患者子宮頸相較于正常子宮頸中PDK1和SGK3的表達(dá)量上升。鹽誘導(dǎo)激酶1(salt inducible kinase 1,SIK1)屬于AMP激活蛋白激酶家族中的一員,研究認(rèn)為,SIK1在前列腺癌[7]、胃癌[8]等惡性腫瘤中起抑癌作用[9]?；诖?本研究旨在探討宮頸癌患者SGK3、SIK1表達(dá)水平及其是否對患者預(yù)后具有較好評估價值,以期為臨床改善宮頸癌患者預(yù)后提供更多參考依據(jù)。

1 資料與方法

1.1 樣本量計算

參考文獻(xiàn)[10]可知總體發(fā)生率π0為0.15,σ=0.10,α=0.05,β=0.10,行雙側(cè)檢驗,查表得Zα為1.960,Zβ為1.282,樣本量計算公式為:n=[(Zα+Zβ)/δ]2×π0×(1-π0),計算可知樣本量至少需119例,本研究納入150例。

1.2 研究對象

選取2017年5月至2020年5月在石家莊市婦幼保健院手術(shù)治療的150例宮頸癌患者為觀察組,病理類型:腺癌26例,鱗癌88例,腺鱗癌36例。另選取同期體檢健康者150例為對照組。納入標(biāo)準(zhǔn):① 經(jīng)影像學(xué)檢查,病理切片確診為宮頸癌,符合相關(guān)診斷標(biāo)準(zhǔn)[11];② 無其他惡性腫瘤;③ 無免疫系統(tǒng)、精神系統(tǒng)疾病;④ 原發(fā)性宮頸癌;⑤ 自愿簽署知情同意書。排除標(biāo)準(zhǔn):① 合并其他惡性腫瘤;② 合并心、肝、腎等臟器功能障礙;③ 合并嚴(yán)重感染;④ 懷孕及哺乳期女性;⑤中途失聯(lián)及資料缺失。本研究內(nèi)容經(jīng)本院倫理委員會審核通過后實行(倫理批號:2017-0053),并得到所有參與者的知情許可。

1.3 方法

1.3.1 宮頸癌臨床分期評估 參照國際婦產(chǎn)科聯(lián)盟(International Federation of Gynecology and Obstetrics,FIGO)標(biāo)準(zhǔn)[12]評估宮頸癌臨床分期,根據(jù)手術(shù)病理結(jié)果,腫瘤部位在子宮頸為Ⅰ期;腫瘤超過子宮,未達(dá)到骨盆壁或陰道下1/3為Ⅱ期;腫瘤擴(kuò)散至骨盆壁,與盆壁之間無間隙,腫瘤累及陰道下1/3為Ⅲ期;腫瘤超出骨盆范圍,或侵犯膀胱和直腸黏膜為Ⅳ期。

1.3.2 宮頸癌組織SGK3、SIK1表達(dá)水平 將術(shù)中切除的宮頸癌組織和癌旁組織標(biāo)本進(jìn)行常規(guī)脫蠟水化,微波煮沸將抗原修復(fù),自然冷卻后用3% H2O2封閉15 min,PBS漂洗5 min后,甩去余液后加10%正常羊血清28 ℃放置20 min,分別加入SGK3、SIK1一抗,陰性對照使用PBS代替一抗。37℃孵育1 h,PBS沖洗4次,加入二抗,在37 ℃黑暗條件下孵育30 min,PBS沖洗、DAB染色10 min,顯色后自來水充分沖洗終止顯色反應(yīng),復(fù)染、脫水、透明、封片。在顯微鏡下選取5個高倍(400倍)視野觀察SGK3、SIK1在組織中的染色情況。陽性對照選用陽性病理切片進(jìn)行觀察。

1.3.3 實時熒光定量聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)法檢測血清SGK3、SIK1表達(dá)水平 抽取患者入院第2天清晨空腹8 h的肘部靜脈血5 mL,抽取體檢當(dāng)天空腹8 h及以上肘部靜脈血5 mL,2 500 r/min離心10 min后,吸取上清液置于-80℃冰箱待檢測。提取總RNA逆轉(zhuǎn)錄,以GAPDH為內(nèi)參,定量分析血清SGK3、SIK1表達(dá)水平,檢測按照試劑盒說明書進(jìn)行操作。引物序列見表1。

表1 引物序列表

1.4 隨訪

對宮頸癌患者進(jìn)行門診定期復(fù)查和電話回訪結(jié)合的方式隨訪,自首次手術(shù)治療開始隨訪,至2022年5月結(jié)束隨訪,若患者死亡則結(jié)束隨訪。隨訪結(jié)束統(tǒng)計宮頸癌患者死亡40例(26.67%)列入死亡組,生存110例(73.33%)列入生存組。

1.5 統(tǒng)計學(xué)方法

2 結(jié)果

2.1 兩組一般資料比較

兩組一般資料比較,差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05),具有可比性,詳見表2。

表2 兩組一般資料比較

2.2 宮頸癌組織與癌旁組織SGK3、SIK1表達(dá)陽性率比較

表3 宮頸癌組織與癌旁組織SGK3、SIK1表達(dá)陽性率比較[例(%)]

與癌旁組織相比,宮頸癌組織SGK3陽性表達(dá)率較高,SIK1陽性表達(dá)率較低,差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。詳見表3和圖1(彩插3)。

2.3 兩組血清SGK3、SIK1表達(dá)水平比較

與對照組相比,觀察組血清SGK3表達(dá)水平高于對照組,SIK1表達(dá)水平低于對照組,差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。詳見表4。

表4 血清SGK3和SIK1表達(dá)水平比較

2.4 宮頸癌患者血清SGK3和SIK1表達(dá)相關(guān)性

相關(guān)性分析結(jié)果顯示,血清SGK3和SIK1表達(dá)之間呈現(xiàn)顯著負(fù)相關(guān)(r=-0.347,P<0.001)。

2.5 死亡組與生存組臨床資料比較

死亡組與生存組淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、臨床分期、分化程度比較,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05);死亡組血清SGK3水平高于生存組,SIK1水平低于生存組,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。見下頁表5。

表5 死亡組與生存組臨床資料比較例(%)]

2.6 COX回歸分析宮頸癌患者預(yù)后的影響因素

以宮頸癌患者預(yù)后情況為因變量(賦值:死亡=0,生存=1),以淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移(賦值:無=0,有=1)、臨床分期(賦值:Ⅰ+Ⅱ期=0,Ⅲ+Ⅳ期=1)、分化程度(賦值:高、中分化=0,低分化=1)、SGK3表達(dá)(賦值:陰性表達(dá)=0,陽性表達(dá)=1)、SIK1表達(dá)(賦值:陰性表達(dá)=0,陽性表達(dá)=1)為自變量,COX回歸分析結(jié)果顯示,淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移(HR=5.313,95%CI:2.032-13.889)、SGK3(HR=1.755,95%CI:1.002-3.074)是影響宮頸癌患者預(yù)后的危險因素,SIK1(HR=0.355,95%CI:0.137-0.921)是影響宮頸癌患者預(yù)后的保護(hù)因素。見下頁表6。

表6 COX回歸分析宮頸癌患者預(yù)后的影響因素

2.7 Kaplan-Meier法分析宮頸癌組織SGK3、SIK1表達(dá)與患者預(yù)后的關(guān)系

通過Kaplan-Meier法分析宮頸癌組織SGK3、SIK1表達(dá)與患者預(yù)后的關(guān)系,結(jié)果發(fā)現(xiàn),SGK3陽性表達(dá)患者生存率(62/94,65.96%)低于SGK3陰性表達(dá)患者(48/56,85.71%)(χ2=5.678,P<0.05);SIK1陽性表達(dá)患者生存率(48/59,81.36%)高于SIK1陰性表達(dá)患者(58/91,63.74%)(χ2=5.361,P<0.05)。見圖2、圖3。

圖2 宮頸癌組織中SGK3表達(dá)與患者生存率間的關(guān)系

2.8 ROC曲線評估血清SGK3、SIK1預(yù)測宮頸癌患者預(yù)后

ROC曲線分析結(jié)果顯示,二者聯(lián)合評估宮頸癌患者預(yù)后的AUC值高于SGK3和SIK1單獨檢測。見下頁表7、圖4。

圖4 血清SGK3和SIK1預(yù)測宮頸癌患者預(yù)后的ROC曲線

表7 ROC曲線評估血清SGK3和SIK1預(yù)測宮頸癌患者預(yù)后

3 討論

宮頸癌是威脅女性健康的第二大惡性腫瘤,其發(fā)病機(jī)制復(fù)雜,臨床治療主要以手術(shù)切除為主,宮頸癌患者確診時往往癌癥發(fā)展已進(jìn)入晚期,腫瘤細(xì)胞浸潤侵犯周圍器官和組織,手術(shù)難度大,患者預(yù)后恢復(fù)較差,5年生存率僅60%[13]。因此探尋臨床上能夠評估宮頸癌預(yù)后的靶點,對于指導(dǎo)治療宮頸癌,提高患者預(yù)后生活質(zhì)量具有重要意義。

SGK3是一種能夠迅速活化的基因,相關(guān)研究證實,SGK3與多種惡性腫瘤的發(fā)生發(fā)展有關(guān),參與細(xì)胞增殖、遷移、分化[14-15]。Cao等[16]研究發(fā)現(xiàn),SGK3在肝癌發(fā)生過程中能作為主要的PDPK1下游因子驅(qū)動腫瘤細(xì)胞生存。乳腺癌細(xì)胞中,SGK3過表達(dá)誘導(dǎo)糖原合酶激酶3磷酸化,增強(qiáng)凋亡和侵襲相關(guān)基因及蛋白,導(dǎo)致腫瘤的發(fā)生和侵襲[17]。Zhang等[18]研究顯示,miR-377-3p下調(diào)可以預(yù)測宮頸癌患者預(yù)后不良,SGK3是miR-377-3p在宮頸癌細(xì)胞中的靶點,SGK3下調(diào)抑制宮頸癌細(xì)胞侵襲與遷移。宮頸癌中抑制因子通過抑制PI3K途徑的下游分子AKT和SGK3的活化來控制癌細(xì)胞的增殖與擴(kuò)散[19]。本研究顯示,在宮頸癌組織中SGK3的陽性表達(dá)率相較于癌旁組織明顯提升,與對照組相比,患者血清中SGK3的表達(dá)水平明顯上調(diào),提示在宮頸癌細(xì)胞中SGK3被活化,從而促進(jìn)癌細(xì)胞增殖擴(kuò)散。

SIK1屬于AMP激活蛋白酶家族中的一員,研究認(rèn)為SIK1在多種腫瘤中起抑癌作用[9]。有研究表明,卵巢癌中SIK1在組織和細(xì)胞中表達(dá)下調(diào),而過表達(dá)的SIK1能夠抑制癌細(xì)胞增殖、擴(kuò)散并促進(jìn)癌細(xì)胞凋亡。SIK1沉默能夠打破抑癌因子對卵巢癌的抑制作用[20]。Peng等[21]研究發(fā)現(xiàn),在宮頸鱗狀細(xì)胞癌中NR2F1-AS1表達(dá)下調(diào),進(jìn)一步實驗研究發(fā)現(xiàn),NR2F1-AS1過表達(dá)導(dǎo)致miR-17靶向SIK1表達(dá)水平上調(diào),NR2F1-AS1與SIK1高表達(dá)抑制宮頸鱗狀細(xì)胞癌細(xì)胞的侵襲和遷移。本研究顯示,宮頸癌細(xì)胞中SIK1表達(dá)陽性率明顯降低,與對照組相比,宮頸癌患者血清SIK1表達(dá)水平明顯下調(diào),提示在宮頸癌發(fā)生發(fā)展過程中,SIK1被靶向調(diào)控,表達(dá)水平下調(diào),對癌細(xì)胞侵襲和遷移的抑制作用降低。

本研究結(jié)果表明,宮頸癌組織SGK3表達(dá)上調(diào),SIK1表達(dá)下調(diào),相關(guān)性分析表明患者血清SGK3和SIK1之間表達(dá)呈顯著負(fù)相關(guān)。患者有無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、臨床分期、分化程度、SGK3和SIK1表達(dá)水平與患者預(yù)后有關(guān),進(jìn)一步通過COX回歸分析結(jié)果發(fā)現(xiàn),淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、SGK3表達(dá)水平是影響患者預(yù)后的危險因素,SIK1表達(dá)水平是影響患者預(yù)后的保護(hù)因素。生存分析結(jié)果顯示,宮頸癌組織SGK3陰性表達(dá)患者生存率高于陽性表達(dá)患者,SIK1陽性表達(dá)患者生存率高于陰性表達(dá)患者。ROC曲線分析結(jié)果顯示,血清SGK3、SIK1評估宮頸癌患者預(yù)后的AUC為0.866,高于血清SGK3和SIK1單獨檢測,提示血清SGK3和SIK1與宮頸癌之間可能存有密切關(guān)系,二者聯(lián)合評估宮頸癌患者預(yù)后具有一定臨床潛力。

綜上所述,宮頸癌組織SGK3表達(dá)上調(diào),SIK1表達(dá)下調(diào),且血清SGK3和SIK1聯(lián)合評估患者預(yù)后具有較好的臨床效能。但本研究仍存在樣本量較少等局限性,有待進(jìn)一步探究。

利益沖突所有作者均聲明不存在利益沖突。