45%甲維·虱螨脲水分散粒劑高效液相色譜分析

張 喆，孫甜甜，馬 超，王 娟，李 靜，陳冬梅，白 亮，徐 軍，2*，陳 昶，2*

（1.河北中保綠農(nóng)作物科技有限公司，廊坊 065000；2.中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院植物保護研究所，北京 100193）

甲氨基阿維菌素苯甲酸鹽（Emamectin benzoate）（甲維鹽）是一種高效、低毒、低殘留的十六元大環(huán)內(nèi)酯類殺蟲劑[1]，與氯蟲苯甲酰胺、虱螨脲、蟲螨腈等其他常規(guī)農(nóng)藥無交互抗性[2]。目前甲維鹽在我國廣泛應(yīng)用于防治棉鈴蟲、煙草天蛾和小菜蛾等蔬菜上的害蟲[3]。虱螨脲（Lufenuron）屬新一代高效低毒的苯甲酰脲類殺蟲劑，是通過影響昆蟲幼蟲的脫皮過程而殺死害蟲，主要用于防治玉米、蔬菜、棉花、果樹等鱗翅目幼蟲[4]。

45%甲維·虱螨脲水分散粒劑是一種新型復(fù)配殺蟲劑，兩者復(fù)配，兼具胃毒和觸殺作用。通過影響昆蟲表皮的形成達到殺蟲作用，還能阻礙害蟲神經(jīng)信息傳遞，殺死害蟲，對甘藍菜青蟲具有良好的防治效果[5-6]。目前關(guān)于甲維鹽和虱螨脲單劑的檢測方法國內(nèi)外已有諸多報道，主要以高效液相色譜分析法為主[7-9]。但是兩者復(fù)配制劑分析方法尚未見報道。本研究采用反相高效液相色譜法，使用外標法同時測定45%甲維·虱螨脲水分散粒劑中兩種有效成分的質(zhì)量分數(shù)。該方法操作簡便、快速，分離效果好，結(jié)果重現(xiàn)性好，定量準確，是較為實用的分析方法。

1 材料與方法

1.1 試劑與儀器

甲醇（色譜級）、乙腈（色譜級）、氨水（色譜級），科密歐試劑有限公司；虱螨脲標準品（含量≥98%）、甲維鹽標準品（含量≥97%），沈陽化工研究院有限公司；45%甲維·虱螨脲水分散粒劑，河北中保綠農(nóng)作物科技有限公司。

LC-20A高效液相色譜儀、Wondasil C18Column不銹鋼色譜柱（4.6 mm×250 mm，粒徑5 μm），日本島津公司；0.45 μm孔徑有機過濾器和濾膜，上海密粒膜分離技術(shù)有限公司；AL104電子天平，梅特勒-托利多儀器（上海）有限公司；KQ500DB超聲波清洗機，昆山市超聲儀器有限公司。

1.2 液相色譜分析條件

色譜柱為Wondasil C18Column不銹鋼柱（4.6 mm×250 mm，粒徑5 μm）；流動相為甲醇∶乙腈∶水＋氨水=45∶40∶15（V/V）＋0.1%氨水，流動相溶液經(jīng)濾膜過濾，并進行脫氣；柱溫為40℃，流速為1.0 mL/min，檢測波長為254 nm，進樣量為5 μL。

1.3 溶液配制

分別稱取甲維鹽標準品0.02 g（純度為97.7%，精確至0.000 02 g）和虱螨脲標準品0.16 g（純度為98.4%，精確至0.000 02 g）于100 mL容量瓶中，加入80 mL甲醇，超聲溶解5 min，待標準品完全溶解后，定容并上下顛倒搖勻，制得濃度為1.6 mg/mL的甲維鹽標準溶液，過濾后存于4℃冰箱備用。

稱取含甲維鹽0.02 g（精確至0.000 02 g）和含虱螨脲0.16 g（精確至0.000 02 g）的45%甲維·虱螨脲WDG于100 mL容量瓶中，處理手段與標準溶液相同，制得濃度約為5 mg/mL的溶液，過濾后存于4℃冰箱備用。

1.4 標準曲線的繪制

稱取一定質(zhì)量的甲維鹽和虱螨脲標準品，配制不同濃度的標樣溶液。用1.2節(jié)色譜條件下分別進行分析，以甲維鹽和虱螨脲的質(zhì)量濃度為橫坐標，峰面積為縱坐標，繪制標準曲線，計算甲維鹽和虱螨脲的線性回歸方程。

1.5 計算

試樣中有效成分甲維鹽和虱螨脲的質(zhì)量分數(shù)w1（%）按式（1）進行計算：

式中：A1為標樣溶液中甲維鹽（或虱螨脲）峰面積的平均值，mAU·min；A2為試樣溶液中有效成分甲維鹽（或虱螨脲）檢測峰面積的平均值，mAU·min；m1為甲維鹽（或虱螨脲）標準品的質(zhì)量，g；m2為試樣的質(zhì)量，g；w為甲維鹽（或虱螨脲）標準品的質(zhì)量分數(shù)，%。

分別稱取5份含0.02 g甲維鹽或0.04 g虱螨脲試樣于100 mL容量瓶中定容，再分別加入甲維鹽標準品（約0.02 g）或虱螨脲標準品（約0.04 g），對其有效成分含量進行測定，按式（2）計算回收率。

2 結(jié)果與分析

2.1 檢測波長的選擇

分別對甲維鹽和虱螨脲標樣溶液在190～300 nm范圍內(nèi)進行全波長掃描，獲得了二者的紫外吸收光譜（圖1）。在254 nm處，甲維鹽和虱螨脲的吸光度較高，且雜質(zhì)影響較小。因此，本方法選擇254 nm作為檢測波長。

圖1 甲維鹽和虱螨脲紫外全波長掃描圖

2.2 流動相的選擇

在45%甲維·虱螨脲水分散粒劑有效成分質(zhì)量分數(shù)檢測中，通過不斷的調(diào)整流動相中甲醇、乙腈和水以及氨水的比例，觀察不同流動相組分對應(yīng)的峰型變化和保留時間，依次進行篩選。最終檢測結(jié)果表明，當甲醇∶乙腈∶水＋氨水=45∶40∶15＋0.1%（V/V）時，分離效果最佳，色譜峰峰形尖銳，此條件下，虱螨脲的保留時間為6.5 min，甲維鹽B1b的保留時間為13.6 min，甲維鹽B1a的保留時間為16.4 min，出峰時間短滿足分析要求[10]（見圖2、圖3）。

圖2 甲維鹽和虱螨脲標樣液相色譜圖

圖3 45%甲維·虱螨脲水分散粒劑的液相色譜圖

2.3 分析方法的線性關(guān)系

甲維鹽的質(zhì)量濃度在0.2～2.0 mg/mL范圍內(nèi)，與其相應(yīng)的峰面積呈良好的線性關(guān)系，線性方程為y=0.353x-0.650，R2=0.996 0；虱螨脲的質(zhì)量濃度在0.2～2.0 mg/mL范圍內(nèi)，與其相應(yīng)的峰面積呈良好的線性關(guān)系，線性方程為y=1.061x+9.566，R2=0.998 0。

2.4 分析方法的精密度

在1.2節(jié)所述色譜條件下，對45%甲維·虱螨脲水分散粒劑試樣重復(fù)進行5次獨立測試，分析方法的精密度由表1可知，樣品中甲維鹽的相對標準偏差為0.82%，虱螨脲的相對標準偏差為0.45%，分別小于NY/T 2887—2016《農(nóng)藥產(chǎn)品質(zhì)量分析方法確認指南》中規(guī)定的有效成分相對標準偏差RSD[11]，即2(1-0.5logC)×0.67，其中C為樣品中有效成分含量。以上結(jié)果均符合該規(guī)定的要求，說明該分析方法的精密度良好。

表1 方法精密度測定結(jié)果（n=5）

2.5 分析方法的準確度

回收率計算結(jié)果見表2。甲維鹽和虱螨脲的平均回收率分別為98.67%和100.16%，均可以滿足分析方法[11]的要求，說明該分析方法準確度良好。

表2 分析方法的回收率測定結(jié)果（n=5）

3 結(jié)論

本文建立了能夠同時對45%甲維·虱螨脲水分散粒劑的有效成分甲維鹽和虱螨脲進行檢測的高效液相色譜分析方法，并對此方法進行了合理的驗證。結(jié)果表明，甲維鹽和虱螨脲在該方法下分離效果較好，精密度和準確度較高，線性關(guān)系良好，相對標準偏差分別為0.82%和0.45%，回收率均達到了98%以上，本方法準確度較高，擺脫了當前使用兩種方法分別測定的復(fù)雜步驟，因此該方法在含有甲維鹽和虱螨脲的復(fù)配產(chǎn)品的質(zhì)量控制中具有很強的可行性和實際應(yīng)用價值。