聚合酶鏈反應(yīng)（PCR）分析儀測量結(jié)果的不確定度評定

【摘要】以聚合酶鏈反應(yīng)（PCR）分析儀測量結(jié)果為研究對象，論述了聚合酶鏈反應(yīng)（PCR）分析儀測量結(jié)果不確定度的評定方法與過程。

【關(guān)鍵詞】聚合酶鏈反應(yīng)；測量結(jié)果；不確定度

【DOI編碼】10.3969/j.issn.1674-4977.2023.06.007

Evaluation of Uncertainty in Measurement Results of Polymerase Chain Reaction （PCR） Analyzer

ZENG Bingmei

（Hainan Kerui Measurement Technology Service Co.， Ltd.， Haikou 570206， China）

Abstract： Taking the measurement results of polymerase Chain reaction （PCR） analyzer as the research object， this paper discusses the evaluation method and process of uncertainty of measurement results of polymerase Chain reaction （PCR） analyzer.

Key words： polymerase chain reaction； measurement results； uncertainty

聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)又稱為PCR，是分子生物學(xué)技術(shù)之一。PCR已成為分子生物學(xué)研究必不可少的一部分。PCR技術(shù)不僅可用于基礎(chǔ)研究，還適用于日常的臨床診斷、法醫(yī)學(xué)調(diào)查和農(nóng)業(yè)生物技術(shù)研究。

PCR儀是一種能夠為PCR反應(yīng)自動完成溫度循環(huán)和孵育的儀器，能夠在短時間內(nèi)將單個DNA分子擴(kuò)增數(shù)百萬倍。其擴(kuò)增過程包括3個連續(xù)步驟：1）變性，對雙鏈DNA模板進(jìn)行加熱，使其解離；2）退火，被稱為引物的短DNA分子與目標(biāo)DNA的側(cè)翼區(qū)域結(jié)合；3）延伸，DNA聚合酶沿著模板鏈將引物3’端進(jìn)行延伸。將這些步驟重復(fù)（循環(huán)）25～35次，即可按指數(shù)方式獲得精確的目標(biāo)DNA拷貝。

1.1校準(zhǔn)依據(jù)

JJF 1527—2015《聚合酶鏈反應(yīng)分析儀校準(zhǔn)規(guī)范》。

1.2標(biāo)準(zhǔn)器

PCR儀溫度驗證系統(tǒng)，EGFR基因突變標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)。

1.3被測對象

熒光定量PCR儀。

1.4測量方法

1.4.1溫度示值誤差、溫度均勻性校準(zhǔn)

將PCR儀（96孔）及溫度校準(zhǔn)裝置各部件連接完好，在溫度傳感器表面上涂抹適量的導(dǎo)熱油，將溫度傳感器置于PCR儀（96孔）的加熱模塊設(shè)定孔中。設(shè)定溫度控制程序見表1。啟動溫度校準(zhǔn)裝置，記錄整個數(shù)據(jù)采集過程并保存。

1.4.2升降溫速率校準(zhǔn)

設(shè)定PCR儀的溫度控制程序，見表2。啟動溫度校準(zhǔn)裝置，記錄整個數(shù)據(jù)采集過程并保存。

1.4.3定量PCR儀樣本示值誤差、樣本線性的校準(zhǔn)

采購相應(yīng)的PCR反應(yīng)體系96孔校準(zhǔn)板，離心后將校準(zhǔn)板置于PCR儀（96孔）的加熱模塊設(shè)定孔中，設(shè)定溫度控制程序，見表3。設(shè)定PCR儀的數(shù)據(jù)分析參數(shù)，計算其線性回歸系數(shù)r。

2.1溫度示值誤差校準(zhǔn)結(jié)果的不確定度評定

2.1.1測量模型

2.1.6擴(kuò)展不確定度

取k=2，PCR儀溫度示值誤差的擴(kuò)展不確定度U = kuci，結(jié)果見表6。

【參考文獻(xiàn)】

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【作者簡介】

曾冰梅，女，1989年出生，工程師，研究方向為溫度、壓力計量。

（編輯：李加鵬）