鹽酸羥哌吡酮對(duì)脂多糖誘導(dǎo)小鼠抑郁樣和焦慮樣行為的改善作用及對(duì)BV2細(xì)胞抗炎作用相關(guān)機(jī)制

常海霞，崔林雨，李云峰2，，代 威，張繼國(guó)

〔1.山東第一醫(yī)科大學(xué)（山東省醫(yī)學(xué)科學(xué)院）藥學(xué)院，山東 泰安 271016；軍事科學(xué)院軍事醫(yī)學(xué)研究院 2.軍事認(rèn)知與腦科學(xué)研究所，3.毒物藥物研究所，北京100850〕

抑郁癥作為一種情感障礙性疾病，以持久反復(fù)的心境低落為主要特征，已成為嚴(yán)重的全球性公共衛(wèi)生難題和社會(huì)問(wèn)題。我國(guó)抑郁癥患病率也呈現(xiàn)逐年上升趨勢(shì)，到2023 年已達(dá)到約4.2%［1］。目前臨床一線的抗抑郁藥大多基于“單胺假說(shuō)”研發(fā)，其中代表性藥物包括選擇性5-羥色胺重?cái)z取抑制劑（如氟西汀和舍曲林）等［2］。這些單胺能藥物在治療抑郁癥的同時(shí)也存在有效率不高（50%～70%）、起效延遲（4～6 周）、導(dǎo)致性功能障礙和自殺傾向等缺陷［2］。明確抑郁癥發(fā)病機(jī)制，發(fā)展更為快速、有效且不良反應(yīng)低的抗抑郁藥迫在眉睫。

鹽酸羥哌吡酮（YL-0919）是軍事醫(yī)學(xué)研究院毒物藥物研究所研發(fā)的全新結(jié)構(gòu)抗抑郁小分子化合物，目前作為1.1 類(lèi)新藥處于Ⅱ期臨床試驗(yàn)階段。前期研究表明，YL-0919 在多種動(dòng)物模型中發(fā)揮顯著抗抑郁和抗焦慮作用，且具有快速起效（3～7 d）、增強(qiáng)認(rèn)知功能和不導(dǎo)致性功能障礙等優(yōu)點(diǎn)［3］。最近研究發(fā)現(xiàn)，YL-0919 具有選擇性激動(dòng)Sigma-1 受體（Sigma-1 receptor，Sig-1R）的作用［4］，但YL-0919是否通過(guò)調(diào)節(jié)炎癥反應(yīng)發(fā)揮抗抑郁效應(yīng)及Sig-1R在其中的作用仍未可知。

文獻(xiàn)報(bào)道，抑郁癥的發(fā)生可能與炎癥反應(yīng)和免疫激活密切相關(guān)［5］。臨床研究結(jié)果提示，抑郁癥患者血清與腦脊液中多種促炎細(xì)胞因子〔如白細(xì)胞介素1β（interleukin-1β，IL-1β）、IL-6、γ 干擾素和腫瘤壞死因子α 等〕含量顯著增加［6-7］。在動(dòng)物水平，注射脂多糖（lipopolysaccharide，LPS）能夠快速誘導(dǎo)其體內(nèi)炎癥反應(yīng)，可導(dǎo)致抑郁樣行為［8］。小膠質(zhì)細(xì)胞是中樞神經(jīng)系統(tǒng)固有免疫細(xì)胞，作為腦內(nèi)神經(jīng)炎癥的主要調(diào)節(jié)者，在神經(jīng)發(fā)育和中樞穩(wěn)態(tài)調(diào)節(jié)等方面具有重要作用［9］。小膠質(zhì)細(xì)胞過(guò)度活化會(huì)釋放大量促炎因子［10-11］?；诖?，有學(xué)者提出抑郁癥的“炎癥損傷假說(shuō)”，認(rèn)為應(yīng)激等因素通過(guò)引發(fā)中樞神經(jīng)系統(tǒng)小膠質(zhì)細(xì)胞活化和機(jī)體免疫調(diào)節(jié)紊亂而導(dǎo)致的炎癥損傷是抑郁癥發(fā)生的重要原因之一［12］。

LPS 誘發(fā)神經(jīng)炎癥反應(yīng)可能與Sig-1R 功能變化相關(guān)［13］。Sig-1R 作為受體型分子伴侶，能夠調(diào)節(jié)神經(jīng)炎癥和突觸發(fā)生，可能是治療多種神經(jīng)精神類(lèi)疾病和神經(jīng)退行性疾病的潛在靶點(diǎn)［14］。Sig-1R 被激活后從內(nèi)質(zhì)網(wǎng)-線粒體界面解離，與膜蛋白或血漿蛋白結(jié)合，發(fā)揮多種生物活性［15］。Sig-1R 激動(dòng)劑可減輕線粒體損傷，調(diào)節(jié)線粒體呼吸功能障礙，并減少活性氧和細(xì)胞凋亡的異常增加［16］。在動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中，Sig-1R敲除的雄性小鼠在強(qiáng)迫游泳實(shí)驗(yàn)和懸尾實(shí)驗(yàn)中表現(xiàn)出不動(dòng)時(shí)間延長(zhǎng)等行為［17］。沉默Sig-1R功能可導(dǎo)致原代海馬神經(jīng)元樹(shù)突棘密度降低和新生神經(jīng)元數(shù)量減少［18］。小膠質(zhì)細(xì)胞上也分布著較豐富的Sig-1R，文獻(xiàn)報(bào)道，Sig-1R 激活可影響小膠質(zhì)細(xì)胞功能［13］。

本研究通過(guò)ip 給予LPS 誘導(dǎo)小鼠抑郁樣行為模型，評(píng)價(jià)YL-0919 的抗抑郁和抗焦慮效應(yīng)，探究該效應(yīng)與炎癥反應(yīng)和炎癥因子的相關(guān)性，在細(xì)胞水平通過(guò)建立LPS炎癥模型，探究YL-0919對(duì)小膠質(zhì)細(xì)胞系BV2細(xì)胞炎癥反應(yīng)的調(diào)節(jié)作用，并采用Sig-1R拮抗劑進(jìn)一步驗(yàn)證該受體在YL-0919 抗抑郁作用中的功能。

1 材料與方法

1.1 藥品、試劑和儀器

YL-0919（批號(hào)：D5222-18-001，純度99.9%），由軍事醫(yī)學(xué)研究院毒物藥物研究所提供；LPS（批號(hào)：L2880，純度＞98%），美國(guó)Sigma 公司；Sig-1R拮抗劑BD1047（貨號(hào)：HY-16996A）和NE-100（貨號(hào)：HY-101484A），美國(guó)MCE公司。兔抗小鼠NOD樣受體熱蛋白結(jié)構(gòu)域相關(guān)蛋白3（NOD-like receptor thermal protein domain associated protein 3，NLRP3，貨號(hào)：ab263899）和IL-1β（貨號(hào)：ab234437）單克隆抗體，英國(guó)Abcam 公司；兔抗小鼠β-肌動(dòng)蛋白單克隆抗體（貨號(hào)：CW0096M），江蘇康為世紀(jì)生物科技有限公司；辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記的山羊抗兔IgG 抗體（二抗），北京中杉金橋公司；DMEM 高糖培養(yǎng)基和胎牛血清，美國(guó)Gibco公司；Trizol，上海碧云天生物技術(shù)有限公司；無(wú)RNA 酶水和逆轉(zhuǎn)錄試劑盒（R333-01），南京諾唯贊生物科技有限公司。PCR儀（TC-EA-48DA），美國(guó)Bio-Rad 公司；熒光定量PCR 儀（QuantStudio3），德國(guó)Angilent Technologies 公司；細(xì)胞培養(yǎng)箱，美國(guó)Thermo Scientific 公司；小鼠曠場(chǎng)和強(qiáng)迫游泳實(shí)驗(yàn)裝置，深圳瑞沃德生命科技有限公司；SMART Video-Tracking System V3.0 軟件，西班牙Panlab 公司；凝膠電泳相關(guān)器材，美國(guó)伯樂(lè)公司；Odyssey 雙色紅外熒光成像系統(tǒng)（OSA-0358），美國(guó)LI-COR 公司；多功能酶標(biāo)儀（EnVisionTM 2104），美國(guó)PerkinElmer公司。

1.2 LPS誘導(dǎo)模型小鼠實(shí)驗(yàn)

1.2.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

40 只10 周齡雄性C57BL/6J 小鼠，SPF 級(jí)，初始體重24～25 g，購(gòu)自斯貝福（北京）生物技術(shù)有限公司，許可證號(hào)SCXK（京）2019-0010。所有動(dòng)物購(gòu)入后在標(biāo)準(zhǔn)化環(huán)境條件下適應(yīng)7 d 后進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。飼養(yǎng)環(huán)境溫度20～24 ℃，濕度40%～60%，12 h 黑暗/白晝交替照明（光照時(shí)間為8∶00-20∶00），小鼠自由進(jìn)食飲水。所有動(dòng)物實(shí)驗(yàn)程序均經(jīng)軍事醫(yī)學(xué)研究院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物福利倫理委員會(huì)批準(zhǔn)。

1.2.2 實(shí)驗(yàn)分組和藥物處理

小鼠隨機(jī)分為正常對(duì)照組、模型組、模型+YL-0919組和模型+YL-0919+BD1047組，每組10只。模型組在實(shí)驗(yàn)第1 天和第6 天分別ip 給予LPS 0.5 mg·kg-1；模型+YL-0919組除以同樣方法給予LPS外，在第2～6天每日2次ig給予YL-0919 2.5 mg·kg-1；正常對(duì)照組不給LPS，每日2次ig給予生理鹽水；模型+YL-0919+BD1047 組在以同樣方法給予LPS和YL-0919 的同時(shí)，在第2～6 天每日1 次ip 給予Sig-1R 拮抗劑BD1047 4 mg·kg-1。第7 天進(jìn)行小鼠開(kāi)場(chǎng)實(shí)驗(yàn)和強(qiáng)迫游泳實(shí)驗(yàn)檢測(cè)。

1.2.3 開(kāi)場(chǎng)實(shí)驗(yàn)（open field test，OFT）［19］

小鼠開(kāi)場(chǎng)箱（41 cm×41 cm×41 cm）材質(zhì)為灰色不透明不反光防滑有機(jī)玻璃，底部劃分為16個(gè)大小相等的小方格。實(shí)驗(yàn)開(kāi)始前將小鼠放置在實(shí)驗(yàn)房間適應(yīng)至少1 h。實(shí)驗(yàn)時(shí)將小鼠面向箱壁放入實(shí)驗(yàn)箱，自由活動(dòng)5 min 并錄像。采用SMART 視頻分析軟件分析小鼠自發(fā)活動(dòng)，記錄小鼠運(yùn)動(dòng)總距離、進(jìn)入中央?yún)^(qū)累計(jì)停留時(shí)間和進(jìn)入次數(shù)。

1.2.4 小鼠強(qiáng)迫游泳實(shí)驗(yàn)（forced swimming test，F(xiàn)ST）［20］

小鼠強(qiáng)迫游泳缸（底部直徑12 cm，高20 cm）材質(zhì)為透明玻璃，水深為16 cm，水溫為（23±1）℃，各游泳缸之間用黑色擋板隔開(kāi)，以免小鼠之間相互影響。實(shí)驗(yàn)前將小鼠放置在實(shí)驗(yàn)房間適應(yīng)至少1 h。實(shí)驗(yàn)時(shí)，將小鼠放入游泳缸后錄制小鼠行為6 min，統(tǒng)計(jì)后4 min 小鼠的不動(dòng)時(shí)間。當(dāng)小鼠直立漂浮或僅做很小的動(dòng)作來(lái)保持頭部平衡時(shí)，認(rèn)為其處于不動(dòng)狀態(tài)。

1.2.5 Western印跡法檢測(cè)小鼠前額葉皮質(zhì)NLRP3和lL-1β蛋白表達(dá)水平

行為學(xué)檢測(cè)后將小鼠處死，取腦并分離前額葉皮質(zhì)，-80 ℃保存。前額葉皮質(zhì)組織超聲研磨2～3 次，4 ℃靜置30 min 后，12 000×g離心10 min，取上清。采用BCA 法對(duì)組織蛋白進(jìn)行定量，將含有30 μg 蛋白的樣品通過(guò)電泳分離，轉(zhuǎn)移至PVDF 膜，5%脫脂牛奶封閉。分別加入抗NLRP3、IL-1β 和β-肌動(dòng)蛋白抗體（1∶1000）4 ℃孵育過(guò)夜。用TBST洗膜5 min，共3 次。加入二抗（1∶5000）室溫下避光孵育2 h。使用Odyssey雙色紅外熒光成像儀顯影，用Image J 軟件分析蛋白條帶積分吸光度值。以β-肌動(dòng)蛋白作為內(nèi)參，以目標(biāo)蛋白與內(nèi)參蛋白積分吸光度值的比值反映目標(biāo)蛋白相對(duì)表達(dá)水平。

1.3 LPS誘導(dǎo)模型BV2細(xì)胞實(shí)驗(yàn)

1.3.1 細(xì)胞和細(xì)胞培養(yǎng)

BV2 細(xì)胞購(gòu)于北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院細(xì)胞資源中心。用完全培養(yǎng)基（90% DMEM+10%胎牛血清）培養(yǎng)于37 ℃、5% CO2培養(yǎng)箱中，待細(xì)胞生長(zhǎng)密度達(dá)到約80%時(shí)傳代。取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期細(xì)胞進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。

1.3.2 RT-qPCR 法檢測(cè)細(xì)胞炎癥因子IL-6 和IL-1β mRNA表達(dá)水平

將BV2 細(xì)胞接種到12 孔板中，每孔1×105細(xì)胞。將細(xì)胞分為細(xì)胞對(duì)照組（DMEM 培養(yǎng)6 h）、LPS組（LPS 1 mg·L-1，孵育6 h）、LPS+YL-0919組（YL-0919 2 μmol·L-1孵育1 h 后用PBS 清洗，再加LPS 1 mg·L-1孵育6 h）和LPS+YL-0919+NE-100組（YL-0919 2 μmol·L-1和NE-100 10 μmol·L-1共同孵育1 h 后用PBS 清洗，再加LPS 1 mg·L-1孵育6 h），每組3 復(fù)孔。吸棄培養(yǎng)基，PBS 清洗后加入500 μL Trizol冰上裂解10 min；加入100 μL氯仿，混勻后冰上靜置至分層，離心15 min（4 ℃，12 000×g）。取200 μL上清加入等體積異丙醇，混勻后冰上靜置10 min，4 ℃，12 000×g離心15 min，棄上清，加70%乙醇重懸沉淀，再次于4 ℃，12 000×g離心5 min；棄上清后加適量無(wú)RNA 酶水溶解RNA。檢測(cè)RNA濃度后，取1 μg RNA作為模板，逆轉(zhuǎn)錄合成cDNA。逆轉(zhuǎn)錄程序：55 ℃孵育5 min，85 ℃加熱5 s，4 ℃冷卻。將所得cDNA作為模板進(jìn)行RT-qPCR擴(kuò)增。反應(yīng)體系：模板1～2 μL cDNA，2×SYBR Mix，正、反向引物各1 μL，補(bǔ)充無(wú)RNA 酶水至20 μL。RT-qPCR程序：95 ℃預(yù)變性10 min；95 ℃變性5 s，60 ℃退火15 s，72 ℃延伸10 s，變性退火延伸40個(gè)循環(huán)，獲得各樣品的熔解曲線。以β-肌動(dòng)蛋白作為內(nèi)參，以2-△△CT法計(jì)算目的基因mRNA 相對(duì)表達(dá)水平。引物序列見(jiàn)表1，由上海生工生物工程股份有限公司合成。

Tab.1 Real time-quantitative PCR（RT-qPCR）primer sequence

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

2 結(jié)果

2.1 YL-0919 對(duì)LPS 誘導(dǎo)小鼠抑郁樣和焦慮樣行為的影響

實(shí)驗(yàn)結(jié)果（圖1）顯示，在OFT中，與正常對(duì)照組相比，各處理組小鼠總運(yùn)動(dòng)距離均無(wú)顯著性差異，提示各藥物處理組不影響小鼠的中樞興奮性。與正常對(duì)照組相比，模型組小鼠OFT 中央?yún)^(qū)停留時(shí)間顯著縮短（P＜0.05）和進(jìn)入中央?yún)^(qū)次數(shù)顯著減少（P＜0.01），游泳不動(dòng)時(shí)間顯著延長(zhǎng)（P＜0.01），提示LPS可誘導(dǎo)小鼠產(chǎn)生焦慮樣和抑郁樣行為。與模型組相比，模型+YL-0919 組OFT 中央?yún)^(qū)停留時(shí)間顯著延長(zhǎng)（P＜0.01），進(jìn)入中央?yún)^(qū)次數(shù)顯著增加（P＜0.05），游泳不動(dòng)時(shí)間顯著縮短（P＜0.01）。與模型+YL-0919 組比較，模型+YL-0919+BD1047 組OFT中央?yún)^(qū)停留時(shí)間顯著縮短（P＜0.01）和中央?yún)^(qū)進(jìn)入次數(shù)顯著減少（P＜0.05），游泳不動(dòng)時(shí)間顯著延長(zhǎng)（P＜0.05）。

Fig.1 Effect of hypidone hydrochloride（YL-0919）on total distance（A），time in center（B）and entries into center（C）in open field test（OFT）and immobility time（D）in forced swimming test（FST）in lipopolysaccharide（LPS）-induced model mice. Mice were divided into normal control，model，model+YL0919 and model+YL0919+BD1047 groups. On the first and sixth days of the experiment，mice were given LPS（0.5 mg·kg-1，ip）. From the second to the sixth days of the experiment，YL-0919（2.5 mg·kg-1，twice a day，ig）was administered alone or co-administered with BD1047（4 mg·kg-1，once per day，ip）. ±s，n=9-10. ＊P＜0.05，＊＊P＜0.01，compared with normal control group；#P＜0.05，##P＜0.01，compared with model group；△P＜0.05，△△P＜0.01，compared with model+YL-0919 group.

2.2 YL-0919 對(duì)LPS 誘導(dǎo)小鼠前額葉皮質(zhì)炎癥小體NLRP3和炎癥因子lL-1β蛋白表達(dá)水平的影響

實(shí)驗(yàn)結(jié)果（圖2）顯示，與正常對(duì)照組相比，模型組小鼠前額葉皮質(zhì)IL-1β 和NLRP3 蛋白水平顯著升高（P＜0.05）；與模型組相比，模型+YL-0919 組IL-1β 和NLRP3 蛋白水平顯著降低（P＜0.01，P＜0.05）；與模型+YL-0919 組比較，模型+YL-0919+BD1047 組IL-1β 和NLRP3 蛋白水平顯著升高（P＜0.05）。

Fig.2 Effect of YL-0919 on protein levels of lL-1β（A）and inflammasome NOD-like receptor thermal protein domain associated protein 3（NLRP3，B）in prefrontal cortex of LPS-treated mice by Western blotting. See Fig.1 for the mouse treatment. B was the semi-quantitative result of A.±s，n=4. ＊P＜0.05，compared with normal control group；#P＜0.05，##P＜0.01，compared with model group；△P＜0.05，compared with model+YL-0919 group.

2.3 YL-0919 對(duì)LPS 誘導(dǎo)BV2 細(xì)胞IL-1β 和IL-6 mRNA表達(dá)水平的影響

RT-qPCR 結(jié)果（圖3）顯示，與細(xì)胞對(duì)照組相比，模型組BV2 細(xì)胞炎癥因子IL-6和IL-1βmRNA表達(dá)水平顯著升高（P＜0.01）；與模型組相比，模型+YL-0919 組BV2細(xì)胞IL-6和IL-1βmRNA 表達(dá)水平顯著降低（P＜0.01）；與模型+YL-0919 組比較，模型+YL-0919+ NE-100 組BV2 細(xì) 胞IL-6和IL-1βmRNA表達(dá)水平顯著升高（P＜0.05）。

Fig.3 Effect of YL-0919 on mRNA levels of IL-1β and IL-6 in LPS-treated BV2 cells by RT-qPCR. See Fig.1 for the mouse treatment. ±s，n=3. ＊＊P＜0.01，compared with cell control group；##P＜0.01，compared with model group；△P＜0.05，compared with model+YL-0919 group.

3 討論

本研究結(jié)果顯示，YL-0919（2.5 mg·kg-1）給藥5 d可明顯改善LPS 模型小鼠抑郁樣、焦慮樣行為，抑制LPS 誘導(dǎo)的小鼠前額葉皮質(zhì)NLRP3 和IL-1β蛋白表達(dá)水平的增加；同時(shí)，YL-0919（2 μmol·L-1）能逆轉(zhuǎn)LPS 誘導(dǎo)的BV2 細(xì)胞IL-1β和IL-6mRNA表達(dá)水平升高；以上效應(yīng)被BD1047 和NE-100 所逆轉(zhuǎn)。提示YL-0919 可能通過(guò)作用于Sig-1R 改善神經(jīng)炎癥，從而發(fā)揮抗抑郁和抗焦慮效應(yīng)。

在應(yīng)激狀態(tài)下，機(jī)體啟動(dòng)免疫反應(yīng)來(lái)識(shí)別、評(píng)估和適應(yīng)應(yīng)激源，導(dǎo)致小膠質(zhì)細(xì)胞激活，從而引發(fā)局部和全身炎癥反應(yīng)，誘發(fā)抑郁、焦慮等癥狀［21］。LPS 是革蘭陰性菌外膜的主要成分。小鼠ip 給予LPS 約2 h 后，血液中促炎細(xì)胞因子的釋放達(dá)到峰值，小鼠產(chǎn)生發(fā)熱、厭食及運(yùn)動(dòng)和社會(huì)互動(dòng)減少等行為，持續(xù)6 h；在LPS處理后24 h可觀察到小鼠抑郁樣行為的產(chǎn)生［22-24］。LPS 被廣泛用于誘導(dǎo)嚙齒類(lèi)動(dòng)物的抑郁、焦慮樣狀態(tài)［25-26］。文獻(xiàn)報(bào)道，小鼠單次ip 給予LPS 不但能夠誘導(dǎo)抑郁樣行為，表現(xiàn)為強(qiáng)迫游泳不動(dòng)時(shí)間的延長(zhǎng)，還能影響小鼠的自發(fā)活動(dòng)，表現(xiàn)為開(kāi)場(chǎng)實(shí)驗(yàn)運(yùn)動(dòng)距離和站立次數(shù)的減少［27］。本課題組對(duì)這一模型進(jìn)行改良發(fā)現(xiàn)，通過(guò)間隔5 d 2 次ip 給予LPS（0.5 mg·kg-1）的方式，可在不影響小鼠自發(fā)活動(dòng)的前提下誘導(dǎo)小鼠產(chǎn)生穩(wěn)定的抑郁樣行為［28］。本課題組以往研究表明，在大鼠慢性不可預(yù)知性應(yīng)激等多個(gè)模型上，ig 給予YL-0919（1.25～2.5 mg·kg-1）3～5 d 即可表現(xiàn)出顯著的抗抑郁行為效應(yīng)［29-30］。本研究選取前期研究中的有效劑量，發(fā)現(xiàn)在改良的LPS 模型上，連續(xù)5 d ig 給予YL-0919 2.5 mg·kg-1亦顯著縮短小鼠強(qiáng)迫游泳不動(dòng)時(shí)間，并增加小鼠在開(kāi)場(chǎng)中央?yún)^(qū)的停留時(shí)間和進(jìn)入中央?yún)^(qū)次數(shù)。在該模型上，與經(jīng)典抗抑郁藥物氟西汀的起效時(shí)間相比［30］，YL-0919 表現(xiàn)出快速起效的抗抑郁和抗焦慮效應(yīng)。本課題組前期研究發(fā)現(xiàn)，BD1047（4 mg·kg-1）可阻斷YL-0919 的抗抑郁效應(yīng)［4］，因此本實(shí)驗(yàn)也延續(xù)了這一給藥方式，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，BD1047 可阻斷YL-0919 快速起效抗抑郁和抗焦慮作用。

NLRP3作為一種存在于胞質(zhì)的蛋白復(fù)合體，可在各種應(yīng)激刺激下快速組裝成有功能的炎癥小體，后者能進(jìn)一步激活胱天蛋白酶1，促進(jìn)細(xì)胞因子IL-1β 前體蛋白加工為成熟的IL-1β，使其釋放到胞外啟動(dòng)下游炎癥反應(yīng)，誘導(dǎo)更多的促炎因子如IL-6和腫瘤壞死因子α 等的合成和釋放［31］。典型抗抑郁藥物氟西汀可通過(guò)抑制炎癥小體NLRP3 的活化對(duì)抑郁癥產(chǎn)生治療作用［32］。有研究表明，IL-1β 作為一種促炎因子，其在腦脊液中的濃度與抑郁癥嚴(yán)重程度呈正相關(guān)，且IL-1β 能激活下丘腦-垂體-腎上腺軸，可能參與抑郁癥的發(fā)生［33］。在慢性束縛應(yīng)激模型上，小鼠前額葉皮質(zhì)IL-1β 表達(dá)顯著上調(diào)，而給予IL-1β 受體拮抗劑可改善小鼠的抑郁樣行為，提示IL-1β 在抑郁癥的發(fā)病和治療中均具有重要作用［34］。本研究結(jié)果表明，YL-0919 不僅抑制腦內(nèi)NLRP3蛋白的表達(dá)水平，而且能抑制小膠質(zhì)細(xì)胞系BV2 細(xì)胞IL-1β和IL-6mRNA 水平，提示YL-0919對(duì)NLRP3/IL-1β/IL-6 途徑的干預(yù)可能是其抗抑郁治療的重要機(jī)制之一，且該效應(yīng)能被Sig-1R拮抗劑BD1047 或NE-100 所阻斷。文獻(xiàn)報(bào)道，NE-100（10 μmol·L-1）顯著阻斷Sig-1R 激動(dòng)劑噴他佐辛在BV2 細(xì)胞上的抗炎作用［35］。本研究結(jié)果提示，Sig-1R 可能介導(dǎo)YL-0919 對(duì)抑郁癥和炎癥反應(yīng)的調(diào)控，小膠質(zhì)細(xì)胞上的Sig-1R 可能是潛在的抗炎和抗抑郁靶點(diǎn)。

綜上，本研究采用優(yōu)化的LPS 模型，發(fā)現(xiàn)YL-0919 可能通過(guò)激活Sig-1R 發(fā)揮快速抗抑郁和抗焦慮效應(yīng)，并對(duì)機(jī)體炎癥反應(yīng)和小膠質(zhì)細(xì)胞過(guò)度激活產(chǎn)生調(diào)節(jié)作用。