聯(lián)合應(yīng)用常染色體STR,X-STR和線粒體SNP鑒別姨甥關(guān)系

侯秀迪 馬莉 侯森 王業(yè)全 張國(guó)安

(1濟(jì)寧醫(yī)學(xué)院司法鑒定中心,濟(jì)寧 272067;2濟(jì)寧市第一人民醫(yī)院產(chǎn)科,濟(jì)寧 272011)

目前我國(guó)入戶程序逐漸完善,非婚生育落戶的需做親緣鑒定以明確其身份。在農(nóng)村過(guò)繼事件時(shí)有發(fā)生,出現(xiàn)了很多叔侄、姑侄、姨甥、舅甥等廣義叔侄關(guān)系的鑒定,但這類鑒定暫無(wú)明確標(biāo)準(zhǔn)規(guī)范,難以得出結(jié)論。本文旨在采用ITO法[1]、判別函數(shù)法[2]和狀態(tài)一致性評(píng)分(identity by state score,IBS)法[3-4]等多種分析方法及線粒體熒光檢測(cè)技術(shù)進(jìn)行鑒定以得到可靠結(jié)果,確定兩者的姨甥關(guān)系,為復(fù)雜親緣關(guān)系鑒定提供思路。

1 材料與方法

1.1 簡(jiǎn)要案情

李某自述為莊某外甥女,因需隨莊某入戶,前來(lái)本鑒定中心證明莊某與李某為姨甥關(guān)系。后為進(jìn)一步確定莊某與李某的姨甥關(guān)系,將李某生母莊某某也作為被鑒定人。按照知情同意原則,采集三名被鑒定人的指尖血樣。本研究經(jīng)濟(jì)寧醫(yī)學(xué)院倫理委員會(huì)審核并同意(JNMC-202/-YX-008)。

1.2 方法

按照Chelex-100法提取外周血DNA,采用華夏白金試劑盒(AB公司),Goldeneye 22NC試劑盒(北京基點(diǎn)認(rèn)知技術(shù)有限公司)、Goldeneye 17X試劑盒(北京基點(diǎn)認(rèn)知技術(shù)有限公司)、Expressmarker mtDNA-SNP 60熒光檢測(cè)試劑盒分別進(jìn)行復(fù)合PCR擴(kuò)增,用3500遺傳分析儀進(jìn)行毛細(xì)管電泳,并用GeneMapper ID-X軟件進(jìn)行基因型分析,得到40個(gè)常染色體STR基因座等位基因、16個(gè)X-STR基因座等位基因和60個(gè)線粒體SNP位點(diǎn)。

2 結(jié)果及數(shù)據(jù)分析

檢測(cè)得到李某、莊某D3S1358等40個(gè)常染色體STR基因座基因型、DXS6795等16個(gè)X-STR基因座基因型(見表1、表2)及10398等59個(gè)線粒體SNP(見圖1)。

以上D3S1358等40個(gè)常染色體STR基因座,除FGA、D15S659、D5S2500等3個(gè)基因座,李某在必需等位基因均能從莊某的基因型中找到來(lái)源,根據(jù)陸惠玲等[1]報(bào)道的ITO法計(jì)算兩者的姨甥關(guān)系指數(shù),得到D3S1358等40個(gè)常染色體STR基因座,計(jì)算姨甥關(guān)系指數(shù)為8.7324×105,即莊某為李某姨母的可能性是莊某和李某為無(wú)關(guān)個(gè)體的可能性的8.7324×105倍。計(jì)算兩者為母女關(guān)系的可能性與兩者為姨-外甥女關(guān)系的比值,得到似然率(likely ration,LR)為8.0574×10-4,即莊某為李某的生母的可能性是莊某為李某姨母的可能性的8.0574×10-4倍,故傾向于支持莊某與李某的姨甥關(guān)系。

為進(jìn)一步確定莊某與李某的姨甥關(guān)系,采集李某生母莊某某血樣,檢測(cè)D3S1358等40個(gè)常染色體STR基因座基因型,李某某的等位基因均能從莊某某的基因型中找到來(lái)源,莊某某與李某的累積親權(quán)指數(shù)(combined parentage index,CPI)為7.3971×1015,支持莊某某為李某的生物學(xué)母親[5]。

表1 莊某、李某、莊某某40個(gè)常染色體STR基因座分型結(jié)果

表2 莊某、李某、莊某某16個(gè)X-STR基因座分型結(jié)果

圖1 mtDNA-SNP 60熒光檢測(cè)莊某、莊某某、李某的分型結(jié)果

依據(jù)《生物學(xué)全同胞關(guān)系鑒定實(shí)施規(guī)范》[6]計(jì)算D3S1358等40個(gè)常染色體STR基因座上莊某與莊某某的累計(jì)狀態(tài)一致性評(píng)分(combined identity by state score,CIBS)為48,傾向于認(rèn)為兩名有爭(zhēng)議個(gè)體為全同胞關(guān)系;依據(jù)《用ITO法計(jì)算兩個(gè)體間的血緣關(guān)系機(jī)會(huì)》[7]中的方法計(jì)算莊某與莊某某的全同胞指數(shù)為3.5163×1011,大于半同胞指數(shù)3.1500×107;依據(jù)《ITO法和判別函數(shù)法在同胞關(guān)系鑒定中的應(yīng)用》[8]中的方法計(jì)算莊某與莊某某的全同胞D值為12.494,大于無(wú)關(guān)個(gè)體D值1.316。在DXS6795等16個(gè)X-STR基因座基因型中莊某與莊某某均有相同等位基因,以上各種分析結(jié)果均支持莊某與莊某某為生物學(xué)全同胞姐妹,即支持莊某與李某的姨甥關(guān)系。

圖1中60個(gè)SNP位點(diǎn)中莊某、莊某某、李某分型均一致,支持3人來(lái)源于同一母系家族。支持莊某與莊某某為生物學(xué)全同胞關(guān)系、莊某某與李某的生物學(xué)母女關(guān)系和莊某與李某的姨甥關(guān)系。

3 討論

在我國(guó)過(guò)繼事件中,叔侄、姑侄、舅甥、姨甥等關(guān)系普遍存在,常以冒充父(母)子關(guān)系進(jìn)行親子鑒定,如將本案中莊某作為李某的母親鑒定,通過(guò)華夏白金試劑盒23個(gè)STR基因座檢測(cè)后,莊某與李某僅有1個(gè)基因座不符合孟德爾遺傳定律且可認(rèn)定為兩步突變CPI值為21.7597(大于0.0001,小于10000)(表1),無(wú)法得出確定結(jié)論;增加基因座至40個(gè),檢測(cè)出3個(gè)STR基因座不符合孟德爾遺傳定律,CPI值為603.2535(大于0.0001,小于10000)(表1),依然無(wú)法給出確定結(jié)論;經(jīng)與被鑒定人溝通,聯(lián)系并采集到李某生母莊某某血樣。經(jīng)過(guò)檢測(cè)計(jì)算,確認(rèn)了李某與莊某某的親子關(guān)系;并確認(rèn)了莊某與莊某某的生物學(xué)全同胞關(guān)系。最終確定李某與莊某的姨甥關(guān)系。因此,叔侄、姑侄、舅甥、姨甥等復(fù)雜親緣關(guān)系給親子鑒定工作帶來(lái)極大的干擾。對(duì)于這種情況,法醫(yī)物證從業(yè)人員在工作中需更加詳細(xì)詢問(wèn)被鑒定人真實(shí)情況,了解是否為近親關(guān)系,并盡量要求進(jìn)行三聯(lián)體親子鑒定;要采用多種方法,反復(fù)驗(yàn)證,得出正確結(jié)論。

當(dāng)然在司法鑒定工作中也存在戶口本上為親子關(guān)系,但實(shí)際并非親子關(guān)系,需排除兩者親子關(guān)系,但叔侄、姑侄、舅甥、姨甥等關(guān)系影響親子關(guān)系的判斷,需采用增加基因位點(diǎn)、Y-STR基因座或線粒體SNP檢測(cè)輔助判斷[9]。以本案為例,如莊某、李某需要鑒定排除二者的母女關(guān)系,40個(gè)常染色體STR基因座,李某在FGA、D15S659、D5S2500等3個(gè)STR基因座無(wú)法在莊某的基因型中找到來(lái)源,CPI值為703.6061(大于0.0001,小于10000),依據(jù)《親權(quán)鑒定技術(shù)規(guī)范》GB/T 37223-2018[5]無(wú)法排除兩者的母女關(guān)系,因無(wú)法獲取李某生物學(xué)父親的DNA,而增加了生物學(xué)母親的DNA分型,可推斷出父親部分基因座傳遞給孩子的等位基因,由此可見莊某在D2S441、FGA、D22S1045、D10S1248、D15S659、D18S535、D5S2500均無(wú)法提供給李某必須的等位基因,排除兩者之間的生物學(xué)母女關(guān)系。

在出現(xiàn)無(wú)法給出確切結(jié)論的親緣關(guān)系鑒定中,均為男性的鑒定可增加父系遺傳關(guān)系(Y-STR檢驗(yàn))的檢驗(yàn),觀察被鑒定人是否來(lái)源于同一父系家族,以考慮被鑒定人是否隱瞞近親關(guān)系。有女性參與的鑒定,相比X-STR檢驗(yàn),更推薦增加線粒體SNP的檢測(cè),能更好的反應(yīng)母系遺傳關(guān)系[10-11]。本案中莊某與李某在16個(gè)X-STR基因座的檢驗(yàn)中,有兩個(gè)基因座兩者無(wú)相同等位基因,無(wú)法判斷兩者有無(wú)親緣關(guān)系,但在59個(gè)線粒體SNP檢驗(yàn)中,莊某與李某檢驗(yàn)結(jié)果均一致,能明確的判斷出兩者來(lái)源于同一母系家族。

目前,叔侄、姑侄、舅甥、姨甥等復(fù)雜親緣關(guān)系(廣義的叔侄關(guān)系)在司法鑒定業(yè)務(wù)中并未有明確的規(guī)范,本文旨在為復(fù)雜親緣關(guān)系鑒定提供思路和方法,為規(guī)范復(fù)雜親緣關(guān)系鑒定提供研究依據(jù)。

利益沖突:所有作者均申明不存在利益沖突。