22%噻蟲嗪·高效氯氟氰菊酯懸浮劑對(duì)環(huán)境非靶標(biāo)生物的急性毒性與風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估

趙 玲，沈 鵬，葉 劍，吳 艷，曹沁芳，吳 靜，王洪雷

（1.江蘇恒生檢測(cè)有限公司，南京 210046；2.江蘇省農(nóng)藥研究所股份有限公司，南京 210046）

噻蟲嗪是由諾華公司開發(fā)的新煙堿類殺蟲劑，具有殺蟲活性高，殺蟲譜廣及與環(huán)境相容性好等特點(diǎn)，可以取代高毒性且殘留期長(zhǎng)的有機(jī)磷、有機(jī)氯和氨基甲酸酯類殺蟲劑[1-3]。高效氯氟氰菊酯是一種擬除蟲菊酯類殺蟲、殺螨劑，以觸殺和胃毒作用為主，具有高效、廣譜、光穩(wěn)定性好、低殘留、對(duì)環(huán)境污染小的特點(diǎn)，并逐漸取代有機(jī)氯農(nóng)藥，成為當(dāng)前殺蟲劑市場(chǎng)的主導(dǎo)產(chǎn)品之一[4-8]。隨著噻蟲嗪和高效氯氟氰菊酯的使用越來越廣泛，環(huán)境安全問題以及對(duì)非靶標(biāo)生物的毒害效應(yīng)開始引起人們的關(guān)注，目前關(guān)于兩種農(nóng)藥對(duì)非靶標(biāo)生物的單一毒性已有報(bào)道，但相應(yīng)的聯(lián)合毒性和風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估仍有欠缺。吳若函等[9]2016年研究發(fā)現(xiàn)，噻蟲嗪對(duì)斑馬魚和大型溞毒性均為低毒，但對(duì)蜜蜂、家蠶均有較高毒性，不會(huì)對(duì)水生魚類、溞類造成危害性的影響，但對(duì)陸生生物蜜蜂、家蠶的生存環(huán)境有巨大威脅。史夢(mèng)竹等[10]在2014年的研究顯示，高效氯氟氰菊酯菊酯對(duì)水生生物的急性毒性較高。22%噻蟲嗪·高效氯氟氰菊酯懸浮劑作為兩種農(nóng)藥的混配制劑，其作用快，持效期長(zhǎng)，具有更高的活性、更好的安全性和更廣的殺蟲譜，其聯(lián)合毒性和風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估的研究對(duì)于新型制劑的開發(fā)研究和減輕環(huán)境污染具有重要意義。

現(xiàn)有的高效氯氟氰菊酯的檢測(cè)方法大都采用液相法[11]、氣相法[12-14]、氣質(zhì)法[15]為主，高效氯氟氰菊酯·噻蟲嗪復(fù)配制劑的檢測(cè)方法目前有高效液相色譜分析方法[16]。本研究建立了用液質(zhì)法測(cè)定曝氣自來水和BG11培養(yǎng)基中高效氯氟氰菊酯和噻蟲嗪的定性定量分析方法，測(cè)定了22%噻蟲嗪·高效氯氟氰菊酯懸浮劑對(duì)魚類、溞類、藻類、蜜蜂和家蠶5種非靶標(biāo)生物的毒性并分級(jí)，結(jié)合相關(guān)數(shù)據(jù)進(jìn)行風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估，對(duì)指導(dǎo)產(chǎn)品的科學(xué)合理施用和保護(hù)生態(tài)環(huán)境安全具有重要意義。

1 材料與方法

1.1 試劑和供試物

22%噻蟲嗪·高效氯氟氰菊酯懸浮劑，湖南長(zhǎng)青潤(rùn)慷寶農(nóng)化有限公司；噻蟲嗪標(biāo)樣（純度98.1%）、高效氯氟氰菊酯（純度98.3%），上海市農(nóng)藥研究所有限公司；乙腈（色譜純）、二氯甲烷（色譜純）、甲醇（色譜純），TEDIA公司；氯化鈉（分析純）、乙酸乙酯（分析純），江蘇強(qiáng)盛功能化學(xué)股份有限公司；甲酸（分析純）、重鉻酸鉀（純度99.8%）、乙酸銨（98.0%），國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司。

斑馬魚（Danio rerio），南京家云水族館；大型溞（Daphnia magna），武漢科樂多生物科技有限公司；羊角月牙藻（Pseudokirchneriella subcapitata），中國科學(xué)院淡水藻種庫；意大利蜜蜂（Apis mellifera），南京市溧水區(qū)柘塘鎮(zhèn)蜜蜂養(yǎng)殖廠；家蠶‘菁松×皓月’（Bombyx mori），諸暨健寶農(nóng)業(yè)開發(fā)有限公司；小型熱帶魚專用飼料，山東貝森水產(chǎn)飼料有限公司。

1.2 儀器設(shè)備

ACQUITY Ultra Performance LC/TQD液相質(zhì)譜聯(lián)用儀，美國沃特世科技公司；XS105DU分析天平、S2-T Kit pH計(jì)，梅特勒托利多；純水儀，默克化工技術(shù)（上海）有限公司；TG20M離心機(jī)，湖南平凡科技有限公司；HQ40D溶氧儀，哈希公司；HI96735總硬度濃度測(cè)定儀，哈納公司；TES-1330A照度計(jì)，泰仕公司；MGC-250BP-2光照培養(yǎng)箱、LRH-250生化培養(yǎng)箱，上海一恒科學(xué)儀器有限公司；NV24A-Ⅱ濃縮氮吹儀，天津博納艾杰爾科技有限公司。

1.3 儀器條件

采用液相色譜-三重四極桿質(zhì)譜法測(cè)定，液相條件為：色譜柱Eclipse Plus C1（82.1 mm×50 mm，1.8 μm），Agilent；柱溫：30℃；進(jìn)樣體積：10 μL；噻蟲嗪流動(dòng)相為0.1%甲酸水：乙腈=10∶90（V∶V），流速0.3 mL/min；高效氯氟氰菊酯流動(dòng)相為0.1%甲酸水（含5.0 mmol/L乙酸銨）：乙腈=10∶90（V∶V），流速0.350 mL/min。質(zhì)譜條件：采用多離子反應(yīng)監(jiān)測(cè)（MRM）；正離子模式；電噴霧離子源（ESI）；離子源溫度：110℃；脫溶劑氣溫度：400℃；毛細(xì)管電壓：3.00 kV；脫溶劑氣類型：N2；脫溶劑氣流量：500 L/Hr；碰撞氣體類型：Ar。具體質(zhì)譜參數(shù)見表1。

表1 多反應(yīng)監(jiān)測(cè)（MRM）的條件

1.4 樣液前處理

魚、溞和藻類試驗(yàn)藥液中噻蟲嗪前處理：取5 mL溶液至50 mL具塞離心管中，加入2 g氯化鈉，加入5 mL乙腈溶液，振蕩混勻，渦旋3 min，靜置5 min，取1 mL上清液，過0.22 μm有機(jī)濾膜至進(jìn)樣瓶，待測(cè)。

魚和溞類試驗(yàn)藥液中高效氯氟氰菊酯前處理：取50 mL溶液到分液漏斗中，加入25 mL二氯甲烷，振搖1 min，取出萃取液至圓底燒瓶中，再重復(fù)提取2次，合并有機(jī)相，于旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀30℃濃縮近干，用5 mL乙腈超純水混合溶液（V∶V=1∶1）溶解，取1 mL復(fù)溶后過0.22 μm有機(jī)濾膜至進(jìn)樣瓶，供測(cè)。

藻類試驗(yàn)藥液中高效氯氟氰菊酯前處理：取1 mL配制好的溶液到5 mL離心管中，加入1 mL乙腈，渦旋3 min，混勻，取1 mL過0.22 μm有機(jī)濾膜至進(jìn)樣小瓶，供測(cè)。

1.5 標(biāo)準(zhǔn)溶液配制

準(zhǔn)確稱取17.79 mg的噻蟲嗪標(biāo)準(zhǔn)品和18.81 mg的高效氯氟氰菊酯標(biāo)準(zhǔn)品，分別用乙腈定容至20 mL容量瓶中，搖勻，配制成質(zhì)量濃度為873 mg/L的高效氯氟氰菊酯和質(zhì)量濃度為925 mg/L的噻蟲嗪儲(chǔ)備液備用。

1.6 非靶標(biāo)生物的急性毒性試驗(yàn)

本試驗(yàn)遵循中華人民共和國農(nóng)業(yè)農(nóng)村部公告第2570號(hào)《農(nóng)藥登記試驗(yàn)質(zhì)量管理規(guī)范》[17]、OECD準(zhǔn)則[18]和GB/T 31270—2014《化學(xué)農(nóng)藥環(huán)境安全評(píng)價(jià)試驗(yàn)準(zhǔn)則》[19]，對(duì)22%噻蟲嗪·高效氯氟氰菊酯懸浮劑進(jìn)行了對(duì)5種非靶標(biāo)生物的急性毒性試驗(yàn)。

（1）魚類急性毒性試驗(yàn)：選用斑馬魚作為供試生物，在試驗(yàn)條件下馴養(yǎng)7 d，采用半靜態(tài)法進(jìn)行染毒，正式試驗(yàn)設(shè)置有效成分質(zhì)量濃度6.00、9.60、15.4、24.6、39.4 μg/L，同時(shí)設(shè)置一個(gè)空白對(duì)照組，濃度組不設(shè)重復(fù)，每組投放7尾魚，每48 h更換一次試驗(yàn)溶液，暴露96 h，暴露開始后3、6、24、48、72、96 h觀察魚的死亡情況，分別在暴露0、48 h和96 h從濃度組和空白對(duì)照組取樣上機(jī)測(cè)定濃度，確保試驗(yàn)期間試驗(yàn)藥液中供試物濃度不低于理論濃度的80%。如果試驗(yàn)期間試驗(yàn)藥液中供試物濃度發(fā)生超過20%的偏離，則應(yīng)檢測(cè)試驗(yàn)藥液中供試物的實(shí)際濃度并以此計(jì)算結(jié)果。下述試驗(yàn)亦如此。

（2）溞類急性活動(dòng)抑制試驗(yàn)：選用大型溞作為供試生物，采用靜態(tài)法進(jìn)行染毒，正式試驗(yàn)設(shè)置4.00、7.20、13.0、23.4 μg/L和42.1 μg/L 5個(gè)有效成分質(zhì)量濃度，同時(shí)設(shè)置1個(gè)空白對(duì)照組，濃度組設(shè)4個(gè)重復(fù)，每組放入5只幼溞，燒杯加蓋培養(yǎng)皿后放入光照培養(yǎng)箱中暴露48 h，試驗(yàn)期間不曝氣、不喂食，在第24 h和48 h觀察并記錄幼溞的受抑制情況。分別在暴露0 h和48 h，從各濃度組和空白對(duì)照組取樣上機(jī)測(cè)定濃度，確保試驗(yàn)期間試驗(yàn)藥液中供試物濃度不低于理論濃度的80%。

（3）藻類生長(zhǎng)抑制試驗(yàn)：選用羊角月牙藻作為供試生物，對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的純種藻，在試驗(yàn)條件下培養(yǎng)，每隔3 d接種一次，反復(fù)接種2次，以此作為試驗(yàn)用藻。采用靜態(tài)試驗(yàn)，正式試驗(yàn)共設(shè)置0.300、0.930、2.88、8.93 mg/L和27.7 mg/L 5個(gè)有效成分質(zhì)量濃度組和一個(gè)空白對(duì)照組。濃度組設(shè)置3個(gè)重復(fù)，使用生物顯微鏡確定羊角月牙藻培養(yǎng)液細(xì)胞濃度，計(jì)算得到預(yù)培養(yǎng)的兩瓶羊角月牙藻細(xì)胞濃度分別為2.95×106個(gè)/mL和3.05×106個(gè)/mL，選擇濃度大的藻液作為接種液，用移液器向每個(gè)空白對(duì)照組和濃度組錐形瓶中接種278 μL藻液，使得羊角月牙藻初始濃度約為1.00×104個(gè)/mL。接種后將錐形瓶轉(zhuǎn)移至恒溫光照搖床中培養(yǎng)。錐形瓶隨機(jī)放在搖床上，并每天更換其位置，試驗(yàn)周期為72 h，分別在暴露0、24、48、72 h，從各濃度組和空白對(duì)照組中取液上機(jī)測(cè)定濃度。

（4）對(duì)蜜蜂的急性經(jīng)口毒性試驗(yàn)：試驗(yàn)選用蜜蜂作為供試生物，采用飼喂染毒糖水法對(duì)蜜蜂進(jìn)行染毒。根據(jù)預(yù)試驗(yàn)結(jié)果，正式試驗(yàn)設(shè)置0.015 0、0.030 0、0.060 0、0.120 μg/蜂和0.240 μg/蜂5個(gè)有效成分質(zhì)量濃度組和1個(gè)空白對(duì)照組，空白對(duì)照組和濃度組各設(shè)3個(gè)重復(fù)，每個(gè)重復(fù)10只蜜蜂。使用二氧化碳麻醉系統(tǒng)對(duì)蜜蜂進(jìn)行麻醉，并隨機(jī)分配到貼標(biāo)簽的試驗(yàn)籠中，饑餓處理2 h。然后將試驗(yàn)溶液（空白對(duì)照組為50%w/v的蔗糖溶液）放入做有標(biāo)記的塑料離心管（底部有一個(gè)孔，直徑為2 mm）做成的喂食器中，每個(gè)重復(fù)的施藥量為200 μL，放入黑暗環(huán)境中48 h。逐個(gè)稱量測(cè)試前的空塑料離心管、加藥后和喂食后的離心管，計(jì)算食物消耗量，把每個(gè)重復(fù)的平均食物消耗量作為該重復(fù)中每只蜜蜂的食物消耗量。記錄給藥后24 h和48 h蜜蜂的死亡數(shù)和異常行為。

（5）對(duì)家蠶的急性毒性試驗(yàn)：選用家蠶作為供試生物，在人工氣候箱中培養(yǎng)，培育至2齡。采用浸葉法對(duì)家蠶進(jìn)行染毒?；陬A(yù)試驗(yàn)結(jié)果，正式試驗(yàn)設(shè)置0.015、0.030、0.060、0.120 mg/L和0.240 mg/L 5個(gè)有效成分質(zhì)量濃度組和一個(gè)空白對(duì)照組，空白對(duì)照組和濃度組各3個(gè)重復(fù)，每個(gè)重復(fù)20頭家蠶。將測(cè)試培養(yǎng)皿放置于人工氣候箱內(nèi)培養(yǎng)96 h，并且記錄試驗(yàn)開始后24、48、72 h和96 h家蠶的死亡數(shù)和異常行為。

通過Bliss軟件計(jì)算22%噻蟲嗪·高效氯氟氰菊酯懸浮劑對(duì)非靶標(biāo)生物的半致死濃度LC50、半數(shù)效應(yīng)濃度EC50、半致死劑量LD50及其95%置信限。

1.7 風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估

1.7.1 蜜蜂風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估

遵照NY/T 2882—2016《農(nóng)藥登記環(huán)境風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估指南》第4部分：蜜蜂[20]，對(duì)蜜蜂進(jìn)行風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估。噴施農(nóng)藥暴露場(chǎng)景的風(fēng)險(xiǎn)商值（RQSP）按式（1）進(jìn)行計(jì)算。

式中：RQSP為噴施農(nóng)藥暴露場(chǎng)景的風(fēng)險(xiǎn)商值；AR為推薦的農(nóng)藥單次最高施用量，g/hm2；LD50為經(jīng)口和接觸的蜜蜂半致死劑量，μg/蜂。

1.7.2 家蠶風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估

遵照NY/T 2882—2016《農(nóng)藥登記環(huán)境風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估指南》第5部分：家蠶[20]，本評(píng)估采用單次施藥飄移場(chǎng)景來進(jìn)行暴露分析。在飄移場(chǎng)景下進(jìn)行評(píng)估并計(jì)算PEC，單次施藥后計(jì)算最外圍桑樹上的預(yù)測(cè)暴露濃度（PECsa-fr）和次外圍桑樹上的預(yù)測(cè)暴露濃度（PECsa-sr）。采用試驗(yàn)得出的毒性終點(diǎn)（EnP）和相應(yīng)的不確定因子（UF），計(jì)算預(yù)測(cè)無效應(yīng)濃度（PNEC）。根據(jù)PEC和PNEC計(jì)算RQ。計(jì)算公式見式（2）～（6）。

式中：PECsa-fr為單次施藥后最外圍一行桑樹上的預(yù)測(cè)暴露濃度，mg/kg桑葉；PDFfr為最外圍一行桑樹上的飄移因子；PECsa-sr為單次施藥后次外圍一行桑樹上的預(yù)測(cè)暴露濃度，mg/kg桑葉；DFphi為桑葉上農(nóng)藥的降解系數(shù)；DT50為農(nóng)藥在桑葉上的降解半衰期，d；PHI為農(nóng)藥最后一次使用距離桑葉采收的間隔期，d；PNEC 為預(yù)測(cè)無效應(yīng)濃度，mg/kg桑葉；EnP為試驗(yàn)得出的毒性終點(diǎn)，mg/kg桑葉；UF為不確定因子。

按式（7）計(jì)算修正后的半致死濃度（LC50-C），mg/kg桑葉。

式中：Fc為修正系數(shù)，默認(rèn)為0.46 L/kg桑葉。

2 結(jié)果與分析

2.1 線性關(guān)系分析

在0.01～1 mg/L范圍內(nèi)，噻蟲嗪標(biāo)準(zhǔn)溶液質(zhì)量濃度與峰面積的線性方程為y=268 256x＋375.681，R2=0.999 325；高效氯氟氰菊酯標(biāo)準(zhǔn)溶液質(zhì)量濃度與峰面積的線性方程為y=159 725x＋869.932，R2=0.997 748，R2均＞0.99，線性相關(guān)性良好，符合土壤和水中化學(xué)農(nóng)藥分析方法建立和驗(yàn)證指南[17]中對(duì)相關(guān)系數(shù)的要求。

2.2 準(zhǔn)確度和精密度分析

向空白曝氣自來水和BG11培養(yǎng)基溶液加標(biāo)進(jìn)行添加回收試驗(yàn)，每檔濃度設(shè)置5平行，噻蟲嗪和高效氯氟氰菊酯在水中的平均回收率和相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD）見表2。噻蟲嗪、高效氯氟氰菊酯平均回收率分別為90.4%～103.0%和78.2%～96.3%；RSD分別為1.86%～9.03%和0.593%～3.78%。噻蟲嗪和高效氯氟氰菊酯在曝氣自來水中的定量限分別為0.001 5 mg/L和0.001 mg/L；噻蟲嗪和高效氯氟氰菊酯在BG11培養(yǎng)基中的定量限分別為0.05 mg/L和0.03 mg/L。均符合土壤和水中化學(xué)農(nóng)藥分析方法建立和驗(yàn)證指南（NY/T 3151—2017）[21]中對(duì)回收率、精密度和定量限的要求。

表2 添加回收率和精密度（n=5）

2.3 毒性效應(yīng)

2.3.1 對(duì)斑馬魚的急性毒性

在斑馬魚急性毒性試驗(yàn)的96 h暴露期間，空白對(duì)照組的死亡率為0%，斑馬魚無異常行為；藥劑處理組出現(xiàn)躺在缸底、翻白、側(cè)游等異常行為。根據(jù)試驗(yàn)終點(diǎn)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析及毒性等級(jí)劃分，22%噻蟲嗪·高效氯氟氰菊酯懸浮劑對(duì)斑馬魚的急性毒性96 h-LC50值為5.12 μg/L（表3），根據(jù)GB/T 31270—2014《化學(xué)農(nóng)藥環(huán)境安全評(píng)價(jià)試驗(yàn)準(zhǔn)則》[19]中農(nóng)藥對(duì)魚類的毒性等級(jí)劃分標(biāo)準(zhǔn)，22%噻蟲嗪·高效氯氟氰菊酯懸浮劑對(duì)斑馬魚的急性毒性為劇毒。

表3 22%噻蟲嗪·高效氯氟氰菊酯懸浮劑對(duì)非靶標(biāo)生物的毒性數(shù)據(jù)分析

2.3.2 對(duì)大型溞的急性毒性

在大型溞急性活動(dòng)抑制試驗(yàn)的48 h暴露期間，空白對(duì)照組大型溞無異常行為，藥劑處理組的大型溞除死亡外也無異常行為。根據(jù)試驗(yàn)終點(diǎn)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析及毒性等級(jí)劃分，22%噻蟲嗪·高效氯氟氰菊酯懸浮劑對(duì)大型溞的急性毒性48 h-EC50值為7.75 μg/L（表3），根據(jù)GB/T 31270—2014《化學(xué)農(nóng)藥環(huán)境安全評(píng)價(jià)試驗(yàn)準(zhǔn)則》[19]中農(nóng)藥對(duì)溞類的毒性等級(jí)劃分標(biāo)準(zhǔn)，22%噻蟲嗪·高效氯氟氰菊酯懸浮劑對(duì)大型溞的急性毒性為劇毒。

2.3.3 對(duì)羊角月牙藻的毒性

在對(duì)羊角月牙藻的生長(zhǎng)抑制的72 h暴露期間，用生物顯微鏡對(duì)24、48 h和72 h的羊角月牙藻進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù)，并在結(jié)束暴露時(shí)用顯微鏡觀察細(xì)胞形態(tài)?？瞻讓?duì)照組藻細(xì)胞生長(zhǎng)狀況良好，外觀正常，未出現(xiàn)中毒癥狀，藥劑處理組藻細(xì)胞受到一定程度的生長(zhǎng)抑制，并出現(xiàn)細(xì)胞碎片的中毒癥狀。根據(jù)試驗(yàn)終點(diǎn)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析及毒性等級(jí)劃分，22%噻蟲嗪·高效氯氟氰菊酯懸浮劑對(duì)羊角月牙藻的急性毒性72 h-ErC50值為4.37 mg/L；72 h-EyC50值為0.591 mg/L（表3），根據(jù)GB/T 31270—2014《化學(xué)農(nóng)藥環(huán)境安全評(píng)價(jià)試驗(yàn)準(zhǔn)則》[19]中農(nóng)藥對(duì)藻類的毒性等級(jí)劃分標(biāo)準(zhǔn)，以生長(zhǎng)率抑制率為毒性終點(diǎn)計(jì)，22%噻蟲嗪·高效氯氟氰菊酯懸浮劑對(duì)羊角月牙藻的急性毒性為低毒；以生物量增長(zhǎng)抑制率為毒性終點(diǎn)計(jì)，22%噻蟲嗪·高效氯氟氰菊酯懸浮劑對(duì)羊角月牙藻的急性毒性為中毒。

2.3.4 對(duì)蜜蜂的毒性

在蜜蜂急性經(jīng)口毒性試驗(yàn)的48 h給藥期間，藥劑處理組蜜蜂出現(xiàn)躺在籠內(nèi)和垂死的異常行為，空白對(duì)照組蜜蜂無異常行為。根據(jù)試驗(yàn)終點(diǎn)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析及毒性等級(jí)劃分，22%噻蟲嗪·高效氯氟氰菊酯懸浮劑對(duì)蜜蜂的急性毒性48 h-LC50值為0.044 8 μg/蜂（表3），根據(jù)GB/T 31270—2014《化學(xué)農(nóng)藥環(huán)境安全評(píng)價(jià)試驗(yàn)準(zhǔn)則》[19]中農(nóng)藥對(duì)蜜蜂的毒性等級(jí)劃分標(biāo)準(zhǔn)，22%噻蟲嗪·高效氯氟氰菊酯懸浮劑對(duì)蜜蜂的急性毒性為高毒。

2.3.5 對(duì)家蠶急性毒性

在家蠶急性毒性試驗(yàn)的96 h給藥期間，藥劑處理組家蠶出現(xiàn)甩頭、晃頭、扭曲掙扎、吐水、攝食減少或抗拒、全部死亡的異常行為，空白對(duì)照組蜜蜂無異常行為。根據(jù)各試驗(yàn)終點(diǎn)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析及毒性等級(jí)劃分，22%噻蟲嗪·高效氯氟氰菊酯懸浮劑對(duì)家蠶的急性毒性96 h-LC50值為0.037 mg/L（表3），根據(jù)GB/T 31270—2014《化學(xué)農(nóng)藥環(huán)境安全評(píng)價(jià)試驗(yàn)準(zhǔn)則》[19]中農(nóng)藥對(duì)家蠶的毒性等級(jí)劃分標(biāo)準(zhǔn)，22%噻蟲嗪·高效氯氟氰菊酯懸浮劑對(duì)家蠶的急性毒性為劇毒。

2.4 初級(jí)風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估

2.4.1 蜜蜂

根據(jù)表4的初級(jí)風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估結(jié)果表明，22%噻蟲嗪·高效氯氟氰菊酯懸浮劑對(duì)蜜蜂的風(fēng)險(xiǎn)商值RQSP為10.312 5，大于1，風(fēng)險(xiǎn)不可接受。另外22%噻蟲嗪·高效氯氟氰菊酯懸浮劑不屬于昆蟲生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑，無需通過蜜蜂幼蟲飼喂試驗(yàn)進(jìn)行風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估。

表4 22%噻蟲嗪·高效氯氟氰菊酯懸浮劑對(duì)蜜蜂的風(fēng)險(xiǎn)商值

2.4.2 家蠶

家蠶在飄移場(chǎng)景下進(jìn)行評(píng)估并計(jì)算單次施藥條件下的預(yù)測(cè)暴露濃度（PEC），22%噻蟲嗪·高效氯氟氰菊酯懸浮劑單次噴霧施用0.023 1 kg/hm2，施藥后計(jì)算供試最外圍桑樹上的預(yù)測(cè)暴露濃度（PECsa-fr）為2.01 mg/kg桑葉，次外圍桑樹上的預(yù)測(cè)暴露濃度（PECsa-sr）為0.12 mg a.i./kg桑葉（表5）。最外圍桑樹場(chǎng)景下和次外圍桑樹場(chǎng)景下的風(fēng)險(xiǎn)商值RQ均大于1（表6），風(fēng)險(xiǎn)不可接受。

表5 22%噻蟲嗪·高效氯氟氰菊酯懸浮劑在飄移場(chǎng)景下對(duì)家蠶的初級(jí)暴露分析結(jié)果

表6 對(duì)家蠶的風(fēng)險(xiǎn)商值

3 結(jié)果與討論

本研究建立了基于液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法測(cè)定曝氣自來水和BG11培養(yǎng)基中高效氯氟氰菊酯和噻蟲嗪的定性定量分析方法，本方法簡(jiǎn)單快捷、準(zhǔn)確度和精密度好，能夠滿足對(duì)水生生物試驗(yàn)環(huán)境不同基質(zhì)中此類農(nóng)藥同時(shí)測(cè)定的要求。在實(shí)驗(yàn)室環(huán)境條件下進(jìn)行了22%噻蟲嗪·高效氯氟氰菊酯懸浮劑對(duì)非靶標(biāo)生物的急性毒性試驗(yàn)，并根據(jù)GB/T 31270—2014《化學(xué)農(nóng)藥環(huán)境安全評(píng)價(jià)試驗(yàn)準(zhǔn)則》[19]進(jìn)行毒性等級(jí)劃分。

22%噻蟲嗪·高效氯氟氰菊酯懸浮劑對(duì)斑馬魚、大型溞的急性毒性為“劇毒”，對(duì)水生生物魚和溞的危害比較大。據(jù)報(bào)道30%噻蟲嗪懸浮劑對(duì)斑馬魚的毒性為微毒[22]，25%噻蟲嗪水分散粒劑對(duì)斑馬魚和大型溞的毒性均為低毒[9]，10%高效氯氟氰菊酯微囊懸浮劑、2.5%高效氯氟氰菊酯乳油和10%高效氯氟氰菊酯可濕性粉劑對(duì)斑馬魚的毒性均為劇毒[23]，8%高效氯氟氰菊酯微乳劑對(duì)斑馬魚、大型溞的毒性分別為劇毒和中毒[10]，本研究22%噻蟲嗪·高效氯氟氰菊酯懸浮劑對(duì)斑馬魚的毒性與報(bào)道的不同劑型和含量的高效氯氟氰菊酯的毒性效應(yīng)一致。22%噻蟲嗪·高效氯氟氰菊酯懸浮劑對(duì)大型溞毒性效應(yīng)為劇毒，遠(yuǎn)高于報(bào)道過的兩類單劑的毒性，可能混配制劑的兩個(gè)有效成分存在加和效應(yīng)，或者制劑加工過程中使用了毒性較大的助劑所導(dǎo)致。毒性效應(yīng)受到多種環(huán)境因子制約并與生物的種類有關(guān)，本研究?jī)H是混配農(nóng)藥對(duì)非靶標(biāo)生物毒性效應(yīng)的初步研究，對(duì)于農(nóng)藥的多種有效成分聯(lián)合使用后的效應(yīng)機(jī)制，還有待進(jìn)一步探討。

基于生長(zhǎng)率抑制率和生物量增長(zhǎng)抑制率，22%噻蟲嗪·高效氯氟氰菊酯懸浮劑對(duì)羊角月牙藻的毒性分別為“低毒”和“中毒”，對(duì)藻類的危害相對(duì)較小。未見此類農(nóng)藥制劑對(duì)藻類的毒性報(bào)道，僅有原藥的毒性數(shù)據(jù)報(bào)道，如96%高效氯氟氰菊酯原藥對(duì)普通小球藻的毒性為低毒[7]，噻蟲嗪原藥對(duì)綠藻的毒性為低毒[24]，混配制劑與原藥的毒性比較接近。

總體來說，除了對(duì)羊角月牙藻外，該混配制劑對(duì)其他水生生物的毒性都比較強(qiáng)，田間施用過程中應(yīng)注意使用劑量、范圍以及方法，還應(yīng)盡量減少農(nóng)藥從施用區(qū)域遷移至鄰近水體。

22%噻蟲嗪·高效氯氟氰菊酯懸浮劑對(duì)蜜蜂的急性毒性為高毒，對(duì)家蠶的急性毒性為劇毒，與其他研究報(bào)道一致[9-10,25]。22%噻蟲嗪·高效氯氟氰菊酯懸浮劑用于小麥噴霧使用，其對(duì)蜜蜂和家蠶的風(fēng)險(xiǎn)均為不可接受。根據(jù)NY/T 2882—2016《農(nóng)藥登記環(huán)境風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估指南》第4部分：蜜蜂[20]中的規(guī)定，由于對(duì)蜜蜂的風(fēng)險(xiǎn)不可接受，可選擇在產(chǎn)品標(biāo)簽上標(biāo)注在施藥區(qū)域（周圍）開花植物花期禁用以及施用農(nóng)藥三日前告知所在地及附近3 000 m以內(nèi)的養(yǎng)蜂者。而根據(jù)NY/T 2882—2016《農(nóng)藥登記環(huán)境風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估指南》第5部分：家蠶[24]中的規(guī)定，在飄移場(chǎng)景下，當(dāng)初級(jí)風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估顯示不可接受時(shí)，首先考慮采用有效的風(fēng)險(xiǎn)降低措施，因此可選擇在產(chǎn)品標(biāo)簽上標(biāo)注在蠶室及桑園附近禁用，以及在桑田周圍種植高大樹木作為隔離帶以減少飄移到桑田的農(nóng)藥量。