CHD4調(diào)控端粒功能促進(jìn)宮頸癌HeLa細(xì)胞生長(zhǎng)的機(jī)制研究

王倩倩　李婷芳　王峰

摘要：目的 探討染色質(zhì)域解旋酶DNA結(jié)合蛋白4（CHD4）通過(guò)調(diào)控端粒功能對(duì)宮頸癌HeLa細(xì)胞增殖、遷移的影響。方法 慢病毒感染構(gòu)建CHD4穩(wěn)定敲低的宮頸癌HeLa細(xì)胞系，實(shí)時(shí)熒光定量PCR（qPCR）和Western blot分別檢測(cè)CHD4的mRNA和蛋白表達(dá)水平；將宮頸癌HeLa細(xì)胞分為對(duì)照組、shCDH4-1組、shCHD4-2組，CCK-8實(shí)驗(yàn)檢測(cè)CHD4對(duì)HeLa細(xì)胞增殖能力的影響；集落形成實(shí)驗(yàn)檢測(cè)細(xì)胞的集落數(shù)量；劃痕愈合實(shí)驗(yàn)檢測(cè)細(xì)胞遷移能力；裸鼠荷瘤實(shí)驗(yàn)觀察移植瘤生長(zhǎng)情況；免疫熒光-熒光原位雜交技術(shù)檢測(cè)CHD4與HeLa細(xì)胞中端粒的共定位及各組細(xì)胞中端粒的損傷情況，端粒損傷以損傷因子γH2AX與端粒的共定位表示；中期染色體-熒光原位雜交技術(shù)檢測(cè)各組細(xì)胞中端粒功能的變化，端粒信號(hào)缺失（SFE）或多端粒信號(hào)（MTS）的染色體比例升高代表端粒功能障礙。結(jié)果 慢病毒感染成功構(gòu)建CHD4穩(wěn)定下調(diào)的HeLa細(xì)胞系（P＜0.05）。與對(duì)照組相比，shCDH4-1組和shCHD4-2組的細(xì)胞增殖能力、集落形成能力、遷移能力、體內(nèi)腫瘤生長(zhǎng)能力均明顯下降（P＜0.05）。免疫熒光-熒光原位雜交實(shí)驗(yàn)表明，CHD4定位于HeLa細(xì)胞的端粒上。與對(duì)照組相比，CHD4的缺失不足以引起端粒的DNA損傷（P＞0.05），但會(huì)導(dǎo)致HeLa細(xì)胞SFE的染色體比例明顯增多（P＜0.05）。結(jié)論 CHD4可通過(guò)調(diào)控HeLa細(xì)胞的端粒功能，促進(jìn)宮頸癌細(xì)胞的增殖和遷移。

關(guān)鍵詞：HeLa細(xì)胞；端粒；宮頸腫瘤；細(xì)胞增殖；染色質(zhì)域解旋酶DNA結(jié)合蛋白4

中圖分類號(hào)：R737.33文獻(xiàn)標(biāo)志碼：ADOI：10.11958/20222091

Study on the mechanism of CHD4 regulating telomere function to promote cervical cancer HeLa cell proliferation

WANG Qianqian， LI Tingfang， WANG Feng

School of Basic Medical Sciences， Tianjin Medical University， Tianjin 300070， China

Corresponding Author E-mail： wangf@tmu.edu.cn

Abstract： Objective To investigate the effect of chromodomain helicase DNA-binding protein 4 （CHD4） on the proliferation and migration of cervical cancer HeLa cells by regulating telomeres function. Methods CHD4-depleted HeLa cell lines were constructed by lentivirus infection. The mRNA and protein expression levels of CHD4 were detected by real-time fluorescence quantitative PCR （qPCR） and Western blot assay. Cervical cancer HeLa cells were divided into the control group， the shCDH4-1 group and the shCHD4-2 group. The effect of CHD4 on cell proliferation of HeLa cells was detected by CCK-8 assay. The colony formation assay was performed to detect the number of cell colonies. Scratch-healing assay was performed to detect cell migration. In vivo， the tumor formation experiment was used to observe the growth changes of xenograft in nude mice. Immunofluorescence-fluorescence in situ hybridization was performed to detect the co-localization of telomeres and CHD4 in HeLa cells， and the level of damage at telomeres in each group. Telomere damage was indicated by the co-localization of damage factor γH2AX with telomeres. Metaphase-telomere fluorescence in situ hybridization was performed to detect changes in telomere function in each group， and the increased proportion of chromosomes with telomere signal deletion （SFE） or multiple telomere signals （MTS） represented telomere dysfunction. Results HeLa cell lines with stable down-regulated CHD4 were successfully constructed after lentiviral infection （P＜0.05）. Compared with the control group， the cell proliferation ability， colony formation ability， migration ability and tumor growth ability in vivo were significantly decreased in the shCHD4-1 group and the shCHD4-2 group （P＜0.05）. Immunofluorescence-fluorescence in situ hybridization assay showed that CHD4 localized to telomeres of HeLa cells. Compared with the control group， the deletion of CHD4 was insufficient to cause DNA damage at telomeres （P＞0.05）. However， the proportion of SFE chromosomes in HeLa cells increased significantly （P＜0.05）. Conclusion CHD4 can promote the proliferation and migration of HeLa cells by regulating telomere function.

Key words： HeLa cells; telomere; uterine cervical neoplasms; cell proliferation; chromodomain helicase DNA-binding protein 4

全球每年約有64萬(wàn)宮頸癌的新發(fā)病例及34萬(wàn)的死亡病例［1］。盡管人乳頭瘤病毒（human papillomavirus，HPV）疫苗的接種率呈上升趨勢(shì)，但宮頸癌仍然是女性四大常見(jiàn)的惡性腫瘤之一［1-2］。目前，手術(shù)、放療和化療是宮頸癌經(jīng)典和有效的治療方法［3］。端粒是位于真核生物線性染色體末端的特殊結(jié)構(gòu)，能夠維持基因組的穩(wěn)定［4］。絕大多數(shù)腫瘤通過(guò)激活端粒酶來(lái)維持端粒長(zhǎng)度，實(shí)現(xiàn)永生化［5］。據(jù)報(bào)道，核小體重塑和組蛋白去乙?；笍?fù)合物（nucleosome remodeling and deacetylase complex，NuRD）能夠參與端粒功能的維持［6］。染色質(zhì)域解旋酶DNA結(jié)合蛋白4（chromodomain helicase DNA-binding protein 4，CHD4）是NuRD復(fù)合體的關(guān)鍵催化亞基，參與細(xì)胞分化、細(xì)胞周期調(diào)節(jié)和DNA損傷修復(fù)［7-8］，且CHD4的表達(dá)與多種惡性腫瘤患者的預(yù)后相關(guān)［9］。然而CHD4在宮頸癌中的作用尚未見(jiàn)報(bào)道。本研究旨在探究CHD4通過(guò)調(diào)控端粒功能對(duì)宮頸癌HeLa細(xì)胞增殖、遷移的影響，為宮頸癌治療提供潛在靶點(diǎn)。

1 材料與方法

1.1 材料 人宮頸癌HeLa細(xì)胞為天津市細(xì)胞穩(wěn)態(tài)與人類重大疾病重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室保存。RPMI1640培養(yǎng)基、基質(zhì)膠均購(gòu)自美國(guó)Corning公司。胰蛋白酶購(gòu)自美國(guó)Gibco公司。胎牛血清購(gòu)自烏拉圭Lonsera公司。RNA提取試劑盒購(gòu)自美國(guó)Promega公司。逆轉(zhuǎn)錄試劑盒和實(shí)時(shí)熒光定量試劑盒均購(gòu)自Invitrogen公司。磷酸鹽緩沖液（PBS）、4%多聚甲醛、1 mol/L Tris-HCl（pH=7.2）、Tris緩沖鹽溶液（TBS）、牛血清白蛋白（BSA）、高效RIPA裂解液購(gòu)自北京索萊寶公司。甲酰胺、明膠（Gelatin）、吐溫-20（Tween-20）、Triton X-100均購(gòu)自美國(guó)Sigma公司。秋水仙素購(gòu)自以色列BI生物科技公司。鼠源γH2AX一抗購(gòu)自Millpore公司，鼠源CHD4一抗購(gòu)自Abcam公司，兔源β-Tubulin一抗和羊抗兔二抗均購(gòu)自Affinity公司，羊抗鼠二抗購(gòu)自美國(guó)Immunoway公司。TelC-FITC探針488、CY3均購(gòu)自Panagene公司。Aleax 555羊抗鼠二抗購(gòu)自Thermo公司。CCK-8檢測(cè)試劑盒購(gòu)自蘭杰柯科技有限公司。熒光倒置顯微鏡購(gòu)自日本Nikon公司。Western blot電泳儀、酶標(biāo)儀購(gòu)自美國(guó)Bio-Rad公司。短發(fā)夾RNA（shRNA）序列由生工生物工程（上海）股份有限公司合成。8只SPF級(jí)雌性裸鼠，4周齡，體質(zhì)量14～16 g，購(gòu)自北京維通利華公司，動(dòng)物生產(chǎn)許可證號(hào)：SCXK（京）2021-0006。

1.2 方法

1.2.1 細(xì)胞培養(yǎng)及分組 將人宮頸癌HeLa細(xì)胞分為陰性對(duì)照組（shRNA靶向無(wú)義序列）和CHD4敲低組（包括shCHD4-1組、shCHD4-2組，2條shRNA分別靶向干擾CHD4序列），細(xì)胞均于RPMI1640培養(yǎng)基（含10%胎牛血清，1%青鏈霉素雙抗）和37 ℃，5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

1.2.2 慢病毒感染及穩(wěn)定細(xì)胞株篩選 靶向CHD4的2條短發(fā)夾RNA（shRNA）序列分別為5′-GCTGACACAGTTATTATCTAT-3′和5′-GGTGTTATGTCTTTGATTC-3′；陰性對(duì)照組shRNA序列為5′-TTCTCCGAACGTGTCACGT-3′。構(gòu)建pLKO.1-Puro-shCHD4質(zhì)粒，測(cè)序確認(rèn)質(zhì)粒成功構(gòu)建。將包裝質(zhì)粒pMG2.G、psPAX2與pLKO.1-Puro-shCHD4質(zhì)粒共同轉(zhuǎn)染到293T細(xì)胞內(nèi)，收集48 h病毒上清。同時(shí)接種適量細(xì)胞于6孔板中，待細(xì)胞匯合至60%后加入病毒上清，放置于細(xì)胞培養(yǎng)箱中。感染24 h后更換為含10%FBS的新鮮培養(yǎng)基，繼續(xù)培養(yǎng)24 h。加入嘌呤霉素（2 mg/L）篩選陽(yáng)性細(xì)胞，待無(wú)病毒感染對(duì)照細(xì)胞死亡后，停止篩選進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn)。

1.2.3 RNA提取與實(shí)時(shí)熒光定量PCR（qPCR）檢測(cè)HeLa細(xì)胞中CHD4 mRNA表達(dá) RNA試劑盒提取細(xì)胞總RNA。按照逆轉(zhuǎn)錄試劑盒說(shuō)明書(shū)將1 μg總RNA逆轉(zhuǎn)錄為cDNA。以cDNA為模板進(jìn)行qPCR。反應(yīng)程序?yàn)椋?5 ℃預(yù)變性3 min；95 ℃變性10 s，60 ℃退火20 s，72 ℃延伸30 s，共40個(gè)循環(huán)。以GAPDH為內(nèi)參，根據(jù)擴(kuò)增曲線的Ct值用2-ΔΔCt公式計(jì)算CHD4 mRNA的相對(duì)表達(dá)水平。GAPDH上游引物5′-CGACAGTCAGCCGCATCTT-3′，下游引物5′-CCCCATGGTGTCTGAGCG-3′；CHD4上游引物5′-AGTGCTGCAACCATCCATACCTCT-3′，下游引物5′-ATGCCCACCCTCCTTAAGGTTCTT-3′。

1.2.4 Western blot檢測(cè)HeLa細(xì)胞中CHD4蛋白的表達(dá)水平 RIPA裂解液提取細(xì)胞總蛋白，BCA法測(cè)定總蛋白濃度。30 μg的細(xì)胞總蛋白經(jīng)電泳分離后，轉(zhuǎn)至0.45 μm的PVDF膜上，5%的脫脂奶粉室溫封閉1 h，CHD4（1∶1 000）、β-Tubulin（1∶2 000）一抗孵育，搖床4 ℃過(guò)夜。二抗（羊抗鼠1∶5 000，羊抗兔1∶8 000）室溫孵育1 h，洗膜后曝光顯影。Image J分析灰度值并進(jìn)行歸一化處理。

1.2.5 CCK-8檢測(cè)細(xì)胞增殖 將各組細(xì)胞計(jì)數(shù)后接種于96孔板中（1 000個(gè)/孔），每組設(shè)6個(gè)復(fù)孔，分別培養(yǎng)1、3、5 d。檢測(cè)前每孔避光加入CCK-8試劑（每100 μL培養(yǎng)基中加入10 μL CCK-8）。1 h后使用酶標(biāo)儀檢測(cè)450 nm波長(zhǎng)處的光密度（OD）值。

1.2.6 集落形成實(shí)驗(yàn)檢測(cè)細(xì)胞的集落數(shù)量 將800個(gè)細(xì)胞接種于6孔板中，繼續(xù)培養(yǎng)2周，待細(xì)胞長(zhǎng)出肉眼可見(jiàn)的細(xì)胞集落時(shí)，終止培養(yǎng)，PBS洗2次，甲醛固定20 min，結(jié)晶紫染色20 min，去離子水清洗后，晾干培養(yǎng)皿，相機(jī)拍照，Image J軟件計(jì)數(shù)圖片中的細(xì)胞集落數(shù)量。

1.2.7 劃痕愈合實(shí)驗(yàn)檢測(cè)細(xì)胞遷移 將各組細(xì)胞接種于6孔板中，待細(xì)胞匯合至100%時(shí)，用100 μL的槍頭在孔板內(nèi)垂直劃線，產(chǎn)生細(xì)胞劃痕。PBS沖洗，無(wú)血清培養(yǎng)基中繼續(xù)培養(yǎng)24 h，顯微鏡下觀察0 h和24 h的劃痕遷移率。劃痕遷移率（%）=（0 h劃痕面積-24 h劃痕面積）/0 h劃痕面積×100%。

1.2.8 裸鼠成瘤實(shí)驗(yàn) 由于shCHD4-2組敲低效率較高，對(duì)細(xì)胞的生長(zhǎng)抑制比較明顯，且裸鼠荷瘤所需細(xì)胞量較大，shCHD4-2組的細(xì)胞量不能達(dá)到注射前所需細(xì)胞數(shù)量，因此選用shCHD4-1組細(xì)胞進(jìn)行裸鼠荷瘤。將1×107個(gè)對(duì)照組和shCHD4-1組的HeLa細(xì)胞懸浮于 50 μL的PBS中，將基質(zhì)膠按1∶1比例加入，全程冰上操作。選擇裸鼠左前肢腋下處皮下接種，將裸鼠分為對(duì)照組和shCHD4-1組，每組4只，20 d后處死裸鼠，取出腫瘤并進(jìn)行稱質(zhì)量和拍照。

1.2.9 免疫熒光-熒光原位雜交（IF-FISH） 提前將適量細(xì)胞接種于含蓋玻片的6孔板中，待細(xì)胞貼壁生長(zhǎng)至匯合度達(dá)到80%時(shí)，用2%多聚甲醛固定20 min，0.5%Triton X-100的PBS通透20 min。將含有TelC-FITC探針的雜交液與細(xì)胞共孵育，85 ℃變性3 min后于室溫避光雜交2 h。洗液A（70%甲酰胺，1 mol/L Tris HCl，pH=7.2，10% BSA，無(wú)菌水）洗滌15 min，2次。洗液B（0.1% Tween-20，TBS）洗滌5 min，3次。室溫下用封閉液（PBS∶BSA∶Gelatin=1∶1∶100）孵育1 h后，一抗（CHD4為1∶10 000，γH2AX為1∶1 000）避光孵育1 h，含0.1% Tween-20的PBS避光振蕩5 min，4次。熒光二抗（1∶2 000）避光孵育30 min。之后用70%、90%、100%的乙醇梯度脫水各2 min，晾干后每張細(xì)胞爬片用10 μL DAPI封片，熒光顯微鏡下觀察拍攝，統(tǒng)計(jì)每個(gè)細(xì)胞核中端粒與γH2AX的共定位個(gè)數(shù)的平均值檢測(cè)端粒損傷情況。

1.2.10 中期染色體-熒光原位雜交（Metaphase-FISH）檢測(cè)端粒功能 傳代培養(yǎng)細(xì)胞，待細(xì)胞密度達(dá)到80%左右時(shí)加入秋水仙素，終質(zhì)量濃度為0.1 mg/L。培養(yǎng)6 h后進(jìn)行中期染色體制備。收集細(xì)胞沉淀，逐滴加入37 ℃預(yù)熱的0.075 mol/L氯化鉀低滲液至10 mL，37 ℃低滲30 min。逐滴加入10 mL固定液（甲醇∶冰乙酸=3∶1），室溫靜置30 min。隨后根據(jù)細(xì)胞沉淀加入適量固定液，將細(xì)胞懸液滴片。4%多聚甲醛固定，70%、90%、100%的乙醇梯度脫水后雜交直至封片。后續(xù)操作步驟同實(shí)驗(yàn)方法1.2.9。統(tǒng)計(jì)每個(gè)中期染色體分裂相中含端粒信號(hào)缺失（SFE）和多端粒信號(hào)（MTS）的染色體比例，比例升高代表端粒功能障礙。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS 25.0軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析。符合正態(tài)分布的計(jì)量資料以均數(shù)[±]標(biāo)準(zhǔn)差（x±s）表示。2組間比較采用獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)；多組間比較采用單因素方差分析，組間多重比較采用LSD法；不符合正態(tài)分布的計(jì)量資料以M（P₂₅，P₇₅）表示，組間比較采用Kruskal-Wallis H檢驗(yàn)。不同時(shí)間點(diǎn)多組間比較采用重復(fù)測(cè)量方差分析。P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 慢病毒感染HeLa細(xì)胞后CHD4的表達(dá) 與對(duì)照組相比，慢病毒感染后，在敲低CHD4的細(xì)胞系中，CHD4的mRNA及蛋白表達(dá)水平均降低（P＜0.05），見(jiàn)圖1、表1。

2.2 抑制CHD4表達(dá)對(duì)HeLa細(xì)胞增殖活力的影響 CCK-8實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，與對(duì)照組相比，第5天時(shí)shCHD4-1組和shCHD4-2組的OD450值均下降（P＜0.05），見(jiàn)表2。

2.3 抑制CHD4表達(dá)對(duì)HeLa細(xì)胞集落形成、遷移能力的影響 與對(duì)照組相比，shCDH4-1組和shCHD4-2組的集落形成數(shù)量、細(xì)胞遷移率均降低（P＜0.05），見(jiàn)圖2、3，表3。

2.4 抑制CHD4表達(dá)對(duì)裸鼠體內(nèi)腫瘤生長(zhǎng)的影響 裸鼠成瘤結(jié)果顯示，與對(duì)照組相比，shCHD4-1組裸鼠體內(nèi)移植瘤質(zhì)量降低［（0.10±0.03）g vs. （0.04±0.01）g，n=4，t=4.533，P＜0.01］，見(jiàn)圖4。

2.5 CHD4在HeLa細(xì)胞的端粒處的定位情況 IF-FISH結(jié)果表明，CHD4定位于HeLa細(xì)胞的端粒上，見(jiàn)圖5。

2.6 CHD4對(duì)HeLa細(xì)胞中端粒DNA損傷的影響 對(duì)照組、shCHD4-1組和shCHD4-2組中每個(gè)細(xì)胞核中端粒與γH2AX的共定位數(shù)分別為（0.26±0.09）個(gè)、（0.26±0.12）個(gè)和（0.20±0.05）個(gè)，組間比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（n=3，F(xiàn)=0.441，P＞0.05），見(jiàn)圖6。

2.7 CHD4對(duì)端粒功能的影響 Metaphase-FISH結(jié)果表明，與對(duì)照組相比，CHD4的缺失導(dǎo)致HeLa細(xì)胞中SFE的染色體所占比例增多（P＜0.05），而各組間含MTS的染色體比例的差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），見(jiàn)圖7、表4。

3 討論

宮頸癌容易早期轉(zhuǎn)移，且預(yù)后不良，5年生存率低至30%～60%［10］。盡管手術(shù)、化療和放療等治療方法已經(jīng)取得了較大進(jìn)步，但化療藥物會(huì)導(dǎo)致嚴(yán)重的肝腎毒性及耐藥性，這也是局部晚期宮頸癌治療的主要問(wèn)題［11-12］。放療被認(rèn)為是宮頸癌患者不可或缺的治療方法，特別是對(duì)于晚期宮頸癌患者。但有研究發(fā)現(xiàn)，接受放療后的宮頸癌患者更易患上盆腔器官的第二原發(fā)性癌癥［13］。因此，深入探究宮頸癌進(jìn)展的分子機(jī)制，尋找新的靶點(diǎn)對(duì)宮頸癌的治療具有重要臨床意義。

CHD4作為NuRD復(fù)合物的關(guān)鍵催化亞基，在染色質(zhì)重塑和基因調(diào)節(jié)過(guò)程中發(fā)揮重要作用。隨著研究的深入，越來(lái)越多的證據(jù)表明，CHD4作為致癌因子參與多種腫瘤的發(fā)生與進(jìn)展。如Xia等［14］研究發(fā)現(xiàn)CHD4可抑制抑癌基因的表達(dá)，并促進(jìn)結(jié)直腸癌的增殖、侵襲和遷移；D'Alesio等［15］通過(guò)RNAi篩選發(fā)現(xiàn)CHD4是乳腺癌必不可少的生長(zhǎng)因子，抑制CHD4的表達(dá)可顯著抑制小鼠體內(nèi)乳腺癌腫瘤的生長(zhǎng)。最近一項(xiàng)研究表明，胃癌患者中腫瘤的耐藥性與CHD4的上調(diào)有關(guān)，敲低CHD4可增強(qiáng)胃癌對(duì)化療藥物的敏感性，并抑制腫瘤生長(zhǎng)［16］。本研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)，利用shRNA靶向抑制CHD4表達(dá)后，宮頸癌HeLa細(xì)胞的增殖活力、集落形成數(shù)量及遷移能力明顯降低，體內(nèi)成瘤實(shí)驗(yàn)進(jìn)一步證實(shí)下調(diào)CHD4能抑制宮頸癌裸鼠移植瘤的生長(zhǎng)。以上結(jié)果進(jìn)一步印證了CHD4的促癌作用，提示CHD4是宮頸癌的促癌因子，可能作為宮頸癌治療的潛在靶點(diǎn)。

癌細(xì)胞與體細(xì)胞最大區(qū)別在于癌細(xì)胞能夠繞過(guò)“海弗利克（Hayflick）極限”并進(jìn)行無(wú)限增殖，這依賴于端粒功能的穩(wěn)定和端粒長(zhǎng)度的維持［17］。由于末端復(fù)制問(wèn)題的存在，隨著每一輪的DNA復(fù)制和細(xì)胞分裂，端粒會(huì)逐漸縮短，最終觸發(fā)復(fù)制性衰老［18］。正常體細(xì)胞中，端粒的進(jìn)行性縮短是不可逆的，但腫瘤細(xì)胞會(huì)激活端粒維持機(jī)制來(lái)獲得無(wú)限增殖的能力［19］。因此，參與端粒功能維持的因子可視為潛在的抗癌治療的靶點(diǎn)。Alder等［20］表明端粒功能障礙可導(dǎo)致肺泡干細(xì)胞功能衰竭。最近的研究發(fā)現(xiàn)，部分特發(fā)性肺纖維化患者表現(xiàn)出端粒丟失和端粒DNA損傷增加，導(dǎo)致成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)缺陷［21］。Conomos等［6］研究表明，NuRD復(fù)合體通過(guò)鋅指蛋白ZNF827定位到端粒上，從而促進(jìn)端粒功能的維持。本研究發(fā)現(xiàn)，在宮頸癌HeLa細(xì)胞中，NuRD復(fù)合體的核心亞基CHD4能夠定位在HeLa細(xì)胞的端粒處，提示CHD4參與HeLa細(xì)胞的端粒維持。盡管CHD4的缺失并沒(méi)有引起γH2AX與端粒定位的明顯變化，即CHD4缺失不會(huì)造成端粒區(qū)DNA損傷，但導(dǎo)致HeLa細(xì)胞端粒信號(hào)丟失的染色體比例明顯增加，表明CHD4能夠維持端粒的穩(wěn)定，防止端粒功能紊亂，進(jìn)而增強(qiáng)HeLa細(xì)胞的生存能力。

綜上所述，CHD4能促進(jìn)宮頸癌HeLa細(xì)胞的增殖、遷移以及宮頸癌腫瘤的生長(zhǎng)，這可能與CHD4調(diào)控端粒功能有關(guān)。本研究初步證實(shí)了CHD4可能是臨床中宮頸癌治療的潛在靶點(diǎn)，為探索宮頸癌的發(fā)病機(jī)制及臨床藥物開(kāi)發(fā)提供了理論支持。

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（2022-12-21收稿 2023-04-20修回）

（本文編輯 李國(guó)琪）