墨旱蓮復方提取物的活性及洗發(fā)乳的研制*

岳欣怡，李筱玲，李玉靜，趙沛沛，楊開飛，李思雨，徐歡歡

(商洛學院生物醫(yī)藥與食品工程學院，陜西 商洛 726000)

隨著社會壓力不斷增大和生活節(jié)奏的加快，環(huán)境的不斷惡化，以及不良的飲食習慣，中國的脫發(fā)患者越來越多，據(jù)不完全統(tǒng)計，脫發(fā)患者約占成年人群體的20%～30%[1]。中醫(yī)認為頭發(fā)的生長有賴于腎氣的充盛，中藥在洗發(fā)護發(fā)領(lǐng)域發(fā)揮的重要作用，越來越受到重視[2]。由墨旱蓮和女貞子配伍的二至丸是補益肝腎的代表方，具有 “發(fā)白返黑，健腰膝”之功效。 已有證據(jù)顯示，二至丸治療脂溢性脫發(fā)及青年男性脫發(fā)收效良好[3-4]。墨旱蓮具有活血、促進毛發(fā)生長、烏發(fā)、止血、抗菌、抗炎等作用[5]；女貞子具有降血脂、活血、抑菌等作用，能增強酪氨酸酶的活性和黑色素的合成，促進皮囊生長、保護損傷細胞等的作用[6]。本文在二至丸基礎(chǔ)上增加側(cè)柏葉，以增加抑菌、抗氧化、祛屑、防脫及生發(fā)等功能[7]，以墨旱蓮、女貞子、側(cè)柏葉復方提取物為主原料，配以月桂醇聚醚硫酸酯鈉及椰油酰胺丙基甜菜堿等表面活性劑，研制了一款溫和、無刺激的綠色天然防脫護發(fā)洗發(fā)乳。

1 實 驗

1.1 主要材料、試劑與儀器

墨旱蓮(批號20200519)，江蘇傳承中藥有限公司；女貞子(批號：B20191101-01)，湖北楚風中藥飲片有限公司；側(cè)柏葉(批號20201102)，遵義市銀花藥業(yè)有限公司；蘆丁(批號：100080-201811)，沒食子酸(批號：110831-201906)，人參皂苷 Re(批號：110754-202028)中國食品藥品檢定研究院；無水乙醇(分析純)，常州市啟迪化工有限公司；月桂醇聚醚硫酸酯鈉(SLES)，月桂基硫酸銨(K12 A)，椰油脂肪酸單乙醇酰胺(CMEA)，椰油酰胺丙基甜菜堿(CAB)，瓜爾膠(C-14S)，苯甲酸鈉，聚季銨鹽-47，鄰苯二甲酸烷基酰胺(TAB-2)，無水檸檬酸，江蘇省海安石油化工廠。

KH5200E超聲清洗儀，昆山禾創(chuàng)超聲儀器有限公司；HH-66恒溫水浴鍋，江蘇金壇市環(huán)宇科學儀器廠，RE52-99旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀，上海亞榮生化儀器廠；DNJ-4，粘度計，上海力辰儀器科技有限公司；S-114萬分之一電子天平，丹佛儀器(北京)有限公司；UV-1500紫外分光光度計，上海美析儀器有限公司。

1.2 實驗方法

1.2.1 墨旱蓮復方提取物有效成分含量測定

取墨旱蓮、女貞子、側(cè)柏葉各70 g，粉碎，過4號篩后混勻，用8倍量的90%乙醇回流提取2次，每次2 h；殘渣再用8倍量的水提取2 h，將3次提取液混合，減壓濃縮后，冷凍干燥，置密封干燥器內(nèi)保存?zhèn)溆?，即得墨旱蓮復方提取物干浸膏。每克干浸膏相當于混合原?.1 g。

(1)墨旱蓮復方提取物總多酚含量測定

①對照品溶液的制備

精密稱取沒食子酸對照品18.8 mg，置于50 mL棕色容量瓶內(nèi)，加水溶解并定容至刻度，搖勻后精密量取5 mL，置25 mL容量瓶，加水稀釋至刻度，搖勻，即得對照品溶液。

②標準曲線的繪制

精密吸取對照品溶液1.0、2.0、3.0、4.0、5.0 mL分置于5個25 mL容量瓶內(nèi)，福林酚試劑法顯色，于759 nm處測定吸光度[8]。以吸光度為y軸，濃度為x軸，繪制標準曲線。得線性回歸方程：y=0.817 7x+0.059 9，R2=0.984 2。

③總多酚含量測定

精密稱取復方提取物干浸膏0.10 g，置100 mL容量瓶，加水使溶解后定容，搖勻，即得供試品溶液。精密量取供試品溶液1.0 mL于25.0 mL容量瓶中，福林酚試劑法顯色，在759 nm波長處測定吸光度。

(2)墨旱蓮復方提取物總黃酮含量測定

①對照品溶液的制備

精密稱取蘆丁對照品10.0 mg，用60%乙醇溶解并定容至25 mL，精密量取上述溶液10 mL置于25 mL容量瓶中，加60%乙醇定容至刻度，搖勻，即得[9]。

②標準曲線的繪制

取7個25 mL的容量瓶分別精密加入對照品試液1.0、2.0、3.0、4.0、5.0、6.0 mL，NaNO2-Al(NO3)3顯色法顯色。于510 nm波長處測定吸光度，以相應試劑為空白對照[10]。y軸為吸光度，x軸為濃度，建立標準曲線。得線性回歸方程：y=0.6414x+0.008 3，R2=0.990 4。

③總黃酮含量測定

精密稱取墨旱蓮復方提取物浸膏約0.10 g，置50 mL容量瓶中，加入60%乙醇40 mL，超聲(250 W，53 KHZ)溶解10 mim，冷卻后用60%乙醇定容至刻度，搖勻，即得供試品溶液。精密量取供試品溶液1.0 mL于25.0 mL容量瓶中，NaNO2-Al(NO3)3法顯色，在510 nm波長處測定吸光度。

(3)墨旱蓮復方提取物總皂苷含量測定

①對照品溶液的制備

精密稱定取人參皂苷Re對照品6.0 mg，置5.0 mL容量瓶中，以甲醇溶解并定容至刻度，搖勻，精密移取2.0 mL至10.0 mL容量瓶中，用甲醇定容，即得到人參皂苷Re對照品溶液。

②標準曲線的繪制

精密吸取人參皂苷Re對照品溶液0.1 mL、0.2 mL、0.4 mL、0.5 mL、0.6 mL、0.7 mL、0.8 mL分別置于試管中，香草醛-高氯酸法顯色，在555 nm處測定各溶液吸光度[10]，以測定的吸光度為y軸，對照品質(zhì)量為x軸，建立標準曲線。得線性回歸方程：y=1.078x+0.0366，R2=0.9844。

③總皂苷含量測定

精密稱取樣品浸膏約0.10 g ，置于50 mL容量瓶中，用甲醇溶解并定容，即得供試品溶液。精密量取供試品溶液1.0 mL于25.0 mL容量瓶中，顯色，在510 nm波長處測定吸光度。

1.2.2 墨旱蓮復方體外抗氧化試驗

抗氧化能力試驗均以VC作為陽性對照。

(1)清除1，1-二苯-2-苦肼自由基(DPPH)實驗

取6支試管分別精密加入濃度為0.02 g/mL、0.04 g/mL、0.05 g/mL、0.06 g/mL、0.08 g/mL、0.10 g/mL的墨旱蓮復方干浸膏乙醇(60%)溶液，再加濃度為0.09 9 mmoL/L的DPPH乙醇溶液2.5 mL，搖勻，在暗處室溫放置30 min后，于514 nm處測定吸光度[11]，結(jié)果記為Ai。

藥物空白對照：待測液加2.5 mL 無水乙醇溶液，同樣條件測定吸光度值，記為Aj。DPPH對照品在同樣條件下測定吸光度，結(jié)果記為A0。

(2)清除ABTS自由基實驗

精密稱取0.0384 g ABTS粉末于 10.0 mL的容量瓶中，加水溶解定容，配制成ABTS儲備液(7 mmoL/mL)，備用。另取5個試管分別加入濃度為0.1 mg/mL、0.3 mg/mL、0.5 mg/mL、0.7 mg/mL、0.9 mg/mL 的墨旱蓮復方提取物(60%)乙醇溶液1 mL，再依次加入9.0 mL的ABTS 工作液后，立即搖均，反應2～10 min，于734 nm波長處測定吸光度[12]，結(jié)果記為Ai。

藥物空白對照：待測樣品加入 9.0 mL的無水乙醇，同樣條件下測定吸光度值，記為Aj。取1 mL 60%乙醇加9 mL的ABTS溶液，反應后測定吸光度，結(jié)果記為A0。

(3)清除羥基自由基(-OH)實驗

取5個試管分別加入濃度為0.1 mg/mL、0.3 mg/mL、0.5 mg/mL、0.7 mg/mL、0.9 mg/mL的墨旱蓮復方提取物(60%)乙醇溶液0.2 mL，再依次加入1 mL 0.15 mmoL/L的硫酸亞鐵(FeSO4)溶液、1 mL 6 mmol/L H2O2、0.4 mL 2 mmol/L的水楊酸和0.4 mL蒸餾水，在37 ℃的溫度下，冷卻水浴1 h，以純水調(diào)零，紫外分光光度計510 nm下測定其吸光度[13]，結(jié)果記為Ai。以純水代替H2O2測得對應待測物吸光度值，記為Aj。60%乙醇溶液測液測得參比溶液吸光度A0。

1.2.3 墨旱蓮復方洗發(fā)乳的制備

(1)主表面活性劑的篩選

配方中所選用的主要表面活性劑應具有高泡性、適宜粘度、良好的穩(wěn)定性、柔順性及保濕性、低毒甚至無毒等特點。SLES是一種性能優(yōu)良的陰離子表面活性劑，具有優(yōu)良的去污、乳化和發(fā)泡性能，有良好的增稠特性和發(fā)泡能力；K12 A作為一種常見的陰離子表面活性劑，具有較好的選擇性和起泡性能[14]。因此在預實驗基礎(chǔ)上選擇SLES和K12A按一定配比添加，將其總添加量定在30%。以泡沫高度為指標考察兩種表面活性劑最佳配比，配比設計為SLES量0%～30%，K12A量30%～0%。

(2)輔助表面活性劑的添加及配方

墨旱蓮中藥洗發(fā)乳中除了要添加主要表面活性劑外還需添加輔助表面活性劑，以降低刺激性，增加穩(wěn)定性、粘稠度、泡沫及其他配伍性能。查閱文獻[15]，現(xiàn)在使用最多的輔助表面活性劑主要有：CDEA、AOS、CAB 、CMEA、APG等。本實驗選用CMEA和CAB作為主要輔表面活性劑。實驗考察了添加6%～10%的CAB量對洗發(fā)乳粘度的影響，以確定CAB的用量。

(3)穩(wěn)定劑、調(diào)理劑、增稠劑的選擇

TAB-2具較好的分散穩(wěn)定性能，常作為懸浮穩(wěn)定劑，防止產(chǎn)品分層，其對產(chǎn)品的泡沫力和粘度沒有影響，并可改善頭發(fā)梳理性能[16]。本實驗選擇TAB-2作為穩(wěn)定劑。洗發(fā)乳中加入瓜爾膠(TC-14-S)、聚季銨鹽-47可調(diào)理洗發(fā)乳粘度和保濕性能，并使原料性能更穩(wěn)定，瓜爾膠(TC-14-S)常與聚季銨鹽-47復配改善梳理性[17]。因此本實驗以瓜爾膠(TC-14-S)常與聚季銨鹽-47復配為調(diào)理劑。預實驗中發(fā)現(xiàn)設NaCl加入量對洗發(fā)乳的粘度影響較大，因此增稠劑選擇NaCl，并以粘度為指標考察0.5%～2%NaCl的影響。

(4)墨旱蓮復方提取物用量的確定

通過改變墨旱蓮復方提取液的添加量，以洗發(fā)乳的外觀、氣味、pH值、穩(wěn)定性(耐寒耐熱)、泡沫高度、粘稠度為指標，考察0%、1%、3%、5%、7%、8%墨旱蓮復方提取液對洗發(fā)乳性能的影響，以確定中藥提取液的添加量。

(5)墨旱蓮復方洗發(fā)乳的制備

1931年，學成后的趙忠堯，回到中國，回到清華，擔任物理系教授。他開設并創(chuàng)辦了中國第一個核物理課程、第一個核物理實驗室，成為中國原子能研究的開拓者。

將AESA、K12A、甘油與適量蒸餾水加于燒杯①中，水浴加熱到70 ℃，并攪拌直至溶解、混勻；用適量水溶解聚季銨鹽-47后，加入CAB、CMEA、C-14S、TAB-2，于70 ℃的水浴鍋中攪拌燒杯②中；將燒杯①中的液體加入燒杯②中，充分攪拌均勻，待溫度降至40 ℃時，加入防腐劑、中藥提取液(墨旱蓮、女貞子、側(cè)柏葉提取液)、茉莉香精，充分混勻，加入NaCl飽和溶液增稠，用檸檬酸調(diào)節(jié)pH，加入去離子水至100 g。

1.2.4 墨旱蓮復方洗發(fā)乳質(zhì)量評價

依據(jù)《洗發(fā)液、洗發(fā)膏》GB/T 29679-2013質(zhì)檢標準進行耐寒、耐熱，起泡性，pH，有效物的測評。并與以國際名牌產(chǎn)品各項性能進行對比評價[17]。

2 結(jié)果與討論

2.1 墨旱蓮復方提取物有效成分含量測定結(jié)果

分別采用福林酚試劑法、NaNo2-Al(NO3)3顯色法、香草醛-高氯酸法測定墨旱蓮復方提取物中總多酚、總黃酮類、總皂苷類成分含量。結(jié)果墨旱蓮復方提取物中總多酚含量為29.68%，總黃酮含量69.344%，總皂苷含量為17.468%。

2.2 墨旱蓮復方體外抗氧化試驗結(jié)果

2.2.1 清除1，1-二苯-2-苦肼自由基(DPPH)實驗結(jié)果

由圖4可知墨旱蓮復方提取物濃度在0.02～0.1 g/mL時，對DPPH自由基的清除率隨濃度增大而增大，從0.06 g/mL后清除率開始高于Vc，藥液濃度到0.06 g/mL后清除率達到最大值并趨于平緩。

圖1 復方提取物濃度對DPPH清除率的影響

2.2.2 清除ABTS自由基實驗結(jié)果

由圖5可知墨旱蓮復方提取物濃度在0.1～0.9 mg/mL時，對ABTS自由基的清除率隨濃度增大而增大且持續(xù)上升，在該濃度區(qū)間時，墨旱蓮復方提取物的清除率比Vc小。

圖2 復方提取物濃度對ABTS清除率的影響

2.2.3 清除羥基自由基(-OH)實驗結(jié)果

由圖7可知墨旱蓮復方提取物濃度在0.1～0.9 mg/mL時，對-OH自由基的清除率隨濃度增大而增大，在濃度0.3 mg/mL到拐點后，緩慢增加，在該濃度區(qū)間時，復合物的清除率比Vc小，還未見明顯平緩趨勢。

圖3 復方提取物濃度對羥基自由基清除率的影響

2.3 墨旱蓮復方洗發(fā)乳的制備結(jié)果

2.3.1 主表面活性劑的篩選

主表面活性劑SLES量0%～30%，K12A量30%～0%，制備的空白洗發(fā)乳，評價結(jié)果見表1。由表1可知：SLES與K12A開始逐漸增大，當主表面活性劑用量SLES 20%、K12A 10%時泡沫高度達到了最大值，泡沫細膩，洗發(fā)乳的的泡沫性能最好。

表1 主表面活性劑篩選結(jié)果

2.3.2 輔助表面活性劑篩選結(jié)果

輔表面活性劑CMEA為1.5%，其他表面活性劑用量固定，CAB量加入為6%～10%，制備的空白洗發(fā)乳，評價結(jié)果見表2。由表2可知，隨著CAB用量的增加，洗發(fā)乳粘度增大，用量增大到8%后，粘度增大不明顯，為節(jié)約成本，CAB加入量定為8%。

表2 輔助表面活性劑CAB篩選結(jié)果

2.3.3 穩(wěn)定劑、調(diào)理劑、增稠劑選擇結(jié)果

依據(jù)文獻資料鄰苯二甲酸酰胺(TAB-2)用量確定為1%；調(diào)理劑瓜爾膠用量為0.2%、聚季銨鹽-47用量為0.7%。增稠劑NaCl用量篩選結(jié)果見表3。由表3可知，隨著NaCl用量加大，粘度也越大，但增大到2%時，粘度有所下降，原因可能是氯化鈉濃度過大使束膠體系破壞，體系黏度下降。故NaCl加入加入量選擇1.8%。

表3 增稠劑NaCl用量篩選結(jié)果

2.3.4 墨旱蓮復方提取物用量確定結(jié)果

改變墨旱蓮復方提取液的添加量，洗發(fā)乳的外觀、氣味、pH值、穩(wěn)定性(耐寒耐熱)、泡沫高度、粘稠度等指標也相應發(fā)生改變，墨旱蓮復方提取物用量實驗結(jié)果見表4。由表4可知，隨著中藥提取液用量的增加洗發(fā)乳的顏色越來越深，pH基本保持不變，泡沫高度變化不大，洗發(fā)乳穩(wěn)定性及粘度逐漸下降，當墨旱蓮復方提取液添加量超過7%時，出現(xiàn)分層、變稀的現(xiàn)象。綜合考慮各個因素，以墨旱蓮復方提取液添加量為7%最為適宜。

表4 中藥提取液對洗發(fā)乳配伍性能的影響

2.3.5 墨旱蓮復方洗發(fā)乳的制備

通過上面幾個影響因素的篩選，得到適宜粘度的墨旱蓮復方洗發(fā)乳配方，各組分百分比如下：AESA 20%、K12 A 10%、甘油4%、聚季銨鹽-47 0.7%、CAB 8%、CMEA 1.5%、C-14S 0.2%、TAB-2 1%、墨旱蓮復方提取液7%、NaCl 1.8%、苯甲酸鈉0.1%、茉莉香精0.2%滴、檸檬酸適量、純水至100 g。參照1.2.4(5)項下方法制備墨旱蓮復方洗發(fā)乳，并對其進行理化進行測定，并與市售洗發(fā)乳進行比較，結(jié)果見表5。

表5 墨旱蓮復方洗發(fā)乳性能測試結(jié)果

3 結(jié) 論

(1)采用紫外分光光度法，分別測定了墨旱蓮復方提取物中總多酚、總多糖、總皂苷含量，方法學考察線性關(guān)系較好。福林酚試劑法測定提復方取物中總多酚含量為29.68%，NaNO2-Al(NO3)3顯色法測定復方中總黃酮含量為69.344%，香草醛-高氯酸法測定復方提取物中總皂苷含量為17.468%

(2)通過體外抗氧化實驗考察墨旱蓮復方的抗氧化作用。結(jié)果表明，墨旱蓮復方提取物在對ABTS自由基、DPPH自由基、羥自由基的清除能力在一定范圍隨著復方提取物濃度的增大而增強。

(3)通過主輔表面活性劑、輔助表面活性劑、增稠劑等影響因素的篩選，得到適宜粘度的墨旱蓮復方洗發(fā)乳配方：AESA 20%、K12A 10%、甘油4%、聚季銨鹽-47 0.7%、CAB 8%、CMEA 1.5%、C-14S 0.2%、TAB-2 1%、墨旱蓮復方提取液7%、NaCl 1.8%、苯甲酸鈉0.1%、茉莉香精0.2%滴、檸檬酸適量。

(4)本文研制了一種以月桂醇聚醚硫酸酯鈉(SLES)配伍月桂基硫酸銨(K12A)為主表面活性劑的無硅油氨基酸型洗發(fā)乳。墨旱蓮、女貞子、側(cè)柏葉具有防脫發(fā)、抑菌等功能，在加入量不超過7%時與其他組分能很好的相容，經(jīng)過理化指標測定，表明該氨基酸型墨旱蓮復方洗發(fā)乳泡沫豐富、粘度適中、穩(wěn)定性較好。