血清T淋巴細(xì)胞亞群水平變化與狼瘡性腎炎患者疾病轉(zhuǎn)歸的相關(guān)性

李飛，常潔，董少卿

（河南科技大學(xué)第一附屬醫(yī)院 腎內(nèi)科，河南 洛陽(yáng) 471003）

系統(tǒng)性紅斑狼 瘡（systemic lupus erythematosus,SLE）是一種累及腎臟、神經(jīng)、肺臟、皮膚等多系統(tǒng)的自身免疫性結(jié)締組織病，狼瘡性腎炎（lupus nephritis,LN）屬于SLE 常見并發(fā)癥，其發(fā)病率占據(jù)SLE 的50%～80%［1］。臨床常采用糖皮質(zhì)激素等免疫抑制劑治療，但不同患者病情轉(zhuǎn)歸不同，因而尋找新型非侵入性標(biāo)志物對(duì)改善病情具有重要意義。CD4+、CD3+、CD16+/CD56+、CD19+屬于T 淋巴細(xì)胞亞群，其中CD4+、CD3+、CD19+屬于特異性免疫應(yīng)答，CD16+/CD56+屬于非特異性免疫應(yīng)答，可參與自身免疫性疾病發(fā)生過(guò)程［2］。CD19+屬于Ⅰ型跨膜糖蛋白，可刺激B 細(xì)胞分化，促進(jìn)漿細(xì)胞分泌抗體，還可分泌細(xì)胞因子，進(jìn)而調(diào)控免疫應(yīng)答［3-4］。目前關(guān)于T 淋巴細(xì)胞亞群與LN 疾病轉(zhuǎn)歸相關(guān)性尚未明確，本研究將檢測(cè)其水平變化對(duì)疾病轉(zhuǎn)歸的預(yù)測(cè)價(jià)值，為L(zhǎng)N 治療提供新思路。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2019 年1 月至2022 年3 月河南科技大學(xué)第一附屬醫(yī)院收治的82 例LN 患者為研究對(duì)象，依據(jù)病情嚴(yán)重程度［5］分為輕度21 例、中度32 例、重度29 例。治療6 個(gè)月后根據(jù)疾病轉(zhuǎn)歸情況分為轉(zhuǎn)歸良好組65 例、轉(zhuǎn)歸不良組17 例。轉(zhuǎn)歸良好組：男25 例，女40 例；年齡24～42 歲，平均（32.16±2.72）歲；體重指數(shù)22～26 kg/m2，平均（24.01±0.52）kg/m2；病程1～3 年，平均（1.52±0.14）年。轉(zhuǎn)歸不良組：男10 例，女7 例；年齡23～43 歲，平均（33.52±2.85）歲；體重指數(shù)21～27 kg/m2，平均（23.85±0.41）kg/m2；病程1～2 年，平均（1.46±0.11）年。兩組一般資料比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），具有可比性。本研究經(jīng)院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)。

1.2 納入與排除標(biāo)準(zhǔn)

納入標(biāo)準(zhǔn)：符合LN 診斷標(biāo)準(zhǔn)［6］且病理類型均為Ⅲ型及以上狼瘡；無(wú)血液疾病者；無(wú)過(guò)敏性疾病者；首次確診者；簽署知情同意書。排除標(biāo)準(zhǔn)：自身免疫性溶血性貧血者；合并其他腎病者；凝血功能異常者；精神障礙者；合并惡性腫瘤者；近3 個(gè)月內(nèi)發(fā)生嚴(yán)重感染或發(fā)熱者；近期接受抑制機(jī)體免疫反應(yīng)藥物治療者。

1.3 方法

1.3.1 治療方法 所有患者接受糖皮質(zhì)激素治療，口服醋酸潑尼松片（輔仁藥業(yè)集團(tuán)有限公司，國(guó)藥準(zhǔn)字H20073323，規(guī)格：5 mg），1 mg/（kg·d）；口服免疫抑制劑霉酚酸酯（上海羅氏制藥有限公司，國(guó)藥準(zhǔn)字H20031240，規(guī)格：0.25 g），1 g/次，2 次/d，連續(xù)治療6 個(gè)月。治療結(jié)束后評(píng)價(jià)疾病轉(zhuǎn)歸情況，轉(zhuǎn)歸良好定義為：臨床癥狀基本消失，尿蛋白含量降低50%，血清蛋白水平≥30 g/L，血肌酐恢復(fù)至正常水平，否則視為轉(zhuǎn)歸不良［7］。

1.3.2 檢測(cè)血清T 淋巴細(xì)胞亞群水平 分別于治療前、治療1 個(gè)月、3 個(gè)月后采集空腹外周靜脈血5 mL，放入含有肝素抗凝采血管內(nèi)，分別加入CD4+、CD3+、CD16+/CD56+、CD19+標(biāo)記的熒光抗體（美國(guó)Abnova 公司），使用FACSAriaⅡ流式細(xì)胞儀（美國(guó)貝克曼庫(kù)爾特公司）檢測(cè)CD4+、CD3+、CD16+/CD56+、CD19+。

1.4 觀察指標(biāo)

①比較入組時(shí)兩組不同生化指標(biāo)：包括血清白蛋白、血肌酐、尿素氮、24 h 尿蛋白、補(bǔ)體C3、補(bǔ)體C4、白細(xì)胞、紅細(xì)胞沉降率（ESR）、尿沉渣紅細(xì)胞數(shù)。②比較治療前、治療1 個(gè)月、3 個(gè)月后兩組及不同病情嚴(yán)重程度（入組時(shí)）患者血清T淋巴細(xì)胞亞群水平。③分析各指標(biāo)與生化指標(biāo)、病情嚴(yán)重程度相關(guān)性。④分析治療1 個(gè)月、3 個(gè)月后各指標(biāo)對(duì)疾病轉(zhuǎn)歸的預(yù)測(cè)價(jià)值。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS 24.0 軟件處理數(shù)據(jù)。計(jì)數(shù)資料以百分率（%）表示，采用χ2檢驗(yàn)；計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（）表示，兩組間比較采用獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)，多組間比較采用單因素方差分析（兩兩間比較采用LSD-t檢驗(yàn)）；應(yīng)用Pearson 分析T淋巴細(xì)胞亞群與生化指標(biāo)的相關(guān)性；應(yīng)用Spearman 分析T 淋巴細(xì)胞亞群與病情嚴(yán)重程度相關(guān)性；采用受試者工作特征（ROC）曲線分析T淋巴細(xì)胞亞群水平對(duì)疾病轉(zhuǎn)歸的預(yù)測(cè)價(jià)值，不同方案間的曲線下面積（AUC）比較采用DeLong 檢驗(yàn)。P＜0.05 為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兩組生化指標(biāo)比較

轉(zhuǎn)歸不良組血清白蛋白、補(bǔ)體C3、補(bǔ)體C4水平低于轉(zhuǎn)歸良好組，血肌酐、尿素氮、24 h 尿蛋白水平，尿沉渣紅細(xì)胞數(shù)高于轉(zhuǎn)歸良好組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。見表1。

表1 兩組生化指標(biāo)比較（）

表1 兩組生化指標(biāo)比較（）

2.2 兩組治療前后血清T 淋巴細(xì)胞亞群水平比較

治療1 個(gè)月、3 個(gè)月后兩組CD4+、CD3+、CD16+/CD56+高于治療前，CD19+低于治療前，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；治療1 個(gè)月、3 個(gè)月后轉(zhuǎn)歸良好組CD4+、CD3+、CD16+/CD56+高于轉(zhuǎn)歸不良組，CD19+低于轉(zhuǎn)歸不良組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。見表2。

表2 兩組治療前后血清T 淋巴細(xì)胞亞群水平比較（）

表2 兩組治療前后血清T 淋巴細(xì)胞亞群水平比較（）

注：1）與治療前比較，P＜0.05；2）與治療1 個(gè)月后比較，P＜0.05。

2.3 不同病情嚴(yán)重程度患者各指標(biāo)水平

隨著病情嚴(yán)重程度增加，CD4+、CD3+、CD16+/CD56+降低，CD19+升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。見表3。

表3 不同病情嚴(yán)重程度患者各指標(biāo)水平（）

表3 不同病情嚴(yán)重程度患者各指標(biāo)水平（）

注：1）與輕度比較，P＜0.05；2）與中度比較，P＜0.05。

2.4 各指標(biāo)與生化指標(biāo)、病情嚴(yán)重程度相關(guān)性分析

CD4+、CD3+、CD16+/CD56+與白蛋白、補(bǔ)體C3、補(bǔ)體C4 呈正相關(guān)，而與尿素氮、病情嚴(yán)重程度呈負(fù)相關(guān)（P＜0.05）；CD19+與白蛋白、補(bǔ)體C3、補(bǔ)體C4 呈負(fù)相關(guān)，而與尿素氮、病情嚴(yán)重程度呈正相關(guān)（P＜0.05）。見表4。

表4 各指標(biāo)與生化指標(biāo)、病情嚴(yán)重程度相關(guān)性分析

2.5 ROC 分析各指標(biāo)對(duì)疾病轉(zhuǎn)歸的預(yù)測(cè)價(jià)值

以轉(zhuǎn)歸不良組17 為陽(yáng)性樣本，以轉(zhuǎn)歸良好組65 例為陰性樣本，繪制ROC 曲線，結(jié)果顯示，治療1 個(gè)月、3 個(gè)月后各指標(biāo)聯(lián)合預(yù)測(cè)疾病轉(zhuǎn)歸的AUC 大于單項(xiàng)預(yù)測(cè)（P＜0.05），且治療3 個(gè)月后各指標(biāo)聯(lián)合預(yù)測(cè)疾病轉(zhuǎn)歸的AUC 大于治療1 個(gè)月（P＜0.05）。見表5。

表5 ROC 分析各指標(biāo)對(duì)疾病轉(zhuǎn)歸的預(yù)測(cè)價(jià)值

3 討論

LN 發(fā)病機(jī)制與免疫復(fù)合物形成、炎性反應(yīng)、遺傳、免疫應(yīng)答等有關(guān)，免疫細(xì)胞因子異常分泌可引起機(jī)體免疫功能紊亂，進(jìn)而引發(fā)自身免疫系統(tǒng)疾病，其病情進(jìn)展與疾病轉(zhuǎn)歸密切相關(guān)，因而尋找LN 發(fā)生發(fā)展相關(guān)分子標(biāo)志物對(duì)疾病轉(zhuǎn)歸具有重要指導(dǎo)意義［8-9］。

CD3+與T 細(xì)胞受體結(jié)合，可傳遞T 細(xì)胞受體、抗原結(jié)合的信號(hào)，促進(jìn)機(jī)體免疫抑制形成，可積極參與機(jī)體應(yīng)對(duì)刺激、感染等過(guò)程；CD4+T 淋巴細(xì)胞可進(jìn)一步分化為輔助性T 細(xì)胞1（Th1）、輔助性T 細(xì)胞2（Th2）、輔助性T 細(xì)胞17（Th17）、調(diào)節(jié)性T 細(xì)胞（Treg）亞群，不同亞群細(xì)胞因子可互相轉(zhuǎn)化，維持機(jī)體免疫平衡［10-11］。抗原刺激下T 淋巴細(xì)胞激活，可生成大量淋巴因子，并可維持機(jī)體免疫內(nèi)環(huán)境穩(wěn)定，若T 淋巴細(xì)胞亞群平衡異?？山閷?dǎo)免疫性疾病發(fā)生過(guò)程［12-13］。本研究結(jié)果顯示，治療后兩組CD4+、CD3+、CD16+/CD56+高于治療前，CD19+低于治療前，治療后轉(zhuǎn)歸良好組CD4+、CD3+、CD16+/CD56+高于轉(zhuǎn)歸不良組，CD19+低于轉(zhuǎn)歸不良組，且CD4+、CD3+、CD16+/CD56+隨著病情嚴(yán)重程度增加而降低，CD19+隨著病情嚴(yán)重程度增加而升高，提示T 淋巴細(xì)胞亞群失衡可能促進(jìn)LN 病情進(jìn)展，并可增加LN 疾病轉(zhuǎn)歸不良發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)。其原因可能為CD4+、CD3+、CD16+/CD56+水平降低主要為誘導(dǎo)細(xì)胞數(shù)目減少，促使機(jī)體中參與免疫抑制作用的細(xì)胞減少，破壞機(jī)體免疫平衡，降低其免疫抑制作用，進(jìn)而激活自身反應(yīng)性T 細(xì)胞；CD19+增加后可減弱T 抑制細(xì)胞功能，促使機(jī)體產(chǎn)生相應(yīng)抗體，進(jìn)而造成體液、細(xì)胞免疫異常，最終促進(jìn)LN 轉(zhuǎn)歸不良。

補(bǔ)體是一種具有酶活性的球蛋白，補(bǔ)體C3、補(bǔ)體C4 水平降低表明補(bǔ)體活化功能異常，其水平變化與LN 疾病活動(dòng)度呈負(fù)相關(guān)，研究表明免疫復(fù)合物可激活補(bǔ)體，促使SLE 腎臟受累［14］。尿蛋白、尿沉渣紅細(xì)胞數(shù)可反映腎臟病變程度［15］。本研究結(jié)果顯示，轉(zhuǎn)歸不良組血清白蛋白、補(bǔ)體C3、補(bǔ)體C4 水平低于轉(zhuǎn)歸良好組，血肌酐、尿素氮、24 h 尿蛋白水平、尿沉渣紅細(xì)胞數(shù)高于轉(zhuǎn)歸良好組，進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)CD4+、CD3+、CD16+/CD56+與白蛋白、補(bǔ)體C3、補(bǔ)體C4 呈正相關(guān)，與尿素氮、病情嚴(yán)重程度呈負(fù)相關(guān)，而CD19+與之相反，表明T 淋巴細(xì)胞亞群可能通過(guò)調(diào)節(jié)機(jī)體免疫反應(yīng)、炎性反應(yīng)，進(jìn)而促進(jìn)LN 轉(zhuǎn)歸不良。本研究中治療后各指標(biāo)聯(lián)合預(yù)測(cè)疾病轉(zhuǎn)歸的AUC 大于單項(xiàng)預(yù)測(cè)，提示T 淋巴細(xì)胞亞群對(duì)LN 疾病轉(zhuǎn)歸具有一定預(yù)測(cè)價(jià)值?？紤]其原因?yàn)門 淋巴細(xì)胞亞群可誘導(dǎo)Th1、Th2 等其他因子產(chǎn)生，引起LN 患者機(jī)體免疫調(diào)節(jié)功能異常，促進(jìn)LN 病情進(jìn)展，進(jìn)一步影響疾病轉(zhuǎn)歸。

綜上所述，CD4+、CD3+、CD16+/CD56+、CD19+聯(lián)合預(yù)測(cè)可提高對(duì)LN 患者疾病轉(zhuǎn)歸的預(yù)測(cè)價(jià)值，可為判斷LN 病情進(jìn)展及治療方案制定提供科學(xué)依據(jù)。