格列齊特片（Ⅱ）溶出曲線考察與有關(guān)物質(zhì)測定*

劉延娟，楊國寧，蔡 偉，趙蕊蕊，李鵬戰(zhàn)

（山東省菏澤市食品藥品檢驗檢測研究院，山東菏澤 274000）

格列齊特屬磺酰脲類降糖藥，可選擇性地作用于胰島β 細胞，促進胰島素分泌，并提高進食葡萄糖后的胰島素釋放，適用于單用飲食控制療效欠佳的輕、中度2 型糖尿病的治療。有研究發(fā)現(xiàn)，格列齊特可通過抑制哺乳動物雷帕霉素靶蛋白（mTOR）信號通路對高糖誘導(dǎo)的足細胞損傷起防護作用［1］，輔助治療高脂血癥并2型糖尿病療效較好［2-4］，較其他口服降糖藥有更好的控糖作用，臨床應(yīng)用廣泛。本研究中收集了國內(nèi)8 家企業(yè)生產(chǎn)并在山東省內(nèi)流通的58 批格列齊特片（Ⅱ），考察其性狀、鑒別、檢查及含量測定項目，并對樣品進行了溶出曲線分析和雜質(zhì)分析，為生產(chǎn)企業(yè)進一步提升藥品內(nèi)在質(zhì)量和藥品監(jiān)管提供參考［5-6］?，F(xiàn)報道如下。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

Agilent1260 型高效液相色譜儀（美國Agilent 公司）；XS105 型電子分析天平（瑞士Mettler Toledo 公司，精度為0.01 mg）；RC12AD 型自動溶出試驗儀（天津市天大天發(fā)科技有限公司）；SYSTEM 860DL 型自動溶出儀（美國Logan公司）。

1.2 試藥

格列齊特對照品（批號為100269 - 202107，含量≥99.7%），格列齊特雜質(zhì)Ⅰ對照品（批號為101191- 201602，含量99.8%），對甲苯磺酰胺對照品（批號為100131 - 202205，含量99.8%），雜質(zhì)B 對照品（批號為101447 - 201901），均購自中國食品藥品檢定研究院；對甲苯磺酰脲對照品（山東潤森化工有限公司，批號為BH2111005，含量99.5%）；格列齊特片（Ⅱ）樣品58 批次，規(guī)格均為每片80 mg，樣品信息見表1。分別抽取自生產(chǎn)企業(yè)（12批、20.69%）、經(jīng)營企業(yè)（38批、65.52%）和醫(yī)療機構(gòu)（8批、13.79%）。

表1 樣品信息（n=58）Tab.1 Information of samples（n=58）

2 方法與結(jié)果

2.1 溶出曲線考察

方法：根據(jù)藥物溶出曲線測定和相似性比較技術(shù)指導(dǎo)原則方法，考察格列齊特的溶出情況，在適宜的時間點取樣，按紫外-可見分光光度法，在226 nm 波長處測定吸光度。繪制溶出曲線；通過相似因子（f2）法［7］進行溶出曲線比較。

溶液制備：采用溶出試驗儀，以pH 8.6 磷酸鹽緩沖液作溶出介質(zhì)，在15，30，45，60，90，120，150，180，210，240 min 時自動取樣，每次取10 mL，濾過，取續(xù)濾液，作為供試品溶液。取格列齊特對照品20 mg，精密稱定，置250 mL 容量瓶中，加溶出介質(zhì)適量，置溫水浴中使溶解，放冷，加溶出介質(zhì)定容，搖勻，即得對照品溶液。

結(jié)果分析：以H 企業(yè)（為原研藥技術(shù)轉(zhuǎn)移企業(yè)）樣品為參比制劑，比較各企業(yè)樣品溶出情況，結(jié)果見表2和圖1。結(jié)果C企業(yè)樣品和參比制劑最相似，其次是E企業(yè)，其余各企業(yè)樣品和參比制劑比較，f2均大于50。

2.2 有關(guān)物質(zhì)考察

2.2.1 格列齊特雜質(zhì)B 含量測定

色譜條件：色譜柱為Agilent Eclipse XDB - C8柱（250 mm × 4.6 mm，5 μm）；流動相為乙腈- 水- 三乙胺- 三氟醋酸（40∶60∶0.1∶0.1，V/V/V/ V）；流速為1.0 mL/min；檢測波長為235 nm；柱溫為30 ℃；進樣量為20 μL。

溶液制備：取格列齊特雜質(zhì)B 對照品適量，精密稱定，用25%二甲基亞砜乙腈溶液溶解并制成每1 mL 含16 μg 的溶液；精密量取1 mL，置50 mL 容量瓶中，加25%二甲基亞砜乙腈溶液定容，搖勻，作為對照品溶液。取樣品細粉（約相當(dāng)于格列齊特0.4 g）適量，精密稱定，置10 mL 容量瓶中，加25%二甲基亞砜乙腈溶液溶解并定容，搖勻，5 000 r/min 離心10 min，取上清液，濾過，取續(xù)濾液，即得供試品溶液。

方法學(xué)考察：按相關(guān)要求進行方法學(xué)考察，供試品溶液色譜中，在與對照品溶液相同保留時間處有相應(yīng)色譜峰，詳見圖2；精密度、穩(wěn)定性、重復(fù)性試驗的RSD均小于2.0%，表明儀器精密度良好，供試品溶液在室溫放置12 h內(nèi)基本穩(wěn)定，方法重復(fù)性良好。

1. 雜質(zhì)BA. 對照品溶液 B. 供試品溶液圖2 雜質(zhì)B的高效液相色譜圖1.Impurity BA.Reference solution B.Test solutionFig.2 HPLC chromatograms of impurity B

樣品含量測定：取樣品適量，按擬訂方法制備供試品溶液，按擬訂色譜條件進樣測定，記錄峰面積并計算含量。結(jié)果表明，各生產(chǎn)企業(yè)樣品均有雜質(zhì)B檢出，其中G 企業(yè)樣品雜質(zhì)B 的含量較其他企業(yè)高。部分樣品含量測定結(jié)果見表3。

表3 不同企業(yè)部分樣品雜質(zhì)B含量測定結(jié)果（%，n=3）Tab.3 Results of content determination of impurity B in partial samples from different manufacturing enterprises（%，n=3）

2.2.2 雜質(zhì)譜檔案建立

通過分析合成工藝與可能的降解途徑，采用高效液相色譜（HPLC）法，取各批樣品及經(jīng)過破壞性試驗（酸、堿、高溫和光照降解）的樣品適量，按2.2.1項下方法制備供試品溶液，再按2.2.1 項下色譜條件進樣測定，記錄峰面積。雜質(zhì)來源分析見表4（其中，+表示含有雜質(zhì)，+ + 表示雜質(zhì)增加顯著；鹽酸、氫氧化鈉濃度均為1 mol/L），格列齊特片（Ⅱ）雜質(zhì)譜見圖3。格列齊特片（Ⅱ）主要存在6 種雜質(zhì)。通過HPLC 法對照品定位，確認其中4種成分。結(jié)果見表5。

圖3 格列齊特片（Ⅱ）雜質(zhì)的高效液相色譜圖Fig.3 HPLC chromatograms of impurities in Gliclazide Tablets（Ⅱ）

表4 雜質(zhì)來源分析Tab.4 Analysis of impurity sources

表5 格列齊特片（Ⅱ）雜質(zhì)信息Tab.5 Information of impurities in Gliclazide Tablets（Ⅱ）

樣品雜質(zhì)檢測：54批樣品檢出對甲苯磺酰脲，58批樣品檢出對甲苯磺酰胺，42 批樣品在相對保留時間0.39處有雜質(zhì)檢出，55批樣品檢出雜質(zhì)Ⅰ，50批樣品在相對保留時間1.26 處有雜質(zhì)檢出，檢出率分別為93.10%，100%，72.41%，94.83%，86.21%。

3 討論

58 批樣品的單個雜質(zhì)檢出含量在0.010%～0.086%之間，雜質(zhì)總量在0.032%～0.22%之間，樣品含量在97.6%～103.4%之間，均符合2020 年版《中國藥典（二部）》規(guī)定。

本研究結(jié)果顯示，山東省內(nèi)生產(chǎn)流通的格列齊特片（Ⅱ）體外溶出情況與參比制劑比較相似性良好，部分企業(yè)樣品在特定時間點溶出有所差異，主要是因為處方工藝差異造成的，建議相關(guān)企業(yè)改善生產(chǎn)工藝，進一步提高藥品有效性。通過對各企業(yè)樣品的雜質(zhì)分析，發(fā)現(xiàn)部分企業(yè)樣品雜質(zhì)含量與第十版歐洲藥典中對格列齊特原料藥中雜質(zhì)B的限定要求比較，接近或超出原料藥限度（0.000 2%）。

山東省內(nèi)市場上流通的格列齊特片（Ⅱ）質(zhì)量較好?，F(xiàn)行檢驗標準基本能全面反映本藥品質(zhì)量。從探索性研究發(fā)現(xiàn)，部分企業(yè)雜質(zhì)含量偏高，仍存在質(zhì)量風(fēng)險。從用藥安全考慮，建議檢驗標準增加有關(guān)物質(zhì)雜質(zhì)B的定量檢查及其他雜質(zhì)的限量控制，從生產(chǎn)源頭進一步控制和提高藥品質(zhì)量。