抗癌扶正方對小鼠Lewis肺癌移植瘤抑瘤作用的實(shí)驗(yàn)研究

唐胤泉,張 昱

(浙江中醫(yī)藥大學(xué)附屬金華中醫(yī)院·浙江 金華 321017)

順氯氨鉑(Cis-dichlorodiammine-platinum,CDDP)簡稱順鉑(cisplatin),作為一種廣譜抗腫瘤化療藥物,具有良好的抗腫瘤作用,是臨床治療肺癌的重要手段之一。然而,其嚴(yán)重的腎毒性[1],以及在化療過程中所產(chǎn)生的耐藥性[2-4],大大限制了其臨床應(yīng)用。傳統(tǒng)中醫(yī)藥一直以來為我國人民的身體健康做出了突出貢獻(xiàn),在抑制腫瘤生長,提高腫瘤患者的生存質(zhì)量,延長其生命等方面都有著得天獨(dú)厚的優(yōu)勢,已逐漸成為腫瘤治療領(lǐng)域的熱點(diǎn)[5]。金華中醫(yī)院名中醫(yī)張昌禧認(rèn)為,肺為嬌臟,喜潤惡燥,癌毒多為火毒,首先灼傷肺陰。肺癌又是一種消耗性癌病,多耗氣傷血,直至機(jī)體氣血枯竭而死亡。方劑宜在益氣養(yǎng)陰、扶正固本的基礎(chǔ)上,加以解毒祛瘀,防止癌腫復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移?？拱┓稣绞菑埨蠌尼t(yī)五十余載抗癌經(jīng)驗(yàn)的總結(jié),前期的臨床觀察也證實(shí)該方具有改善耐藥性,以及抑制腫瘤復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移的作用,并能有效改善患者生存質(zhì)量,延長其生命[6-7]。本實(shí)驗(yàn)通過建立小鼠Lewis肺癌模型,觀察抗癌扶正方對小鼠Lewis肺癌移植瘤的生長抑制作用,為臨床應(yīng)用抗癌扶正方提供實(shí)驗(yàn)室依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動物與瘤株細(xì)胞 雄性C57BL /6小鼠,4～5周齡,40只,體質(zhì)量18～22 g,購自上海斯萊克實(shí)驗(yàn)動物有限責(zé)任公司,動物生產(chǎn)許可證號為SCXK(滬)2017-0005。于浙江鷹旸醫(yī)藥研發(fā)有限公司屏障系統(tǒng)內(nèi)飼養(yǎng),實(shí)驗(yàn)飼養(yǎng)室許可證號:SYXK(浙)2021-0033。Lewis肺癌細(xì)胞采購于賽百慷,貨號:iCell-m027。

1.2 藥物與主要試劑 抗癌扶正方主要由貓爪草、三葉青、山慈菇、冬凌草、南沙參、麥冬等中藥配伍組成,由金華市中醫(yī)醫(yī)院制劑室制備,將配方中藥加入蒸餾水浸泡2 h,藥材與蒸餾水比例為1∶5,煎煮沸騰20 min后過濾,在殘?jiān)性?∶3加入蒸餾水,沸騰后煮20 min,過濾,合并兩次藥液,濃縮成38.5 mL,濃度為2.9 g/mL,密閉于4 ℃冰箱保存,備用。順鉑:江蘇豪森藥業(yè)集團(tuán)有限公司,批號:601210503。生理鹽水:河北天成藥業(yè)股份有限公司,批號:R21479/D12GR171221。

1.3 主要儀器 S9智能型IVC:蘇州市蘇杭科技器材有限公司;YXQ-MG-202型脈動真空滅菌器:張家港華菱醫(yī)療設(shè)備股份公司;YJ-500L型純水儀:杭州亞潔環(huán)保設(shè)備有限公司;UTP-313型電子天平:上?；ǔ彪娖饔邢薰?8015型游標(biāo)卡尺:SANTO公司。

1.4 動物模型建立 在無菌條件下將傳代后10 d的瘤源小鼠頸椎脫臼處死后固定于實(shí)驗(yàn)板上,剝?nèi)∑淠[瘤組織,制成活細(xì)胞數(shù)>95﹪的懸液。將制備好的細(xì)胞懸液以0.1 mL/只(1×106)移植于小鼠右腋皮下,復(fù)制小鼠Lewis肺癌轉(zhuǎn)移模型,共造模40只,接種完成后密切觀察小鼠接種部位腫瘤的生長情況,待腫瘤體積>100 mm3時(shí),隨機(jī)揀選2只,取腫瘤組織制作病理切片,鏡下觀察確認(rèn)組織為腫瘤細(xì)胞,提示Lewis肺癌移植瘤小鼠模型建立成功。

1.5 實(shí)驗(yàn)分組與給藥 將40只成模小鼠隨機(jī)分成5 組,分別為:荷瘤對照組、順鉑對照組和抗癌扶正方低劑量組、中劑量組、高劑量組,每組各8只。荷瘤對照組:灌胃給予中藥組相同體積的生理鹽水,2次/天,連續(xù)28 d,并腹腔注射順鉑對照組同等體積的生理鹽水,1次/周,4 周;順鉑對照組:腹腔注射給予順鉑2 mg/kg,1次/周, 4 周;低、中、高劑量組:灌胃給予抗癌扶正方14.6、29.2、58.4 g/ kg,每天2次,連續(xù)28 d。

1.6 抑瘤率觀察 在末次給藥后24 h,行脫頸椎處死小鼠,于超凈工作臺剝離出腫瘤組織,稱重、記錄,計(jì)算抑瘤率。抑瘤率=(模型組平均瘤重-實(shí)驗(yàn)組平均瘤重)/模型組平均瘤重×100%。

2 結(jié)果見表1。

表1 各組小鼠瘤重與抑瘤率比較

3 討論

肺癌是一種患病率和病死率極高的常見惡性腫瘤[8-9],全球每年約有180萬確診為肺癌,并導(dǎo)致160萬人死亡,5年生存率僅為4%～17%[10]。根據(jù)肺癌病理類型可分為非小細(xì)胞肺癌(NSCLC)和小細(xì)胞肺癌(SCLC),其中,85%為NSCLC。目前,常見的治療體系為手術(shù)、放化療、生物免疫治療以及中醫(yī)藥治療等,治療效果雖在不斷提高,但5年生存率依然在20%徘徊,總生存期僅為8～10 個(gè)月[11-12],且耐藥性明顯,還常伴有腹瀉、皮疹、間質(zhì)性肺炎等副反應(yīng)[13-14]。

抗癌扶正方是浙江省省級名中醫(yī)張昌禧的經(jīng)驗(yàn)方,方中貓爪草、三葉青、山慈菇和冬凌草具有清熱解毒、祛風(fēng)化痰、活血止痛等作用,南沙參和麥冬可養(yǎng)陰生津、潤肺清心。該方在本院已有多年的應(yīng)用歷史,因其價(jià)格便宜、療效好、無不良反應(yīng),深受臨床醫(yī)師和腫瘤病人的認(rèn)可。

本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,抗癌扶正方可明顯減輕小鼠Lewis肺癌移植瘤瘤重,以高劑量組效果最為明顯;抗癌扶正方對小鼠Lewis肺癌移植瘤的抑瘤率呈現(xiàn)劑量依賴性,隨著劑量的增加抑瘤率升高。證實(shí)抗癌扶正方對肺癌移植瘤有抑制作用。后期將進(jìn)一步研究抗癌扶正方與化療藥物聯(lián)合運(yùn)用對順鉑的增敏性,以便臨床更好地應(yīng)用。