FGF-2及miR-215對(duì)早期胃癌患者經(jīng)內(nèi)鏡黏膜下剝離術(shù)后復(fù)發(fā)的預(yù)測(cè)價(jià)值分析

徐毅

(南陽市第一人民醫(yī)院胃腸外科,河南 南陽 473010)

胃癌近年的發(fā)病率快要趕超肺癌,成為了當(dāng)前發(fā)病率第二的惡性腫瘤,僅次于肺癌[1]。對(duì)于早期胃癌來說,根治性手術(shù)治療能夠及時(shí)將病灶切除,提升患者生存期,因此對(duì)胃癌的早期診斷早治療具有重要價(jià)值[2]。內(nèi)鏡黏膜下剝離術(shù)作為早期胃癌的常用微創(chuàng)手術(shù)方式,能夠?qū)つ硬≡詈突鶎臃蛛x,從而將腫瘤切除,但術(shù)后依然有部分患者出現(xiàn)復(fù)發(fā)情況,影響其生活質(zhì)量。因此,探究胃癌的早期診斷指標(biāo)及復(fù)發(fā)預(yù)測(cè)指標(biāo)成為臨床研究熱點(diǎn)內(nèi)容。成纖維細(xì)胞生長因子2(FGF-2)作為促細(xì)胞生長因子,能夠誘導(dǎo)內(nèi)皮細(xì)胞增殖,促進(jìn)新生血管形成,在當(dāng)前不同的腫瘤細(xì)胞增殖與侵襲過程中發(fā)揮了重要作用[3]。另外,大量研究發(fā)現(xiàn)[4],miRNA和腫瘤的轉(zhuǎn)移、侵襲、增殖與分化具有密切關(guān)系,同樣也在胃癌的發(fā)生與發(fā)展中具有重要作用。但FGF-2、miRNA對(duì)于胃癌的診斷效能和復(fù)發(fā)預(yù)測(cè)價(jià)值尚無確切定論。因此,本研究探討了FGF-2及miR-215對(duì)早期胃癌患者經(jīng)內(nèi)鏡黏膜下剝離術(shù)后復(fù)發(fā)的預(yù)測(cè)價(jià)值,具體報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

2018年1月到2021年1月,選取我院收治的90例早期胃癌患者,將其分為觀察組,另選取同期90例經(jīng)病理活檢確定為正常胃粘膜的志愿者,將其分為對(duì)照組。其中觀察組患者中男性52例,女性38例,年齡為43～72歲,平均年齡(54.32±8.92)歲。對(duì)照組男性50例,女性40例;年齡為42～72歲,平均(54.28±7.38)歲。本研究經(jīng)我院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)。兩組受檢者一般資料對(duì)比無明顯差異(P>0.05),具有可比性。

1.2 納排標(biāo)準(zhǔn)

納入標(biāo)準(zhǔn):病理診斷確診為早期胃癌[5];腫瘤位于胃黏膜層;所有患者均選擇應(yīng)用經(jīng)內(nèi)鏡黏膜下剝離術(shù)治療;臨床資料完整;年齡≥18歲;對(duì)本研究知情并簽署同意書。

排除標(biāo)準(zhǔn):診斷前未接受過胃癌相關(guān)治療,其中包括手術(shù)、放化療和靶向治療等;合并其他惡性腫瘤;臨床資料不全和不愿配合研究者;未完成2年隨訪者;遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移或淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者。

1.3 方法

FGF-2及miR-215檢測(cè)方法:分別將對(duì)照組的正常黏膜組織和觀察組的胃黏膜組織進(jìn)行免疫組織化學(xué)法檢測(cè),檢測(cè)淺表組織中FGF-2及miR-215表達(dá)情況,具體方法為:從-90℃的環(huán)境中將冷凍的組織標(biāo)本取出,在10%福爾馬林溶液中進(jìn)行固定,隨后進(jìn)行石蠟包埋處理后,制作成為4 mm的切片,隨后進(jìn)行脫蠟處理。并應(yīng)用3%的過氧化氫溶液進(jìn)行孵育,孵育時(shí)間為10 min,隨后應(yīng)用PBS進(jìn)行洗滌,每次洗滌時(shí)間為3 min,共洗滌3次,隨后應(yīng)用檸檬酸鹽緩沖溶液進(jìn)行高溫抗原修復(fù)之后,在進(jìn)行PBS洗滌,同樣每次洗滌3 min,共洗滌3次,滴加1抗1滴,在4℃溫度下孵育過夜,并滴加二抗1滴,在37℃下孵育60 min,隨后滴加二氨基聯(lián)苯胺進(jìn)行染色處理,復(fù)燃采用蘇木素進(jìn)行,隨后應(yīng)用梯度酒精脫水處理,二甲苯透明處理,并應(yīng)用中性樹膠進(jìn)行封片。在電子顯微鏡下觀察染色慶康,隨后選取5個(gè)有代表意義視野,每個(gè)視野技術(shù)為200個(gè)細(xì)胞進(jìn)行評(píng)價(jià),取5個(gè)視野平均值。并依照陽性細(xì)胞百分比進(jìn)行評(píng)分,>75%為4分,50%～75%為3分,25%～50%為2分,<25%為1分,陰性為0分。依照染色強(qiáng)度進(jìn)行頻分,棕褐色3分,黃褐色或黃色2分,淺黃色1分,無染色0分。取兩種評(píng)分方法的乘積作為最終評(píng)價(jià)結(jié)果,>1分為陽性,≤1分為陰性。并應(yīng)用FGF-2及miR-215試劑盒提取早期胃癌組織與正常胃粘膜組織中的FGF-2和miR,并分別以FGF-2和miR作為模板反轉(zhuǎn)錄合成cDNA,配置cDNA作為模板熒光定量PCR反應(yīng)體系,分別應(yīng)用FGF-2及B-actin的引物,miR-215及U6引物,在熒光定量PCR儀上完成PCR反應(yīng)之后,得到FGF-2及B-actin,miR-215及U6循環(huán)曲線與循環(huán)瘀滯,以B-actin、U6為內(nèi)參計(jì)算FGF-2及miR-215表達(dá)量。

隨訪方法:治療后對(duì)所有患者進(jìn)行歷時(shí)2年隨訪,對(duì)于胃鏡復(fù)查疑似病變的患者進(jìn)行病理活檢,將出現(xiàn)癌細(xì)胞的患者判定為復(fù)發(fā),并依照患者是否復(fù)發(fā)情況分為復(fù)發(fā)組和非復(fù)發(fā)組。

一般資料收集:收集所有患者的一般臨床資料,其中包括:性別、年齡、腫瘤位置、浸潤深度、腫瘤直徑、組織分化程度、FGF-2及miR-215表達(dá)水平。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

2 結(jié)果

2.1 FGF-2及miR-215水平對(duì)比

觀察組患者胃黏膜組織FGF-2陽性率、表達(dá)水平,miR-215陽性率、表達(dá)水平明顯高于對(duì)照組(P<0.05),如表1所示。

表1 FGF-2及miR-215水平對(duì)比(n,%)

2.2 FGF-2及miR-215對(duì)早期胃癌的診斷效能分析

FGF-2對(duì)早期胃癌的診斷效能明顯高于miR-215(P<0.05),其中FGF-2診斷早期胃癌的曲線下面積為0.852,最佳診斷界限值為1.11,miR-215曲線下面積為0.735,最佳診斷界限值為0.86,如圖1、表2所示。

圖1 FGF-2及miR-215對(duì)早期胃癌的診斷ROC曲線

表2 FGF-2及miR-215對(duì)早期胃癌的診斷效能分析

2.3 復(fù)發(fā)組與非復(fù)發(fā)組一般臨床情況對(duì)比

復(fù)發(fā)組與非復(fù)發(fā)組患者性別、年齡、腫瘤位置、腫瘤直徑對(duì)比無明顯差異(P>0.05),復(fù)發(fā)組與非復(fù)發(fā)組患者浸潤深度、組織分化程度、FGF-2及miR-215水平對(duì)比差異顯著(P<0.05),如表3所示。

2.4 FGF-2及miR-215對(duì)早期胃癌患者經(jīng)內(nèi)鏡黏膜下剝離術(shù)后復(fù)發(fā)的預(yù)測(cè)價(jià)值

對(duì)上述單因素分析具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異的指標(biāo)進(jìn)行賦值,logistic回歸分析結(jié)果表明:FGF-2及miR-215為胃癌患者預(yù)后的獨(dú)立影響因素(P<0.05),如表4所示。

表4 血清MMP-9和MMP-2對(duì)胃癌患者的預(yù)后預(yù)測(cè)價(jià)值

3 討論

本研究結(jié)果表明,觀察組患者胃黏膜組織FGF-2陽性率、表達(dá)水平,miR-215陽性率、表達(dá)水平明顯高于對(duì)照組(P<0.05)。研究發(fā)現(xiàn)[6],miR-215在胃癌組織或血清中呈現(xiàn)高表達(dá)情況,并且通過靶基因表達(dá)水平影響胃癌細(xì)胞增殖與遷徙能力,與本研究結(jié)果相符。這是因?yàn)?miRNA作為人類凈化中高度保守內(nèi)源性非編碼小分子RNA的一種,他能夠與靶基因mRNA中3-UTR區(qū)域相結(jié)合,從而對(duì)靶基因翻譯產(chǎn)生阻遏,調(diào)控靶基因表達(dá)的同時(shí),也參與了多種疾病病理生理發(fā)展過程。MiRNA編碼基因?qū)儆诋?dāng)前最大一類調(diào)節(jié)基因,在細(xì)胞的生長、發(fā)育和凋亡過程中發(fā)揮著重要作用。已有研究表明[7],miR-21、miR-233、miR-199等與胃癌的發(fā)生與發(fā)展具有重要關(guān)系。FGF-2屬于一類強(qiáng)有力細(xì)胞分裂促因子的一種,對(duì)于成纖維細(xì)胞在內(nèi)的多種細(xì)胞產(chǎn)生促進(jìn)分化和增殖功能,因此與腫瘤的生長具有密切關(guān)系。研究發(fā)現(xiàn)[8],FGF-2在胰腺癌、乳腺癌以及胃癌等多種惡性腫瘤中均存在過度表達(dá)情況,與本研究結(jié)果相符。

本研究結(jié)果表明,FGF-2對(duì)早期胃癌的診斷效能明顯高于miR-215(P<0.05),其中FGF-2診斷早期胃癌的曲線下面積為0.852,最佳診斷界限值為1.11,miR-215曲線下面積為0.735,最佳診斷界限值為0.86。提示FGF-2及miR-215對(duì)早期胃癌均具有重要診斷價(jià)值。以往研究中對(duì)于FGF-2及miR-215與早期胃癌診斷的相關(guān)研究較少,多研究發(fā)現(xiàn)[9],兩者與胃癌的發(fā)生與發(fā)展具有一定相關(guān)性。但本研究發(fā)現(xiàn),FGF-2對(duì)于早期胃癌的診斷效能優(yōu)于miR-215,其具體機(jī)制還需日后增加樣本量進(jìn)行持續(xù)深入分析。

復(fù)發(fā)組與非復(fù)發(fā)組患者性別、年齡、腫瘤位置、腫瘤直徑對(duì)比無明顯差異(P>0.05),復(fù)發(fā)組與非復(fù)發(fā)組患者浸潤深度、組織分化程度、FGF-2及miR-215水平對(duì)比差異顯著(P<0.05)。研究發(fā)現(xiàn)[10],許多早期胃癌患者通過內(nèi)鏡黏膜下剝離術(shù)后能夠達(dá)到完全治愈效果,但依然有一部分患者術(shù)后會(huì)出現(xiàn)胃癌復(fù)發(fā)或淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況。因此,對(duì)胃癌術(shù)后復(fù)發(fā)情況進(jìn)行早期預(yù)測(cè)具有重要價(jià)值。而本研究發(fā)現(xiàn),浸潤深度、組織分化程度與胃癌復(fù)發(fā)情況具有一定關(guān)系,這主要是因?yàn)閻盒阅[瘤轉(zhuǎn)移和浸潤過程中,最先浸潤的就是胃黏膜組織,組織分化程度增加,浸潤程度越深,雖然通過手術(shù)治療可將病灶組織剝離,但殘留病灶情況發(fā)生率較高,因此也增加了患者術(shù)后復(fù)發(fā)情況。而對(duì)于FGF-2及miR-215水平與黏膜下剝離術(shù)后復(fù)發(fā)的關(guān)系來說,主要是因?yàn)?miR-215能夠通過抑制神經(jīng)營養(yǎng)因子受體紀(jì)元蛋白相關(guān)激酶C截短形式來發(fā)揮輔助作用,這種截短形勢(shì)下對(duì)于胃癌細(xì)胞的生長調(diào)節(jié)具有重要作用。有研究發(fā)現(xiàn)[11],胃癌細(xì)胞的發(fā)生發(fā)展與miR-215表達(dá)具有顯著關(guān)系,與本研究結(jié)果相符。另外,對(duì)于FGF-2來說,它能夠直接作用在腫瘤細(xì)胞分泌的各種蛋白分解酶與膠原酶,促進(jìn)腫瘤浸潤與轉(zhuǎn)移,若患者通過內(nèi)鏡黏膜下剝離術(shù)后依然有殘余病灶,FGF-2作為血管生長因子對(duì)于活動(dòng)生長的腫瘤具有明顯促進(jìn)作用,能夠促進(jìn)腫瘤毛細(xì)血管內(nèi)皮增殖,增加對(duì)于腫瘤血液供應(yīng),從而促進(jìn)腫瘤細(xì)胞分裂的同時(shí),也增加了早期胃癌患者的術(shù)后復(fù)發(fā)情況。

logistic回歸分析結(jié)果表明:FGF-2及miR-215為胃癌患者預(yù)后的獨(dú)立影響因素(P<0.05)。提示臨床上對(duì)于FGF-2及miR-215表達(dá)增加的經(jīng)內(nèi)鏡下黏膜剝離術(shù)治療的早期胃癌患者要及時(shí)采取相關(guān)措施來預(yù)防術(shù)后復(fù)發(fā)情況的發(fā)生。

綜上所述,FGF-2及miR-215對(duì)于早期胃癌的診斷價(jià)值較高,且FGF-2、miR-215水平升高為早期胃癌經(jīng)內(nèi)鏡黏膜下剝離術(shù)后復(fù)發(fā)的獨(dú)立預(yù)測(cè)因素。