葡萄糖在三種真空采血管中穩(wěn)定性分析

羅偉 王芳 代凌峰 吳海翔 高應(yīng)萍*

1 湖北省疾病預(yù)防控制中心 （湖北 武漢 430079）2 武漢大學(xué)醫(yī)院檢驗(yàn)科 （湖北 武漢 430072）

內(nèi)容提要： 目的：研究三種與血糖檢測(cè)相關(guān)的真空采血管血糖的穩(wěn)定性及差異，探討針對(duì)糖酵解引起的變異的應(yīng)對(duì)措施，提高實(shí)驗(yàn)室血糖檢測(cè)質(zhì)量。方法：對(duì)30名受試者，以氟化鈉管、肝素管和分離膠管各抽取靜脈血1管，3～5mL/管，即每人3管。離心，于采血后0.5h、1h、2h、4h、6h、24h、48h、72h檢測(cè)血糖濃度，用肝素管和分離膠管分別與氟化鈉管按時(shí)間分組配對(duì)，進(jìn)行秩和檢驗(yàn)分析。結(jié)果：①三種采血管血糖檢測(cè)均值如下：0.5～72h，氟化鈉管由（5.826±0.625）mmol/L降至（5.753±0.637）mmol/L；肝素管由（5.843±0.643）mmol/L降至（3.338±0.673）mmol/L；分離膠管由（5.829±0.602）mmol/L降至（5.645±0.712）mmol/L，均隨時(shí)間延長(zhǎng)，檢測(cè)值逐步下降，肝素管下降程度遠(yuǎn)大于氟化鈉管和分離膠管。②肝素管0.5～2h血糖檢測(cè)值與氟化鈉管差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），4～72h血糖檢測(cè)值明顯下降，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）。分離膠管0.5～48h血糖檢測(cè)值與氟化鈉管差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），72h血糖檢測(cè)值差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）。結(jié)論：糖酵解對(duì)血糖檢測(cè)準(zhǔn)確性影響較大，通過(guò)選擇合適的真空采血管，可減小此誤差。

近年來(lái)隨著社會(huì)經(jīng)濟(jì)快速發(fā)展，生活水平及生活方式改變，超重/肥胖的患病率快速增長(zhǎng)，使我國(guó)糖尿病患者逐年增加，并呈年輕化趨勢(shì)[1]。調(diào)查顯示，我國(guó)18～49歲的青壯年人群糖尿病患病率從2010年的3.2%，到2018年的已達(dá)8.8%[2]。由糖尿病及其并發(fā)癥不但給患者帶來(lái)生理上的痛苦且對(duì)患者及其家庭帶來(lái)沉重的經(jīng)濟(jì)及社會(huì)負(fù)擔(dān)，給健康中國(guó)目標(biāo)帶來(lái)新的挑戰(zhàn)[3]。對(duì)糖尿病前期及時(shí)進(jìn)行干預(yù)，預(yù)防及延緩糖尿病發(fā)生已經(jīng)成為共識(shí)，而糖尿病前期診斷主要依據(jù)是靜脈血中葡萄糖濃度，血液中葡萄糖臨床上稱(chēng)為“血糖”，血糖檢測(cè)是臨床生化常規(guī)項(xiàng)目之一[4,5]。通常血糖隨其他生化檢測(cè)項(xiàng)目一起檢測(cè)，使用含有肝素鋰抗凝管或含有促凝劑的分離膠管采集血樣[6]。由于采集血樣后，血細(xì)胞仍會(huì)分解利用葡萄糖（糖酵解），使血樣在抽血到檢測(cè)的期間血糖持續(xù)消耗而引起檢測(cè)誤差，給糖尿病防治帶來(lái)困擾[7]。為掌握采血管中血糖消長(zhǎng)規(guī)律，合理使用采血管，提高檢測(cè)質(zhì)量，特對(duì)三種與血糖檢測(cè)相關(guān)的采血管進(jìn)行血糖穩(wěn)定性觀察，現(xiàn)將結(jié)果報(bào)道如下。

1.資料與方法

1.1 臨床資料

2022年5 月～6月，對(duì)30名健康體檢者的血樣進(jìn)行了葡萄糖在三種采血管中降解的觀察，并統(tǒng)計(jì)分析。30例研究對(duì)象中男性17例，女性13例，年齡25～40歲，平均（35±4.06）歲。

檢測(cè)儀器及試劑：檢測(cè)儀器為AU480 全自動(dòng)生化分析儀，血糖試劑：利德曼，方法：葡萄糖氧化酶法，批號(hào)：20201102102；效期：20220501；質(zhì)控品：朗道，批號(hào)：1376UN，效期：20230128。

1.2 方法

樣本處理：每一位受檢者均使用氟化鈉管（葡萄糖檢測(cè)專(zhuān)用采血管）、肝素抗凝管（以下簡(jiǎn)稱(chēng)，肝素管）和分離膠促凝管（以下簡(jiǎn)稱(chēng)，分離膠管）分別采集血液3～5mL，顛倒混勻后靜置5min，置低速離心機(jī)內(nèi)，3000r/min，離心5min，分離血漿（血清）待檢。

血糖檢測(cè)及質(zhì)控：在全自動(dòng)生化分析儀上對(duì)3種采血管90份（30×3）血樣檢測(cè)血糖，檢測(cè)時(shí)間為采血后0.5h、1h、2h、4h、6h、24h、48h、72h，記錄結(jié)果，每次檢測(cè)間隙采血管封蓋防止揮發(fā)，第6h檢測(cè)完成后，樣本封蓋放冰箱冷藏保存待檢。所有操作嚴(yán)格按照檢測(cè)SOP文件進(jìn)行，每批次檢測(cè)均使用質(zhì)控品同步檢測(cè)，監(jiān)測(cè)分析批次質(zhì)量，質(zhì)控結(jié)果在控，則接受該批次樣本檢測(cè)結(jié)果。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

使用Excel2007 錄入三種采血管的檢測(cè)數(shù)據(jù)。用SPSS17.0統(tǒng)計(jì)軟件分析，將氟化鈉管作為血糖參考管，采用配對(duì)秩和檢驗(yàn)，用肝素管、分離膠管分別與氟化鈉管按不同檢測(cè)時(shí)間分組配對(duì)，比較同一樣本的血糖在相同時(shí)間（相對(duì)的），不同采血管的檢測(cè)值差異。檢驗(yàn)水準(zhǔn)P≤0.05有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2.結(jié)果

2.1 三種采血管血糖檢測(cè)結(jié)果及差異

將每種采血管1～72h檢測(cè)值與0.5h檢測(cè)值縱向比較，統(tǒng)計(jì)結(jié)果顯示，三種采血管的血糖在采樣后隨時(shí)間延長(zhǎng)，血糖濃度均下降，氟化鈉采血管血糖下降程度最小，72h檢測(cè)值僅較0.5h下降1.25%；其次是分離膠管，72h檢測(cè)值較0.5h下降3.16%，與氟化鈉管檢測(cè)值相近；下降程度最大的是肝素管，72h的檢測(cè)值較0.5h下降42.87%，表明血液離體后，葡萄糖存在持續(xù)酵解消耗，見(jiàn)表1。

2.2 三種采血管不同時(shí)間檢測(cè)血糖結(jié)果及配對(duì)比較

由于氟化鈉采血管是專(zhuān)用與葡萄糖檢測(cè)，穩(wěn)定性較高。用肝素管和分離膠管與氟化鈉管配對(duì)比較，觀察血糖在普通生化管與葡萄糖專(zhuān)用管中的穩(wěn)定性差異。秩和檢驗(yàn)分析結(jié)果顯示，肝素管0.5～2h血糖檢測(cè)值與氟化鈉管差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，P＞0.05；4～72h與氟化鈉管的差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，P≤0.05。分離膠管0.5～48h血糖檢測(cè)值與氟化鈉管的差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，P＞0.05，72h檢測(cè)值與氟化鈉管差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，P≤0.05，見(jiàn)表2。

表2.三種采血管不同時(shí)間檢測(cè)血糖結(jié)果及配對(duì)秩和檢驗(yàn)比較

3.討論

血糖檢查主要有便攜式血糖儀檢測(cè)和全自動(dòng)生化儀檢測(cè)兩種方式。便攜式血糖儀檢測(cè)的樣本是末梢血，優(yōu)點(diǎn)是簡(jiǎn)便快速，但儀器設(shè)備來(lái)源廣，材料、設(shè)備性能不一，操作者個(gè)體能力差異等影響因素較多，準(zhǔn)確性及重復(fù)性不甚理想，多用于糖尿病患者日常血糖監(jiān)測(cè)或住院患者床邊檢測(cè)等對(duì)準(zhǔn)確度要求不高的檢測(cè)[8]。全自動(dòng)生化儀檢測(cè)的樣本是靜脈血血漿（血清），使用標(biāo)準(zhǔn)品對(duì)儀器校準(zhǔn)，檢測(cè)結(jié)果可溯源，其準(zhǔn)確度和精密度水平較高。

檢測(cè)的質(zhì)量控制包括檢測(cè)前階段、檢測(cè)中階段、檢測(cè)后階段。被檢測(cè)物的生物化學(xué)特性各不相同，應(yīng)根據(jù)具體情況確定被檢測(cè)物的特點(diǎn)采取針對(duì)性的措施。在實(shí)踐中，由于葡萄糖檢測(cè)的影響因素較多，葡萄糖酵解引起的檢測(cè)誤差一直未引起足夠的重視。本次研究結(jié)果顯示了血液離體后血糖濃度不斷降低的規(guī)律，還比較了血糖在不同采血管載體中變化差異，為做好血糖檢測(cè)前階段的質(zhì)量控制提供了依據(jù)。

真空采血管因采血便捷、無(wú)污染、便于運(yùn)輸?shù)葍?yōu)勢(shì)已在臨床檢驗(yàn)中廣泛使用。常用于血糖檢測(cè)的真空采血管主要是本次研究的氟化鈉管、肝素管、分離膠管三種。氟化鈉通過(guò)抑制烯醇化酶而阻止血糖分解，能抑制糖酵解，因氟化鈉抗凝管抑制烯醇化酶的活性，對(duì)其他生化項(xiàng)目的檢測(cè)會(huì)有抑制作用，影響其他生化項(xiàng)目檢測(cè)，一般僅用于血糖檢測(cè)[9,10]。肝素管含有肝素抗凝劑，其加強(qiáng)抗凝血酶滅活絲氨酸蛋白酶，阻止凝血酶形成，常用于快速生化檢測(cè)、血?dú)夥治觥⒓t細(xì)胞滲透脆性實(shí)驗(yàn)等。分離膠管含有促凝劑，促凝劑激活凝血過(guò)程，加速血液凝固，縮短血清分離時(shí)間，特別適合急診生化和快速血清分離。本次研究主要對(duì)三種采血管的血糖穩(wěn)定性進(jìn)行研究，目的是比較兩種用于常規(guī)生化檢測(cè)的采血管與血糖專(zhuān)用采血管的差異，為實(shí)驗(yàn)室合理使用采血管提供依據(jù)。結(jié)果顯示，肝素抗凝管在2h以?xún)?nèi)血糖檢測(cè)值與氟化鈉管差異不大，其后的血糖檢測(cè)值明顯低于氟化鈉管，差異較大（有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義）。肝素管經(jīng)過(guò)離心后血漿與血細(xì)胞只是分層，血漿與血細(xì)胞仍直接接觸，血糖被不斷地消耗，因而血糖濃度隨時(shí)間延長(zhǎng)而下降。分離膠管是一種含有惰性黏性膠體的采血管，分離膠比重在1.05，介于血液液體比重1.02和血細(xì)胞有形成分比重1.08之間，離心時(shí)分離膠網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)破壞變成鏈狀結(jié)構(gòu)成為流體。由于比重差異，分離膠發(fā)生反轉(zhuǎn)現(xiàn)象而分層，血清/分離膠/血細(xì)胞三層。停止離心后分離膠由鏈狀結(jié)構(gòu)恢復(fù)為網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)，恢復(fù)高黏度凝膠狀態(tài)，在血清和血細(xì)胞間形成隔離層，使血清化學(xué)成分不受到細(xì)胞影響而保持較高的穩(wěn)定性[11]。本次研究顯示，分離膠管隨著時(shí)間的延長(zhǎng)，血糖檢測(cè)值也存在下降情況，但下降程度很小，0.5～48h血糖檢測(cè)值與氟化鈉管差異很?。o(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義），雖72h血糖檢測(cè)值與氟化鈉管差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P≤0.05），但與其0.5h血糖檢測(cè)值比較僅低3.16%，未超出生物學(xué)變異±7%允許誤差范圍，仍具有較高的臨床價(jià)值[12]。因此從實(shí)驗(yàn)成本考慮，實(shí)驗(yàn)室能夠在采血后2h內(nèi)完成檢測(cè)結(jié)果的，可選擇較便宜的肝素管。大批量體檢血糖往往與肝功能、腎功能、血脂等其他生化項(xiàng)目一起檢測(cè)（一般不單獨(dú)為血糖采集血樣），檢測(cè)速度慢的生化儀檢測(cè)時(shí)間常常需數(shù)小時(shí)，使同一批次排在后面的血樣因糖酵解造成檢測(cè)誤差。因此對(duì)于含有血糖項(xiàng)目的大批量生化樣本，建議使用分離膠管采集血樣，并及時(shí)離心分離血清。

相關(guān)研究發(fā)現(xiàn)分離膠管分離效果受諸多因素影響，如Ig、TP明顯升高、HCT降低、MM患者的血樣在分離膠管中不能正常分離[13]；此外，分離膠質(zhì)量、血液凝固不完全、離心力和時(shí)間、離心溫度、高血鈉、血管造影劑等因素對(duì)分離效果也有影響[14]。本研究過(guò)程中發(fā)現(xiàn)有10%（9/90）的分離膠血樣離心分離不完全，72h血糖與0.5h比較下降在10%以上，且這些血樣在24h的下降程度已區(qū)別于其他分離膠管血樣，因此使用分離膠管也可能出現(xiàn)個(gè)別血樣由于分離效果欠佳而影響檢測(cè)結(jié)果，需引起重視。