神經(jīng)遞質(zhì)γ-氨基丁酸對小鼠B淋巴細(xì)胞分化和抗體生成的影響

宋廣平，吳 敏，梁麗云，李慧艷，張學(xué)敏，李 平，張宇程

（1.國家生物醫(yī)學(xué)分析中心，北京 100850；2.中國人民解放軍總醫(yī)院第一醫(yī)學(xué)中心腎臟病醫(yī)學(xué)部，北京 100853）

高親和力中和抗體可有效抵抗機體感染病原微生物，也是絕大多數(shù)疫苗發(fā)揮作用的基礎(chǔ)［1-3］。生發(fā)中心是機體遇到抗原刺激發(fā)生免疫反應(yīng)時，在外周淋巴器官（如脾）或淋巴結(jié)中短暫存在的特定結(jié)構(gòu)，是B淋巴細(xì)胞克隆增殖和親和力成熟的場所，在此最終篩選出能產(chǎn)生高親和力抗體的漿細(xì)胞［4-6］。目前，對生發(fā)中心調(diào)控的研究主要集中在B細(xì)胞與濾泡輔助性T 細(xì)胞（follicular helper T cells，Tfh）和濾泡樹突狀細(xì)胞互作方面，著重闡述Tfh 和濾泡樹突狀細(xì)胞如何通過分泌細(xì)胞因子及細(xì)胞表面的配體受體如何結(jié)合而調(diào)控B細(xì)胞成熟、生發(fā)中心形成、抗體類型轉(zhuǎn)換和體細(xì)胞超突變等功能［7-9］。但越來越多的研究表明，神經(jīng)系統(tǒng)與免疫系統(tǒng)聯(lián)系緊密，且存在交互信息傳遞［10-11］。近年來研究發(fā)現(xiàn)，人Tfh 能分泌多巴胺作用于B 細(xì)胞，促進生發(fā)中心反應(yīng)［12］；且腺苷酸可通過作用于Tfh上的腺苷酸受體，抑制Tfh 分化和生發(fā)中心B 細(xì)胞形成［13］。還有研究發(fā)現(xiàn)，大腦-脾的神經(jīng)-免疫調(diào)控軸可通過去甲腎上腺素和乙酰膽堿等遞質(zhì)，促進漿細(xì)胞的生成和疫苗接種引起的抗體免疫應(yīng)答［14］。因此，神經(jīng)遞質(zhì)對B細(xì)胞分化的影響成為神經(jīng)免疫領(lǐng)域的研究重點和前沿。

本研究以B細(xì)胞上表達的神經(jīng)遞質(zhì)受體為切入點，用B細(xì)胞體外分化體系和經(jīng)典的乙?；?-羥基-3 硝基苯基偶聯(lián)鑰孔血藍(lán)蛋白（4-hydroxy-3-nitrophenylacetyl conjugated to keyhole limpet hemocyanin，NP-KLH）抗原免疫小鼠模擬疫苗接種模型，檢測神經(jīng)遞質(zhì)γ-氨基丁酸（gamma-aminobutyric acid，GABA）對小鼠B細(xì)胞分化和抗體生成的影響，為相關(guān)疾病的治療和疫苗研發(fā)提供新思路。

1 材料與方法

1.1 動物、試劑和儀器

雌性C57BL/6 小鼠，18～22 g，8～12 周，動物許可證號SCXK（京）2016-0011，北京維通利華實驗動物技術(shù)有限公司；胎牛血清（fetal bovine serum，F(xiàn)BS），美 國Gibco 公 司；DMEM 培 養(yǎng) 基、RPMI 1640 培養(yǎng)基、青-鏈霉素雙抗、丙酮酸鈉、HEPES、胰蛋白酶、非必需氨基酸和EDTA，中科邁晨（北京）生物科技有限公司；Prime Script RT Master Mix，日本TaKaRa 公司；紅細(xì)胞裂解液和鋁佐劑，美國Thermo Fisher Scientific 公司；綿羊紅細(xì)胞（sheep red blood cells，SRBC），鄭州百基生物科技有限公司；NP-KLH、乙?；?-羥基-3 硝基苯基偶聯(lián)牛血清蛋 白（4-hydroxy-3-nitrophenylacetyl conjugated to bovine serum albumin，NP3-BSA），乙酰化4-羥基-3 硝基苯基偶聯(lián)藻紅蛋白（4-hydroxy-3-nitrophenylacetyl conjugated to phycoerythrin，NP-PE），美國Biosearch Technologies公司；GABA，美國MCE公司；小鼠白細(xì)胞介素4（interleukin-4，IL-4），美國PeproTech 公司；HRP-山羊抗小鼠IgG 抗體，美國Jackson Immuno Research 公司；生物素-大鼠抗小鼠CD19 抗體、EF450-大鼠抗小鼠IgM 抗體和FVS 死活細(xì)胞染料，美國eBioscience 公司；純化的大鼠抗小鼠CD16/32、FITC-大鼠抗小鼠B220、Per-CP-大鼠抗小鼠B220、BV510-大鼠抗小鼠B220、APC-大鼠抗小鼠GL7、太平洋藍(lán)（Pacific blue）-大鼠抗小鼠GL7、APC-大鼠抗小鼠CD138、PerCP-大鼠抗小鼠Gr-1、FITC-大鼠抗小鼠IgG1及PE-小鼠抗小鼠Fas 抗體，美國BioLegend 公司；FITC-大鼠抗小鼠CD19 抗體、PE-Cy7-倉鼠抗小鼠Fas 抗體和BD Cytofix/Cytoperm?細(xì)胞固定/通透液試劑盒，美國BD Biosciences 公司。磁力分選架、MS 分選柱、抗生物素的磁珠，美國Mitenyi Biotec 公司；Thermo FORMA311 型CO2培養(yǎng)箱和Q3 實時熒光定量PCR（real-time quantitative PCR，RT-qPCR）儀，美國Thermo Fisher Scientific 公司；5424R 型低溫高速離心機和5424 型常溫高速離心機，德國Eppendorf公司；i3酶聯(lián)免疫檢測儀，美國Molecular Devices 公司；流式細(xì)胞儀BD FACS Aria Ⅱ，美國BD Biosciences公司。

1.2 B細(xì)胞轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù)分析

為分析小鼠脾幼稚B細(xì)胞和生發(fā)中心B細(xì)胞上神經(jīng)遞質(zhì)受體表達，分析了Komban等［15］于2019年Nat Commun發(fā)表的研究論文附加原始轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù)，該數(shù)據(jù)已上傳至https：//www.ncbi.nlm.nih.gov/geo/query/acc.cgi？acc=GSE129103。通過生物信息學(xué)方法，分析B細(xì)胞上神經(jīng)遞質(zhì)受體表達。

1.3 流式細(xì)胞術(shù)分選SRBC 免疫小鼠幼稚B 細(xì)胞、生發(fā)中心B細(xì)胞和漿細(xì)胞

ip 給予1×109SRBC 免疫小鼠，7 d 后取脾，研磨并裂解紅細(xì)胞。取1×108脾細(xì)胞，用500 μL 無菌流式緩沖液〔PBS（pH 7.4）+1%FBS+5 mmol·L-1EDTA〕重懸細(xì)胞。加入5 μg 抗CD16/32 抗 體 冰上孵育10 min，封閉IgG 抗體受體。加入100 μL抗體混合液（FITC-大鼠抗小鼠B220 抗體4 μg、PE-Cy7-倉鼠抗小鼠Fas 抗體2 μg、太平洋藍(lán)-大鼠抗小鼠GL7 抗體2 μg 和APC-大鼠抗小鼠CD138 抗體2 μg），F(xiàn)VS 死活細(xì)胞染料按說明書加入。另設(shè)空白染色管及每種熒光抗體的單標(biāo)管，將樣本與抗體混合均勻后4 ℃孵育30 min。最后加入流式緩沖液1 mL清洗細(xì)胞，500×g離心3 min，棄上清。用無菌PBS 5 mL 重懸細(xì)胞，加至流式上樣管內(nèi)，用BD 流式細(xì)胞儀分選幼稚B 細(xì)胞（B220+FaslowGL7low）、生發(fā)中心B 細(xì)胞（B220+FashiGL7hi）和漿細(xì)胞（CD138+）。

1.4 RT-qPCR檢測幼稚B細(xì)胞、生發(fā)中心B細(xì)胞和漿細(xì)胞上GABA受體和轉(zhuǎn)運體mRNA表達

使用Trizol法分別提取幼稚B細(xì)胞、生發(fā)中心B細(xì)胞和漿細(xì)胞總RNA，用Prime Script RT Master Mix 逆轉(zhuǎn)錄試劑盒合成cDNA。取cDNA 500 ng和5×Prime Script Mix 2 μL，DEPC 水補充至10 μL，用Power Up SYBR Green Master Mix（AB）試劑盒進行熒光定量PCR 檢測。PCR 引物均據(jù)Primer Bank 網(wǎng)站設(shè)計，引物序列見表1，由生工生物科技有限公司合成。以GAPDH作為內(nèi)參基因，利用2-ΔΔCt法計算待測基因mRNA相對表達水平。

Tab.1 Primer sequences for real-time quantitative PCR（RT-qPCR）

1.5 B細(xì)胞體外分化體系和GABA處理

NB-21 細(xì)胞培養(yǎng)基由DMEM 基礎(chǔ)培養(yǎng)基添加10%FBS、1%青-鏈霉素雙抗和1%非必需氨基酸配制而成。當(dāng)NB-21細(xì)胞擴增到約90%密度時，用胰蛋白酶消化，離心收集的細(xì)胞用臺盼藍(lán)染色進行活細(xì)胞計數(shù)，接種12孔板，每孔1×105細(xì)胞，5%CO2孵箱中培養(yǎng)過夜，作為B 細(xì)胞體外分化的飼養(yǎng)層細(xì)胞。

取8 周齡未免疫小鼠脾，研磨，裂解紅細(xì)胞，離心收集脾細(xì)胞并計數(shù)。用200 μL 磁珠緩沖液（PBS+1%BSA+EDTA 2 mmol·L-1）重懸2×107脾細(xì)胞，加入抗CD16/32 抗體2 μg 冰上孵育，封閉IgG 抗體受體10 min。加入生物素-大鼠抗小鼠CD19 抗體1 μg 和抗生物素微珠5 μL，利用磁珠法分離幼稚B細(xì)胞。

B 細(xì)胞體外分化體系：取B 細(xì)胞培養(yǎng)基（RPMI 1640 培養(yǎng)基添加10% FBS、1%青-鏈霉素雙抗、1%非必需氨基酸、HEPES 10 mmol·L-1、丙酮酸鈉1 mmol·L-1、β巰基乙醇55 μmol·L-1），加入小鼠IL-4 2 μg·L-1，重懸幼稚B 細(xì)胞。移除NB-21 飼養(yǎng)層細(xì)胞培養(yǎng)基，每孔加入2×105幼稚B細(xì)胞。

B 細(xì)胞體外分化實驗分為4 組：細(xì)胞對照及GABA 0.2，1.0 和2.0 mmol·L-1組［16］，每組3 平行孔。從B 細(xì)胞體外培養(yǎng)分化第1 天起，每天半量換液，第5 天收集B 細(xì)胞，流式細(xì)胞儀分析IgG1+GL7+生發(fā)中心B細(xì)胞和CD138+漿細(xì)胞百分比。

1.6 NP-KLH免疫小鼠的制備和分組處理

小鼠隨機分為3 組：正常對照（7 只）、免疫+PBS（16 只）和免疫+GABA 組（16 只）。將溶解的1 g·L-1NP-KLH 抗原與等體積鋁佐劑混合均勻，除正常對照組外，每只小鼠（8 周齡）ip 給予NP-KLH 100 μg，免疫后ip給予PBS或GABA（20 mg·kg-1）［17］，每天1次，連續(xù)12 d。第13天處死正常對照組4只、免 疫+PBS 組7 只和免疫+GABA 組7 只小鼠，制備脾細(xì)胞進行流式分析。第27 天處死正常對照組3 只、免疫+PBS 組9 只和免疫+GABA 組9 只小鼠，制備骨髓細(xì)胞進行流式分析。

1.7 流式細(xì)胞術(shù)分析NP-KLH 免疫小鼠脾生發(fā)中心B細(xì)胞、總漿細(xì)胞和lgG1+漿細(xì)胞亞群

取1.6 分組處理的部分小鼠，NP-KLH 免疫后第13 天處死，取脾制備單細(xì)胞懸液，裂解紅細(xì)胞后調(diào)整細(xì)胞密度為5×1010L-1。取脾細(xì)胞100 μL，加入抗CD16/32抗體1 μg冰上孵育10 min，封閉IgG 抗體受體，按以下方案進行流式抗體孵育后于流式細(xì)胞儀檢測。①脾生發(fā)中心B 細(xì)胞染色：PerCP-大鼠抗小鼠B220抗體1 μg，APC-大鼠抗小鼠GL7抗體0.5 μg，PE-Cy7-小鼠抗小鼠Fas 抗體0.5 μg，F(xiàn)VS 死活細(xì)胞染料按說明書加入。②脾總漿細(xì)胞和IgG1

+漿細(xì)胞染色：PerCP-大鼠抗小鼠B220 抗體1 μg，APC-大鼠抗小鼠CD138 抗體0.5 μg，F(xiàn)VS 死活染料按說明書加入；染色30 min后用BD Cytofix/Cytoperm ?細(xì)胞固定/通透液試劑盒破膜，加入FITC-大鼠抗小鼠IgG1抗體0.5 μg染色。

1.8 流式細(xì)胞術(shù)分析NP-KLH免疫小鼠骨髓NP+lgM-漿細(xì)胞亞群分析

取1.6 分組處理的部分小鼠，NP-KLH 免疫后第27天處死，剪取小鼠一側(cè)股骨，用1 mL注射器吸FACS 緩沖液刺入關(guān)節(jié)處，將骨髓細(xì)胞沖至1.5 mL EP 管，裂解紅細(xì)胞后調(diào)整細(xì)胞密度為1×1010L-1。PerCP-大鼠抗小鼠Gr-1 抗體0.5 μg，F(xiàn)ITC-大鼠抗小鼠B220抗體1 μg，APC-大鼠抗小鼠CD138抗體0.5 μg，F(xiàn)VS 死活細(xì)胞染料按說明書加入。染色30 min 后用BD Cytofix/Cytoperm?細(xì)胞固定/通透液試劑盒破膜，加入NP-PE 染料0.5 μg 和EF450-大鼠抗小鼠IgM 抗體0.5 μg。另設(shè)空白染色管和每種熒光抗體單標(biāo)管。最后加入1 mL 流式緩沖液清洗細(xì)胞，500×g離心3 min，棄上清，用PBS 300 μL重懸細(xì)胞用于流式細(xì)胞儀分析。

1.9 ELlSA 檢測NP-KLH 免疫小鼠血清中抗原特異性lgG抗體

分別取1.6 處理的正常對照、免疫+PBS 和免疫+GABA 組脾漿細(xì)胞百分比接近平均值的3 只小鼠，NP-KLH 免疫后第13 天摘除眼球取血，制備血清，ELISA檢測血清中抗原特異性IgG抗體［14］，測定波長為450 nm。

1.10 統(tǒng)計學(xué)分析

實驗結(jié)果數(shù)據(jù)用±s表示。利用Flowjo10 分析流式細(xì)胞檢測的源文件，分析分化過程中不同階段B 細(xì)胞所占B 細(xì)胞總數(shù)百分比，并用流式等高線圖和散點圖展示。使用GraphPad Prism 8.0 軟件進行統(tǒng)計學(xué)分析，多組間比較采用單因素方差分析，兩組間比較采用成組t檢驗。P＜0.05 為差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 B細(xì)胞上GABA受體和轉(zhuǎn)運體mRNA表達水平

通過分析已知B 細(xì)胞數(shù)據(jù)庫，發(fā)現(xiàn)小鼠脾中幼稚B 細(xì)胞和生發(fā)中心B 細(xì)胞均高表達GABA B1 型受體（GABA B receptor，subunit 1，Gabbr1）（圖1A）。用流式細(xì)胞儀分選出SRBC 免疫小鼠脾幼稚B 細(xì)胞（B220+FaslowGL7low）、生發(fā)中心B細(xì)胞（B220+FashiGL7hi）和漿細(xì)胞（CD138+）（圖1B），RT-qPCR檢測結(jié)果顯示，幼稚B細(xì)胞、生發(fā)中心B細(xì)胞和漿細(xì)胞主要表達GABA受體Gabbr1，其他受體和轉(zhuǎn)運體幾乎無表達（圖1C）。

Fig.1 Expression levels of γ-aminobutyric acid（GABA）receptors and transporters in B cells of mice. A：heat-map showed expressions of neurotransmitter receptors and transcripts from RNA-seq data of the splenic na?ve B cells and germinal center（GC）B cells.B：flow cytometry sorting strategy for na?ve B cells（B220+FaslowGL7low），germinal center（GC）B cells（B220+FashiGL7hi）and splenic plasma cells（SPPCs）（CD138+）from the spleens of mice on the 7th day after sheep red blood cell immunization.C：mRNA expressions of GABA receptors and transporters in sorted na?ve B cells，GC B cells and SPPC detected by RT-qPCR.±s，n=3.Drd5：dopamine receptor D5；Grm5：glutamate receptor，metabotropic 5；Oprl1：opioid receptor-like 1；Htr1a：5-hydroxytryptamine receptor 1A；Vipr1：vasoactive intestinal peptide receptor 1；Hrh2：histamine receptor H2；Adora1：adenosine A1 receptor；Chrnb1：cholinergic receptor nicotinic beta 1 subunit.

2.2 B細(xì)胞體外分化體系的建立

經(jīng)磁珠分選后，B細(xì)胞純度達到91.8%（圖2A）。將其加入到NB-21 飼養(yǎng)層細(xì)胞上進行體外培養(yǎng)，并加IL-4 誘導(dǎo)B 細(xì)胞分化。流式細(xì)胞術(shù)測定結(jié)果表明，培養(yǎng)前5 d 漿細(xì)胞百分比逐漸升高至38.6%，第6天開始減少（27.3%）（圖2B）。

Fig.2 Changes of percentage of CD138+ plasma cells from isolated na?ve B cells of mice detected by flow cytometry. A: na?ve B cells (CD19+) purified from spleens of normal mice by anti-biotin microbeads；B: quantification of CD138+ plasma cells in in vitro plasma cell differentiation system.

2.3 GABA促進漿細(xì)胞的體外分化

如圖3 所示，B 細(xì)胞體外分化過程中加入不同濃度GABA 后，與細(xì)胞對照組相比，GABA 不影響IgG1+GL7+生發(fā)中心B 細(xì)胞形成，但GABA 1.0 和2.0 mmol·L-1明顯升高CD138+漿細(xì)胞百分比（P＜0.01），提示GABA可促進漿細(xì)胞體外分化。

Fig.3 GABA promoted differentiation of CD138+ plasma cells in vitro detected by flow cytometry. A and B: percentages of IgG1+GL7+ GC B cells and CD138+ SPPCs，respectively，after culture in in vitro plasma cell differentiation system alone or with GABA for 5 d.±s,n=3.＊＊P＜0.01,compared with cell control（GABA 0.0 mmol·L-1）group.

2.4 GABA促進NP-KLH免疫小鼠漿細(xì)胞分化

NP-KLH 免疫小鼠第13 天，流式細(xì)胞術(shù)檢測脾生發(fā)中心B 細(xì)胞和漿細(xì)胞百分比，圈門策略如圖4A所示。圖4B 和4C 結(jié)果顯示，與正常對照組相比，免疫+PBS 組小鼠生發(fā)中心B 細(xì)胞百分比明顯增高（P＜0.01），漿細(xì)胞（P＜0.05）和IgG1+漿細(xì)胞（P＜0.01）百分比亦明顯升高，提示抗原NP-KLH免疫小鼠成功。與免疫+PBS 組相比，免疫+GABA 組小鼠生發(fā)中心B 細(xì)胞無明顯變化，漿細(xì)胞（P＜0.01）和Ig G1+漿細(xì)胞（P＜0.05）百分比顯著升高。

2.5 GABA促進NP-KLH免疫小鼠骨髓抗原特異性漿細(xì)胞分化

NP-KLH 免疫小鼠第27 天后，流式細(xì)胞術(shù)檢測骨髓中NP+IgM-漿細(xì)胞百分比，圈門策略如圖5A 所示。與正常對照組相比，免疫+PBS 組小鼠骨髓中NP+IgM-漿細(xì)胞百分比明顯增多（P＜0.01），且免疫+GABA組顯著高于免疫+PBS 組（P＜0.05）（圖5B）。

Fig.5 GABA increased abundance of antigen-specific bone-marrow plasma cells (BMPCs) of mice after immunization with NP-KLH detected by flow cytometry. See Fig.4 for the mouse treatment. A and B: gating strategy and frequencies of NP-binding B220-CD138+IgM- (BMPCs) on the 27th day after NP-KLH immunization, respectively. x ±s, n=3 (normal control group), 9 (immunized+PBS and immunized+GABA groups).＊＊P＜0.01,compared with normal control group; #P＜0.05,compared with immunized+PBS group.

2.6 GABA 促進NP-KLH 免疫小鼠高親和力抗體生成

如圖6 所示，與正常對照組相比，免疫+PBS 組小鼠血清NP 特異性抗體明顯升高（P＜0.01），且免疫+GABA組顯著高于免疫+PBS組（P＜0.01）。

Fig.6 GABA enhanced antigen-specific antibody response of mice after immunization with NP-KLH.See Fig.4 for the mouse treatment. NP-specific IgG titers of mice were detected by ELISA on the 13rd day after NP-KLH immunization.±s，n=3. ＊＊P＜0.01，compared with normal control group；##P＜0.01，compared with immunized+PBS group.

3 討論

抗體是機體用于抵抗細(xì)菌、病毒等外來病原體侵襲的重要免疫分子，由B 細(xì)胞分化成的漿細(xì)胞分泌。但由于B 細(xì)胞在體外培養(yǎng)時極易凋亡，其分化體系一直是研究的熱點和難點。2011 年，日本Takuya Nojima 教授實驗室改造了BALB/c 小鼠3T3 細(xì)胞系，使其穩(wěn)定表達小鼠CD40L 和B 細(xì)胞激活因子，稱為40LB 細(xì)胞［18］，將其作為B 細(xì)胞的飼養(yǎng)層細(xì)胞，才使B細(xì)胞長期體外培養(yǎng)和分化得以實現(xiàn)，但該體系漿細(xì)胞分化比例較低。在此基礎(chǔ)上，2016年美國Garnett Kelsoe 實驗室進一步改造40LB 細(xì)胞，使其穩(wěn)定表達小鼠IL-21 得到NB-21 細(xì)胞，建立了目前公認(rèn)的B細(xì)胞體外分化成漿細(xì)胞的體系［19］。

GABA 是一種重要的抑制性神經(jīng)遞質(zhì)，具有降血壓、促進乙酰膽堿合成和促進生長激素分泌等多種生理功能［20-21］，主要通過GABA 受體及GABA 轉(zhuǎn)運體等發(fā)揮作用［22］。據(jù)報道，其作用于巨噬細(xì)胞和T 細(xì)胞行使免疫調(diào)節(jié)功能，如GABA 通過GABA 轉(zhuǎn)運體2 改變細(xì)胞代謝方式從而調(diào)控M1 型巨噬細(xì)胞極化［23］，GABA 轉(zhuǎn)運體SLC6A13 缺乏能促進腸道感染時Th17 細(xì)胞的分化等［24］。然而，關(guān)于GABA能否調(diào)控B細(xì)胞分化和抗體生成尚無報道。

本研究成功建立B 細(xì)胞體外分化體系，分化過程中加入GABA 明顯提高CD138+漿細(xì)胞百分比，表明神經(jīng)遞質(zhì)GABA在體外能促進B細(xì)胞向漿細(xì)胞分化。Gabbr1 受體為G 蛋白偶聯(lián)受體［25］，在B 細(xì)胞上高表達，但該受體促進B 細(xì)胞分化的分子機制尚不清楚。本研究用流式細(xì)胞儀分選出SRBC 免疫小鼠脾幼稚B 細(xì)胞、生發(fā)中心B 細(xì)胞和漿細(xì)胞，發(fā)現(xiàn)它們均表達Gabbr1受體，其他受體和轉(zhuǎn)運體幾乎無表達。

GABA在小鼠血清中的生理濃度為2 mg·kg-1［26］。Ren 等［17］報道，ip 給予小鼠GABA 40 μg·kg-1～40 mg·kg-1可促進空腸組織IL-17 表達且呈濃度依賴性。NP-KLH 是一種T 細(xì)胞依賴性抗原，可在小鼠體內(nèi)誘導(dǎo)出生發(fā)中心反應(yīng)。本研究發(fā)現(xiàn)，NP-KLH 免疫后ip 給予小鼠GABA 20 mg·kg-1可促進漿細(xì)胞分化。GABA 在體內(nèi)可促進Th17 細(xì)胞分化［24］，那么GABA 是否可直接促進B 細(xì)胞分化尚未見報道。為此本研究用流式細(xì)胞術(shù)分析NP-KLH免疫后小鼠脾Tfh 百分比，確定GABA 是否通過增加Tfh 數(shù)量而促進漿細(xì)胞生成。研究結(jié)果表明，ip給予GABA 20 mg·kg-1可促進NP-KLH 免疫小鼠脾B細(xì)胞向漿細(xì)胞分化。GABA是調(diào)節(jié)神經(jīng)元間通訊的抑制性神經(jīng)遞質(zhì)，主要由GABA能神經(jīng)元釋放。但最近有研究報道，GABA也能由脾和淋巴結(jié)等B細(xì)胞產(chǎn)生［16］。由此提示，機體受到抗原刺激時也可能由B細(xì)胞自分泌GABA而促進其向漿細(xì)胞分化并產(chǎn)生抗體。

綜上，神經(jīng)遞質(zhì)GABA 在B 細(xì)胞分化過程中具有調(diào)控功能，提示GABA 可能是一種有研究價值的促進體液免疫反應(yīng)的靶點，有望為提高疫苗的有效性及機體抗病毒能力提供新策略。