萎縮性胃炎患者外周血TLR4 MyD88 NF-κB及PG水平變化與Hp感染病變進(jìn)程及炎癥反應(yīng)的關(guān)系

李飛飛, 楊金艷, 韓瑞瑞, 穆亞娟, 高 玲, 景 慧, 錢麗鮮

(1.陜西省榆林市第一醫(yī)院消化內(nèi)科, 陜西 榆林 719000 2.云南省老年病醫(yī)院內(nèi)科, 云南 昆明 650011)

萎縮性胃炎是消化系統(tǒng)常見疾病,其病理學(xué)特征主要以胃黏膜萎縮、腺體減少為主,其發(fā)病原因受多種因素影響,與Hp感染、非甾體類抗炎藥物使用、自身免疫等因素密切相關(guān)[1]。該疾病會導(dǎo)致患者出現(xiàn)上腹疼痛、消化不良、胃酸分泌不足等癥狀,嚴(yán)重時還會導(dǎo)致胃部出血及胃潰瘍的發(fā)生。目前臨床上對萎縮性胃炎發(fā)病機(jī)制和病理、生理過程的了解仍不完全,尤其是在免疫和炎癥反應(yīng)方面的研究尚不充分。TLR4/MyD88/NF-κB信號通路與機(jī)體多種炎癥反應(yīng)相關(guān),其中Toll樣受體4(oll-like receptor 4,TLR4)是一種Toll樣受體,當(dāng)機(jī)體感染時,TLR4被激活并通過與配體結(jié)合來啟動下游信號傳導(dǎo),而激活的TLR4會與適配器蛋白髓樣分化因子-88(myeloid differentiation primary response 88,MyD88)結(jié)合,MyD88的激活又將導(dǎo)致NF-κB的激活和轉(zhuǎn)錄因子的釋放,在慢性萎縮性胃炎中,核因子κB(nuclear factor kappa-light-chain-enhancer of activated B cells,NF-κB)的異常活化與炎癥反應(yīng)的持續(xù)存在密切相關(guān)[2]。胃蛋白酶原(pepsinogen,PG)則是一種由胃壁上皮細(xì)胞分泌的蛋白質(zhì),包括PGⅠ和PGⅡ兩種亞型,PG的分泌主要來自于胃黏膜腺體,因此胃黏膜萎縮可能會影響PG的分泌[3]?；诖?本研究旨在探討萎縮性胃炎患者血清TLR4、MyD88、NF-κB、PGⅠ、PGⅡ的表達(dá)變化及TLR4/MyD88/NF-κB通路與該疾病發(fā)生發(fā)展的關(guān)系。

1 資料與方法

1.1一般資料:采取回顧性研究方法,選取榆林市第一醫(yī)院2020年12月至2023年3月期間經(jīng)胃鏡取病理學(xué)組織檢查證實為萎縮性胃炎的患者98例作為A組、選取同期檢查確診的非萎縮性胃炎患者100例作為B組、健康體檢志愿者100例作為C組;三組研究對象的基礎(chǔ)資料比較情況見表1,差異均無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。

表1 三組研究對象的基礎(chǔ)資料比較情況

A組、B組患者納入標(biāo)準(zhǔn):①本研究收治的慢性胃炎患者的診斷標(biāo)準(zhǔn)參考《中國慢性胃炎診療專家共識》[4]中的標(biāo)準(zhǔn),萎縮性胃炎患者的內(nèi)鏡下表現(xiàn)主要有胃黏膜紅白相間,胃黏膜皺襞變平,甚至出現(xiàn)消失,部分胃黏膜血管顯露;胃鏡下可以見到黏膜紅斑出血點,黏膜粗糙或伴有水腫、充血、滲出;均為初診患者;非萎縮性胃炎主要是有淺表的充血、糜爛這些表現(xiàn),病檢下和胃鏡下看不到明顯的腺體萎縮的這些癥狀;②所有胃炎患者均接受了內(nèi)鏡檢查,其中萎縮性胃炎患者按照內(nèi)鏡下分級分類標(biāo)準(zhǔn)將其分為Ⅰ級、Ⅱ級、Ⅲ級;③Hp感染情況以14C呼氣試驗檢查結(jié)果為準(zhǔn)。C組對象納入標(biāo)準(zhǔn):①健康體檢志愿者為我院體檢中心收集的體檢對象,患者經(jīng)胃鏡檢查無任何病變;②研究方案獲得醫(yī)學(xué)倫理委員會審查并批準(zhǔn)。排除標(biāo)準(zhǔn):①伴有胃食管靜脈曲張等疾病;②患者伴有惡性腫瘤;③免疫系統(tǒng)疾病患者;④患者近4周內(nèi)服用了治療幽門螺桿菌(Hp)的相關(guān)藥物或治療慢性胃炎的相關(guān)藥物(抗生素、紙質(zhì)泵抑制劑、H2受體拮抗劑等);⑤患有抑郁、焦慮等精神疾病或老年癡呆等;⑥嚴(yán)重的肝腎功能疾病等。

1.2血清檢測方法:采集患者外周靜脈血5mL,放入離心機(jī)內(nèi)進(jìn)行離心,離心速度3000r/min,離心15min,離心半徑10cm,離心后取上清液放入-70℃中保存,通過酶聯(lián)免疫吸附法檢測TLR4、MyD88、NF-κB、白細(xì)胞介素-6(IL-6)、IL-1β、腫瘤壞死因子-α(TNF-α)、Hp水平。再取部分血清標(biāo)本通過免疫層析法檢測PGⅠ、PGⅡ水平,試劑盒選自欣博盛生物科技有限公司。

2 結(jié) 果

2.1三組研究對象的各項指標(biāo)比較:A、B、C三組研究對象的TLR4、MyD88、NF-κB、PGⅡ、PGⅠ/IL-6、IL-1β、TNF-α在三組之間總體差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05);進(jìn)一步進(jìn)行組間比較,A組患者的TLR4、MyD88、NF-κB、PGⅡ、IL-6、IL-1β、TNF-α高于B組、C組,PGⅠ測定值低于B組和C組,差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05);B組患者的TLR4、MyD88、NF-κB、PGⅡ、IL-6、IL-1β、TNF-α高于C組,PGⅠ測定值低于C組,差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05),見表2。

表2 三組研究對象的各項指標(biāo)比較

2.2萎縮性胃炎患者是否合并Hp感染的各項實驗室指標(biāo)比較:經(jīng)14C呼氣試驗檢查,A組患者中Hp感染陽性患者74例、陰性患者24例,Hp陽性組的TLR4、MyD88、PGⅡ、IL-6、IL-1β、TNF-α高于Hp陰性組,PGⅠ測定值低于Hp陰性組,差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05),見表3。

表3 萎縮性胃炎患者是否合并Hp感染的各項實驗室指標(biāo)比較

2.3不同病變分級的萎縮性胃炎患者各項實驗室指標(biāo)比較:經(jīng)胃鏡檢查,內(nèi)鏡下達(dá)到Ⅲ級病變的萎縮性胃炎患者27例、病變Ⅱ級患者43例、病變Ⅰ級患者28例;Ⅰ級、Ⅱ級、Ⅲ級患者的TLR4、MyD88、NF-κB 、PGⅠ、PGⅡ、IL-6、IL-1β、TNF-α測定值在三組之間總體差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05),進(jìn)一步進(jìn)行組間兩兩比較,Ⅲ級病變患者的TLR4、MyD88、NF-κB 、PGⅡ、IL-6、IL-1β、TNF-α高于Ⅱ級、Ⅰ級患者,PGⅠ測定值低于Ⅱ級、Ⅰ級患者,差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05);Ⅱ級病變患者的TLR4、MyD88、NF-κB 、PGⅡ、IL-6、IL-1β、TNF-α高于Ⅰ級患者,PGⅠ測定值低于Ⅰ級患者,差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05),見表4。

表4 不同病變分級的萎縮性胃炎患者各項實驗室指標(biāo)比較

2.4相關(guān)性分析:采用相關(guān)性分析法,分析萎縮性胃炎患者TLR4、MyD88、NF-κB 、PGⅡ、PGⅠ與IL-6、IL-1β、TNF-α的相關(guān)性,結(jié)果顯示:TLR4、MyD88、NF-κB 與IL-6、IL-1β、TNF-α均呈正相關(guān)關(guān)系(P<0.05),PGⅡ、PGⅠ與IL-6、IL-1β、TNF-α無相關(guān)性(P>0.05),見表5。

表5 線性相關(guān)分析結(jié)果

3 討 論

萎縮性胃炎是一種慢性胃炎,是胃黏膜的一種退行性變化,據(jù)統(tǒng)計,我國萎縮性胃炎的患病率已經(jīng)達(dá)到了50%以上,且隨著年齡的增加其患病率逐漸提高[5]。目前,萎縮性胃炎的治療主要依靠抗Hp治療、胃黏膜保護(hù)劑以及對癥治療等。然而,這些治療方法并不能完全或高效地治愈該疾病,因此需要更深入地了解萎縮性胃炎的發(fā)生和發(fā)展機(jī)制,為該疾病的治療提供新的思路和方法。TLR4是一種主要在免疫細(xì)胞表面表達(dá)的受體,它能夠識別和結(jié)合一類稱為病原相關(guān)分子模式(PAMPs)的分子,這些分子與病原體感染有關(guān)。此外,TLR4還可與其配體結(jié)合后,啟動NF-κB信號通路,導(dǎo)致炎癥相關(guān)基因的轉(zhuǎn)錄和炎癥因子的產(chǎn)生,MyD88則是一種重要的信號傳導(dǎo)分子,參與了機(jī)體調(diào)節(jié)免疫應(yīng)答和炎癥反應(yīng)。PG是由胃黏膜細(xì)胞產(chǎn)生的前酶形式的胃蛋白酶,包括PGⅠ和PGⅡ,PGⅠ主要由主細(xì)胞分泌,而PGⅡ主要由頸部細(xì)胞和壁細(xì)胞分泌,在正常情況下,PGⅠ和PGⅡ的分泌維持在一定的平衡狀態(tài),在萎縮性胃炎患者中,PGⅠ和PGⅡ的分泌會發(fā)生明顯改變[6]。

本研究結(jié)果顯示,TLR4、MyD88、NF-κB、PGⅡ、IL-6、IL-1β、TNF-α的測定值A(chǔ)組高于B組,高于C組,而PGⅠ的測定值A(chǔ)組低于B組,低于C組,這說明上述檢測指標(biāo)與萎縮性胃炎具有相關(guān)性。分析其原因為,LR4是一種重要的免疫受體,能夠識別來自外部環(huán)境和內(nèi)部機(jī)體的損傷信號,從而激活炎癥反應(yīng)。在胃黏膜中,TLR4的活化可以引起NF-κB的激活和IL-1β、TNF-α、IL-6等炎癥因子的表達(dá)升高,進(jìn)而導(dǎo)致胃黏膜炎癥和組織損傷的發(fā)生[7]。具體來說,NF-κB是TLR4信號通路的下游重要節(jié)點蛋白,它可以促進(jìn)炎癥因子的表達(dá)和炎癥反應(yīng)的發(fā)生。IL-1β、TNF-α、IL-6都是促炎細(xì)胞因子,它們的表達(dá)量升高可以反映出胃黏膜的炎癥和損傷程度。正常情況下,胃酸的分泌受到復(fù)雜的調(diào)控機(jī)制控制,IL-1β適量的生成可以起到激活免疫應(yīng)答的作用,同時發(fā)揮免疫監(jiān)視的功能,而IL-1β的過度分泌可能干擾胃酸調(diào)控機(jī)制,導(dǎo)致胃酸分泌的減少,進(jìn)而導(dǎo)致消化功能障礙,影響食物的正常消化吸收,進(jìn)而導(dǎo)致胃黏膜的損傷和萎縮。IL-6是一種多功能的細(xì)胞因子,在免疫反應(yīng)、炎癥調(diào)節(jié)以及腫瘤產(chǎn)生等方面具有重要的功能,當(dāng)胃黏膜受到刺激或損傷時,炎癥細(xì)胞和免疫細(xì)胞會釋放IL-6作為一種應(yīng)激性反應(yīng)。IL-6的高表達(dá)可以反映出胃黏膜的炎癥和免疫反應(yīng)程度。TNF-α是一種重要的促炎細(xì)胞因子,由巨噬細(xì)胞、淋巴細(xì)胞和其他炎癥細(xì)胞分泌,TNF-α可以刺激炎癥細(xì)胞產(chǎn)生其他炎癥因子,如IL-1β、IL-6和IL-8等,形成炎癥反應(yīng)的正反饋回路。其次,TNF-α可以引發(fā)細(xì)胞凋亡(細(xì)胞程序性死亡),導(dǎo)致胃黏膜上皮細(xì)胞的損傷和脫落,此外,TNF-α還可以影響胃黏膜血流和胃酸分泌,進(jìn)一步加劇胃黏膜的損傷和炎癥反應(yīng)。PG是一種存在于胃黏膜細(xì)胞中的無活性前體,在胃黏膜保護(hù)和修復(fù)中起著重要的作用。在萎縮性胃炎中,由于胃黏膜細(xì)胞的萎縮和腸化現(xiàn)象的出現(xiàn),導(dǎo)致胃底腺數(shù)量大量減少,從而導(dǎo)致PG的分泌量明顯減少[8]。

Hp作為螺旋狀革蘭氏陰性細(xì)菌,可寄生在胃黏膜表面的黏液層與黏膜上皮細(xì)胞間,是導(dǎo)致萎縮性胃炎的主要病因之一。本研究對是否感染Hp的萎縮性胃炎患者進(jìn)行對比分析得知,Hp陽性組的TLR4、MyD88、PGⅡ、IL-6、IL-1β、TNF-α顯著高于Hp陰性組且在Ⅰ-Ⅲ級萎縮性胃炎病變患者中其水平呈遞增趨勢,而PGⅠ測定值顯著低于Hp陰性組同時在Ⅰ-Ⅲ級萎縮性胃炎病變患者中其水平呈遞減趨勢(P<0.05),這說明,在Hp感染與病變程度越高的萎縮性胃炎患者中其相關(guān)血液指標(biāo)發(fā)生明顯變化,且變化幅度與病情嚴(yán)重程度及Hp感染有關(guān)。這是由于在Hp感染和病變程度較重的萎縮性胃炎患者中,免疫和炎癥反應(yīng)更為活躍,TLR4和MyD88參與了免疫應(yīng)答的激活過程,其水平升高可能是為了應(yīng)對感染引起的炎癥和損傷[9]。PGⅡ是由多種細(xì)胞分泌的胃蛋白酶的亞型,其水平升高可能反映了胃黏膜炎癥和病變的嚴(yán)重程度。IL-6、IL-1β和TNF-α是促炎細(xì)胞因子,它們的升高表明炎癥反應(yīng)的強(qiáng)烈存在,同時胃黏膜細(xì)胞的萎縮和腸化導(dǎo)致胃底腺的減少和功能下降,從而使PGⅠ的分泌減少[10]。

本研究結(jié)果還顯示,TLR4、MyD88、NF-κB與IL-6、IL-1β、TNF-α均呈顯著正相關(guān)關(guān)系,這進(jìn)一步說明了TLR4、MyD88、NF-κB水平與萎縮性胃炎炎癥反應(yīng)存在密切關(guān)系,而其中的相互作用機(jī)制為TLR4作為一個受體,可以激活下游的信號傳導(dǎo)分子MyD88,進(jìn)而激活NF-κB通路,促進(jìn)IL-6、IL-1β和TNF-α等促炎因子的表達(dá)和釋放,而這些細(xì)胞因子的增加反過來可以進(jìn)一步激活炎癥反應(yīng),形成一個正向的調(diào)節(jié)環(huán)路。因此,TLR4、MyD88和NF-κB在萎縮性胃炎中可能發(fā)揮重要的調(diào)控作用,通過介導(dǎo)促炎因子的產(chǎn)生,參與炎癥反應(yīng)的發(fā)生和發(fā)展[11-12]。

綜上所述,TLR4/MyD88/NF-κB通路與萎縮性胃炎患者病變程度、發(fā)生Hp感染有關(guān),并且在一定程度上調(diào)控患者炎癥反應(yīng)嚴(yán)重程度。