潰瘍性結(jié)腸炎患者結(jié)腸黏膜CCL-2、IL-23、MGP表達(dá)與臨床參數(shù)的關(guān)系

王瑩瑩 汪秀梅 陳曉燕

（鄭州大學(xué)附屬鄭州市中心醫(yī)院消化內(nèi)科，河南 鄭州 450001）

潰瘍性結(jié)腸炎（Ulcerative colitis，UC）為一種慢性非特異性炎性疾病，病變組織多為大腸黏膜、黏膜下層，其病程長，病情易反復(fù)，同時(shí)具有癌變風(fēng)險(xiǎn)[1-2]。近年來UC的發(fā)病率呈逐年上升趨勢，其發(fā)病與免疫異常關(guān)系密切，但其具體機(jī)制目前尚不清楚。隨著人們對UC認(rèn)識(shí)的不斷深入，研究發(fā)現(xiàn)UC病情嚴(yán)重程度不同，治療方案和預(yù)后差別較大[3]，故找尋高特異性組織學(xué)指標(biāo)對該類患者的病情及活動(dòng)度進(jìn)行判斷意義重大。

趨化因子是一類具有誘導(dǎo)附近反應(yīng)細(xì)胞定向趨化的能力的信號蛋白，C-C基序趨化因子配體（C-C motif chemokine ligand，CCL）在直腸癌、結(jié)腸癌、胃癌等多種惡性腫瘤中呈高表達(dá)[4]。CCL-2為趨化因子家族的一員，推測其與UC、結(jié)腸癌的發(fā)生、發(fā)展有關(guān)。白細(xì)胞介素-23（Interleukin-23，IL-23）主要產(chǎn)生于抗原呈遞細(xì)胞，可與靶細(xì)胞膜上的IL-23受體結(jié)合，激活細(xì)胞內(nèi)信號分子，激活記憶T細(xì)胞、樹突細(xì)胞、巨噬細(xì)胞等，產(chǎn)生促炎癥因子，進(jìn)而引起慢性腸道疾病[5-6]?；|(zhì)Gla蛋白（Matrix Gla protein，MGP）為人體血管和軟骨鈣化抑制劑，在腫瘤、動(dòng)脈粥樣硬化的發(fā)生、發(fā)展中具有重要作用[7]，而在炎癥性疾病的研究中罕見報(bào)道。目前UC患者結(jié)腸黏膜CCL-2、IL-23、MGP表達(dá)與臨床參數(shù)的關(guān)系目前尚不清楚，鑒于此，本研究收集UC患者結(jié)腸黏膜組織、健康者正常黏膜組織進(jìn)行分析，針對以上問題進(jìn)行探討。

1 資料與方法

1.1 臨床資料

收集2018年4月至2022年10月醫(yī)院收治的103例UC患者結(jié)腸黏膜組織記為研究組，同一時(shí)期單發(fā)息肉切除后行結(jié)腸鏡復(fù)查的58例健康者的正常黏膜組織記為對照組。研究組中男62例、女41例，年齡23～68歲，平均年齡42.86±12.37歲，病程22～51 m，平均病程36.27±6.45 m，病變部位：直腸38例、乙狀結(jié)腸42例、左半結(jié)腸23例，緩解期39例、活動(dòng)期64例（輕度20例、中度31例、重度13例）；對照組中男33例、女25例，年齡22～65歲，平均年齡41.72±12.54歲；兩組性別構(gòu)成比、年齡對比，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。本研究經(jīng)本院醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)審批通過。

納入標(biāo)準(zhǔn)：符合《炎癥性腸病診斷與治療的共識(shí)意見》中UC診斷標(biāo)準(zhǔn)[8]；年齡＞18歲；近期未服用抗生素、止痛類藥物；患者對本研究知情同意。排除標(biāo)準(zhǔn)：合并肝腎疾??；合并嚴(yán)重心腦血管疾??；有腸道手術(shù)史、吸毒史、藥物濫用史；行全結(jié)直腸切除手術(shù)；合并惡性腫瘤；妊娠或哺乳期女性；合并精神疾病或認(rèn)知功能障礙；合并免疫系統(tǒng)或血液系統(tǒng)疾病者；合并放射性腸炎、腸道寄生蟲病等其他腸道疾病。

1.2 結(jié)腸黏膜組織CCL-2、IL-23及MGP mRNA檢測

收集所有研究對象結(jié)腸黏膜組織，采用實(shí)時(shí)熒光定量聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（Real time fluorescence quantitative Polymerase chain reaction，RT-PCR）檢測結(jié)腸黏膜組織CCL-2 mRNA、IL-23 mRNA及MGP mRNA水平：取結(jié)腸黏膜組織，使用Trizol法提取組織RNA，反轉(zhuǎn)錄為cDNA，設(shè)計(jì)CCL-2、IL-23、MGP及內(nèi)參基因β-actin上下游引物（PCR引物序列見表1）；RT-PCR反應(yīng)條件：93℃預(yù)變性32 s；93℃變性14 s；65℃退火28 s；72℃延伸20 s；41個(gè)循環(huán)。根據(jù)2-ΔΔCt計(jì)算CCL-2 mRNA、IL-23 mRNA及MGP mRNA相對表達(dá)量。

表1 PCR引物序列表

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

所有數(shù)據(jù)用SPSS21.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行分析，計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±SD）表示，采用t檢驗(yàn)；計(jì)數(shù)資料以率（%）表示，用χ2檢驗(yàn)；相關(guān)分析用Spearman法。P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 對比兩組結(jié)腸黏膜組織CCL-2 mRNA、IL-23 mRNA及MGP mRNA表達(dá)水平

研究組結(jié)腸黏膜組織CCL-2、IL-23及MGP mRNA表達(dá)水平高于對照組（P＜0.05），見表2。

表2 結(jié)腸黏膜組織CCL-2、IL-23及MGP mRNA表達(dá)水平對比（±SD）

表2 結(jié)腸黏膜組織CCL-2、IL-23及MGP mRNA表達(dá)水平對比（±SD）

注：與對照組相比，*P＜0.05。

組別 例數(shù) CCL-2 mRNA IL-23 mRNA MGP mRNA研究組 103 2.25±0.95* 2.84±1.33* 3.20±1.39*對照組 58 0.58±0.13 0.62±0.15 0.75±0.23

2.2 結(jié)腸黏膜組織CCL-2、IL-23及MGP表達(dá)水平與UC患者病情分期的關(guān)系

活動(dòng)期UC患者結(jié)腸黏膜組織CCL-2 mRNA、IL-23 mRNA及MGP mRNA表達(dá)水平高于緩解期（P＜0.05）；活動(dòng)期重度UC患者結(jié)腸黏膜組織CCL-2 mRNA、IL-23 mRNA及MGP mRNA表達(dá)水平高于輕度、中度患者（P＜0.05）；活動(dòng)期中度UC患者結(jié)腸黏膜組織CCL-2 mRNA、IL-23 mRNA及MGP mRNA表達(dá)水平高于輕度患者（P＜0.05）；結(jié)腸黏膜組織CCL-2、IL-23及MGP表達(dá)水平與UC患者病情分期呈正相關(guān)（r=0.732、0.748、0.739，P=0.000、0.000、0.000），見表3。

表3 不同UC分期結(jié)腸黏膜組織CCL-2、IL-23及MGP表達(dá)水平（±SD）

表3 不同UC分期結(jié)腸黏膜組織CCL-2、IL-23及MGP表達(dá)水平（±SD）

注：與緩解期相比，*P＜0.05；與輕度相比，aP＜0.05；與中度相比，bP＜0.05。

病情分期 例數(shù) CCL-2 mRNA IL-23 mRNA MGP mRNA活動(dòng)期 64 2.85±0.67* 3.74±0.81* 4.19±0.67*緩解期 39 1.28±0.31 1.36±0.32 1.58±0.36活動(dòng)期 輕度 20 2.10±0.40 2.82±0.58 3.37±0.50中度 31 2.93±0.24a 3.87±0.25a 4.44±0.26a重度 13 3.78±0.27ab 4.82±0.25ab 4.82±0.25ab

2.3 結(jié)腸黏膜組織CCL-2、IL-23及MGP表達(dá)水平與UC患者病變范圍的關(guān)系

依據(jù)Montreal分型將病變范圍分為E1（直腸）、E2（左半結(jié)腸）、E3（廣泛結(jié)腸）；病變范圍為E3的UC患者結(jié)腸黏膜組織CCL-2 mRNA、IL-23 mRNA及MGP mRNA表達(dá)水平高于E1、E2患者（P＜0.05）；病變范圍為E2的UC患者結(jié)腸黏膜組織CCL-2 mRNA、IL-23 mRNA及MGP mRNA表達(dá)水平高于E1患者（P＜0.05）；結(jié)腸黏膜組織CCL-2、IL-23及MGP表達(dá)水平與UC患者病變范圍呈正相關(guān)（r=0.515、0.401、0.389，P=0.000、0.000、0.000），見表4。

表4 不同病變范圍結(jié)腸黏膜組織CCL-2、IL-23及MGP表達(dá)水平（±SD）

表4 不同病變范圍結(jié)腸黏膜組織CCL-2、IL-23及MGP表達(dá)水平（±SD）

注：與E1相比，aP＜0.05；與E2相比，bP＜0.05。

病變范圍 例數(shù) CCL-2 mRNA IL-23 mRNA MGP mRNA E1 18 1.35±0.66 1.82±1.04 2.20±1.16 E2 34 2.07±0.79a 2.65±1.25a 2.99±1.36a E3 51 2.68±0.89ab 3.29±1.29ab 3.67±1.31ab

2.4 結(jié)腸黏膜組織CCL-2、IL-23及MGP表達(dá)水平與UC患者內(nèi)鏡分級的關(guān)系

依據(jù)Truelove標(biāo)準(zhǔn)分為I級、Ⅱ級及Ⅲ級；內(nèi)鏡分級為Ⅲ級的UC患者結(jié)腸黏膜組織CCL-2 mRNA、IL-23 mRNA及MGP mRNA表達(dá)水平高于I級、Ⅱ級患者（P＜0.05）；病變范圍為Ⅱ級的UC患者結(jié)腸黏膜組織CCL-2 mRNA、IL-23 mRNA及MGP mRNA表達(dá)水平高于I級患者（P＜0.05）；結(jié)腸黏膜組織CCL-2、IL-23及MGP表達(dá)水平與UC患者內(nèi)鏡分級呈正相關(guān)（r=0.681、0.623、0.602，P=0.000、0.000、0.000），見表5。

表5 不同內(nèi)鏡分級結(jié)腸黏膜組織CCL-2、IL-23及MGP表達(dá)水平（±SD）

表5 不同內(nèi)鏡分級結(jié)腸黏膜組織CCL-2、IL-23及MGP表達(dá)水平（±SD）

注：與Ⅰ級相比，aP＜0.05；與Ⅱ級相比，bP＜0.05。

內(nèi)鏡分級 例數(shù) CCL-2 mRNA IL-23 mRNA MGP mRNAⅠ級 35 1.44±0.61 1.81±0.95 2.10±1.03Ⅱ級 47 2.43±0.73a 3.02±1.17a 3.48±1.23aⅢ級 21 3.20±0.77ab 4.14±0.85ab 4.40±0.92ab

3 討論

UC為一種病因不明的慢性直腸和結(jié)腸炎性病變，其臨床治愈難度大，治療后易復(fù)發(fā)，給患者及其家屬帶來了嚴(yán)重的精神和經(jīng)濟(jì)困擾[9-11]。UC病因及發(fā)病機(jī)制目前尚不明確，一些學(xué)者認(rèn)為其發(fā)生可能與遺傳、黏膜屏障功能及免疫等因素有關(guān)，其中免疫因素關(guān)注相對較多[12]。UC患者病情遷延不愈，易反復(fù)發(fā)作，有研究表明[13]，UC病程越長，癌變發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)越高；故早期對UC病情進(jìn)行判斷，及早對癌變發(fā)生進(jìn)行診斷，并指導(dǎo)臨床給予有針對性的治療意義重大。本研究通過探討UC患者結(jié)腸黏膜CCL-2、IL-23、MGP表達(dá)與臨床參數(shù)的關(guān)系，對臨床該類患者的治療、預(yù)后改善具有一定的理論參考依據(jù)。

本研究中，研究組結(jié)腸黏膜組織CCL-2 mRNA、IL-23 mRNA及MGP mRNA表達(dá)水平高于對照組，提示與正常黏膜組織相比，UC患者病變結(jié)腸黏膜CCL-2、IL-23、MGP表達(dá)異常升高。為維持腸的平衡，正常腸黏膜免疫系統(tǒng)需在促炎、抗炎細(xì)胞因子之間保持平衡，若平衡被打破，可能會(huì)致使效應(yīng)細(xì)胞過度增殖或調(diào)節(jié)細(xì)胞功能降低，進(jìn)而可加劇黏膜的炎癥反應(yīng)[14-17]。相關(guān)研究表明[18]，炎癥因子在UC的發(fā)生發(fā)展中具有重要作用，CCL-2可有效趨化巨噬細(xì)胞、單核細(xì)胞向炎癥區(qū)域的方向聚集，其表達(dá)水平與UC炎癥程度、疾病進(jìn)展關(guān)系密切。

炎癥反應(yīng)是UC發(fā)生、發(fā)展的病理特征之一，而IL-23可活化記憶T細(xì)胞，并可產(chǎn)生IL-6、IL-17炎性因子，進(jìn)而可致使腸道發(fā)生慢性炎癥[19-21]。辛群等[22]人研究表明，IL-23在UC疾病的進(jìn)展中具有重要作用，且黏膜中的IL-23表達(dá)量可反應(yīng)疾病的活動(dòng)度。MGP為一種小分子量基質(zhì)蛋白，有關(guān)研究表明[23-24]，MGP表達(dá)上調(diào)、MGP啟動(dòng)子區(qū)甲基化下調(diào)可致使UC患者免疫失衡。董旭旸等[25]人研究發(fā)現(xiàn)，MGP與UC活動(dòng)度、病情關(guān)系密切，隨著炎癥程度的加重，MGP呈升高趨勢，且結(jié)腸黏膜組織MGP表達(dá)水平與梅奧（Mayo）內(nèi)鏡評分相關(guān)。本研究中，結(jié)腸黏膜組織CCL-2、IL-23及MGP表達(dá)水平與UC患者病情分期、病變范圍及內(nèi)鏡分級均呈正相關(guān)，說明三者均參與UC的發(fā)生發(fā)展。

綜上所述，與正常黏膜組織相比，UC患者病變結(jié)腸黏膜CCL-2、IL-23、MGP表達(dá)異常升高，且UC患者結(jié)腸黏膜CCL-2、IL-23、MGP表達(dá)與病情分期、病變范圍及內(nèi)鏡分級有關(guān)，可作為臨床該類患者病情判斷、預(yù)測早期癌變的重要參考指標(biāo)，但其具體作用機(jī)制、調(diào)控因素仍有待進(jìn)一步深入研究。