血液分析儀檢驗用于白血病診斷的臨床價值分析

劉秀娜 于海濤

白血病是一種惡性造血干細胞克隆性疾病, 臨床表現(xiàn)為發(fā)熱、貧血、淋巴結(jié)腫大、疲勞、多汗等［1］。由于白血病細胞生長紊亂, 白細胞在細胞發(fā)育的不同階段停滯不前, 進而在骨髓等造血組織中大量積累,影響正常造血。白血病臨床可分為急性白血病和慢性白血病。人類白血病的病因尚不完全清楚, 白血病的發(fā)生可能是多步驟的［2］。目前認為, 至少有兩種分子事件參與了發(fā)病機制［3］。首先, 由于各種原因?qū)е略煅毎心承┗虬l(fā)生決定性突變, 激活某些信號通路, 導致克隆性造血細胞異常形成, 從而使造血細胞具有增殖和/或生存優(yōu)勢, 許多細胞被阻止凋亡［4］。其次, 某些遺傳變化可能涉及某些轉(zhuǎn)錄因子, 導致造血細胞分化遲緩或紊亂［5］。中國白血病發(fā)病率約為3/10 萬～4/10 萬, 與亞洲其他國家相近, 低于歐美國家［6］。在惡性腫瘤的死亡率中, 白血病排在第6 位和第7 位。急性髓系白血病是成人白血病中最常見的類型, 急性淋巴細胞白血病是兒童白血病中最常見的類型［7］。慢性髓系白血病的發(fā)病率隨著年齡的增長而逐漸增加。白血病的診斷方法［8］：①骨髓細胞學涂片檢查；②流式細胞術(shù)分析細胞, 分析患者免疫分型；③細胞遺傳學測試；④細胞分子生物學檢測。通過細胞形態(tài)學、免疫學、細胞遺傳學和分子生物學(Morphology、Immunology、Cytogenetics、Molecular biology, MICM) 的分類, 不僅可以診斷白血病, 還可以了解白血病的細胞類型。鑒別診斷急性髓系白血病和急性淋巴細胞白血病對患者的預后有一定的指導意義。本研究旨在解析血液分析儀檢驗在白血病臨床診斷中的價值, 報告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選擇2021 年1 月～2023 年3 月本院收治的白血病患者100例作為白血病組, 年齡23～59歲,男52 例, 女48 例；其中急性57 例, 慢性43 例。另選同期體檢的健康者100 例作為健康對照組, 年齡25～60 歲, 男44 例, 女56 例。兩組一般資料比較差異無統(tǒng)計學意義(P＞0.05), 具有可比性。見表1。

表1 兩組一般資料比較［±s, n(%)］

表1 兩組一般資料比較［±s, n(%)］

注：兩組比較, P＞0.05

組別 例數(shù) 年齡(歲) 性別男女白血病組 100 38.65±7.82 52(52.00) 48(48.00)健康對照組 100 38.37±7.93 44(40.00) 56(56.00)t/χ2 0.2514 1.2821 P 0.8018 0.2575

1.2 白血病診斷標準［9］

1.2.1 急性白血病診斷標準 ①臨床癥狀包括突然高熱、進行性貧血或大出血、外周疼痛。②體征：皮膚出血,胸骨壓痛, 淋巴結(jié)腫大, 肝脾腫大。③實驗室：a.血液圖中白細胞總有明顯增加(或減少), 可能出現(xiàn)原始細胞或幼年細胞；b.骨髓顯像:骨髓有核紅細胞占所有有核細胞的50%以下, 原始細胞≥30%, 可診斷為急性白血?。还撬柚杏泻思t細胞比例≥50%, 非紅系細胞中原始細胞比例≥30%, 即可診斷為急性紅系白血病。

1.2.2 慢性白血病診斷標準 ①臨床表現(xiàn)：a.可能出現(xiàn)乏力、體力下降、消瘦、低熱、貧血、出血；b.可能有淋巴結(jié)(包括頭頸部、腋窩和腹股溝)、肝臟和脾臟腫大。②實驗室檢查:a.外周血WBC ＞ 10×109/L, 淋巴細胞比例≥50%, 絕對值≥5×109/L, 以成熟淋巴細胞為主, 可見幼年或不典型淋巴細胞；b.骨髓顯像：骨髓增生活躍或明顯活躍, 淋巴細胞≥40%, 以成熟淋巴細胞為主。

1.3 研究方法 兩組均行血涂片和血液分析儀檢驗。采集外周血樣本：采血時, 所有產(chǎn)品均經(jīng)過消毒或使用符合標準的一次性用品。采集新鮮血液樣本, 放入含有抗凝劑的血管中, 采集新鮮血液4 ml。取一半血液樣本, 使用細胞分析儀分析紅細胞、白細胞和血小板的參數(shù)。取另一半血液樣本進行血涂片檢測, 涂抹時涂片厚度均勻適中, 頭部和尾部清晰。涂片上的細胞分布均勻, 血膜長度約為玻璃的2/3。在用復合染料染色涂片時, 用高倍和低倍顯微鏡觀察涂片的整體外觀, 即觀察涂片的制備和染色是否符合標準。同時, 要觀察各種血細胞和白細胞的數(shù)量和比例, 以及外周血細胞的分布情況, 是否有異常細胞和巨細胞, 身體尾部交界處是否有核細胞, 核心是否包裹在一個與紅細胞不重疊的區(qū)域, 即代表性的油鏡區(qū)域。利用油鏡區(qū)檢查、觀察、記錄細胞的分類計數(shù)、形態(tài)、細胞比, 同時注意淋巴細胞、毒性是否有變化, 白細胞形態(tài)、血小板數(shù)量、形態(tài)、聚集、紅細胞分布情況, 主要觀察紅細胞大小是否異?；虿坏?。

1.4 觀察指標 比較不同檢驗方法的診斷結(jié)果及靈敏度和特異度, 比較兩組的血液指標, 比較不同白血病類型患者的血液指標。血液指標包括PLT、Hb、RBC、CRP、WBC。

1.5 統(tǒng)計學方法 采用SPSS24.0 統(tǒng)計學軟件對數(shù)據(jù)進行處理。計量資料以均數(shù)±標準差(±s)表示,采用t 檢驗；計數(shù)資料以率(%)表示, 采用χ2檢驗。P＜0.05 表示差異有統(tǒng)計學意義。

2 結(jié)果

2.1 不同檢驗方法的診斷結(jié)果比較 血液分析儀的診斷準確率89.50%明顯高于血涂片的80.00%, 差異具有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。見表2。

表2 不同檢驗方法的診斷結(jié)果比較(n, %, n=200)

2.2 不同檢驗方法的靈敏度和特異度比較 血液分析儀檢測白血病的靈敏度和特異度均明顯高于血涂片,差異具有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。見表3。

表3 不同檢驗方法的靈敏度和特異度比較(%)

2.3 兩組的血液指標比較 白血病組患者的PLT、Hb、RBC 水平均明顯低于健康對照組, CRP、WBC水平均明顯高于健康對照組, 差異具有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。見表4。

表4 兩組的血液指標比較( ±s)

表4 兩組的血液指標比較( ±s)

注：與健康對照組比較, aP＜0.05

組別 例數(shù) PLT(×109/L) CRP(mg/L) Hb(g/L) WBC(×109/L) RBC(×1012/L)白血病組 100 191.91±50.39a 17.00±1.92a 90.53±9.46a 10.26±1.84a 2.76±0.24a健康對照組 100 252.41±54.29 3.42±0.78 119.61±9.94 7.35±1.67 4.02±0.31 t 8.1678 65.5282 21.1821 11.7109 32.1391 P 0.0000 0.0000 0.0000 0.0000 0.0000

2.4 不同白血病類型患者的血液指標比較 急性白血病患者的PLT、Hb、RBC 水平均明顯低于慢性白血病患者, CRP、WBC 水平均明顯高于慢性白血病患者,差異具有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。見表5。

表5 不同白血病類型患者的血液指標比較( ±s)

表5 不同白血病類型患者的血液指標比較( ±s)

注：與慢性白血病比較, aP＜0.05

類型 例數(shù) PLT(×109/L) CRP(mg/L) Hb(g/L) WBC(×109/L) RBC(×1012/L)急性白血病 57 182.36±45.92a 20.15±2.15a 80.67±9.06a 11.56±1.61a 2.37±0.35a慢性白血病 43 204.56±40.78 12.83±1.46 103.61±8.94 9.28±1.03 3.28±0.31 t 2.5098 19.2205 12.6067 8.1128 13.5110 P 0.0137 0.0000 0.0000 0.0000 0.0000

3 討論

白血病的發(fā)病率約在2/10 萬～4/10 萬, 在所有惡性腫瘤中, 白血病的發(fā)病率排名9～11 位［10］。白血病的發(fā)病機制與物理因素、化療因素、生物因素、環(huán)境因素、生活習慣、自身免疫系統(tǒng)功能等密切相關［11］。白血病的檢驗方法包括以下幾種。①血液檢查。a.急性白血?。喊准毎园籽〉腤BC＞10×109/L；白細胞再生障礙性白血病的WBC 正?；驕p少, ＜1.0×109/L。血涂片分級檢查顯示原始細胞和幼細胞數(shù)量不等, 但在非白細胞增多的情況下, 很難在血涂片上發(fā)現(xiàn)原始細胞；其他疾病可以通過血液檢查排除, 對疾病作出初步診斷。b.慢性白血?。郝运柘蛋籽〉腤BC＞20×109/L, 最高可達到100×109/L 以上, 血切片中粒細胞明顯增多, 可見各個階段的粒細胞以中性、中期、晚期、桿狀核粒細胞為主；慢性淋巴細胞白血病的WBC＞10×109/L, 淋巴細胞比例≥50%, 絕對淋巴細胞值＞5×109/L(至少3 個月)［12］。白血病的主要特征是淋巴細胞持續(xù)增多。白血病細胞形態(tài)與成熟小淋巴細胞相似, 胞漿少, 核染色質(zhì)一團。少數(shù)患者細胞形態(tài)異常, 細胞體較大, 不成熟, 細胞核有較深的切口。通過血液檢查可以測出WBC 和比例, 這有助于確診疾病。②骨髓檢查。a.急性白血病, 骨髓檢查是診斷急性白血病的主要依據(jù)和必要檢查。大多數(shù)患者骨髓核細胞明顯增生, 以原始細胞為主。少數(shù)急性白血病的骨髓增生低, 稱為發(fā)育不良的急性白血病。b.慢性白血病, 慢性髓系白血病：骨髓增生明顯至極活躍, 主要由粒細胞組成, 粒細胞與紅細胞之比明顯增高, 中性粒細胞、晚期幼細胞、棒狀粒細胞明顯增高, 原始細胞＜10%；嗜酸性粒細胞和嗜堿性粒細胞增多；紅細胞相對減少；巨核細胞正?；蛟龆? 晚期減少。慢性淋巴細胞白血病的有核細胞增殖明顯活躍或極活躍, 淋巴細胞≥40%, 以成熟淋巴細胞為主。紅細胞、粒細胞和巨核細胞的增殖受到抑制, 并在晚期顯著減少。當伴有溶血時, 紅細胞可發(fā)生代償性增殖［13-15］。③細胞學檢查：主要用于協(xié)助各種類型白血病的形態(tài)學鑒定,常見白血病細胞化學反應包括髓過氧化物酶、糖原染色和非特異度酯酶。④免疫學檢查：確定白血病細胞表達的一系列相關抗原的來源, 有助于確定疾病的分類, 為治療提供線索。⑤染色體檢查：白血病常伴有特定的染色體和基因變化, 染色體檢查可以明確患者的基因和染色體, 有助于疾病的具體診斷。⑥血液生化檢查。a.急性白血病：血清尿酸濃度升高, 彌散性血管內(nèi)凝血(DIC)患者可出現(xiàn)凝血象異常, 血清乳酸脫氫酶可升高。b.慢性白血病中的慢性髓系白血病, 血、血清、尿中尿酸濃度升高, 血清乳酸脫氫酶升高, 對疾病的診斷和后續(xù)治療很重要。診斷標準［12］：根據(jù)臨床表現(xiàn)和血液常規(guī)檢查, 醫(yī)生可以做出初步診斷。骨髓穿刺后, 獲得骨髓圖像可確診。根據(jù)臨床表現(xiàn)、血液和骨髓特征一般不難診斷白血病。然而, 由于白血病細胞類型、染色體改變、免疫表型、融合基因的不同,治療方案和預后也不同［16-19］。因此, 初步診斷的患者應努力獲得全面的MICM數(shù)據(jù), 以評估預后, 指導治療。b.慢性白血?。郝运柘蛋籽? 在不明原因的白細胞數(shù)量持續(xù)增加的情況下, 可根據(jù)典型的血液和骨髓變化、脾腫大、PH 染色體陽性或費城染色體(BCR-ABL)融合基因陽性來診斷；慢性淋巴細胞白血病, 結(jié)合臨床表現(xiàn), 外周血中單克隆淋巴細胞持久性＞5×109/L,骨髓中成熟小淋巴細胞≥40%, 可根據(jù)免疫表型特征進行診斷。

本研究結(jié)果中, 血液分析儀的診斷準確率89.50%明顯高于血涂片的80.00%, 差異具有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。血液分析儀檢測白血病的靈敏度和特異度分別為97.00%、82.00%, 均明顯高于血涂片的90.00%、70.00%, 差異具有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。白血病組患者的PLT、Hb、RBC 均明顯低于健康對照組, CRP、WBC 均明顯高于健康對照組, 差異具有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。急性白血病患者的PLT、Hb、RBC 均明顯低于慢性白血病患者, CRP、WBC 均明顯高于慢性白血病患者, 差異具有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。血液分析儀主要用于檢測各種血細胞計數(shù)、白細胞分類、Hb 含量,檢測原理包括電學原理和光學原理。①血細胞計數(shù)原理。a.電阻抗法原理：血細胞是不良導體, 當用等滲電解質(zhì)溶液稀釋的血細胞懸浮液通過兩側(cè)電流穩(wěn)定的小孔時, 由于細胞的電導率比電解質(zhì)溶液低, 小孔感應區(qū)電阻增大, 引起瞬時電壓變化產(chǎn)生脈沖信號, 即通過脈沖, 脈沖信號經(jīng)過放大、鑒別、整形后, 送入計數(shù)系統(tǒng), 得到細胞計數(shù)結(jié)果, 根據(jù)脈沖大小, 還可以分析細胞體積, 并提供細胞體積分布圖。b.流式細胞儀與光散射血細胞檢測原理：在流式細胞儀中, 當單個細胞通過激光照射的檢測區(qū)域時, 光束會發(fā)生折射、衍射和散射。散射光被光電探測器接收并產(chǎn)生脈沖。脈沖大小與被照射細胞的大小呈正比, 脈沖的數(shù)量代表細胞的數(shù)量。②白細胞分類原則。a.白細胞的三種分類原則:根據(jù)電阻抗法原理, 不同體積的白細胞通過毛孔時產(chǎn)生的脈沖大小有顯著差異, 該儀器根據(jù)脈搏大小對白細胞進行分類, 在樣品中加入溶血劑溶解紅細胞,儀器計數(shù)從白細胞測量到的＞35 fl 的電子脈沖數(shù), 將細胞計數(shù)為白細胞。同時, 根據(jù)脈沖的大小將血液中的白細胞分為三組:小細胞組：35～90 fl, 主要是淋巴細胞；中間細胞組：91～160 fl, 包括單核細胞、嗜酸性粒細胞、嗜堿性粒細胞和幼細胞；大細胞組：161～450 fl,主要是中性粒細胞。其特點是檢測速度快, 操作簡單,可大大提高工作效率。該儀器可用于常規(guī)檢查標本的白細胞分類篩選, 對儀器檢測出的陽性標本需進一步鏡檢。如果有疑似血液病的患者, 即使儀器未提示異常,也應進行血液涂片和鏡檢。b.五大分類原則：從電阻抗法三位一體發(fā)展到結(jié)合多種技術(shù)(激光、射頻、化學染色)同時檢測單個細胞, 綜合分析實驗數(shù)據(jù), 得出白細胞的五大分類結(jié)果。該方法細胞數(shù)量多, 特異度強,是目前較為理想的血細胞自動分類方法。③Hb 測量原理：Hb 是用分光光度法測量的, 使用三組或五組血液分析儀。其原理是含有溶血劑的稀釋劑溶解紅細胞,釋放Hb, Hb 與溶血劑中的某些成分結(jié)合, 形成穩(wěn)定的Hb 衍生物。比色法在特定的光波范圍內(nèi)(530～550 nm)進行, 由于吸光度變化與血液Hb 濃度呈正比, 因此計算Hb 濃度［20,21］。

總之, 在白血病臨床診斷中使用血液分析儀檢驗的準確性、靈敏度和特異度高, 可以鑒別急、慢性白血病, 具有較高臨床診斷價值。