尿核基質(zhì)蛋白22 和非典型細(xì)胞參數(shù)在膀胱癌診斷中的臨床價(jià)值

王月妹 李 磊

（上海市靜安區(qū)市北醫(yī)院檢驗(yàn)科，上海 200435）

膀胱尿路上皮癌（簡(jiǎn)稱膀胱癌）在男性中的發(fā)病率較高[1]。尿核基質(zhì)蛋白22（nuclear matrix protein 22，NMP22）是目前臨床應(yīng)用較廣的膀胱癌腫瘤標(biāo)志物之一[2]，但其特異性較低。其他膀胱癌的腫瘤標(biāo)志物也存在著一定的不足，目前尚無標(biāo)志物能同時(shí)保證高敏感性和高特異性[3]。因此，膀胱癌診斷目前仍以膀胱鏡和尿脫落細(xì)胞學(xué)檢查為主，前者為侵入性檢查，后者由病理科完成，耗時(shí)較長(zhǎng)[4]。早期診斷膀胱癌有助于提高患者生存率、延長(zhǎng)患者生存時(shí)間[5]。UF-5000尿有形成分分析儀可基于流式細(xì)胞術(shù)和熒光染色技術(shù)對(duì)尿液中的有形成分進(jìn)行定量分析，其中非典型細(xì)胞（atypical cell，Atyp.C）參數(shù)可代表尿液中的非典型細(xì)胞或惡性上皮細(xì)胞[6-7]。目前，關(guān)于NMP22和Atyp.C參數(shù)聯(lián)合檢查用于膀胱癌診斷的研究較少。為此，本研究擬探討NMP22和Atyp.C參數(shù)聯(lián)合檢測(cè)診斷膀胱癌的效能，為早期診斷膀胱癌提供參考。

1 材料和方法

1.1 研究對(duì)象

選取2021年10月—2022年9月上海市靜安區(qū)市北醫(yī)院行NMP22檢測(cè)和尿有形成分分析的患者3 288例，其中膀胱癌患者97例（膀胱癌組，均為男性，年齡55～84歲）、其他泌尿系統(tǒng)疾病患者3 191例（總對(duì)照組，其中男1 212例、女1 979例，年齡19～93歲）；將1 212例男性泌尿系統(tǒng)疾病患者作為男性對(duì)照組。膀胱癌依據(jù)膀胱鏡和術(shù)后病理組織學(xué)檢查確診，根據(jù)美國(guó)癌癥聯(lián)合委員會(huì)2017年發(fā)布的TNM分期標(biāo)準(zhǔn)[11]將膀胱癌分為Ⅰ期（42例）、Ⅱ期（30例）、Ⅲ期（25例）、Ⅳ期（0例）。對(duì)照組疾病類型包括膀胱炎（647例）、泌尿道感染（1 277例）、尿路結(jié)石（1 135例）、尿路狹窄（86例）、前列腺癌（46例）。排除標(biāo)準(zhǔn)：年齡<18歲，尿液樣本采集前2周內(nèi)行泌尿系統(tǒng)相關(guān)的侵入性檢查或有手術(shù)史，進(jìn)行過放療、化療或免疫治療等。本研究經(jīng)上海市靜安區(qū)市北醫(yī)院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)（YL-20210702-10）。

1.2 方法

收集所有患者行膀胱鏡檢查前或術(shù)前的尿液樣本。采用Alere NMP22 BladderChek（膠體金法，美國(guó)雅培公司）定性檢測(cè)尿液NMP22。嚴(yán)格按試劑盒說明書進(jìn)行操作。采用UF-5000尿有形成分分析儀（日本Sysmex公司）檢測(cè)尿液有形成分，得出Atyp.C熒光強(qiáng)度，Atyp.C參數(shù)的參考區(qū)間為0[12]。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS 26.0進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。呈正態(tài)分布的計(jì)量資料以±s表示，2個(gè)組之間比較采用t檢驗(yàn)，多組間比較采用單因素方差分析。呈非正態(tài)分布的計(jì)量資料以中位數(shù)（M）[四分位數(shù)（P25～P75）]表示，組間比較采用非參數(shù)U檢驗(yàn)，多組間比較采用Kruskal-WallisH檢驗(yàn)。計(jì)數(shù)資料以例或率表示，組間比較采用χ2檢驗(yàn)。采用Logistic回歸分析建立NMP22和Atyp.C熒光強(qiáng)度的聯(lián)合檢測(cè)方程，采用受試者工作特征（receiver operating characteristic，ROC）曲線評(píng)價(jià)各項(xiàng)指標(biāo)單項(xiàng)和聯(lián)合檢測(cè)診斷膀胱癌的效能。以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 膀胱癌組和對(duì)照組各項(xiàng)指標(biāo)比較

膀胱癌組年齡顯著低于男性對(duì)照組和總對(duì)照組（P<0.001）。膀胱癌組NMP22陽性率和Atyp.C熒光強(qiáng)度顯著高于男性對(duì)照組和總對(duì)照組（P<0.001）。見表1。

表1 膀胱癌組和對(duì)照組各項(xiàng)指標(biāo)比較

2.2 不同TNM分期膀胱癌患者NMP22陽性率與Apty.C熒光強(qiáng)度比較

NMP22陽性率（P=0.001）和Apty.C熒光強(qiáng)度（P<0.001）隨TNM分期的增高而升高。見表2。

表2 不同TNM分期膀胱癌患者NMP22陽性率及Apty.C熒光強(qiáng)度比較

2.3 NMP22、Atyp.C單項(xiàng)檢測(cè)和聯(lián)合檢測(cè)診斷膀胱癌的效能

聯(lián)合檢測(cè)方程為L(zhǎng)ogit（P）=2.329+2.634×NMP22（陽性=1，陰性=0）- 0.580×Atyp.C熒光強(qiáng)度。ROC曲線分析結(jié)果顯示，以男性對(duì)照組為參考，NMP22、Atyp.C熒光強(qiáng)度單項(xiàng)檢測(cè)和聯(lián)合檢測(cè)診斷膀胱癌的曲線下面積（area under curve，AUC）分別為0.794、0.757、0.867。以總對(duì)照組為參考，NMP22、Atyp.C熒光強(qiáng)度單項(xiàng)檢測(cè)和聯(lián)合檢測(cè)診斷膀胱癌的AUC分別為0.787、0.752、0.861。見表3、表4、圖1。

圖1 NMP22和Atyp.C單項(xiàng)檢測(cè)和聯(lián)合檢測(cè)診斷膀胱癌的ROC曲線

表3 以男性對(duì)照組為參考時(shí)NMP22、Atyp.C熒光強(qiáng)度單項(xiàng)檢測(cè)和聯(lián)合檢測(cè)診斷膀胱癌的效能

表4 以總對(duì)照組為參考時(shí)NMP22、Atyp.C熒光強(qiáng)度單項(xiàng)檢測(cè)和聯(lián)合檢測(cè)診斷膀胱癌的效能

3 討論

NMP22是從凋亡的尿路上皮細(xì)胞中釋放出的核有絲分裂器蛋白，膀胱癌患者尿液NMP22水平顯著升高[3]。NMP22水平受多種因素，如炎癥、感染、年齡、其他泌尿系統(tǒng)疾病的影響，因此特異性較低[8-9]。鑒于NMP22有較高的假陽性率，應(yīng)慎重解釋NMP22陽性結(jié)果。無創(chuàng)的尿液脫落細(xì)胞學(xué)檢查因具有非侵入性和高特異性的優(yōu)點(diǎn)而被廣泛使用，但該檢查需要連續(xù)3 d留取尿液樣本，且需人工鏡檢，因此干擾因素較多，重復(fù)性較差[10]。

UF-5000尿有形成份分析儀可通過熒光信號(hào)區(qū)域的不同來識(shí)別細(xì)胞中不同的核酸含量，對(duì)尿液樣本的要求較低，可以識(shí)別未染色、未離心的尿液樣本[7]。因此，相對(duì)于尿液脫落細(xì)胞學(xué)檢查，采用UF-5000尿有形成分分析儀檢測(cè)Atyp.C參數(shù)更加快速、簡(jiǎn)單，重復(fù)性更好。有研究結(jié)果顯示，Atyp.C參數(shù)在高危尿路上皮癌患者中有較高的敏感性和特異性，且與尿液脫落細(xì)胞學(xué)檢查的結(jié)果高度一致[11]。根據(jù)世界衛(wèi)生組織聯(lián)合國(guó)際泌尿外科疾病咨詢委員會(huì)發(fā)布的專家共識(shí)，Atyp.C參數(shù)符合作為膀胱癌生物標(biāo)志物的標(biāo)準(zhǔn)[12]。REN等[11]以Atyp.C熒光強(qiáng)度≥0.10作為Atyp.C陽性的標(biāo)準(zhǔn)，其診斷膀胱癌的敏感性為59.0%、特異性為82.1%。但對(duì)于本研究人群，無論是否聯(lián)合NMP22，以0.10為Atyp.C的臨界值雖具有極高的特異性，但敏感度較低。由于本研究納入的膀胱癌患者均為男性，因此為了減小偏差，除總對(duì)照組外，本研究還設(shè)置了僅含男性的對(duì)照組。本研究結(jié)果顯示，分別以男性對(duì)照組和總對(duì)照組作為參考，以0.59作為臨界值，Atyp.C熒光強(qiáng)度診斷膀胱癌的特異性分別為97.6%、97.0%，聯(lián)合檢測(cè)NMP22和Atyp.C熒光強(qiáng)度可顯著提高對(duì)膀胱癌的診斷效能。目前，大部分研究報(bào)道的分子標(biāo)志物僅在健康人群中具有良好的特異性，而對(duì)于除膀胱癌外的其他泌尿系統(tǒng)疾病患者的特異性普遍較低[12]。本研究結(jié)果顯示，Atyp.C參數(shù)可以較好地識(shí)別NMP22的假陽性結(jié)果，可避免非必要的膀胱鏡等侵入性檢查。

本研究尚有一些不足之處：首先，本研究為單中心研究，納入的膀胱癌患者僅97例，樣本量較小，且均為男性，無女性膀胱癌患者。這與膀胱癌主要發(fā)生在男性人群中有關(guān)。有統(tǒng)計(jì)數(shù)據(jù)顯示，男性膀胱癌的發(fā)病率是女性的4倍[13]。由于總對(duì)照組中女性患者所占比例（62%）更大，整體年齡高于膀胱癌組，且總對(duì)照組人群還包括多種其他泌尿系統(tǒng)疾病的患者，這可能對(duì)腫瘤標(biāo)志物的敏感性、特異性產(chǎn)生了一定的影響[14]。為避免選擇性偏差，本研究還設(shè)置了僅含男性的對(duì)照組進(jìn)行分析。其次，由于本研究屬于回顧性研究，不是所有患者都進(jìn)行了尿液細(xì)胞脫落學(xué)檢查，因此無法比較NMP22、Atyp.C參數(shù)與尿液細(xì)胞脫落學(xué)檢查之間的一致性。再次，因本研究未檢測(cè)其他腫瘤標(biāo)志物，因此無法將NMP22、Atyp.C參數(shù)與其他腫瘤標(biāo)志物進(jìn)行比較。最后，尚無規(guī)范的標(biāo)準(zhǔn)操作程序來指導(dǎo)Atyp.C檢測(cè)前的尿液樣本預(yù)處理，國(guó)內(nèi)外對(duì)于Atyp.C參數(shù)的臨床價(jià)值也未達(dá)成共識(shí)。未來需要更大樣本量的前瞻性、多中心研究分析NMP22和Atyp.C參數(shù)檢測(cè)在膀胱癌中的應(yīng)用價(jià)值。

綜上所述，NMP22在膀胱癌診斷中表現(xiàn)出高敏感性，而Atyp.C參數(shù)則表現(xiàn)出較高的特異性，二者聯(lián)用可顯著提高對(duì)膀胱癌的診斷效能，為膀胱癌的早期篩查和臨床決策提供指導(dǎo)。